Gentamicin BP 2001

GENTAMICIN SULFAT Gentamicini sulfas Gentamicin C1 C2 C1a C2a R1 Me Me H H R2 NHMe NH2 NH2 NH2 R3 H H H Me Gentamicin sulfat hỗn hợp kháng khuẩn đựơc sản sinh Micromonospora purpurea Thành phần gồm gentamicin C1; C1a; C2 C2a Hàm lượng: Không 590 đv/mg tính theo chế phẩm khan Tính chất Bột màu trắng gần trắng Dễ tan nước, thực tế không ethanol 96% ether Định tính Có thể chọn hai nhóm định tính sau: Nhóm 1: C, D Nhóm 2: A, B, D A Hòa tan khoảng 10 mg chế phẩm ml nước, thêm ml dung dịch acid sulfuric 40% (TT) Đun nóng cách thuỷ 100 phút, làm nguội pha loãng thành 25 ml với nước Phổ hấp thụ ánh sáng (Phụ lục 4.1) dung dịch thu khoảng từ 240 nm đến 330 nm cực đại hấp thụ B Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4) Bản mỏng: Silica gel G (TT) Dung môi khai triển: Hỗn hợp đồng thể tích amoniac - methanol - methylen clorid Lắc kỹ, để yên cho tách lớp, lấy lớp Dung dịch thử: Hòa tan 25 mg chế phẩm nước pha loãng thành ml với dung môi Dung dịch đối chiếu: Hòa tan 25 mg gentamicin sulfat chuẩn (ĐC) pha loãng thành ml với dung môi Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng 10 µl dung dịch thử dung dịch đối chiếu Triển khai sắc ký dung môi 15 cm Làm khô mỏng không khí Phun mỏng với dung dịch ninhydrin (TT) Sấy mỏng 110 oC phút Trên sắc ký đồ dung dịch thử phải cho vết tương ứng với vết dung dịch đối chiếu vị trí, màu sắc kích thước C Phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) phần thử thành phần gentamicin Trên sắc ký đồ dung dịch thử phải cho pic tương ứng với pic dung dịch đối chiếu thời gian lưu D Chế phẩm phải cho phản ứng (A) phép thử định tính ion sulfat (Phụ lục 8.1) Độ màu sắc dung dịch Dung dịch S: Hòa tan 0,8 g chế phẩm nước carbon dioxyd (TT) pha loãng thành 20 ml với dung môi Dung dịch S phải (Phụ lục 9.2) có màu không đậm thang màu số màu giống (Phụ lục 9.3; phương pháp 2) pH Từ 3,5 đến 5,5 (Phụ lục 6.2) Dùng dung dịch S Góc quay cực riêng Từ +107o đến +121o, tính theo chế phẩm khan (Phụ lục 6.4) Hòa tan 2,5 g chế phẩm nước pha loãng thành 25,0 ml với dung môi Methanol Không 1,0% (Phụ lục 10.14, hệ sắc ký B) Thành phần gentamicin Xác định phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Pha động: Hòa tan 5,5 g natri heptansulfonat (TT) hỗn hợp gồm 50 ml acid acetic băng (TT), 250 ml nước 700 ml methanol (TT) Dung dịch thử: Hòa tan 0,10 g chế phẩm nước pha loãng thành 100,0 ml với dung môi Hút 10,0 ml dung dịch thu được, thêm ml methanol (TT) ml thuốc thử phtalaldehyd (TT); trộn pha loãng thành 25,0 ml với methanol (TT) Đun nóng hỗn hợp thu cách thuỷ 60 oC 15 phút, làm nguội đến nhiệt độ phòng Nếu dung dịch thử không dùng ngay, làm lạnh nhiệt độ oC sử dụng vòng kể từ chuẩn bị dung dịch Dung dịch đối chiếu: Cân 0,10 g gentamicin sulfat chuẩn (ĐC), tiến hành tương tự phần chuẩn bị dung dịch thử Điều kiện sắc ký: Cột thép không gỉ (15 cm x 4,6 mm) nhồi pha tĩnh C (5 µm) Detector quang phổ tử ngoại đặt bước sóng 330 nm Tốc độ dòng: 1,5 ml/phút Thể tích tiêm: 20 µl Cách tiến hành: Tiêm dung dịch đối chiếu Với điều kiện sắc ký trên, thời gian lưu thành phần C2 khoảng 10 đến 20 phút Thời gian lưu tương đối so với thành phần C thuốc thử khoảng 0,13; thành phần C1 khoảng 0,27; thành phần C1a khoảng 0,65 thành phần C2a khoảng 0,85 Hệ thống thích hợp độ phân giải pic thành phần C 2a píc thành phần C2 phải 1,3 Điều chỉnh lượng methanol pha động cần thiết Điều chỉnh độ nhạy cho chiều cao pic tương ứng với thành phần C khoảng 75% thang đo, đường kẻ từ điểm xuất phát pic thuốc thử Đo chiều cao pic tương ứng với thành phần gentamicin Tính hệ số đáp ứng (Rx) thành phần theo công thức sau: H Rx = x Fx Trong đó: FX tỷ lệ phần trăm thành phần Cx gentamicin sulfat đối chiếu HX chiều cao pic thành phần Cx sắc ký đồ dung dịch đối chiếu Tiêm dung dịch thử tiến hành tương tự dung dịch đối chiếu Đo chiều cao pic tương ứng với thành phần gentamicin Tính tỷ lệ phần trăm thành phần C 1; C1a; C2 C2a chế phẩm theo công thức sau: H 'x Rx C x (%) = ' ' H1 H1a H '2a H '2 + + + R R1a R 2a R Trong đó: H'x chiều cao pic tương ứng với thành phần Cx sắc ký đồ dung dịch thử Tỷ lệ phần trăm thành phần gentamicin phải nằm giới hạn sau: Thành phần C1: từ 25,0 đến 50,0% Thành phần C1a: từ 10,0 đến 35,0% Tổng thành phần C2 C2a: từ 25,0 đến 55,0% Nước Không 15,0% (Phụ lục 10.3) Dùng 0,300 g chế phẩm Tro sulfat Không 1,0% (Phụ lục 9.9, phương pháp 2) Dùng 0,50 g chế phẩm Sulfat Phải từ 32,0 đến 35,0% sulfat (SO4) tính theo chế phẩm khan Hòa tan 0,250 g chế phẩm 100 ml nước, điều chỉnh pH dung dịch thu đến 11 amoniac đậm đặc (TT) Thêm 10,0 ml dung dịch bari clorid 0,1 M (CĐ) thêm khoảng 0,5 mg phthalein đỏ tía (TT) Chuẩn độ dung dịch natri edetat 0,1 M (CĐ), dung dịch bắt đầu chuyển màu thêm 50 ml ethanol 96% (TT) tiếp tục chuẩn độ màu xanh tím ml dung dịch bari clorid 0,1 M (CĐ) tương đương với 9,606 mg sulfat (SO4) Độ vô khuẩn Chế phẩm phải vô khuẩn (Phụ lục 13.7) chế phẩm dùng để pha chế thuốc tiêm thuốc nhỏ mắt mà không tiến hành phương pháp tiệt trùng thích hợp Nội độc tố vi khuẩn Không 0,71 đơn vị nội độc tố vi khuẩn mg gentamycin (Phụ lục 13.2) chế phẩm dùng để pha thuốc tiêm mà không áp dụng phương pháp loại bỏ nội độc tố vi khuẩn Định lượng Tiến hành theo phương pháp vi sinh vật (Phụ lục 13.9) Bảo quản Đựng đồ bao gói kín Nếu chế phẩm vô khuẩn, đựng đồ bao gói vô khuẩn, kín đảm bảo Nhãn Phải ghi rõ chế phẩm vô khuẩn nội độc tố vi khuẩn Loại thuốc Kháng khuẩn Chế phẩm Kem thuốc, thuốc nhỏ mắt, thuốc tiêm, thuốc mỡ