SƠ ĐỒ THÍ NGHIỆM 6.3g cysteine hydrochloride, 1l NaOH 0.054M Hòa tan Nhựa đu đủ 180g 200-300 ml dung dịch 100g celite 150g cát Nghiền Nhiệt độ phòng Trích ly Khi nhựa tạo huyền phù gạn bỏ lớp 300ml dung dịch Lọc Nước lọc Phần bã Nước lọc 110ml NaOH 1M Chỉnh pH Lọc (NH4)2SO4 Kết tủa Tinh thể • Thêm chậm NaOH • Khuấy • pH=9.0 Có thể thay ly tâm 2600v/phút, t=1h, loại bỏ tủa xám • Thêm (NH4)2SO4 đến 40% độ bão hòa • T= 1-2h Ly tâm • 2500v/phút • T=4-5h • Thu tủa bỏ dịch lỏng Kết tinh • pH 6.5 • Giữ nhiệt độ phòng 30 phút • Giữ qua đêm 40oC 400ml cysteine 0.002M Ly tâm 400-500ml (NH4)2SO4 • 2500v/phút • Bỏ dịch lỏng, thu lấy tủa Ly tâm • 2500v/phút • T=1h • Bỏ dịch lỏng thu tủa Kết tủa • pH 7-7.5 • Thêm chậm NaCl • T=1h Rửa 600ml cysteine 0.02M Phần tủa 60g NaCl Hòa tan Tinh thể Nước cất Kết tinh lại Dd NaCl bão hòa Ly tâm Sấy chân không Papain Dd đệm phosphate chứa cysteine • Thêm nước đến C%=1% • Dd NaCl:dd Protein = 1:30 • Giữ 40oC qua đêm • 2500v/phút • T=4-5h • Thu lấy kết tinh • Nhiệt độ 40oC Dung dịch sau lọc Lọc Màng lọc 4000A0 Quy trình tăng hoạt tính enzyme (có thể thực không) Quy trình sản xuất enzyme papain