Phân Lập Và Đánh Giá Khả Năng Sinh Enzyme Cellulase Của Một Số Vi Sinh Vật Bản Địa

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM o0o NGUYỄN THỊ HUYỀN Tên đề tài: PHÂN LẬP VÀ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG SINH ENZYME CELLULASE CỦA MỘT SỐ VI SINH VẬT BẢN ĐỊA KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Khoa : CNSH - CNTP Khóa học : 2010 – 2014 Thái Nguyên, năm 2014 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM o0o NGUYỄN THỊ HUYỀN Tên đề tài: PHÂN LẬP VÀ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG SINH ENZYME CELLULASE CỦA MỘT SỐ VI SINH VẬT BẢN ĐỊA KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Lớp : K42 - CNSH Khoa : CNSH - CNTP Khóa học : 2010 – 2014 Giảng viên hướng dẫn : ThS Lương Hùng Tiến TS Dương Văn Cường Thái Nguyên, năm 2014 LỜI CẢM ƠN Được trí Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhiệm Khoa Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm thời gian thực tập tốt nghiệp em thực đề tài “Phân lập đánh giá khả sinh enzyme cellulase số vi sinh vật địa” Sau tháng thực tập phòng thí nghiệm công nghệ vi sinh Khoa Công nghệ sinh học công nghệ thực phẩm đên em hoàn thành xong đề tài Để đạt kết ngày hôm em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhiệm Khoa thầy cô môn tạo điều kiện giúp đỡ em thời gian qua Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo Th.S Lương Hùng Tiến TS Dương Văn Cường Khoa Công nghệ sinh học công nghệ thực phẩm, Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên tận tình bảo, hướng dẫn em thời gian qua Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn toàn thể gia đình, bạn bè hêt lòng giúp đỡ, tạo điều kiện vật chất tinh thần cho em trình học tập nghiên cứu Do thời gian thực tập có giới hạn nên đề tài tránh khỏi sai sót Em mong nhận đóng góp thầy cô bạn để đề tài em hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên ngày 30 tháng năm 2014 Sinh viên Nguyễn Thị Huyền DANH MỤC CÁC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT CBD Cellulose binding domain CMC Carboxymethyl cellulose E Enzyme EG Endoglucanase HEC Hydroxyethyl cellulose NM Nấm mốc S Cơ chất VK Vi khuẩn VSV Vi sinh vật XK Xạ khuẩn DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Một số vi sinh vật sản xuất cellulase 13 Bảng 4.1 Kết đặc điểm chủng vi sinh vật phân lập 27 Bảng 4.2 Kết thử hoạt tính 29 Bảng 4.3 Kết ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến khả sinh tổng hợp cellulase chủng NM1, NM3 30 Bảng 4.4 Kết ảnh hưởng nhiệt độ đến khả sinh enzyme cellulase từ chủng NM1, NM3 33 Bảng 4.5 Kết ảnh hưởng pH ban đầu đến sinh tổng hợp cellulase chủng NM1, NM3 35 Bảng 4.6 Kết ảnh hưởng nồng độ chất cảm ứng đến khả phân giải chất chủng NM1, NM3 37 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1 Cấu trúc không gian phân tử cellulose Hình 2.2 Cấu trúc phân tử cellulose Hình 2.3 Cấu trúc không gian enzme cellulase Hình 2.4 Vị trí cắt exoglucanase 10 Hình 2.5 Cơ chế tác dụng cellulase 11 Hình 3.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định điều kiện nuôi cấy thích hợp 26 Hình 4.1 Một số hình ảnh phân lập vi sinh bật sinh enzyme cellulase 28 Hình 4.2 Hoạt tính cellulase chủng nuôi cấy 29 Hình 4.3 Ảnh hưởng thời gian đến khả sinh enzyme cellulase chủng NM1, NM3 31 Hình 4.4 Ảnh hưởng thời gian đến khả thu sinh khối enzyme cellulase 31 Hình 4.5 Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả sinh enzyme cellulase chủng NM1 34 Hình 4.6 Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả sinh enzyme cellulase chủng NM3 34 Hình 4.7 Ảnh hưởng pH ban đầu đến hoạt tính enzyme cellulase đến chủng NM1 36 Hình 4.8 Ảnh hưởng pH ban đầu đến khả sinh enzyme cellulase chủng NM3 36 Hình 4.9 Ảnh hưởng nồng độ chất cảmứng đến khả sinh cellulase chủng NM1 38 Hình 4.10 Ảnh hưởng nồng độ chất cảm ứng đến đên khả sinh cellulase chủng NM3 38 MỤC LỤC Phần MỞ ĐẦU 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2.Mục đích nghiên cứu 1.3.Yêu cầu đề tài 1.4.Ý nghĩa khoa học 1.4.1.Ý nghĩa khoa học 1.4.2.Ý nghĩa thực tiễn Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Lịch sử vấn đề nghiên cứu 2.2 Giới thiệu cellulose 2.3 Enzyme cellulase 2.3.1 Cấu trúc enzyme cellulase 2.3.2 Tính chất enzyme cellulase 2.3.3 Nguồn gốc enzyme cellulase 2.3.4 Cơ chất enzyme cellulase 2.3.5 Cơ chế hoạt động 2.4 Hoạt lực enzyme cellulase (cơ chế thủy phân cellulose) 12 2.5 Vi sinh vật sinh tổng hợp cellulase .13 2.6 Ứng dụng cellulase 14 2.6.1 Ứng dụng cellulase chế biến thực phẩm .14 2.6.2 Trong công nghệ xử lý rác thác sản xuất phân bón vi sinh 16 2.6.3 Trong xử lý môi trường 16 2.6.4 Trong sản xuất thức ăn gia súc 17 2.6.5 Trong kỹ thuật di truyền 17 2.7 Tình hình nghiên cứu enzyme cellulase .18 2.7.1 Tình hình nghiên cứu giới 18 2.7.2 Tình hình nghiên cứu nước 19 Phần VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 3.1 Vật liệu nghiên cứu .20 3.1.1 Mẫu phân lập 20 3.1.2 Thiết bị, dụng cụ hóa chất dung cho ngiên cứu 20 3.2 Môi trường 21 3.3 Phương pháp nghiên cứu .22 3.3.1 Phương pháp phân lập .22 3.3.2 Phương pháp thử hoạt tính 24 3.3.3 Phương pháp bố trí thí nghiệm xác định điều kiện nuôi cấy thích hợp 25 3.3.4 Phương pháp xử lý số liệu 26 Phần KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 4.1 Phân lập chủng vi sinh vật sinh enzyme cellulase cao 27 4.2 Kết thử hoạt tính 28 4.3 Xác định số yếu tố ảnh hưởng đến khả sinh tổng hợp enzyme cellulase chủng NM1, NM3 tuyển chọn 30 4.3.1 Ảnh hưởng thời gian 30 4.3.2 Ảnh hưởng nhiệt độ 33 4.3.3 Ảnh hưởng pH ban đầu 35 4.3.4 Ảnh hưởng nồng độ chất cảm ứng đến khả phân giải chất chủng NM1, NM3 37 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 39 5.1 Kết luận 39 5.2 Đề xuất ý kiến .39 TÀI LIỆU THAM KHẢO .40 Phần MỞ ĐẦU 1.1 Tính cấp thiết đề tài Enzyme cellulase hệ enzyme bao gồm loại enzyme: C1, Cx, βclucosidase, có khả hoạt động phối hợp để phân giải cellulose thành glucose Enzyme cellulase ứng dụng nông nghiệp chế biến thức ăn chăn nuôi, công nghiệp thực phẩm để chế biến thực phẩm, trình li trích chất từ thực vật, việc phân hủy phế liệu giàu cellulose….Theo Bhat (2000), xấp xỉ 20% số tỷ USD thu từ lượng enzyme công nghiệp bán giới gồm enzyme cellulase, hemicelluse pectinase Hằng năm, nước ta phải nhập ngoại lượng lớn nguồn enzyme cellulase để giải vấn đề sản xuất xử lý ô nhiễm môi trường Việt Nam nước nhiệt đới có nông nghiệp phong phú, đa dạng đà phát triển Vì vậy, lượng phế thải nông nghiệp dồi dào, với công nghiệp hóa đại hóa đất nước, ô nhiễm môi trường ngày trở thành nguy thật Thành phần phế thải rắn có nông nghiệp, lâm nghiệp cellulase Việc phức hệ cellulase phân giải nguồn thức ăn giàu celluloase rơm rạ, bã mía, gỗ mục triển khai nhiều nước, lĩnh vực sản xuất protein đơn bào làm thức ăn cho gia súc [3] Do đó, vi sinh vật phân giải cellulose có vai trò quan trọng chu trình tuần Vì chọn đề tài “Phân lập đánh giá khả sinh enzyme cellulase số vi sinh vật đia” 1.2 Mục đích nghiên cứu - Phân lập đánh giá khả sinh enzyme cellulose từ số vi sinh vật địa, làm tiền đề cho nghiên cứu xử lí phụ phẩm chứa cellulose 1.3 Yêu cầu đề tài - Phân lập vi sinh vật có hoạt tính sinh enzyme cellulase - Đánh giá vi sinh vật có hoạt tính sinh enzyme cellulase - Thử nghiệm vi sinh vật có hoạt tính cellulase phân giải cellulose 1.4 Ý nghĩa khoa học 1.4.1 Ý nghĩa khoa học - Xây dựng sưu tập nguồn gene vi sinh vật địa có khả phân giải cellulose - Tuyển chọn chủng vi sinh vật phân giải cellulose cao 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn - Nghiên cứu đặc điểm hình thái sinh lý sinh hóa phân loại chủng vi sinh vật tuyển chọn Nghiên cứu yếu tố môi trường ảnh hưởng đến trình phân giải cellulose vi sinh vật - Bước đầu ứng dụng vào việc hạn chế ô nhiễm môi trường hạn chế chất thải - Giúp sinh viên có hội tiếp cận với quy trình, thao tác kỹ thuật thực tế Qua kết hợp với kiến thức lý thuyết học sinh viên có hiểu biết chuyên sâu nhìn tổng quát Ảnh hưởng thời gian đến khả sinh enzyme cellulase chủng NM3 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HT FILE CCCC 6/ 6/** 4:33 PAGE VARIATE V003 HT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T 10 3650.18 R 181818 * RESIDUAL 20 31.8185 365.018 229.44 0.000 0.06 0.944 909091E-01 1.59092 * TOTAL (CORRECTED) 32 3682.18 115.068 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SINHKHOI FILE CCCC 6/ 6/** 4:33 PAGE VARIATE V004 SINHKHOI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T 10 206240E+09 206240E+08 155.34 0.000 R 109340 * RESIDUAL 54669.9 0.41 0.673 20 265526E+07 132763 * TOTAL (CORRECTED) 32 209005E+09 653140E+07 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE CCCC 6/ 6/** 4:33 PAGE MEANS FOR EFFECT T - T NOS HT SINHKHOI 0.000000 2232.00 4.00000 3116.00 3 11.0000 5365.00 16.0000 7962.00 25.0000 8875.00 29.0000 9264.00 30.0000 9575.00 30.0000 9870.33 29.0000 8506.67 10 28.0000 8374.00 11 24.0000 8157.00 0.728223 210.367 2.14823 620.576 SE(N= 3) 5%LSD 20DF - MEANS FOR EFFECT R - R NOS HT SINHKHOI 11 20.5455 7312.00 11 20.4545 7411.73 11 20.6364 7448.18 0.380302 109.861 1.12188 324.085 SE(N= 11) 5%LSD 20DF - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE CCCC 6/ 6/** 4:33 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 33) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS C OF V |T % |R | | | | | | | | | HT 33 20.545 10.727 1.2613 6.1 0.0000 0.9443 SINHKHOI 33 7390.6 2555.7 364.37 4.9 0.0000 0.6727 Ảnh hưởng nhiệt độ chủng NM1 BALANCED ANOVA FOR VARIATE C FILE HHHHHH 5/ 6/14 16:20 :PAGE VARIATE V003 C LN PROB SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO ER SQUARES SQUARES LN ========================================================================= T 0.000 2614.50 522.900 490.21 5.33334 2.66667 2.50 10 10.6668 1.06668 R 0.131 * RESIDUAL -* TOTAL (CORRECTED) 17 2630.50 154.735 -TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE HHHHHH 5/ 6/14 16:20 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS C 27.0000 33.0000 3 37.0000 31.0000 25.0000 SE(N= 3) 5%LSD 10DF 0.000000 0.596289 1.87893 MEANS FOR EFFECT R R NOS C 24.8333 25.5000 26.1667 SE(N= 6) 5%LSD 10DF 0.421640 1.32860 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE HHHHHH 5/ 6/14 16:20 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T (N= SD/MEAN | |R | 18) | | NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS 12.439 1.0328 % | | | | | | C 18 25.500 4.1 0.0000 0.1306 Ảnh hưởng nhiệt độ chủng NM3 BALANCED ANOVA FOR VARIATE C FILE AAAAAA 5/ 6/14 19:10 :PAGE VARIATE V003 C LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T 2632.00 526.400 686.56 0.000 2.33333 1.16667 1.52 0.265 10 7.66720 766720 R * RESIDUAL * TOTAL (CORRECTED) 17 2642.00 155.412 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE AAAAAA 5/ 6/14 19:10 :PAGE MEANS FOR EFFECT T - T NOS C 30.0000 32.0000 3 33.0000 36.0000 27.0000 0.000000 SE(N= 3) 0.505543 5%LSD 10DF 1.59298 - MEANS FOR EFFECT R - R NOS C 26.8333 26.1667 26.0000 SE(N= 6) 0.357473 5%LSD 10DF 1.12641 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE AAAAAA 5/ 6/14 19:10 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE C GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 18) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS 12.466 0.87563 18 26.333 C OF V |T % |R | | | | | | | | | 3.3 0.0000 0.2647 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BBBBB 6/ 6/** 0: PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 24) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS ND 24 4.5000 2.3406 GO 24 24.500 4.2221 ROM 24 30.250 6.4824 C OF V |T 0.76384E-03 % |R | | | | | | | | | 0.0 0.0000 1.0000 1.1877 4.8 0.0000 0.1445 0.64087 2.1 0.0000 0.0000 Ảnh hưởng pH ban đầu đến chủng NM1 BALANCED ANOVA FOR VARIATE D FILE CCCCCC 5/ 6/14 19:55 :PAGE VARIATE V003 D LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T 84.0000 R 888178E-14 444089E-14 * RESIDUAL 14.0000 ****** 0.000 0.00 1.000 12 256686E-05 213905E-06 * TOTAL (CORRECTED) 20 84.0000 4.20000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE K FILE CCCCCC 5/ 6/14 19:55 :PAGE VARIATE V004 K LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T 29.3759 R 334952E-01 167476E-01 * RESIDUAL 12 1.03691 4.89599 56.66 0.000 0.19 0.827 864090E-01 * TOTAL (CORRECTED) 20 30.4463 1.52232 BALANCED ANOVA FOR VARIATE C FILE CCCCCC 5/ 6/14 19:55 :PAGE VARIATE V005 C LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T 466.286 77.7143 96.00 0.000 18.2857 9.14286 11.29 0.002 12 9.71434 809528 R * RESIDUAL * TOTAL (CORRECTED) 20 494.286 24.7143 BALANCED ANOVA FOR VARIATE S FILE CCCCCC 5/ 6/14 19:55 :PAGE VARIATE V006 S LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T 19.4286 R 361525E-01 180762E-01 * RESIDUAL 12 225783 3.23811 172.10 0.000 0.96 0.412 188153E-01 * TOTAL (CORRECTED) 20 19.6906 984529 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE CCCCCC 5/ 6/14 19:55 :PAGE MEANS FOR EFFECT T - T NOS D K C S 2.00000 8.07000 20.0000 1.70667 3.00000 9.67333 31.0000 2.47000 3 4.00000 9.67000 31.0000 3.89333 5.00000 9.74333 36.0000 4.24333 6.00000 9.68000 28.0000 4.18333 7.00000 7.08000 27.0000 4.05667 8.00000 7.01667 25.0000 4.36000 SE(N= 3) 0.267024E-03 0.169714 0.519464 5%LSD 12DF 0.822792E-03 0.522948 1.60064 0.791944E-01 0.244025 - MEANS FOR EFFECT R - R NOS D 5.00000 K 8.65286 C 27.1429 S 3.61429 5.00000 8.71143 28.2857 3.54857 5.00000 8.75000 29.4286 3.51429 SE(N= 7) 0.174808E-03 0.111104 0.340069 5%LSD 12DF 0.538644E-03 0.342350 1.04787 0.518449E-01 0.159752 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE CCCCCC 5/ 6/14 19:55 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 21) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS C OF V |T % |R | | | | | | | | | D 21 5.0000 2.0494 0.46250E-03 0.0 0.0000 1.0000 K 21 8.7048 1.2338 0.29395 3.4 0.0000 0.8274 C 21 28.286 4.9713 0.89974 3.2 0.0000 0.0018 S 21 3.5590 0.99223 0.13717 3.9 0.0000 0.4124 Ảnh hưởng pH ban đầu chủng NM3 BALANCED ANOVA FOR VARIATE D FILE EEEEEE 5/ 6/14 21:53 :PAGE VARIATE V003 D LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T 84.0000 R 888178E-14 444089E-14 * RESIDUAL 14.0000 ****** 0.000 0.00 1.000 12 256686E-05 213905E-06 * TOTAL (CORRECTED) 20 84.0000 4.20000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SK FILE EEEEEE 5/ 6/14 21:53 :PAGE VARIATE V004 SK LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T 7.38886 R 643813E-02 321906E-02 * RESIDUAL 12 454629 1.23148 32.51 0.000 0.08 0.919 378857E-01 * TOTAL (CORRECTED) 20 7.84992 392496 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HT FILE EEEEEE 5/ 6/14 21:53 :PAGE VARIATE V005 HT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T 524.000 87.3333 32.75 0.000 666666 333333 0.12 0.883 12 32.0000 2.66667 R * RESIDUAL * TOTAL (CORRECTED) 20 556.667 27.8333 BALANCED ANOVA FOR VARIATE C FILE EEEEEE 5/ 6/14 21:53 :PAGE VARIATE V006 C LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T 22.0762 3.67937 R 105210 526048E-01 12 171725 143105E-01 * RESIDUAL 257.11 0.000 3.68 0.056 * TOTAL (CORRECTED) 20 22.3532 1.11766 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE EEEEEE 5/ 6/14 21:53 :PAGE MEANS FOR EFFECT T - T NOS D SK HT C 2.00000 7.24333 18.0000 1.87667 3.00000 8.35000 32.0000 2.55000 3 4.00000 8.25000 31.0000 3.78000 5.00000 8.56667 34.0000 4.75000 6.00000 8.43667 30.3333 4.76000 7.00000 7.44000 28.0000 4.12667 8.00000 7.02667 25.0000 4.25000 SE(N= 3) 0.267024E-03 0.112377 0.942810 5%LSD 12DF 0.822792E-03 0.346272 2.90512 0.690663E-01 0.212817 - MEANS FOR EFFECT R R NOS D SK HT C 5.00000 7.90286 28.5714 3.66857 5.00000 7.88000 28.2857 3.68714 5.00000 7.92286 28.1429 3.82714 SE(N= 7) 5%LSD 12DF 0.174808E-03 0.735680E-01 0.617214 0.452145E-01 0.538644E-03 0.226688 0.139321 1.90185 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE EEEEEE 5/ 6/14 21:53 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 21) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS C OF V |T % |R | | | | | | | | | D 21 5.0000 2.0494 0.46250E-03 0.0 0.0000 1.0000 SK 21 7.9019 0.62650 0.19464 2.5 0.0000 0.9186 HT 21 28.333 5.2757 1.6330 5.8 0.0000 0.8834 C 21 3.7276 1.0572 0.11963 3.2 0.0000 0.0561 Ảnh hưởng nồng độ chất cảm ứng khả sinh enzyme cellulase chủng NM1 BALANCED ANOVA FOR VARIATE ND FILE AAAAAA 5/ 6/** 23:40 PAGE VARIATE V003 ND LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T 126.000 R 555112E-14 277556E-14 * RESIDUAL 18.0000 ****** 0.000 0.00 1.000 14 816822E-05 583444E-06 * TOTAL (CORRECTED) 23 126.000 5.47826 BALANCED ANOVA FOR VARIATE ROM FILE AAAAAA 5/ 6/** 23:40 PAGE VARIATE V004 ROM LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T 266.625 38.0893 28.07 0.000 9.00000 4.50000 3.32 0.065 14 19.0000 1.35714 R * RESIDUAL * TOTAL (CORRECTED) 23 294.625 12.8098 BALANCED ANOVA FOR VARIATE GO FILE AAAAAA 5/ 6/** 23:40 PAGE VARIATE V005 GO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T 2818.50 402.643 203.13 0.000 R 6.25000 3.12500 1.58 0.241 14 27.7500 1.98215 * RESIDUAL * TOTAL (CORRECTED) 23 2852.50 124.022 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE AAAAAA 5/ 6/** 23:40 PAGE MEANS FOR EFFECT T - ROM GO T NOS 1.00000 20.0000 25.0000 2.00000 22.0000 27.0000 3 3.00000 23.0000 40.0000 4.00000 25.0000 42.0000 5.00000 28.0000 57.0000 6.00000 29.0000 28.0000 7.00000 30.0000 26.0000 8.00000 24.0000 25.0000 0.441000E-03 0.672593 0.812844 SE(N= 3) 5%LSD 14DF ND 0.133765E-02 2.04012 2.46554 - MEANS FOR EFFECT R - ROM GO R NOS 4.50000 24.3750 33.1250 4.50000 25.1250 33.7500 4.50000 25.8750 34.3750 0.270057E-03 0.411877 0.497763 SE(N= 8) 5%LSD 14DF ND 0.819141E-03 1.24932 1.50983 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE AAAAAA 5/ 6/** 23:40 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 24) NO OBS DEVIATION BASED ON BASED ON TOTAL SS RESID SS ND 24 4.5000 2.3406 ROM 24 25.125 3.5791 GO 24 33.750 11.137 C OF V |T 0.76384E-03 % |R | | | | | | | | | 0.0 0.0000 1.0000 1.1650 4.6 0.0000 0.0652 1.4079 4.2 0.0000 0.2406 Ảnh hưởng nồng độ chất cảm ứng đến khả sinh enzyme cellulase chủng NM3 BALANCED ANOVA FOR VARIATE ND FILE BBBBB 6/ 6/** 0: PAGE VARIATE V003 ND LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T 126.000 R 555112E-14 277556E-14 * RESIDUAL 18.0000 ****** 0.000 0.00 1.000 14 816822E-05 583444E-06 * TOTAL (CORRECTED) 23 126.000 5.47826 BALANCED ANOVA FOR VARIATE GO FILE BBBBB 6/ 6/** 0: PAGE VARIATE V004 GO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T 384.000 54.8571 38.89 0.000 6.25000 3.12500 2.22 0.145 14 19.7500 1.41072 R * RESIDUAL * TOTAL (CORRECTED) 23 410.000 17.8261 BALANCED ANOVA FOR VARIATE ROM FILE BBBBB 6/ 6/** 0: PAGE VARIATE V005 ROM LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T 940.500 134.357 327.13 0.000 R 20.2500 10.1250 24.65 0.000 14 5.75000 410714 * RESIDUAL * TOTAL (CORRECTED) 23 966.500 42.0217 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BBBBB 6/ 6/** 0: PAGE MEANS FOR EFFECT T - T NOS ND GO ROM 1.00000 19.0000 24.0000 2.00000 20.0000 26.0000 3 3.00000 22.0000 34.0000 4.00000 22.0000 35.0000 5.00000 29.0000 43.0000 6.00000 30.0000 30.0000 7.00000 28.0000 26.0000 8.00000 26.0000 24.0000 0.441000E-03 0.685739 0.370006 SE(N= 3) 5%LSD 14DF 0.133765E-02 2.08000 1.12231 - MEANS FOR EFFECT R - R NOS ND GO ROM 4.50000 23.8750 29.1250 4.50000 24.5000 30.2500 4.50000 25.1250 31.3750 0.270057E-03 0.419928 0.226582 0.819141E-03 0.687273 SE(N= 8) 5%LSD 14DF 1.27373 [...]... ở Vi t Nam đã có một số nghiên cứu về vi sinh vật phân hủy cellulose và cellulase (Đặng Minh Hằng,1999, Hoàng Ngọc Minh và cộng sự, 2006) Những nghiên cứu này chủ yếu đề cập đến vấn đề phân lập các chủng vi sinh vật và đánh giá ảnh hưởng của một số yếu tố môi trường đến khả năng sinh tổng hợp cellulase như: Tuyển chọn, nghiên cứu ảnh hưởng của yếu tố môi trường lên khả năng sinh tổng hợp cellulase và. .. QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Phân lập chủng vi sinh vật sinh enzyme cellulase cao Để tuyển chọn các chủng VSV có khả năng sinh enzyme cellulase thủy phân cellulose, tôi tiến hành phân lập từ các mẫu đã thu được tại Huyện Phú Lương- Thái Nguyên Bảng 4.1 Kết quả và đặc điểm các chủng vi sinh vật phân lập được Mẫu Lá Cây Mục Gỗ cây mục Rơm rạ mục Đặc điểm của chủng Chủng STT vi sinh Màu của Thời gian khuẩn vật. .. (Lusta và cộng sự, 1999), Schizophillum commune (Wilick & Seligy, 1985) Năm 2000, Mawadza và cộng sự đã nghiên cứu về khả năng sinh tổng hợp cellulase từ các loài vi sinh vật có đặc hiệu cao bao gồm phức hệ 3 enzyme: endoglucanse, cellobihydrolase, và β- glucosidase thủy phân hoàn toàn cellulose Trong số những nghiên cứu về khả năng sinh cellulase của vi khuẩn thì Bacillus là chủng có khả năng sản sinh cellulase. .. bổ sung vi sinh vật giàu cellulase thì thời gian phân hủy sẽ rút ngắn chỉ còn khoảng một tháng Điều này rất có ý nghĩa trong vi c bảo vệ môi trường (hạn chế sự ô nhiễm nước, không khí và đất) đồng thời thúc đẩy quá trình chuyển hóa vật chất trong tự nhiên Ngoài vi c bổ sung trực tiếp vi sinh vật vào bể ủ để xử lý rác thải thì vi c tạo ra các chế phẩm vi sinh có chứa các vi sinh vật sinh ra cellulase. .. cellulose có sự tương quan mạnh giữa khả năng xúc tác phân giải cellulose của các enzyme và ái lực của enzyme này đối với cellulose Hơn nửa, hoạt tính của cellulase dựa vào tinh thể cellulose và khả năng kết hợp của CBD với cellulose Điều này chứng tỏ CBD làm gia tăng hoạt tính cellulase đối với tinh thể cellulose Sự có mặt của CBD sẽ hỗ trợ cho enzyme cellulase thực hiện vi c cắt đứt nhiều liên kết trong... nghiệp năng lượng sạch của toàn thế giới 18 2.7 Tình hình nghiên cứu enzyme cellulase 2.7.1 Tình hình nghiên cứu trên thế giới Nghiên cứu và ứng dụng của cellulase bắt đầu từ những năm 1950 Cuối thế kỉ XIX đã có rất nhiều tác giả nghiên cứu về khả năng tổng hợp cellulase từ các loại vi sinh vật Một số nghiên cứu về cellulase từ nấm của một số tác giả như: Trichoderma reseii (Ogawa và cộng sự, 1991), Aspergillus... cứu khả năng sinh tổng hợp và đặc điểm cellulase của A niger Rnnl 363 Châu Hoàng Vũ cũng nghiên cứu thu nhận và tinh sạch enzym cellulase từ nấm mốc T reesei bằng phương pháp lên men bán rắn Năm 2004, Trần Thạnh Phong khảo sát khả năng sinh tổng hợp enzym cellulase từ T reesei và A niger trên MT lên men bán rắn Năm 2005, Lê Thị Hồng Nga nghiên cứu sự sinh tổng hợp cảm ứng pectinase và cellulase của một. .. cứu Các công trình nghiên cứu khả năng sinh enzym cellulase Khả năng sinh enzym cellulase chủ yếu được tổng hợp từ nấm sợi Trichoderma và Aspergillus Ở Mỹ, năm 1983 PTN của Quân đội Mỹ ở Natik và trường đại học Rutgers, sử dụng chủng Trichoderma viride QM6 hoang dại để sản xuất cellulase đầu tiên Sau đó, gây biến chủng và chọn lọc được biến chủng QM9414 có khả năng sinh ra cellulase cao (theo Rehm, 1983)... công nghiệp, vi c phân hủy cellulose bằng enzyme, ngoài các yếu tố kỹ thuật như nhiệt độ pH, nồng độ cơ chất, lượng enzyme , một yếu tố hết sức quan trọng là tính đồng bộ của hệ enzyme cellulose từ nhiều nguồn vi sinh vật khác nhau Quá trình thủy phân cellulose chỉ có thể được tiến hành đến sản phẩm cuối cùng khi sử dụng đồng bộ ba loại enzyme cellulose 13 2.5 Vi sinh vật sinh tổng hợp cellulase Cellulose... thường của protein và vi c thay đổi chiều dài của vùng glycosil hóa có ảnh hưởng đến hoạt tính xúc tác của enzyme Hình 2.3 Cấu trúc không gian của enzme cellulase 8 2.3.2 Tính chất của enzyme cellulase Cellulase thủy phân cellulose tự nhiên và các dẫn xuất như carboxymethyl cellulose (CMC) hoặc hydroxyethyl cellulose (HEC) Cellulase cắt liên kết β-1,4-glucosid trong cellulose, lichenin và các β-Dglucan của