THUỐC NHỎ MẮT HYDROCORTISON VÀ NEOMYCIN Collyrium Hydrocortisoni et Neomycini Thuốc nhỏ mắt hydrocortison neomycin hỗn dịch vô trùng hydrocortison acetat dung dịch neomycin sulfat nước Chế phẩm phải đáp ứng yêu cầu chuyên luận "Thuốc nhỏ mắt" (Phụ lục 1.14) yêu cầu sau: Hàm lượng hydrocortison acetat, C23H32O6, từ 90,0% đến 110,0% so với hàm lượng ghi nhãn Hàm lượng neomycin, từ 90,0% đến 130,0% so với hàm lượng ghi nhãn Tính chất Hỗn dịch màu trắng đục, đồng lắc kỹ Định tính A Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4) Bản mỏng: Silica gel G Dung môi khai triển: Methanol : amoniac 13,5 : cloroform (60 : 40 : 20) Dung dịch thử: Pha loãng thể tích thuốc nhỏ mắt chứa 3500 IU neomycin thành 2,5 ml nước, lắc kỹ với ml cloroform (TT), ly tâm sử dụng lớp nước phía Dung dịch đối chiếu: Dung dịch neomycin sulfat chuẩn 0,2% Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng µl dung dịch Triển khai sắc ký đến dung môi khoảng 3/4 chiều dài mỏng Lấy mỏng để mỏng khô không khí Phun lên mỏng dung dịch ninhydrin 1% n-butanol (TT) sấy 105 0C phút Vết sắc ký đồ dung dịch thử phải phù hợp với vết sắc ký đồ dung dịch đối chiếu vị trí, màu sắc kích thước B Trong phần Định lượng hydrocortison acetat, pic sắc ký đồ dung dịch thử phải có thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu pic hydrocortison acetat sắc ký đồ dung dịch chuẩn pH Từ 5,5 đến 7,5 (Phụ lục 6.2) Định lượng Neomycin Lấy xác thể tích chế phẩm có chứa khoảng 3500 IU neoycin vào bình định mức 50 ml, thêm dung dịch đệm số (TT) tới định mức Pha loãng 10,0 ml dung dịch với dung môi thành 100 ml để thu dung dịch thử có nồng độ tương đương với dung dịch chuẩn Tiến hành định lượng theo chuyên luận "Xác định hoạt lực thuốc kháng sinh phương pháp thử vi sinh vật" (Phụ lục 13.9) Hydrocortison acetat Phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Pha động: N-butyl clorid - nước bão hòa n-butyl clorid – tetrahydrofuran – methanol - acid acetic băng (95 : 95 : 14 : : 6) Dung dịch chuẩn nội: Hoà tan lượng fluoxymesteron cloroform (TT) để thu dung dịch có nồng độ khoảng 0,8 mg/ml Dung dịch chuẩn: Hoà tan khoảng 10 mg hydrocortison acetat chuẩn 10,0 ml dung dịch chuẩn nội 40,0 ml cloroform (TT) Lọc Dung dịch thử: Lấy xác thể tích chế phẩm, lắc kỹ bọt khí, tương đương với 10 mg hydrocortison acetat vào bình gạn thích hợp Thêm xác 10,0 ml dung dịch chuẩn nội 40,0 ml cloroform (TT), lắc kỹ khoảng phút để phân lớp hoàn toàn Lấy lớp cloroform làm dung dịch thử Điều kiện sắc ký: Cột thép không gỉ (30 cm x 4,0 mm) nhồi pha tĩnh A (10 µm) Detector quang phổ tử ngoại đặt bước sóng 254 nm Tốc độ dòng: 1,0 ml/phút Thể tích tiêm: 20 µl Cách tiến hành: Kiểm tra khả thích hợp hệ thống sắc ký: Tiến hành sắc ký dung dịch chuẩn, thời gian lưu tương đối hydrocortison acetat 0,7 fluoxymesteron 1,0 Phép thử có giá trị độ phân giải hai pic hydrocortison acetat chuẩn nội không nhỏ 3,0; độ lệch chuẩn tương đối diện tích pic lần tiêm lặp lại không lớn 2,0% Tiến hành sắc ký dung dịch chuẩn dung dịch thử Tính hàm lượng hydrocortison acetat,C 23H32O6, chế phẩm dựa vào tỷ lệ diện tích pic hydrocortison acetat diện tích pic chuẩn nội thu sắc ký đồ dung dịch thử, dung dịch chuẩn hàm lượng C23H32O6 hydrocortison acetat chuẩn, Bảo quản Để nơi khô mát, tránh ánh sáng