Nghiên cứu ứng dụng phổ raman trong việc sàng lọc nhanh thuốc giả

BỘ Y TẾ TRƯ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘ ỘI NGUYỄN HƯƠNG TRÀ Mã sinh viên: 1101547 NGHIÊN CỨU C ỨNG DỤ ỤNG PHỔ Ổ RAMAN TRONG VI VIỆC SÀNG LỌC L NHANH THUỐ ỐC GIẢ KHÓA LUẬN LU TỐT NGHIỆP DƯỢC CS SĨ HÀ NỘI – 2016 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN HƯƠNG TRÀ Mã sinh viên: 1101547 NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG PHỔ RAMAN TRONG VIỆC SÀNG LỌC NHANH THUỐC GIẢ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: Ths Đặng Thị Ngọc Lan Ths Nguyễn Thị Thùy Linh Nơi thực hiện: Bộ môn Hóa phân tích độc chất Trường Đại học Dược Hà Nội HÀ NỘI – 2016 LỜI CẢM ƠN Trước hết, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc gửi lời cảm ơn chân thành đến ThS Đặng Thị Ngọc Lan ThS Nguyễn Thị Thùy Linh trực tiếp hướng dẫn, giúp đỡ, bảo tận tình suốt trình thực khóa luận Tôi xin cảm ơn thầy cô Bộ môn Hóa phân tích Độc chất tạo điều kiện cung cấp cho tài liệu cần thiết, dụng cụ, thiết bị trình làm thực nghiệm để hoàn thành khóa luận Tôi xin cảm ơn Ban giám hiệu, thầy cô giáo cán nhân viên Trường đại học Dược Hà Nội - người dạy bảo trang bị cho kiến thức khoa học tảng suốt thời gian học mái trường Tôi xin cảm ơn bạn bè đồng hành suốt trình học tập trường Cuối cùng, xin dành biết sâu sắc đến bố mẹ tất người thân gia đình người bên khích lệ, động viên, giúp đỡ suốt thời gian học tập Hà Nội, ngày 11 tháng 05 năm 2016 Sinh viên Nguyễn Hương Trà MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan thuốc giả 1.1.1 Định nghĩa 1.1.2 Vấn đề thuốc giả giới Việt Nam 1.1.3 Một số phương pháp sử dụng để phát thuốc giả 1.2 Tổng quan thuốc nghiên cứu đề tài 1.2.1 Sildenafil 1.2.2 Ibuprofen 1.2.3 Lamivudin 1.3 Tổng quan phương pháp quang phổ Raman 1.3.1 Lịch sử phát triển 1.3.2 Nguyên lý quang phổ Raman 10 1.3.3 Thiết bị quang phổ Raman 12 1.3.4 Ưu điểm 12 1.3.5 Nhược điểm 13 1.3.6 Ứng dụng quang phổ Raman 13 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Nguyên liệu thiết bị 15 2.1.1 Nguyên liệu 15 2.1.2 Thiết bị 15 2.2 Nội dung nghiên cứu 16 2.3 Phương pháp nghiên cứu 16 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 18 3.1 Công thức bào chế viên nén viên nang hoạt chất dùng nghiên cứu 18 3.1.1 Công thức bào chế viên nén viên nang hoạt chất Sildenafil 18 3.1.2 Công thức bào chế viên nén viên nang hoạt chất Ibuprofen 21 3.1.3 Công thức bào chế viên nén viên nang hoạt chất Lamivudin 24 3.2 Kiểm tra chất lượng mẫu viên nghiên cứu 27 3.3 Kết 27 3.3.1 Xác định dịch chuyển Raman 27 3.3.1.1 Quy trình phân tích 27 3.3.1.2 Bộ dịch chuyển Raman Sildenafil 28 3.3.1.3 Bộ dịch chuyển Raman Ibuprofen 30 3.3.1.4 Bộ dịch chuyển Raman Lamivudin 31 3.3.1.5 Khảo sát chế phẩm thị trường 32 3.3.2 Xác định giới hạn phát 35 3.4 Bàn luận 38 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 40 Kết luận 40 Kiến nghị 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Tiếng Anh CT Tiếng Việt Công thức HPLC High - performance liquid chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao HQI Hit Quality Index Hệ số tương đồng phổ IR Intrared Hồng ngoại kl/kl Khối lượng/khối lượng kl/tt Khối lượng/thể tích mg Miligam ml Mililit N Mol/lít NIR Near Intrared nm Cận hồng ngoại Nanomet TLC Thin - layer chromatography Sắc ký lớp mỏng UV-VIS Untraviolet – Visible Tử ngoại-khả kiến WHO World Health Organization Tổ chức Y tế Thế giới DANH MỤC CÁC BẢNG STT Bảng Nội dung Bảng 1.1 Bảng 2.1 Bảng 2.2 Bảng 3.1 Công thức bào chế viên nén Sildenafil 18 Bảng 3.2 Công thức bào chế viên nang Sildenafil 20 Bảng 3.3 Công thức bào chế viên nén Ibuprofen 21 Bảng 3.4 Công thức bào chế viên nang Ibuprofen 23 Bảng 3.5 Công thức bào chế viên nén Lamivudin 24 Bảng 3.6 Công thức bào chế viên nang Lamivudin 26 Tỷ lệ thuốc đông dược, dược liệu không đạt chất lượng từ năm 2010 – 2014 Các thông số kỹ thuật máy quang phổ Raman để bàn Các thông số kỹ thuật máy quang phổ Raman cầm tay Trang 15 15 Các đỉnh đặc trưng tỷ lệ cường độ Raman 10 Bảng 3.7 đỉnh đặc trưng phổ Sildenafil chuẩn 28 mẫu viên tự bào chế Các đỉnh đặc trưng tỷ lệ cường độ Raman 11 Bảng 3.8 đỉnh đặc trưng phổ viên thực chế tạo 29 chứa 50% Sildenafil 12 Bảng 3.9 Bộ dịch chuyển Raman Sildenafil 29 Các đỉnh đặc trưng tỷ lệ cường độ Raman 13 Bảng 3.10 đỉnh đặc trưng phổ Ibuprofen chuẩn 30 mẫu viên tự bào chế Các đỉnh đặc trưng tỷ lệ cường độ Raman 14 Bảng 3.11 đỉnh đặc trưng phổ viên thực chế tạo 31 có hàm lượng 50% Ibuprofen 15 Bảng 3.12 Bộ dịch chuyển Raman Ibuprofen 31 16 Bảng 3.13 17 Bảng 3.14 18 Bảng 3.15 19 Bảng 3.16 20 Bảng 3.17 Vị trí tỷ lệ cường độ Raman đỉnh đặc trưng Lamivudin Bộ dịch chuyển Raman Lamivudin Kết đo phổ Raman chế phẩm khảo sát có chứa Sildenafil Kết đo phổ Raman chế phẩm khảo sát có chứa Ibuprofen Kết đo phổ Raman chế phẩm khảo sát có chứa Lamivudin 32 32 33 34 34 Vị trí đỉnh đặc trưng tỷ lệ cường độ 21 Bảng 3.18 Raman đỉnh đặc trưng Ibuprofen CT5 37 hàm lượng 20% 22 Bảng 3.19 Kết giới hạn phát hoạt chất 37 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ STT Hình Nội dung Hình 1.1 Hình 1.2 Tỷ lệ thuốc giả qua năm từ 2010 – 2014 Hình 1.3 Công thức cấu tạo Sildenafil Hình 1.4 Công thức cấu tạo Ibuprofen Hình 1.5 Công thức cấu tạo Lamivudin Hình 1.6 Hình 1.7 Sơ đồ cấu tạo máy quang phổ Raman 11 Hình 1.8 Máy quang phổ Raman cầm tay hãng NanoRam® 12 Hình 1.9 10 Hình 3.1 Phổ Raman Sildenafil chuẩn 28 11 Hình 3.2 Phổ Raman viên nang Sildenafil 28 12 Hình 3.3 Phổ Raman Ibuprofen chuẩn 30 13 Hình 3.4 Phổ Raman viên nén Ibuprofen 30 14 Hình 3.5 Phổ Raman Lamivudin chuẩn 31 15 Hình 3.6 16 Hình 3.7 17 Hình 3.8 18 Hình 3.9 19 Hình 3.10 Tỷ lệ thuốc chất lượng qua năm từ 2010 – 2014 Các thành phần thu sau cho ánh sáng kích thích đến mẫu Máy quang phổ Raman để bàn sản xuất hãng Renishaw Phổ Raman viên nang Lamivudin có hàm lượng giảm 50% Phổ Raman Ibuprofen CT5 hàm lượng 20% không phát hoạt chất Hình ảnh chồng phổ Ibuprofen CT5 hàm lượng 20% so với hàm lượng 100% Phổ Raman Lamivudin CT2 hàm lượng 30% không phát hoạt chất Hình ảnh chồng phổ Lamivudin CT2 hàm Trang 10 12 31 35 35 36 36 lượng 20% so với phổ Lamivudin chuẩn 20 Hình 3.11 21 Hình 3.12 Phổ Raman Sildenafil CT3 hàm lượng 5% không phát hoạt chất Hình ảnh chồng phổ Sildenafil CT3 hàm lượng 5% so với hàm lượng 100% công thức 36 36 32 Phân tích phổ chuẩn Lamivudin, phổ viên placebo phổ viên tự bào chế, xác định đỉnh đặc trưng tỷ lệ cường độ Raman đỉnh đặc trưng loại viên bảng 3.13 Bảng 3.13 Vị trí tỷ lệ cường độ Raman đỉnh đặc trưng Lamivudin Raman shift (cm-1) Tỷ lệ 798 781 1243 1258 1288 594 1202 1612 1522 986 2,30 2,27 2,13 1,09 1,01 1,00 0,86 0,78 0,75 0,60 Dao động vị trí loại viên Dao động tỷ lệ loại viên 798 780 1243 1258 1288 594 1202 1612 1522 986 ±0 ±1 ±1 ±1 ±0 1,67- 1,61- 1,62- 0,61- 0,682,35 2,61 2,30 1,18 1,09 ±1 ±2 1,00 ±1 ±2 ±1 0,73- 0,68- 0,47- 0,410,95 0,85 0,84 0,67 Trên viên có hàm lượng dược chất Lamivudin 50% so với hàm lượng mẫu viên thực tế có khối lượng viên, phổ Raman chúng cho đỉnh trùng với đỉnh đặc trưng phổ chuẩn tỷ lệ cường độ Raman đỉnh 1613 cm-1 nằm giới hạn xác định Cũng tương tự với Ibuprofen, mở rộng khoảng giới hạn tỷ lệ cường độ đỉnh 1613 cm-1 thành 0,64-0,85 để hạn chế âm tính giả Bảng 3.14 Bộ dịch chuyển Raman Lamivudin Raman shift (cm-1) Tỷ lệ 798 780 ±0 ±1 ±1 1,56- 1,6- 1,6- 2,45 2,67 1243 1258 2,30 1288 594 1202 1612 1522 986 ±1 ±0 ±1 ±2 ±1 ±2 ±1 0,6- 0,68- 0,72- 0,64- 0,45- 0,41- 0,95 0,95 0,89 0,67 1,19 1,09 1,00 3.3.1.5 Khảo sát chế phẩm thị trường Các viên chứa Sildenafil: - Viagra 100mg Pfizer, lô 121483352, ký hiệu SI1 33 - Adagrin 50mg ICA, lô 010613, ký hiệu SI2 - Caverta 100mg Ranbaxy, lô 2428179, ký hiệu SI3 - Sildenafil 100mg SAVA, lô 4230C, ký hiệu SI4 - Sildenafil 50mg Badinh, lô 010114, ký hiệu SI5 Các viên chứa Ibuprofen: - Ibuprofen STADA 400mg STADA-VN, lô 070913 ký hiệu IB1 - Ibuprofen 400mg TV Pharma, lô 01082015, ký hiệu IB2 - Mofen 400 Medopharm India, lô 3934, ký hiệu IB3 - Ibuflam 400 Axon drugs PVT, lô B13JFMO, ký hiệu IB4 - Nurofen 400mg Reckitt Benckiser, lô 166, ký hiệu IB5 Các viên chứa Lamivudin: - Lamivudin STADA 100mg STADA-VN, lô 010313, ký hiệu LA1 - Zeffix 100mg GlaxoSmith Kline, lô R655179, ký hiệu LA2 - Lamivir HBV 100mg Cipla, lô A00328, ký hiệu LA3 - Lamivudine HBV 100mg Alpha, lô 65015, ký hiệu LA4 - Mevudine 100mg Medipharco, lô 100113, ký hiệu LA5 Tiến hành khảo sát thực tế mẫu viên chứa Sildenafil (SI1-SI5), mẫu viên chứa Ibuprofen (IB1-IB5) mẫu viên chứa Lamivudin (LA1-LA5) có thị trường, kết thu bảng 3.15, bảng 3.16, bảng 3.17 Bảng 3.15 Kết đo phổ Raman chế phẩm khảo sát có chứa Sildenafil Raman 1580 ± 1563 ± 1529 ± 1238 ± 1404 ± (Tỷ lệ) (1,85-2,20) (0,97-1,31) (0,95-1,19) (1,00) (0,48-0,61) SI1 1580 (1,94) 1561 (0,97) 1529 (0,96) 1238 (1,00) 1403 (0,55) SI2 1581 (2,11) 1563 (1,14) 1529 (1,08) 1238 (1,00) 1404 (0,60) SI3 1580 (2,03) 1563 (1,13) 1529 (1,06) 1238 (1,00) 1404 (0,55) SI4 1580 (2,20) 1563 (1,19) 1529 (1,11) 1238 (1,00) 1403 (0,62) SI5 1580 (2,17) 1563 (1,13) 1529 (1,06) 1238 (1,00) 1404 (0,59) shift (cm-1) 34 Bảng 3.16 Kết đo phổ Raman chế phẩm khảo sát có chứa Ibuprofen Raman shift 833 ± 1607± 1182±2 1208±2 139 ± 746±1 1008±1 -1 (cm ) (Tỷ lệ) (1,05-1,64) IB1 IB2 IB3 IB4 IB5 (1,00) (0,54-0,99) (0,50-0,76) (0,46-0,76) (0,47-0,70) (0,30-0,50) 834 1608 1182 1206 140 745 1007 (1,63) (1,00) (0,85) (0,70) (0,69) (0,65) (0,47) 834 1608 1180 1206 140 745 1008 (1,22) (1,00) (0,57) (0,56) (0,59) (0,62) (0,40) 834 1608 1180 1208 140 745 1007 (1,03) (1,00) (0,68) (0,54) (0,56) (0,59) (0,37) 834 1608 1180 1208 140 745 1008 (1,07) (1,00) (0,57) (0,50) (0,54) (0,58) (0,30) 834 1607 1182 1206 138 745 1007 (1,48) (1,00) (0,76) (0,64) (0,61) (0,60) (0,47) Bảng 3.17 Kết đo phổ Raman chế phẩm khảo sát có chứa Lamivudin Raman shift (cm-1) (Tỷ lệ) LA1 798 780 1243 1258 1288 594 1202 1612 1522 986 ±0 ±1 ±1 ±1 ±0 ±1 ±2 ±1 ±2 ±1 (0,72- (0,64- (0,45- (0,41- 0,95) 0,95) 0,89) 0,67) 1203 1613 1520 986 (1,92) (2,08) (1,78) (0,82) (0,82) (1,00) (0,82) (0,76) (0,67) (0,52) 1613 1522 985 (2,45) (2,67) (2,28) (1,19) (1,02) (1,00) (0,82) (0,92) (0,89) (0,60) 1612 1522 986 (1,59) (1,71) (1,68) (0,65) (0,73) (1,00) (0,79) (0,80) (0,45) (0,44) 1613 1521 986 (1,83) (1,90) (1,73) (0,82) (0,93) (1,00) (0,72) (0,80) (0,69) (0,52) 1612 1522 985 (1,68) (1,78) (1,90) (0,84) (0,78) (1,00) (0,82) (0,71) (0,59) (0,48) (1,56- (1,61- (1,62- (0,61- (0,682,45) 2,67) 2,30) 1,19) 1,09) 798 780 1244 1259 1288 798 LA2 798 LA3 798 LA4 LA5 798 780 780 779 779 1243 1243 1243 1243 1258 1259 1258 1258 1288 1288 1288 1287 (1,00) 593 593 593 593 593 1202 1203 1203 1202 35 Kết cho thấy đỉnh đặc trưng tỷ lệ cường độ Raman nằm giới hạn cho phép xác định bảng 3.9, bảng 3.12 bảng 3.14 Như vậy, chế phẩm có chứa hoạt chất (Sildenafil, Ibuprofen hay Lamivudin) tương ứng 3.3.2 Xác định giới hạn phát - Dập viên có hàm lượng dược chất giảm dần 40%, 30%, 20%, 15%, 10%, 5% so với hàm lượng thực tế (khối lượng viên không thay đổi) - Đo viên có hoạt chất từ hàm lượng cao đến hàm lượng thấp so sánh với phổ chuẩn để xác định giới hạn phát hoạt chất viên Đo đến viên mà máy quang phổ nhận diện cho phổ chuẩn hàm lượng hoạt chất viên giới hạn phát hoạt chất viên Ibuprofen CT5-20% Ibu.CT5-20% Ibu.CT5-100% 9000 8000 8000 7000 7000 6000 6000 5000 5000 4000 3000 4000 2000 3000 1000 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 -1 Raman shift (cm ) Hình 3.7 Phổ Raman Ibuprofen CT5 hàm lượng 20% không phát hoạt chất Raman shift (cm-1) Hình 3.8 Hình ảnh chồng phổ Ibuprofen CT5 hàm lượng 20% so với hàm lượng 100% công thức 36 Lami CT2-20% Lami chuan Lami.CT2-30% 9000 8000 8000 7000 7000 6000 6000 5000 5000 4000 4000 3000 3000 2000 2000 1000 1000 0 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 200 400 600 Raman shift (cm-1) 800 1000 1200 1400 1600 1800 Raman shift (cm-1) Hình 3.9 Phổ Raman Lamivudin Hình 3.10 Hình ảnh chồng phổ CT2 hàm lượng 30% không phát Lamivudin CT2 hàm lượng 20% so với phổ hoạt chất Lamivudin chuẩn Sil CT3-5% Sil CT3-100% 25000 Sidenafil CT3-5% 20000 10000 15000 8000 6000 10000 4000 5000 2000 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 Raman shift (cm-1) 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 Raman shift (cm-1) Hình 3.11 Phổ Raman Sildenafil Hình 3.12 Hình ảnh chồng phổ CT3 hàm lượng 5% không phát Sildenafil CT3 hàm lượng 5% so với hàm hoạt chất lượng 100% công thức Dùng phần mềm vẽ phổ, chồng phổ viên có hàm lượng hoạt chất giảm dần với phổ viên đủ hàm lượng công thức, ta nhìn sơ thấy hình ảnh phổ viên không giống Quan sát phổ viên hàm lượng hoạt chất giảm mạnh số lượng đỉnh đặc trưng giảm, cường độ đỉnh thấp Như hàm lượng dược chất giảm nhỏ so với khối lượng viên, để đảm bảo khối lượng, lượng tá dược tăng lên hấp thụ tán xạ Raman nhiều 37 làm che số đỉnh đặc trưng dược chất Vì phổ không hình dạng giống phổ chuẩn so sánh máy quang phổ Raman không nhận tương đồng hai phổ Khi xác định đỉnh đặc trưng vị trí đỉnh viên có hàm lượng hoạt chất giảm dần ta thấy có đỉnh trùng với đỉnh đặc trưng hoạt chất có tỷ lệ cường độ Raman đỉnh nằm khoảng giới hạn cho phép Ví dụ Ibuprofen CT5 hàm lượng 20%, ta xác định vị trí có đỉnh đặc trưng bảng 3.18 Bảng 3.18 Vị trí đỉnh đặc trưng tỷ lệ cường độ Raman đỉnh đặc trưng Ibuprofen CT5 hàm lượng 20% Raman shift 832 1608 744 1208 Tỷ lệ 0,87 (1,05-1,64) 1,00 0,74 (0,47-0.70) 0,90 (0,5-0,75) Sildenafil có cường độ tán xạ Raman mạnh, cho đỉnh đặc trưng rõ nên giảm hàm lượng dược chất viên xuống thấp cho tín hiệu tốt không bị ảnh hưởng nhiều lượng tá dược, hàm lượng dược chất 15% phát được, giảm xuống 5% hàm lượng dược chất không phát lượng tá dược tăng lên nhiều Với hai hoạt chất Ibuprofen Lamivudin, hàm lượng dược chất giảm xuống 20-30% bắt đầu không phát nữa, lý hai hoạt chất có cường độ tán xạ Raman không mạnh, cường độ đỉnh đặc trưng không cao rõ Sildenafil nên hàm lượng hoạt chất giảm bị ảnh hưởng nhiều lượng tá dược tăng lên, nên giới hạn phát hai chất hàm lượng cao Bảng 3.19 Kết giới hạn phát hoạt chất Giới hạn phát Hoạt chất Hàm lượng dược chất/viên (kl/kl) Ibuprofen 20 % - 30% Lamivudin 30% Sildenafil 5% 38 3.4 Bàn luận Thuốc thị trường đa dạng, tùy vào loại hoạt chất mục đích sử dụng, hàm lượng hoạt chất viên khác Ngay với hoạt chất, lượng hoạt chất viên, nhiều công ty dược sản xuất chế phẩm có thành phần hàm lượng (khối lượng/khối lượng) dược chất viên khác Tuy nhiên, dạng bào chế, chúng hình thành hoạt chất số loại tá dược Chẳng hạn với viên nén thường bao gồm hai phần: phần vỏ phần lõi Phần vỏ gồm tá dược bao tá dược màu, phần lõi gồm dược chất tá dược độn, rã, dính, trơn Phổ Raman đặc trưng cho dao động liên kết phân cực Cùng với phổ hồng ngoại, hỗ trợ cho việc phân tích cấu trúc phân tử Tuy nhiên, đỉnh liên kết đặc trưng, có xạ kích thích chiếu vào, phân tử tán xạ xạ tương tác gốc, liên kết phân tử với tạo nên đỉnh đặc trưng riêng cho phân tử Các đỉnh đặc trưng sử dụng “dấu vân tay” để so sánh tìm có phải chất khảo sát hay không Khi sử dụng thiết bị Raman cầm tay, phép phân tích xác định hệ số tương đồng phổ (HQI – Hit quality index) chất chuẩn chất thử máy tính phần mềm tích hợp thiết bị tính toán so sánh theo kiểu “dấu vân tay” dễ dàng cho kết nhanh xác theo mức độ yêu cầu người sử dụng Khi so sánh phổ chất chuẩn, mẫu viên chứa dược chất viên placebo, ta thấy ảnh hưởng tá dược mẫu lên phổ đồ mẫu viên không nhiều, hầu hết chúng làm giảm cường độ đỉnh che chắn làm giảm nồng độ dược chất viên mà không tác động đến đỉnh đặc trưng tỉ lệ cường độ đỉnh Sở dĩ dựa lý sau: - Đo phổ tá dược điều kiện đo với mẫu thử, xác định đỉnh đặc trưng Ta thấy phổ đồ tá dược cho đỉnh đặc trưng, đỉnh không trùng với đỉnh phổ chuẩn Ibuprofen, Sildenafil, Lamivudin 39 - Đo phổ placebo điều kiện đo với mẫu thử: Cường độ phổ mẫu viên placebo thấp so sánh với cường độ phổ số đỉnh đặc trưng mẫu viên tương ứng Tuy mẫu phức tạp, chứa nhiều tá dược khác nhau, phổ đặc trưng viên placebo chủ yếu mang đặc trưng loại tá dược có hàm lượng lớn thường tá dược độn, tá dược độn lại chất trơ với tán xạ Raman - Quy trình xây dựng dựa xác định chất thông qua chất phổ, tức dựa vào đỉnh đặc trưng tỷ lệ cường độ đỉnh đặc trưng ấy, đỉnh có cường độ lớn định kết phép đo Nền mẫu cường độ hấp thụ thấp, dược chất có cường độ hấp thụ lớn lý để giảm bớt ảnh hưởng mẫu tới kết phép đo Sơ khảo sát giới hạn phát hoạt chất, nhận thấy: giới hạn phát Ibuprofen Lamivudin khoảng 20-30%, Sidenafil 5% Tuy nhiên, giới hạn khảo sát với viên nén thiết bị máy cầm tay Với trường hợp thuốc giả không đủ hàm lượng kết luận thuốc giả hàm lượng nằm giới hạn phát hiện, với hàm lượng lớn chưa thể khẳng định chắn thuốc giả hay không so phổ với phổ chuẩn hệ số HQI thấp với trường hợp đủ hàm lượng hoạt chất; trường hợp cần đem mẫu định lượng phương pháp phân tích khác kết luận xác Tuy vậy, hoàn toàn áp dụng phương pháp xây dựng nghiên cứu để sàng lọc nhanh thuốc giả Thực tế kiểm nghiệm loại thuốc giả không đủ hàm lượng thị trường cho kết hàm lượng dược chất nằm khoảng giới hạn phát hoạt chất, ta dùng quang phổ Raman để sơ xác định hàm lượng với mục tiêu phát nhanh thuốc không đủ hàm lượng Phương pháp quang phổ Raman cho ta thấy nhiều ưu điểm so với số phương pháp kiểm tra mẫu nhanh khác thị trường (như phương pháp minilab) nên phương pháp quang phổ Raman ứng dụng nhiều công tác sàng lọc nhanh thuốc giả ngày phát triển 40 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ kết nghiên cứu trình bày đây, rút kết luận sau: - Đã xây dựng dịch chuyển Raman ba hoạt chất Sildenafil, Ibuprofen Lamivudin với đỉnh đặc trưng, khoảng dao động vị trí cường độ giá trị dịch chuyển Raman - Đã ứng dụng để kiểm tra chế phẩm có chứa ba hoạt chất thị trường cho kết khả quan - Xác định giới hạn phát ba hoạt chất Sildenafil, Ibuprofen Lamivudin Kiến nghị - Tiếp tục nghiên cứu ứng dụng phương pháp quang phổ phổ Raman với hoạt chất khác lưu hành thị trường Việt Nam - Tiếp tục triển khai tiếp đề tài theo hướng định lượng để góp phần kiểm tra thuốc chất lượng thị trường TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt: Bộ Y Tế (2010), Hướng dẫn việc quản lý chất lượng thuốc, số 09/2010/TTBYT, ngày 28 tháng 04 năm 2010 Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, Nhà xuất Y học, Hà Nội Bộ Y Tế (2009), Dược thư Quốc gia Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội Bộ Y tế (2007), Dược lý học, Nhà xuất Y học, Hà Nội Trần Quang Hinh (1999), Phát số thuốc cấm (Heroin-MorphinCodein, Chất gây nghiện) phương pháp quang phổ FT-Raman, Luận văn thạc sỹ khoa học vật lý, Trường Đại học Khoa học tự nhiên TP Hồ Chí Minh, TP Hồ Chí Minh Nguyễn Thị Mai Linh (2014), Tổng quan số ứng dụng quang phổ Raman kiểm nghiệm dược phẩm, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội Nguyễn Thị Thùy Linh (2015), Xây dựng phương pháp phân tích phát nhanh thuốc giả phổ Raman, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội Bùi Việt Phương (2014), Nghiên cứu phương pháp phân tích phát nhanh thuốc giả sử dụng thiết bị phổ Raman, Luận văn thạc sĩ dược học, trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội Viện Kiểm nghiệm thuốc trung ương (2014), Báo cáo công tác kiểm tra, giám sát chất lượng thuốc năm 2014 định hướng công tác năm 2015, Hà Nội Tài liệu tiếng Anh: 10 Arruabarrena J., Coello J., Maspoch S (2014), "Raman spectroscopy as a complementary tool to assess the content uniformity of dosage units in breakscored warfarin tablets", International journal of pharmaceutics, 465, pp 299305 11 Assi Sulaf (2013), "Raw material identification using dual laser handheld Raman spectroscopy", European Pharmaceutical Review, 18(5), pp 25-30 12 Bate Roger, Boateng Kathryn (2007), "Bad Medicine in the Market", American Enterprise institute for public policy research, 8, pp 1-6 13 Bell Steven E J., Burns D Thorburn, Dennis Andrew C., Speers James S (2000), "Rapid analysis of ecstasy and related phenethylamines in seized tablets by Raman spectroscopy", Analyst, 125, pp 541-544 14 Brits Marius, Kopp Sabine (2014), "Combating unsafe medical products: outcomes of a survey on testing of suspect medicines", WHO Drug Information, 28(3), pp 317-323 15 Buckley Kevin, Matousek Pavel (2011), "Recent advances in the application of transmission Raman spectroscopy to pharmaceutical analysis", Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 55, pp 645-655 16 Buckley Kevin, Matousek Pavel (2011), "Non-invasive analysis of turbid samples using deep Raman spectroscopy", Analyst, 136(15), pp 3039-3050 17 Dégardin Klara, Roggo Yves, Been Frederic, Margot Pierre (2011), "Detection and chemical profiling of medicine counterfeits by Raman spectroscopy and chemometrics", Anal Chim Acta, 705(1-2), pp 334-341 18 Dégardin Klara, Roggo Yves, Margot Pierre (2014), "Understanding and fighting the medicine counterfeit market", Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,87, pp 167-175 19 Deisingh Anil K (2005), "Pharmaceutical counterfeiting", Analyst, 130, pp 171-179 20 Ferraro John R., Nakamoto Kazuo, Brown Chris W (2003), Introductory Raman Spectroscopy, Academic Press, pp 1-27 21 Gamberini M.C., Baraldi C., Tinti A., Rustichelli C., Ferioli V., Gamberini G (2006), "Solid state characterization of chloramphenicol palmitate Raman spectroscopy applied to pharmaceutical polymorphs", Journal of Molecular Structure, 785(1-3), pp 216-224 22 Georgiou Constantinos A (2002), "Analytical Raman spectroscopy", BAU Fen Bill.Enst.Dergisi, 4(2), pp 74-79 23 Gupta P., Singhal K., et al (2012), "Counterfeit (fake) drugs & new technologies to identify it in India", Gupta et al , IJPSR, 3(11), pp 4057-4064 24 Hajjou Mustapha, Qin Yanyan, Bradby Sanford, Bempong Daniel, Lukulay Patrick (2013), "Assessment of the performance of a handheld Raman device for potential use as a screening tool in evaluating medicines quality", J Pharm Biomed Anal, 74, pp 47-55 25 Han Qing-Juan, Wu Hai-Long, Cai Chen-Bo, Xu Lu, Yu Ru-Qin (2008), "An ensemble of Monte Carlo uninformative variable elimination for wavelength selection", Analytical chimica acta, 612, pp 121-125 26 Hargreaves Michael D., Macleod Neil A., Smith Mark R., Darren Andrews, Hammond Stephen V., Matousek Pavel (2011), "Characterisation of transmission Raman spectroscopy for rapid quantitative analysis of intact multicomponent pharmaceutical capsules", Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,54, pp 463-468 27 Hwang Min-Sik, Cho Soohwa, Chung Hoeil, Young-AhWoo (2005), "Nondestructive determination of the ambroxol content in tablets by Raman spectroscopy", J Pharm Biomed Anal, 38(2), pp 210-215 28 Johansson Jonas, Sparén Anders, Svensson Olof, Folestad Staffan, Claybourn Mike (2007), "Quantitative transmission Raman spectroscopy of pharmaceutical tablets and capsules", Applied spectroscopy, 61(11), pp 12111218 29 Kalantri Pushkar P., Somani Rakesh R., Makhija Dinesh T (2010), "Raman spectroscopy: A potenial technique in analysis of pharmaceuticals", Pelagia Research Library, 1(1), pp 1-12 30 Lewis Ian R., Edwards Howell G M (2001), Handbook of Raman Spectroscopy, Marcel Dekker, pp 19-25, 586-601 31 Loethen Yvette L., Rodriguez Jason D (2015), "Field-Deployable Raman AntiCounterfeit Screening of Tamiflu Capsules", American Journal of Analytical Chemistry, 6, pp 559-568 32 Long Derek A (2002), The Raman Effect: A Unified Treatment of the Theory of Raman Scattering by Molecules John Wiley & Sons, pp 31-84 33 Martino R., Malet-Martino M., et al (2010), "Counterfeit drugs: analytical techniques for their identification", Analytical and bioanalytical chemistry, 398(1), pp 77-92 34 Mazurek Sylwester, Szostak Roman (2006), "Quantitative determination of captopril and prednisolone in tablets by FT-Raman spectroscopy", J Pharm Biomed Anal, 40(5), pp 1225-1230 35 McCreery Richard L (2000), Raman Spectroscopy for chemical analysis, John Wiley and Sons, pp 15-40 36 Nuhu Abdulmumin A (2011), "Recent analytical approaches to counterfeit drug detection", Journal of Applied Pharmaceutical Science, 01(05), pp 06-13 37 Okumura Takehiro, Otsuka Makoto (2005), "Evaluation of the microcrystallinity of a drug substance, indomethacin, in a pharmaceutical model tablet by chemometric FT-Raman spectroscopy", Pharm Res, 22(8), pp 1350-1357 38 Pelletier M.J (2003), "Quantitative Analysis Using Raman Spectrometry", Applied Spectroscopy, 57(1), pp 20A-42A 39 Pereira B G., Vianna-Soares C D., Righi A., Pinheiro M V B., Flores M Z S., Bezerra E M., Freire V.N., Lemos V., Caetano E W S., Cavada B S (2007), "Identification of lamivudine conformers Raman scattering measurements and quantum chemical calculations", Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 43, pp 1885-1889 40 Pratiwi Destari, Fawcett J Paul, Gordon Keith C., Rades Thomas (2002), "Quantitative analysis of polymorphic mixtures of ranitidine hydrochloride by 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 Raman spectroscopy and principal components analysis.", Eur J Pharm Biopharm., 54(3), pp 337-341 Ranieri Nicola, Tabernero Patricia, Green Michael D., et al (2014), "Evaluation of a new handheld instrument for the detection of counterfeit artesunate by visual fluorescence comparison", Am J Trop Med Hyg, 91(5), pp 920-924 Robertsa Sarra N Campbell, Williamsa Adrian C., Grimseya Ian M., Boothb Steven W (2002), "Quantitative analysis of mannitol polymorphs FT-Raman spectroscopy", Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 28, pp 1135-1147 Roggo Yves, Degardin Klara, Margot Pierre (2010), "Identification of pharmaceutical tablets by Raman spectroscopy and chemometrics", Talanta, 81(3), pp 988-995 Sanoria Abhishek, Schuster Tobias, Brül Robert (2015), "Raman spectroscopy as a non-destructive tool to quantify the comonomer content in ethylene/1olefin copolymers", Anal Methods, 7(12), pp 5245-5253 Sacré Pierre-Yves, Deconinck Eric, Saerens Lien, Beer Thomas De, Courselle Patricia, Vancauwenberghed Roy, Chiap Patrice, Crommen Jacques, Beer Jacques O De (2011), "Detection of counterfeit Viagra(R) by Raman microspectroscopy imaging and multivariate analysis", J Pharm Biomed Anal, 56(2), pp 454-461 Šašic Slobodan (2007), Pharmaceutical applications of Raman spectroscopy, John Wiley & Sons, pp 1-43 Strachan Clare J., Pratiwi Destari, Gordon Keith C., Rades Thomas (2004), "Quantitative analysis of polymorphic mixtures of carbamazepine by Raman spectroscopy and principal components analysis", Journal of Ramam spectroscopy, 35(5), pp 347-352 Strachan Clare J., Rades Thomas, Gordon Keith C., Rantanen Jukka (2007), "Raman spectroscopy for quantitative anlysis pharmaceutical solids", Pharmacy and pharmacology, 59, pp 179-192 Vankeirsbilck T., Vercauteren A., Baeyens W., Weken G Van der, Verpoort F., Vergote G., Remon J P (2002), "Applications of Raman spectroscopy in pharmaceutical analysis", Trends in analytical chemistry, 21(12), pp 869-877 Vehring Reinhard (2005), "Red-excitation dispersive Raman spectroscopy is a suitable technique for solid-state analysis of respirable pharmaceutical powders", Applied spectroscopy, 59(3), pp 267-391 Veij Marleen de, Deneckere Annelien, Vandenabeele Peter, Kaste Dries de, Moens Luc (2008), "Detection of counterfeit Viagra with Raman spectroscopy", Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 46, pp 303-309 52 Veij Marleen De, Vandenabeele Peter, Beer Thomas De, Remon Jean Paul, Moens Luc (2009), "Reference database of Raman spectra of pharmaceutical expirents", Journal of Ramam spectroscopy, 40, pp 297-307 53 Venhuis B.J., Zomer G., Vredenbregt M.J., Kaste D de (2010), "The identification of (−)-trans-tadalafil, tadalafil, and sildenafil in counterfeit Cialis® and the optical purity of tadalafil stereoisomers", Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 51, pp 723-727 54 Witkowski Mark R (2005), "The Use of Raman Spectroscopy in the Detection of Counterfeit and Adulterated Pharmaceutical Product", American Pharmaceutical Review, pp 1-5 55 WHO (2006), "General Information on counterfeit medicines”; “Combating Counterfeit Drugs: Building Effective International Collaboration'", WHO drug information, 20(2), pp 104-193 56 Yadav Sankalp, Rawal Gautam (2015), "Counterfeit drugs: problem of developing and developed countries", International journal of Pharmaceutical Chemistry and Analysis, pp 46-50 57 Zhang Yan, Huang Xiaoyan, Liu Wenfang, Cheng Zeneng, Chen Chuanpin, Yin Lihui (2009), "Analysis of drugs illegally added into chinese traditional patent medicines using surface-enhanced Raman scattering", Analytical sciences, 29, pp 985-990 58 Zhao Yu, Ji Nan, Yin Lihui, Wang Jun (2015), "A Non-invasive Method for the Determination of Liquid Injectables by Raman Spectroscopy", AAPS Pharm.Sci.Tech, 16(4), pp 914-921 Trang web: 59 http://www.thuocantoan.com.vn 60 http://who.org PHỤ LỤC [...]... laser  Thu phổ quay và phổ dao động – quay với độ phân giải cao trong phổ Raman khó hơn trong phổ hồng ngoại  Chi phí cho các thiết bị quang phổ Raman rất cao, cao hơn phổ hồng ngoại – đó chính là trở ngại lớn để có thể sử dụng như một phép phân tích thông thường [20], [49] 1.3.6 Ứng dụng của quang phổ Raman  Ứng dụng trong thực tiễn Với sự phát triển mạnh mẽ, ngày nay phổ Raman được ứng dụng trong nhiều... mẫu, kỹ thuật đơn giản, dễ sử dụng có thể đáp ứng được nhiệm vụ này Vậy nên, nhằm kiểm soát chất lượng thuốc đang lưu thông, giảm thiểu tình trạng thuốc giả tràn lan trên thị trường và để nâng cao hiệu quả điều trị, tính an toàn cho những người bệnh, chúng tôi thực hiện đề tài: Nghiên cứu ứng dụng phổ Raman trong việc sàng lọc nhanh thuốc giả với 2 mục tiêu: 1 Xây dựng bộ dịch chuyển Raman cơ bản của... phát triển vượt bậc của các bộ lọc quang, sự cải tiến đáng kể về công nghệ phần mềm và ứng dụng của nó trong các phương pháp phân tích dữ liệu … mà quang phổ Raman được ứng dụng rộng rãi hơn và ngày càng phát triển trở thành một phương pháp không thể thiếu trong các Trung tâm nghiên cứu và các trường đại học [46] 10 1.3.2 Nguyên lý cơ bản của quang phổ Raman Quang phổ Raman là hiện tượng tán xạ, xảy... trong quang phổ Raman đặc trưng cho sự thay đổi tần số trong hiệu ứng Raman được gọi là Raman shift” Đối với một chất, cường độ của các bức xạ tương ứng trên Raman shift là khác nhau, chúng tạo nên phổ Raman đặc trưng và duy nhất cho chất đó, đồng thời mỗi nhóm chức thì cho đỉnh phổ ở các số sóng đặc trưng khác nhau Vì vậy, phân tích phổ Raman, chúng ta có thể xác định được chính xác một chất và nghiên. .. Viện Kiểm nghiệm thuốc trung ương cho thấy mẫu thuốc này không cho phản ứng định tính của hoạt chất Amoxycillin Như vậy, thuốc có thông tin nêu trên là thuốc giả [59] 1.1.3 Một số phương pháp đã được sử dụng để phát hiện thuốc giả Trong vài thập kỷ qua, một số kỹ thuật đã được sử dụng để phát hiện thuốc giả Đơn giản nhất là phương pháp so màu, sắc kí lớp mỏng với ưu điểm dễ làm, rẻ tiền, nhanh chóng, nhân... ngành khoa học khác nhau Trong ngành khoa học vật liệu, quang phổ Raman giúp xác định cấu trúc vật liệu, xác định thành phần cấu tạo trong hỗn hợp rắn Trong pháp y, người ta sử dụng quang phổ Raman như một công cụ hiệu quả để tìm ra các chất độc hại, gây tử vong; gần đây còn dùng phổ Raman để xác định chẩn đoán nhanh các bệnh trong y học Trong khảo cổ học, người ta dùng phổ Raman để tìm ra các kim loại,... chất giảm dần và xác định giới hạn phát hiện của từng hoạt chất - Đo phổ của một số viên thực tế trên thị trường, so sánh với phổ của mẫu viên nghiên cứu 2.3 Phương pháp nghiên cứu Thu thập tài liệu trong và ngoài nước liên quan đến đề tài Tham khảo các phương pháp và kỹ thuật phân tích của các nước tiên tiến trên thế giới về phổ Raman, cũng như ứng dụng của chúng trong phân tích dược phẩm Nghiên cứu. .. cách sử dụng, khai thác phần mềm trên thiết bị: Hiệu chỉnh thiết bị, cách xác định các đỉnh phổ, thiết lập công thức so sánh (chổng phổ, xác định hệ số match), cài đặt trong thiết bị… Cách thiết lập phổ chuẩn, tạo thư viện phổ chuẩn Các số liệu của đề tài được thu thập từ thực nghiệm và khả năng ứng dụng phương pháp đo phổ Raman - Đo phổ Raman của chất chuẩn, thiết lập thư viện phổ chuẩn - Đo phổ Raman. .. trường, đưa ra kết quả nhanh chóng để có biện pháp cảnh báo, tạm ngưng hoặc thu hồi ngay các thuốc có nguy cơ làm giả, ảnh hưởng đến sức khỏe của con người vì vậy hạn chế được các thuốc giả đến tay người dân Đo phổ Raman, ngoài tín hiệu của dược chất, còn thu được tín hiệu nền của hệ tá dược Khi kiểm tra chất lượng một thuốc chúng ta thường so sánh phổ Raman của thuốc đó với phổ của thuốc đối chiếu do... đã có bước ngoặt lớn trong công nghệ Raman, người ta đã nghiên cứu sử dụng một số loại Laser khác nhau để làm nguồn kích thích cho tán xạ Raman và cho đến gần đây các nguồn laser IR và NIR được đưa vào sử dụng làm hạn chế rất nhiều hiện tượng huỳnh quang (một hiện tượng tác động mạnh đến việc thu phổ Raman) [20], [46] Những năm 1900, đã có một cuộc cách mạng mới trong quang phổ Raman Nhờ sự phát triển