Đánh giá sản xuất viên nang chữa gout

Đánh giá sản xuất viên nang chữa gout Đánh giá sản xuất viên nang chữa gout Đánh giá sản xuất viên nang chữa gout Đánh giá sản xuất viên nang chữa gout Đánh giá sản xuất viên nang chữa gout Đánh giá sản xuất viên nang chữa gout Đánh giá sản xuất viên nang chữa gout Đánh giá sản xuất viên nang chữa gout Đánh giá sản xuất viên nang chữa gout Đánh giá sản xuất viên nang chữa gout Đánh giá sản xuất viên nang chữa gout Đánh giá sản xuất viên nang chữa gout Đánh giá sản xuất viên nang chữa gout Đánh giá sản xuất viên nang chữa gout Đánh giá sản xuất viên nang chữa gout Đánh giá sản xuất viên nang chữa gout

Tiểu luận: Đánh giá sản xuất viên nang chữa gout BÀI 3: VIÊN NANG GTC Xí nghiệp Dược phẩm Trung Ương sản xuất dựa thuốc cổ phương điều trị bệnh Gout I ĐẶT VẤN ĐỀ Gout bệnh rối loạn chuyển hóa acid uric với triệu chứng điển hình viêm, đau quanh khớp xương Bệnh không gây đau đớn, ảnh hưởng tới khả lao động, bệnh không chữa trị kịp thời dẫn tới biến chứng gây tàn phế suốt đời Trong năm gần bệnh Gout ngày phổ biến, nhu cầu thuốc điều trị gout ngày cao Thuốc tân dược dùng điều trị Gout ít, giá thành cao gây nhiều tác dụng không mong muốn Vì việc nghiên cứu tác dụng điều trị Gout có nguồn gốc thảo dược cần thiết Việc sử dụng thuốc có nguồn gốc thiên nhiên có nhiều thuận lợi, thuốc cổ phương chữa gout có sẵn khẳng định dựa yếu tố kinh nghiệm Trong y học cổ truyền, có nhiều phương thuốc dùng điều trị Gout Một thuốc kho tàng y học cổ truyền dân gian sử dụng từ lâu để điều trị bệnh Gout cho kết tốt thuốc GTC Bài thuốc với thành phần hoàng bá, thương truật, tỳ giải, độc hoạt, đương quy, xuyên khung bột quế được xí nghiệp Dược phẩm TƯ Đà Nẵng sản xuất dạng viên nang Tuy nhiên có tài liệu nghiên cứu chứng minh tác dụng thuốc này, chưa có tài liệu nghiên cứu thăm dò chế tác dụng thuốc này, việc sử dụng hạn chế Bào chế thuốc dạng viện nang từ cổ phương cần chứng minh tác dụng thử nghiệm dược lý để khẳng định tác dụng thuốc cách khoa học Vì vậy, để thuốc sử dụng hiệu rộng rãi sở khoa học, thực đề tài : ”Xây dựng mô hình dược lý thực nghiệm chứng minh tác dụng hạ acid uric máu thăm dò chế tác dụng thuốc GTC ” Mục tiêu đề tài : Xây dựng mô hình dược lý thực nghiệm chứng minh tác dụng hạ acid uric máu thuốc GTC Thăm dò chế tác dụng thuốc GTC II TỔNG QUAN: Hiện nay, nước phát triển bệnh Gout chiếm tỷ lệ 1-2% dân số, thường gặp tuổi trung niên, gặp nam giới nhiều nữ giới Còn Việt nam, với phát triển kinh tế xã hội, cộng với chế độ dinh dưỡng thiếu hợp lý nên bệnh gout bệnh rối loạn chuyển hóa khác tiểu đường, rối loạn lipid máu, tăng huyết áp, thừa cân, béo phì, ngày phổ biến Theo nghiên cứu đánh giá mô hình bệnh tật khoa Cơ Xương Khớp Bệnh viện Bạch Mai 10 năm (1991-2000) bệnh gout chiếm tỷ lệ 8% (so với trước 1,5%), đứng hàng thứ tư 15 bệnh khớp nội trú thường gặp Bức tranh mô tả bệnh Gout James Gillray, 1979, bảo tàng Philadelphia Gout bệnh lý biết đến lâu đời loài người, từ thời Hipocrate vào kỷ thứ V trước công nguyên Tuy nhiên, đến năm 1683, Sydenham mô tả đầy đủ diễn biến lâm sàng gout cấp, đến cuối kỷ XIX, Schelle, Bargman Wollaston tìm thấy vai trò acid uric nguyên nhân gây bệnh, bệnh gout gọi viêm khớp acid uric Đến năm 60 kỷ XX, nhà khoa học nghiên cứu sâu sinh học tế bào, chế sinh lý bệnh tình trạng tăng acid uric máu bệnh gout Do người ta biết rõ gout bệnh lý rối loạn chuyển hóa gây tình trạng lắng đọng tinh thể urat mô thể tăng acid uric máu Khớp bàn chân bị gout Những vị trí thể hay Do lắng đọng tinh thể urat phát sinh bệnh Gout Có hai thể bệnh gout nguyên phát thứ phát Bệnh gout nguyên phát thể bệnh thường gặp (99% trường hợp) nguyên nhân rối loạn chuyển hóa acid uric Bệnh gout thứ phát thường gặp sau trình phát triển số bệnh bệnh thận (suy thận mạn, thận đa nang, nhiễm độc chì), bệnh tiêu tế bào mức (bệnh bạch cầu thể tủy mạn tính, thiếu máu huyết tán, bệnh vẩy nến diện rộng, ) sử dụng số loại thuốc thuốc lợi tiểu, corticoid, Bệnh chủ yếu gặp nam giới trưởng thành, tuổi bắt đầu mắc bệnh từ 35 đến 40 ngày có xu hướng trẻ hóa Bệnh biểu đợt viêm khớp cấp sau tiến triển thành mạn tính, gây tổn thương mô mềm thận Bệnh tiến triển qua giai đoạn: giai đoạn tăng acid uric máu không triệu chứng, gout cấp, giai đoạn gian phát giai đoạn viêm khớp mạn tính Gout mạn tính thường tiến triển chậm kéo dài tăng dần, lúc đầu tổn thương ngón bàn chân cổ chân, gối, khuỷu ngón bàn tay Thời gian tiến triển 10-20 năm, diễn biến mạn tính ghép vào đợt viêm cấp tính làm bệnh nặng thêm Ở giai đoạn cuối cùng, bệnh nhân khả vận động, tử vong biến chứng thận, nhiễm khuẩn suy mòn Nhưng phát sớm, điều trị kiểm soát tốt, bệnh nhân tránh ảnh hưởng bệnh lý thứ phát Gout bệnh rối loạn chuyển hóa liên quan đến việc tăng sản xuất giảm đào thải chất acid uric thể Có thể nói nguyên nhân trực tiếp gây bệnh gout acid uric, sản phẩm phụ tạo thoái giáng purin Ở người bình thường, lượng acid uric máu trì mức cố định: 5mg% nam 4mg% nữ, tùy độ tuổi có thay đổi Để mức acid uric cân hàng ngày, acid uric thải chủ yếu theo đường thận qua nước tiểu phần qua phân đường khác Một lý đó, hàm lượng purin thể tăng, trình chuyển hóa chúng thành acid uric tăng Khi thể tạo nhiều acid uric thải acid nước tiểu nồng độ acid uric máu tăng lên, chuyển hóa acid uric thành muối urat tăng theo dẫn tới lắng đọng tinh thể muối urat sắc nhọn hình kim khớp, sụn, xương, tổ chức da, gây viêm sưng khớp biểu triệu chứng vị trí lắng đọng 2.1 Nguyên nhân gây tăng lượng acid uric Tăng bẩm sinh: bệnh Lesch - Nyhan: thiếu men HGPT nên lượng acid uric tăng cao từ nhỏ, bệnh có biểu toàn thân, thần kinh, thận khớp Bệnh nặng Bệnh gout nguyên phát: bệnh gắn liền với yếu tố di truyền địa, bệnh nhân có trình tổng hợp purin nội sinh tăng nhiều gây tăng acid uric Đây nguyên nhân chủ yếu bệnh Bệnh gout thứ phát: acid uric máu tăng thứ phát nguyên nhân sau : Do tiêu thụ loại thức ăn có chứa nhiều purin (gan, lòng, thịt, cá, nấm, tôm, cua), uống nhiều rượu, bia Thực tác nhân phát động bệnh nguyên nhân trực tiếp Do thể tăng cường thoái giáng purin nội sinh (phá hủy nhiều tế bào, tổ chức) liên quan đến bệnh lý huyết học bệnh đa hồng cầu, leucemie kinh thể tủy, hodgkin, sarcom hạch, đa u tủy xương, sử dụng thuốc diệt tế bào để điều trị bệnh u ác tính Do giảm thải acid uric qua thận: viêm thận mạn tính, suy thận làm cho trình đào thải acid uric giảm ứ lại gây bệnh 2.2 Nguyên tắc điều trị bệnh Gout - Chống viêm khớp đợt cấp - Hạ acid uric máu để phòng đợt viêm khớp cấp tái phát, ngăn ngừa biến chứng - Điều trị bệnh lý kèm theo đặc biệt nhóm bệnh lý rối loạn chuyển hóa như: tăng huyết áp, đái tháo đường, tăng mỡ máu, béo phì… - Cần điều trị viêm khớp cấp trước Chỉ sau tình trạng viêm khớp hết thuyên giảm bắt đầu dùng thuốc hạ acid uric máu Để điều trị có hiệu cần thường xuyên kiểm tra acid uric máu niệu, kiểm tra chức thận 2.3 Các thuốc dùng điều trị gout: Colchicin, Allopurinol Probenecid (tăng thải uric qua đường niệu): kết hợp Các NSAIDs, cortocosteroid: điều trị triệu chứng viêm, đau 2.4 Những bất lợi gặp phải điều trị gout thuốc tân dược: Colchicin gây thuốc có nhiều tác dụng phụ không mong muốn, đứng đầu rối loạn dày, ruột tiêu chảy, nôn, đau bụng Hiếm gặp phản ứng dị ứng da, rụng tóc, bệnh Việc dùng thuốc kéo dài dẫn tới suy tủy xương., Allopurinol gây dị ứng thuốc tăng thải acid uric gây sỏi thận Cơ địa dị ứng thuốc bệnh nhân Có bệnh nhân gout bị dị ứng với nhiều thuốc chữa gút colchicin allopurinol - - - Sự thiếu tuân thủ điều trị người bệnh Bệnh nhân gout thường quan tâm đến bệnh dùng thuốc đợt cấp dẫn đến bệnh tiến triển nặng dần Khi điều trị triệu chứng đau viêm: số bệnh nhân lạm dụng thuốc giảm đau, chống viêm (NSAIDs corticoid) dẫn đến tác dụng phụ đáng tiếc tác dụng phụ dày, thận, Nhiều bệnh nhân có chế độ ăn uống, sinh hoạt không điều độ, nên bệnh có nguy tái phát 2.5 Lý luận nguyên nhân chữa trị bệnh gout theo Y học cổ truyền: Nguyên nhân bệnh lý theo y học cổ truyền Theo YHCT, gout hay thống phong ngoại tà xâm nhập thể gây tắc nghẽn kinh lạc, khí huyết ứ trệ khớp gây đau co duỗi khó khăn Bắt đầu bệnh biểu kinh lạc, bệnh lâu, tà khí vào gân xương gây tổn thương tạng phủ, chức khí huyết tân dịch rối loạn, tân dịch ứ trệ thành đàm, khí huyết ngưng trệ thành ứ, đàm ứ kết mà hình thành u cục tôphi quanh khớp, da Bệnh tiến triển lâu ngày gây tổn thương đến can thận, làm biến dạng khớp tái phát nhiều lần Y văn cổ ghi chứng gout có chứng "thống phong" chứng thống tý lâu ngày khó khỏi Cho nên bệnh thống phong qui thuộc phạm trù chứng tý đông y Biện Chứng Luận Trị Biện chứng luận trị cần ý đến giai đoạn phát triển bệnh thể cấp tính chủ yếu dùng phép nhiệt thông lạc khu phong trừ thấp, thể mạn tính thường kèm theo đàm thấp, ứ huyết, hàn ngưng, nên tùy chứng mà dùng phép hóa đàm, trừ thấp, hoạt huyết thông lạc, ôn kinh, tán hàn Đồng thời ý đến mức độ hư tổn âm dương, khí huyết, can thận mà bồi bổ thích hợp Đối với thể cấp tính: Biểu thể phong thấp nhiệt; đột ngột khớp ngón (thường gặp khớp nhỏ khác) sưng nóng đỏ đau, không đụng vào được, kèm theo sốt, đau đầu, sợ lạnh bứt rứt, khát nước, miệng khô, tiểu vàng, lưỡi đỏ, rêu vàng bẩn, mạch Sác Điều trị nguyên nhân triệu chứng: Thanh nhiệt, thông lạc, khu phong, trừ thấp, hóa ứ, ôn kinh, thống Có nhiều thuốc y học cổ truyền chữa bệnh gout, số thuốc, tùy theo dạng bệnh khác nhau: Bài Bạch Hổ Gia Quế Chi Thang Gia giảm: Thạch cao, Tri mẫ, Quế chi, Bạch thược, Xích thược, Dây Kim ngân, Phòng kỷ, Mộc thông, Hải đồng bì, Cam thảo Trường hợp thấp nhiệt nặng (Sưng tấy đau nhiều gia thêm dây Kim ngân, Thổ phục linh,Ý dĩ (tăng trừ thấp) gia thuốc hoạt huyết Toàn Đương qui, Đan sâm, Trạch lan, Đào nhân, Hồng hoa, Tằm sa để hóa ứ thống, trường hợp có biểu chứng thêm thêm Quế chi, Độc hoạt, Tế tân để giải biểu, tán hàn thống Bài Địa Hoàng Du Linh Phương: Sinh địa, Hoàng kỳ, Đơn sâm, Ích mẫu thảo, Tang ký sinh đề, Sơn thù, Phục linh, Trạch tả, Tần giao Thận dương hư, chân lạnh, lưng gối lạnh đau thêm Tiên linh tỳ, Tiên mao, tỳ hư bụng đầy, tiêu lỏng thêm Đảng sâm, bạch truật, miệng khô tiểu vàng mạch Sác thêm Hoàng cầm, Hoàng bá Sơn chi, can dương thịnh đau đầu, váng đầu thêm Câu đằng, Cúc hoa, Thiên ma Bài Thống Phong Phương: Thương truật, Hoàng bá, Ngưu tất, Hải đồng bì, Khương hoàng, Uy linh tiêm, Hy thiêm thảo, Mao đông thanh, Hắc lão hổ, Nhặp địa kim ngưu sắc uống Trắc bá diệp, Đại hoàng, Hoàng bá, Bạc hà, Trạch lan tán bột cho mật nước vừa đủ thành hồ đắp Có nhiều thuốc cổ phương có nguồn gốc dân gian từ Trung Quốc hay Việt Nam có hiệu khẳng định thử nghiệm dược lý chứng minh thực tiễn điều trị Khai thác thuốc y học cổ truyền để bào chế dạng thuốc tiện dụng điều trị gout hướng phát triển có triển vọng, với lý do: Các chế phẩm có nguồn gốc thiên nhiên nên tác dụng phụ thuốc “tân dược” đặc biệt với bệnh gout bệnh mà bệnh nhân phải dùng lâu, nhiều lần Dễ dùng, lượng hóa xác liều dùng (ưu điểm dạng bào chế đại) Điều trị lâu tận gốc nguyên bệnh Dễ khai thác, bào chế Đáp ứng thị hiếu người dùng xu hướng dùng chế phẩm thiên nhiên Hiện có nhiều dạng thuốc theo dạng bào chế đại (viên nang, nén, siro, ) dựa thuốc cổ phương để điều trị bệnh gout Các dạng bào chế đăng ký lưu hành dạng dược phẩm, thực phẩm chức Tuy nhiên tác dụng dược lý chúng hầu hết chưa chứng minh thử nghiệm dược lý nghiêm túc đặc biệt thực phẩm chức Công ty CP Dược Danapha (tên cũ XNDPTW5) dựa thuốc cổ phương điều trị gout bao gồm vị thuốc: Hoàng bá, Thương truật, Tỳ giải, Độc hoạt, Đương quy, Xuyên khung, Quế chi để bào chế viên nang GTC (Dự kiến tên sản phẩm Gouticap) Về thành phần thuốc cổ phương viên nang GTC, xét mặt y học cổ truyền ta thấy rằng: HOÀNG BÁ Tên thuốc: Cortex Phellodendri Tên khoa học: Phellodendron amurense Rupr, Họ Cam Quýt (Rutaceae) Bộ phận dùng: vỏ Tính vị: vị đắng, tính hàn Quy kinh: Vào kinh Thận Bàng quang Tác dụng: thấp nhiệt hạ tiêu, tả tướng hoả Dùng chín: trị đau mắt, miệng lở loét TỲ GIẢI Tên khoa học: Dioscorea tokoro Mahino, Họ Củ Nâu (Dioscoreaceae) Bộ phận dùng: thân rễ (vẫn gọi củ) Củ to, vỏ trắng ngà, ruột trắng có nhiều chất bột Thành phần hoá học: có Saponosid (Dioxin Dioscorea sapotoxin) Tính vị: vị đắng, tính bình Quy kinh: Vào kinh Can Vị Tác dụng: trị phong thấp, lợi tiểu, , trị thấp nhiệt sang độc, trị bạch trọc, lưng cốt tê đau THƯƠNG TRUẬT Tên thuốc: Rhizoma Atractylodis Tên khoa học: Atractylodes lancea (Thunb.); A chinensis (DC.) Koidz; Atractylodes japonica koidz Exkitam Bộ phận dùng: Thân rễ Tính vị: Vị cay, đắng tính ấm Quy kinh: Vào kinh Tỳ Vị Tác dụng: Trừ ẩm, bổ Tỳ, trừ phong, thấp, tăng tiết mồ hôi, trị Phong hàn thấp ứ trở, Thấp nhiệt ứ trở ĐỘC HOẠT Tên thuốc: Radix Angelicae Pubescentis Tên khoa học: Heracleum lanatum Michx, Họ Hoa Tán (Umbelliferae) Bộ phận dùng: rễ củ Tính vị: vị cay, tính ôn Quy kinh: Vào hai kinh Can, Thận Tác dụng: trừ tà phong, táo hàn thấp, chuyên chữa phong, khí ĐƯƠNG QUI Tên thuốc: Radix Angelicae Sinensis Tên khoa học: Angelica sinensis (Oliv.)Diels, Họ Hoa Tán (Umbelliferae) Bộ phận dùng: rễ (vẫn gọi củ) Thành phần hoá học: có tinh dầu (0,2%), chất đường sinh tố B12 Tính vị: vị cay, ngọt, đắng, thơm, tính ấm Quy kinh: Vào ba kinh Tâm, Can Tỳ Tác dụng: bổ huyết, hoạt huyết, nhuận táo, hoạt trường, thống, trị Ứ trệ phong thấp XUYÊN KHUNG Tên thuốc: Radix Chuanxiong Tên khoa học: Ligusticum Wallichii Franch, Họ Hoa Tán (Umbelliferae) Bộ phận dùng: thân rễ (vẫn gọi củ) Thành phần hoá học: có tinh dầu - 2%, acid Ferulic Tính vị: vị cay, tính ôn Quy kinh: Vào kinh Can, Đởm Tâm bào Tác dụng: trị sưng đau, trừ phong thấp, kinh bế, trị Hội chứng phong thấp ngưng trệ QUẾ CHI Tên thuốc: Ramulus Cinnamoni Tên khoa học: Cinnamomum loureirrii Ness, Họ Long Não (Lauraceae) Bộ phận dùng: vỏ Tính vị: vị ngọt, cay, tính đại nhiệt Vào hai kinh Can Thận Tác dụng : trị chân tay lạnh, tả lỵ, đau bụng, bế kinh, tiêu hoá, kiện Vị, Ðau khớp nhiễm phong, hàn thấp Bài thuốc cổ phương chứng minh thực tế tác dụng bệnh nhân với quãng thời gian dài, kiến thức chứng minh tác dụng thuốc lý luận y học cổ truyền vị thuốc dùng dạng cách thức bào chế (sao tẩm, sắc, ) theo kinh nghiệm y học cổ truyền Tuy nhiên bào chế dạng bào chế đại viên nang tác dụng thuốc phải chứng minh thử nghiệm dược lý, lâm sàng Hiện nhiều thuốc dạng bào chế đại đưa thị trường dạng dược phẩm, đặc biệt dạng thực phẩm chứng quản lý bất cập quan quản lý, quảng cáo tùy tiện nhà sản xuất làm cho tác dụng thuốc quảng bá chưa có sở, khoa học Xuất phát từ yếu tố: Bệnh gout ngày phổ biến, nhu cầu thuốc điều trị gout ngày cao Việc sử dụng thuốc có nguồn gốc thiên nhiên có nhiều thuận lợi, thuốc cổ phương chữa gout có sẵn khẳng định dựa yếu tố kinh nghiệm Bào chế thuốc dạng viện nang từ cổ phương cần/ nên chứng minh tác dụng thử nghiệm dược lý nghiêm túc Để khẳng định tác dụng thực thuốc Chúng tiến hành thử nghiệm tác dụng dược lý để đánh giá tác dụng điều trị gout viên nang GTC Qua mô hình dược lý thực nghiệm để chứng minh tác dụng: làm giảm acid uric máu, chống viêm cấp giảm đau III THIẾT KẾ MÔ HÌNH 3.1 Thiết kế mô hình chứng minh tác dụng giảm acid uric máu viên nang GTC: 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu: Thuốc nghiên cứu: Viên nang GTC xí nghiệp Dược phẩm TW5 Đà Nẵng sản xuất Thành phần: Hoàng bá, thương truật, tỳ giải, độc hoạt, đương qui, xuyên khung, bột quế Động vật thử nghiệm: Khỏe mạnh, hai giống, chuột nhắt trắng chủng Swiss 18-22g Viện vệ sinh dịch tễ Hà Nội cung cấp 3.1.2 Phương tiện nghiên cứu: a Hóa chất: Allopurinol chuẩn xí nghiệp Dược phẩm TW5 Đà Nẵng cung cấp Hỗn hợp dung môi propylenglycol/nước tỷ lệ 1:1 dùng làm dung môi để pha thuốc Kali oxonat đạt tiêu chuẩn b Dụng cụ: Máy sinh hóa Autohumalyzer900Splus 3.1.3 Phương pháp nghiên cứu: Để chứng minh tác dụng điều trị gout chế phẩm GTC, tiến hành thiết kế mô hình nghiên cứu thông qua mô hình thực nghiệm: Tiến hành mô hình thực nghiệm gây tăng acid uric máu kali oxonat Chuột nhắt trắng nuôi ổn định môi trường phòng thí nghiệm chia ngẫu nhiên thành lô: Lô chứng: Uống dung môi pha GTC, 0,2ml/10g chuột Lô allopurinol: Uống allopurinol liều 10mg/kg, 0,2ml/10g chuột Lô GTC1: Uống GTC liều 6g/kg, 0,2ml/10g chuột Lô GTC2: Uống GTC liều 12g/kg, 0,2ml/10g chuột Chuột uống dung môi thuốc nghiên cứu hàng ngày vào định ngày trước làm thực nghiệm Trước dùng dung môi thuốc 0,5h chuột không ăn uống nước bình thường Ngày thứ 7, tất lô chuột gây tăng acid uric máu cách tiêm màng bụng kali oxonat 500mg/kg trước uống thuốc lần cuối ngày Ngày thứ Nhịn ăn Uống thuốc hàng ngày Tiêm kali oxanat 30 phút 60 phút Uống thuốc Lấy máu 120 phút Hình vẽ: Quy trình thí nghiệm hạ acid uric Sau uống thuốc giờ, lấy máu, để lắng tự nhiên nhiệt độ phòng 1h trước đem ly tâm lấy huyết tương, bảo quản huyết tương -20oC trước xác định nồng độ acid uric • Định lượng acid uric phương pháp enzyme: Acid uric + O2 + 2H2O (uricase)→ Allatoin + CO2 + H2O2 H2O2 + 4-Aminoantipyrine + DHBS (peroxidase)→ Chromogen + H2O Acid uric chuyển thành allatoin hydro peroxyd nhờ uricase Hydro peroxyd phản ứng với 4-Aminoantipyrine 3,5-dichloro -2-hydroxybenzen sulfonic acid (DHBS) tạo thành chromogen, chất định lượng phương pháp đo quang bước sóng 520nm • Tính tỉ lệ giảm nồng độ acid uric máu lô thử so với lô chứng theo công thức: I(%) = (Cc – Ct)/Cc x 100 Trong đó: I(%): tỷ lệ giảm nồng độ acid uric máu lô thử so với lô chứng Cc: nồng độ acid uric máu lô chứng Ct: nồng độ acid uric máu lô thử • Kết quả: xử lý phần mềm Splus 10.2 Lô (n=20) Nồng độ acid uric máu Mức độ giảm so với chứng P So với chứng So với allopurinol Lô chứng Lô allopurinol Lô GTC1 Lô GTC2 • Phương pháp xử lý số liệu: Kết biểu diễn dạng M + SE (M: giá trị trung bình lô, SE: sai số chuẩn) So sánh giá trị trung bình đo phương pháp T Test lô thử lô chứng 3.2.Thiết kế mô hình thăm dò chế tác dụng viên nang GTC: Hiện chế tác dụng thuốc điều trị bệnh gout có: Tăng thải trừ acid uric qua nước tiểu, ức chế tạo thành acid uric có ức chế enzyme xanthin oxidase (một enzyme trình chuyển hóa để tạo thành acid uric) Sau thiết kế mô hình thăm dò chế tác dụng viên nang GTC hướng: 3.2.1 Đánh giá tác dụng thuốc lên thải trừ acid uric qua nước tiểu: Xác định nồng độ acid uric nước tiểu nhằm đánh giá khả tăng thải acid uric ức chế tái hấp thu urat thận Qua thăm dò chế tăng thải trừ acid uric qua nước tiểu viên nang GTC a Thiết kế mô hình: Chuột nhắt trắng nuôi ổn định môi trường phòng thí nghiệm chia ngẫu nhiên thành lô: Lô chứng bệnh lý: Uống dung môi pha GTC, 0,2ml/10g chuột Lô allopurinol: Uống Probenecid liều 10mg/kg, 0,2ml/10g chuột Lô GTC1: Uống GTC liều 6g/kg, 0,2ml/10g chuột Lô GTC2: Uống GTC liều 12g/kg, 0,2ml/10g chuột Chuột uống dung môi thuốc nghiên cứu hàng ngày vào định ngày trước làm thực nghiệm Trước dùng dung môi thuốc 0,5h chuột không ăn uống nước bình thường Ngày thứ 7, tất lô chuột gây tăng acid uric máu cách tiêm màng bụng kali oxonat 500mg/kg trước uống thuốc lần cuối Hứng nước tiểu chuột vòng sau uống thuốc Vào thời điểm kết thúc thực nghiệm, lấy máu chuột lô Thuốc đối chiếu dùng mô hình probenecid (thuốc điều trị gout theo chế tăng thải trừ acid uric qua đường niệu) b Các thông số theo dõi: Nồng độ acid uric nước tiểu chuột thực nghiệm Nồng độ acid uric máu chuột thực nghiệm Nồng độ creatinin máu chuột thực nghiệm Nồng độ creatinin nước tiểu chuột thực nghiệm Tính tỷ lệ xuất urat: L = (urat nước tiểu/urat máu)/(creatinin nước tiểu/ creatinin máu) c Phương pháp xử lý số liệu: Kết biểu diễn dạng M + SE (M: giá trị trung bình lô, SE: sai số chuẩn) So sánh giá trị trung bình đo phương pháp T Test lô thử lô chứng 3.2.2 Đánh giá tác dụng xanthin oxidase: Xanthin oxidase (XO) enzyme gan, chuyển hypoxanthin xanthin thành acid uric Các chất ức chế enzyme ngăn cản bước cuối trình tạo acid uric máu Ở đánh giá tác dụng ức chế enzyme xanthin oxidase mô hình in vitro Xác định hoạt tính ức chế enzyme xanthine oxidase phương pháp đo quang (UV-VIS): Hỗn hợp phản ứng gồm: 50µM xanthine 0,1mM EDTA Thuốc thử 495µl dung dịch đệm phosphate có pH (Na2HPO4 0,02mM) Được ủ 37oC Sau ủ 10 phút, cho 5µl enzyme xanthin oxidase (20nM) vào hỗn hợp ủ tiếp phút Sau đo độ hấp thụ ánh sáng UV hỗn hợp bước song 290nm Thiết kế với lô: Lô trắng: Không có thuốc thử Lô chứng: Sử dụng thuốc thử allopurinol Lô thử: Sử dụng thuốc thử bột thuốc viên nang GTC Mỗi lô thực thí nghiệm song song lấy kết tính giá trị trung bình a Tác dụng ức chế enzyme XO tính toán theo công thức: T(Tác dụng ức chế) = 100 x [(Ac-As)/Ac] Trong đó: Ac: Là độ hấp thụ mẫu chứng (không có thuốc thử) As: Là độ hấp thụ mẫu thử (có thuốc thử) Tác dụng ức chế mẫu thử đánh giá theo trị số IC50, giá trị nồng độ (tính toán theo lý thuyết) thuốc thử ức chế 50% tạo thành acid uric hỗn hợp phản ứng so với mẫu chứng b Phương pháp xử lý số liệu: Kết biểu diễn dạng M + SE (M: giá trị trung bình lô, SE: sai số chuẩn) So sánh giá trị trung bình đo phương pháp T Test lô thử với lô chứng IV BÀN LUẬN 4.1 Mô hình chứng minh tác dụng hạ acid uric máu: Sau thu thập xử lý kết quả, thấy tác dụng acid uric máu viên nang GTC so với lô chứng trắng lô chứng dùng thuốc allopurinol thông qua số liệu tỉ lệ giảm nồng độ acid uric máu Sự giảm acid uric máu viên nang GTC khác có ý nghĩa không? Và từ xác định liều có tác dụng hạ acid uric máu tốt hơn, liều tương đương tác dụng allopurinol? Giả sử thực nghiệm kết thu GTC với liều 12g/kg có tác dụng hạ acid uric máu chuột nhắt gây tăng acid uric máu thực nghiệm Ta ngoại suy liều GTC có tác dụng điều trị gout người 1g/kg 3.2 Tác dụng tăng thải acid uric máu: 3.3 Tác dụng ức chế enzyme xanthin oxidase: V ĐỀ XUẤT - Tiếp tục làm thử nghiệm đánh giá tác dụng giảm đau chống viêm hạ acid uric máu thuốc GTC - Để áp dụng người cần tiếp tục nghiên cứu độc tính động vật thực nghiệm - Nghiên cứu đánh giá lại liều có tác dụng điều trị tối ưu thuốc người - Tiếp tục nghiên cứu tác dụng viên nang GTC với tác dụng điều trị gout lâm sàng với liều ngoại suy từ liều có tác dụng động vật thực nghiệm - Có thể khai triển nhiều dạng bào chế thuốc để có tác dụng tối ưu Tài liệu tham khảo : Bùi Thị Thanh Hòa, Đào Thị Vui, Nguyễn Thùy Dương, Nghiên cứu tác dụng điều trị Gout thuốc Đông dược GTC, Luận văn dược sỹ (2007) Đào Thị Vui, Một số mô hình nghiên cứu tác dụng điều trị Gout thuốc, Bài giảng cao học dược (2010) Đỗ Trung Đàm, Phương pháp ngoại suy liều có hiệu tương đương người động vật thí nghiệm, Tạp chí dược học, số 2,3/2001 Lưu Thị Ngọc, Đào Thị Vui, Nguyễn Thùy Dương, Đánh giá tác dụng hạ acid uric máu thực nghiệm ba thuốc Đông dược, Luận văn dược sỹ (2009) Nguyễn Thị Hồng Tuyến, Đào Thị Vui, Nguyễn Thùy Dương, Khảo sát tác dụng điều trị Gout thực nghiệm thuốc từ chuối hột củ ráy, Luận văn dược sỹ (2009) Nguyễn Thị Phương Thảo, Đào Thị Vui, Nguyễn Thùy Dương, Nghiên cứu triển khai mô hình gây tăng acid uric máu động vật thực nghiệm đánh giá tác dụng hạ acid uric máu hy thiêm thảo thổ phục linh, Luận văn dược sỹ (2009) Nguyễn Thùy Dương, Đào Thị Vui, Vũ Thùy Trâm, Mai Đăng Đẩu, Nghiên cứu tác dụng điều trị bệnh Gout thực nghiệm chế phẩm GTC, Tạp chí dược học số 9/2008 Nhữ Thị Hoàng Ly, Phan Thị An, Đào Thị Vui, Vũ Thùy Trâm, Nghiên cứu tác dụng điều trị Gout thuốc Đông dược GTC, Hội Nghị KHCN lần thứ XIV (2008) [...]... tác dụng dược lý để đánh giá tác dụng điều trị gout của viên nang GTC Qua các mô hình dược lý thực nghiệm để chứng minh các tác dụng: làm giảm acid uric máu, chống viêm cấp và giảm đau III THIẾT KẾ MÔ HÌNH 3.1 Thiết kế mô hình chứng minh tác dụng giảm acid uric máu của viên nang GTC: 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu: Thuốc nghiên cứu: Viên nang GTC do xí nghiệp Dược phẩm TW5 Đà Nẵng sản xuất Thành phần: Hoàng... cáo tùy tiện của nhà sản xuất làm cho tác dụng của thuốc được quảng bá chưa có cơ sở, căn cứ khoa học Xuất phát từ các yếu tố: Bệnh gout ngày càng phổ biến, nhu cầu thuốc điều trị gout ngày càng cao Việc sử dụng thuốc có nguồn gốc thiên nhiên có nhiều thuận lợi, bài thuốc cổ phương chữa gout có sẵn và đã được khẳng định dựa trên yếu tố kinh nghiệm Bào chế thuốc dưới dạng viện nang từ cổ phương trên... chúng tôi thiết kế mô hình thăm dò cơ chế tác dụng của viên nang GTC trên 2 hướng: 3.2.1 Đánh giá tác dụng của thuốc lên sự thải trừ acid uric qua nước tiểu: Xác định nồng độ acid uric trong nước tiểu nhằm đánh giá khả năng tăng thải acid uric hoặc ức chế tái hấp thu urat ở thận Qua đó thăm dò cơ chế tăng thải trừ acid uric qua nước tiểu của viên nang GTC a Thiết kế mô hình: Chuột nhắt trắng được nuôi... chế enzyme xanthin oxidase: V ĐỀ XUẤT - Tiếp tục làm thử nghiệm đánh giá tác dụng giảm đau chống viêm và hạ acid uric máu của thuốc GTC - Để áp dụng trên người cần tiếp tục nghiên cứu độc tính trên động vật thực nghiệm - Nghiên cứu đánh giá lại liều có tác dụng điều trị tối ưu của thuốc trên người - Tiếp tục nghiên cứu tác dụng của viên nang GTC với tác dụng điều trị gout trên lâm sàng với liều ngoại... thuốc thử bột thuốc viên nang GTC Mỗi lô thực hiện 5 thí nghiệm song song lấy kết quả tính giá trị trung bình a Tác dụng ức chế enzyme XO được tính toán theo công thức: T(Tác dụng ức chế) = 100 x [(Ac-As)/Ac] Trong đó: Ac: Là độ hấp thụ của mẫu chứng (không có thuốc thử) As: Là độ hấp thụ của mẫu thử (có thuốc thử) Tác dụng ức chế của mẫu thử được đánh giá theo trị số IC50, là giá trị nồng độ (tính... dưới dạng M + SE (M: giá trị trung bình từng lô, SE: sai số chuẩn) So sánh giá trị trung bình đo được bằng phương pháp T Test giữa lô thử và lô chứng 3.2.2 Đánh giá tác dụng trên xanthin oxidase: Xanthin oxidase (XO) là enzyme ở gan, chuyển hypoxanthin và xanthin thành acid uric Các chất ức chế enzyme sẽ ngăn cản bước cuối cùng trong quá trình tạo acid uric máu Ở đây chúng tôi đánh giá tác dụng ức chế... Lô GTC2 • Phương pháp xử lý số liệu: Kết quả được biểu diễn dưới dạng M + SE (M: giá trị trung bình từng lô, SE: sai số chuẩn) So sánh giá trị trung bình đo được bằng phương pháp T Test giữa lô thử và lô chứng 3.2.Thiết kế mô hình thăm dò cơ chế tác dụng của viên nang GTC: Hiện nay cơ chế tác dụng của thuốc điều trị bệnh gout có: Tăng thải trừ acid uric qua nước tiểu, hoặc ức chế sự tạo thành acid uric... xử lý số liệu: Kết quả được biểu diễn dưới dạng M + SE (M: giá trị trung bình từng lô, SE: sai số chuẩn) So sánh giá trị trung bình đo được bằng phương pháp T Test giữa lô thử với lô chứng IV BÀN LUẬN 4.1 Mô hình chứng minh tác dụng hạ acid uric máu: Sau khi thu thập và xử lý kết quả, chúng ta có thể thấy được tác dụng acid uric máu của viên nang GTC so với lô chứng trắng và lô chứng dùng thuốc allopurinol... Nghiên cứu tác dụng điều trị Gout của bài thuốc Đông dược GTC, Luận văn dược sỹ (2007) 2 Đào Thị Vui, Một số mô hình nghiên cứu tác dụng điều trị Gout của thuốc, Bài giảng cao học dược (2010) 3 Đỗ Trung Đàm, Phương pháp ngoại suy liều có hiệu quả tương đương giữa người và động vật thí nghiệm, Tạp chí dược học, số 2,3/2001 4 Lưu Thị Ngọc, Đào Thị Vui, Nguyễn Thùy Dương, Đánh giá tác dụng hạ acid uric máu... Sự giảm acid uric máu của viên nang GTC này khác nhau có ý nghĩa không? Và từ đó xác định liều có tác dụng hạ acid uric máu tốt hơn, liều tương đương tác dụng của allopurinol? Giả sử trên thực nghiệm kết quả thu được rằng GTC với liều 12g/kg có tác dụng hạ acid uric máu trên chuột nhắt gây tăng acid uric máu thực nghiệm Ta có thể ngoại suy liều của GTC có tác dụng điều trị gout trên người là 1g/kg 3.2