NẤM TRONG CÔNG NGHỆ CHUYỂN HÓA MÔI TRƯỜNG

LÊ XN THÁM, Ph D Assoc Professor NẤM TRONG CÔNG NGHỆ & CHUYỂN HÓA MÔI TRƯỜNG Linh Chi Ganodermataceae Donk NHÀ XUẤT BẢN KHOA HỌC & KỸ THUẬT Lê Xn Thám, Ph.D Assoc Professor NẤM TRONG CÔNG NGHỆ & CHUY ỂN HÓA MÔI TRƯ ỜN G Linh Chi Ganodermataceae Donk NHÀ XUẤT BẢN KHOA HỌC & KỸ THUẬT Hà nội – 2010 SỞ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ TỈNH ĐỒNG NAI VIỆN NĂNG LƯNG NGUYÊN TỬ VIỆT NAM Chuyên luận III Đề tài: “Phát triển sản xuất nấm sở điều tra tài nguyên xây dựng Bảo tàng Nấm Vườn Quốc gia Cát tiên” Cùng GSTS JM Moncalvo tuyến Cây tung, Nam Cát tiên, 4/2008 MỞ ĐẦU Từ lâu, nấm Linh chi (Ganoderma) biết tới loại thuốc dân gian có tác dụng tăng cường sức khoẻ chữa trị nhiều loại bệnh Trong năm gần nghiên cứu y dược học cho thấy chế phẩm từ nấm Ganoderma kìm hãm tổng hợp ADN tế bào ung thư hạn chế q trình di căn,… Các lồi Ganoderma khác sản sinh loại hợp chất sinh học có hoạt tính khác nhau, tác dụng tốt hệ tim mạch, bảo vệ gan, tăng cường miễn dịch,… Cách tròn 60 năm (1948), Donk M.A - nhà nấm học Hà Lan tiếng xác lập họ Linh chi Ganodermataceae Donk cở sở tính đặc thù bào tử đảm – yếu tố sinh sản hữu tính nấm Đảm (Basidiomycetes) mà ngày hầu hết nhà nấm học cơng nhận Tuy nhiên năm qua tình trạng phân loại - hệ thống học họ Ganodermataceae Donk cố Giáo sư Zhao Ji-Ding (1916-1995) nêu rõ rơi vào khó khăn hỗn độn tồn lồi nấm nhiều lỗ (Đa khổng khuẩn Polyporoid) Trên thực tế việc định loại lồi Linh chi dễ nhầm lẫn biến hóa đa dạng hình thái thể cấu trúc hệ sợi Trên giới nước ta, năm gần đây, tiến trình tích hợp phân tích nhiều dẫn liệu cấu trúc gen ribosom cho nghiên cứu đa dạng sinh học Gen sử dụng phổ biến nghiên cứu phân loại nấm nói chung phân loại lồi Linh chi Ganoderma nói riêng gen ribosom (rADN) nhân ty thể bao gồm vùng ITS (Internal Transcribed Spacers) vùng phân ly D2 gen mã hố cho rRNA tiểu đơn vị lớn (LSU-D2) Đây phương pháp phân tích hệ gen tương đối đơn giản nhanh chóng Do nhằm mục đích định loại xác đánh giá quan hệ phát sinh chủng loại họ Ganodermataceae, chúng tơi kết hợp phương pháp phân loại dựa vào dẫn liệu hình thái kinh điển phân tích cấu trúc DNA nhằm làm sáng tỏ hệ thống phân loại phức tạp họ Chính vậy, Chun luận “Xây dựng hệ thống học chủng loại phát sinh họ nấm Linh chi Ganodermataceae Donk”, sở hình thái giải phẫu cấu trúc gene (rDNA): thẩm định vị trí nhóm Hồng chi Tomophagus (tách từ chi Ganoderma) với đại diện phát Vườn Quốc gia Cát Tiên, phân tích quan hệ lồi Linh chi đỏ tím Humphreya endertii Thác trời Cát tiên (= Ganoderma endertii) - phát bổ sung Việt Nam, Linh chi đỏ ống to Haddowia longipes (= Amauroderma longipes) vùng Nam Cát tiên – Mã đà với taxon gần gũi thuộc chi Ganoderma, Amauroderma,… họ nấm Linh chi Ganodermataceae tiến hành Qua xác định củng cố mức bậc taxon chúng Đồng thời nghiên cứu xây dựng quy trình ni trồng cơng nghệ hóa chủ động nguồn chất phụ phế liệu nhằm bảo tồn nguồn gen, cung cấp dược liệu q góp phần giải nhiễm mơi trường Các cộng tác viên tham gia nhiều đóng góp cho chun luận này: Lý Xn Quang, Hồng Tấn Lộc, Lê Viết Ngọc, Trần Hữu Độ, Phạm Ngọc Dương, Nguyễn Thị Thường Anh, Nguyễn Mạnh Hùng, Nguyễn Văn Huấn, Bùi Thị Minh Hải, Huỳnh Tấn Mẫn, Nguyễn Lê Quốc Hùng, TS Lê Thị Thanh Huyền, GS.TS Jean-Marc Moncalvo, TS Dentinger M Bryn TS Dirk Stubbe từ quan phối hợp: Trung tâm Hạt nhân Tp Hồ Chí Minh, Sở Khoa học & Cơng nghệ Lâm đồng, Đại học Nha trang, Đại học Dalat, Vườn Quốc gia Cát tiên, Đại học Toronto, Canada, Đại học Gent, Vương quốc Bỉ Đặc biệt giúp đỡ tận tình hiệu Cơng ty Sinh học Cơng Thành, Long khánh, Đồng nai trực tiếp cá nhân ơng Bùi Quang Trung Chủ tịch Hội đồng quản trị góp phần cho nhiều kết tốt Cơng trình dấu ấn tri ân cho thời cộng tác chúng tơi Trong sách tạm thời dẫn khỏang 50 lòai nghiên cứu, nuôi trồng nhiều để thể phần đa dạng sinh vật – tài nguyên nấm Linh chi Việt nam Theo ước tính chúng tôi, nước ta có khỏang >60 lòai nấm Linh chi, riêng vùng Cao nguyên Lâm đồng Đồng nai (chưa tính hết Tây nguyên) có >50 lòai; vùng Thừa Thiên Huế (chưa tính hết miền Trung bộ) có >30 lòai; vùng Bắc (nhất vùng Tây bắc, Việt bắc Đông bắc) không 30 lòai Nếu tính vùng sinh thái – đòa lý khác dự kiến độ trùng lặp khỏang 50-60%, số 60 lòai hòan tòan tin cậy tầm tay, khảo cứu đầy đủ từ đến năm 2010 (xin lưu ý tòan Trung quốc có liệt kê khỏang 100 lòai, với độ trùng lặp ước tính 35%, nghóa có 60-70 lòai thực – tương đương với Việt nam mà thôi!) Thật ấn tượng so với giới: ~200 lòai, với >400 tên gọi, mà theo Moncalvo & Ryvarden (1997) bò nhầm lẫn, trùng lắp nhiều, thực tế mẫu vật bao hàm khỏang 150-200 lòai tối đa Như Việt nam chiếm khỏang 1/3 với không lòai mới, đặc hữu! Nghiên cứu tài nguyên nấm Linh chi Việt nam công trình khó khăn, song tuyệt thú có giá trò khoa học, kinh tế to lớn Những sơ sót, khiếm khuyết trình khảo cứu nấm Linh chi Việt nam nhà nghiên cứu đương nhiên khó tránh khỏi, kể trình biên soạn tập chuyên khảo Kính mong nhận dẫn, hợp tác chân thành trợ giúp xa gần Trở lại Dalat, 8/2008 Nhớ Hà nội – dâng tặng 1000 năm Thăng long 10/10/2010 CHƯƠNG I ĐA DẠNG SINH HỌC NẤM LINH CHI GANODERMATACEAE DONK HỆ THỐNG HỌC PHÂN TỬ TRONG NẤM HỌC Từ nửa cuối kỷ 20 trở lại đặc biệt từ thập niên 80, phát triển mạnh mẽ sinh học phân tử mở hàng lọat phương pháp nghiên cứu cho phân loại học, phân loại học phân tử Phân loại học phân tử phát hiện, mơ tả giải thích đa dạng sinh học mức độ phân tử lồi phạm vi lồi Đây ứng dụng kỹ thuật đại sinh học phân tử, chủ yếu hóa sinh cơng nghệ gen vào mục đích nghiên cứu đa dạng sinh học, nghiên cứu mối quan hệ tiến hố lồi, hình thành chủng loại phát sinh,… Mặc dù đời hướng sớm trở thành hệ thống phương pháp nghiên cứu hiệu quả, khắc phục hạn chế phương pháp cổ điển, bổ sung xác định dẫn liệu khoa học có tính chất tính quy luật (Hồ Huỳnh Thùy Dương, 2002) Nghĩa tiến gần đến hệ thống tự nhiên I.1 HỆ THỐNG HỌC NẤM ĐẢM BASIDIOMYCETES TRÊN CƠ SỞ TỔNG HỢP CÁC DẪN LIỆU VỚI GIẢI TRÌNH TỰ ADN Có lẽ Giải Nobel Sinh – Y học vào năm 1980 trao cho Woese thành tựu ứng dụng phương pháp giải trình tự ADN nghiên cứu chủng lọai tiến hóa làm sáng tỏ nguồn gốc phân hóa nhóm vi sinh vật (theo Woese, Kandler Wheelis, 1992) mở đầu cho kỷ ngun hệ thống học phân tử Có thể nói cách 25 năm phương pháp giải trình tự acid nucleic mở đầu cho kỷ ngun hệ thống học phân tử – hệ thống học chủng loại phát sinh, đặc biệt cho nấm Đảm (Basidiomycetes) Cơng trình tiên phong cơng bố Nature Walker Doolittle (1982) giải trình tự đoạn 5S gene ribosome (rARN) lồi thuộc hai nhóm Dị đảm (heterobasidiomycetes) Đồng đảm (homobasidiomycetes), phác họa q trình tiến hóa phân ly chúng giới nấm (Hình 1.1) Những thành tựu thừa nhận thuyết phục phù hợp với dẫn liệu phân tích hình thái giải phẫu tinh vi mơ tế bào, đặc biệt thể rõ có bước nhảy tách ly phân hóa kiểu lỗ vách ngăn sợi nấm Ngay sau đó, Templeton Đại học Washington, Missouri (USA) phân tích Nature (1983) tính cách mạng cơng trình này, sau Walker Doolittle kiểm chứng thêm với 20 lồi Họ chứng minh chất tổ tiên chung chúng Hình 1.1 Quan hệ chủng lọai phát sinh nhóm nấm Đảm (trên sở dẫn liệu 5S rADN, Walker Doolittle, 1983) Trong 25 năm qua hệ thống học chủng loại phát sinh phân tử sở dẫn liệu ADN trở thành trụ cột nấm học đại Thực vậy, điểm qua tổng quan sở lý luận cơng trình Bruns et al (1991) Đại học Berkeley, California (USA), Hibbett et al (1992) Đại học Harvard (USA) vào thập niên 90 tiến trình Bruns, White Taylor (1991) Đại học Berkeley, California (USA) tổng quan tảng lĩnh vực hệ thống học chủng loại tiến hóa sở giải trình tự ADN Đây dấu ấn quan trọng sau 10 năm hàng loạt thành tựu gần cách mạng tồn nhóm sinh vật với kết thuyết phục chí bất ngờ Hình 1.2 Quan hệ chủng loại phát sinh nhóm sinh vật (có nấm Đảm) (trên sở dẫn liệu 18S rADN: Bruns, White Taylor, 1991) Bức tranh chung tiến hố Giới Nấm vị trí chúng quần hệ sinh vật sở giải trình tự tiểu đơn vị 18S rARN nhỏ nhân đưa Hình 1.2, đồng thời cung cấp nhìn tổng qt giúp nắm bắt phù hợp hiệu phương pháp phân tích mức độ phân loại thích hợp Tồn nghiên cứu nhấn mạnh tầm quan trọng kiểm tra thống kê giả thuyết phát sinh hình thái Sự tương quan với giả thiết phát sinh hình thái trước hết dựa hình thái học, sinh thái học, sinh lý học dẫn liệu phân tử khác cung cấp thêm để xác minh phát sinh chủng loại mức phân tử Qua cho thấy tiềm kỹ thuật phân tích ADN nghiên cứu quan hệ chủng loại phát sinh bậc taxon sinh giới (Hình 1.3) Hình 1.3 Tiềm kỹ thuật phân tích ADN nghiên cứu quan hệ chủng lọai phát sinh bậc taxon sinh giới (Bruns, White Taylor ,1991) Tổng quan nhóm nhà khoa học Đại học Harvard (USA) Hibbett D.S et al., 1992, 1994, 1995 sau 10 năm kể từ thành cơng Walker Doolittle (1982), với hàng loạt thành tựu cho phân tích khái qt sâu sắc hệ thống chủng loại phát sinh nấm sở phương pháp phân tích ADN Cũng nhóm Hibbett et al (1997) phát triển tiếp thành tựu lần xây dựng nhóm chủng loại phát sinh nấm nhiều lỗ (Polyporoid fungi), sở khảo cứu 62 lồi, sử dụng phân tích tối thiểu tiểu đơn vị nhỏ gene ribosome ty thể (mt-rADN) để đánh giá quan hệ phát sinh chủng loại nấm lỗ Polyporaceae phương hướng tiến hố nấm lỗ taxon khác Trong lần thấy tương quan hệ thống học nấm Linh chi chuẩn Ganoderma lucidum (sinh trưởng hàng niên) taxon liên hệ (Hình 1.4), theo thấy phân hóa đa tạp chủng địa lý Giáo sư Vilgalys Đại học Duke, North Carolina (USA) chuyên gia hàng đầu xây dựng hoàn thiện phương pháp phân tích ADN nấm học nêu nguyên lý chặt chẽ kỹ thuật chuẩn phân tích gene ribosome Trong nghiên cứu đưa giới thiệu sưu tập danh sách trình tự mồi dùng cho phản ứng khuếch đại giải trình tự rADN nhân cho tất vùng đơn vò lặp lại rADN từ hầu hết nhóm chủ yếu nấm (đặc biệt nhóm nấm thực Eumycota) Eukaryota khác Tất mồi xác đònh thử nghiệm dựa giải trình tự tiểu đơn vò lớn nhỏ ADN từ nấm, thực vật Eukaryota khác Đồng thời, hầu hết cặp mồi vùng mã hoá nhân rADN (Hình 6) cho phép khuếch đại vùng mong muốn Hình Sơ đồ tiêu biểu rõ vùng rARN mồi đặc hiệu cho vùng (Vilgalys, 2001) Hình Các mồi xuôi mồi ngược dùng cho phản ứng khuếch đại giải trình tự tiểu đơn vị nhỏ rADN (17-18S) (Vilgalys, 2001) Dạng bào tử có rãnh khía dọc theo trục Linh chi lõm Ganoderma ahmadii Kim chi Ganoderma amboinense Ganoderma amboinense (Lam Ex Fr) Pat.Bull Soc Myc France, 26: 47 (1910) Teng, 447 (1964) Nấm lim mọc chum Quả giá thường có cuống phân nhánh hình thành nhiều mũ nấm hình tròn đến hình thân màu, có lơng mịn Mũ nấm dạng quạt, hình thận, hình tròn; dẹp Mặt mũ có nhiều nếp nhăn phóng xạ chạy từ cuống mép vòng đồng tâm mờ; mũ nấm lúc đầu phủ lớp lơng mịn nỉ, nhìn rõ kính lúp Nấm hình thành màu trắng vàng, màu lưu huỳnh, sau ngả vàng, nâu đỏ cuối già bị sờ mó vào mà trở nên bóng óng ánh Khi già mũ có lớp vỏ rõ rệt, rắn, dễ gãy, mép mũ nấm sắc đến tù, xé thùy nhỏ cưa khơng có quy luật (ít hay nhiều) Kích thước mũ – 10 (13) x – 12 (16)cm, dày 0,5 – 1,2cm Thịt nấm chất lie, chắc, đồng nhất; màu vàng bẩn đến nâu vàng; dày 0,2 – 0,6cm Mơ biến màu tối dung dich KOH Thế sinh sản dạng ống, dày 0,2 – 0,6 – cm, màu với thịt nấm Bề mặt ống nấm phẳng, hình thành màu trắng, sau chuyển sang màu vàng lưu huỳnh, khơ già trở nên màu nâu tối Miệng ống dày, hồn chỉnh, có – lỗ 1mm Cuống nấm sinh thường đơn độc, đoạn dài – 6cm hay bắt đầu phân nhánh hay nhiều, khơng có quy luật tạo nên cuống phụ từ cuống chung, đầu tận hình thành mũ nấm Cuống nấm sinh màu trắng, sau chuyển sang màu vàng có lớp phủ dạng lơng mịn kiểu nỉ tương tự mũ Cuống nấm tròn hay dẹt, kích thước – 15cm x – 2,5cm Bào tử giá hình trứng, cụt đầu với phần phụ khơng màu, màng bào tử hai lớp, lớp ngồi gần khơng màu, lớp có màu nâu rỉ sắt, đâm màng ngồi dạng gai nhọn Bào tử màu nâu rỉ sắt Có lỗ mầm rõ Kích thước 5,5 – 6,5 x (7,5) x – 10,5 μm Hệ thống sợi nấm thể thường sợi cứng, màng dày, khơng vách ngăn sợi bện khơng vách phân nhánh mạnh, kích thước 2,5 – 4,5 μm đường kính Hệ sợi ni cấy khiết màu trắng, sau đưa sáng có màu vàng, vàng nâu; quan sát thấy có sợi ngun thủy giai đoạn đầu Nấm mọc gỗ mục rừng, đặc biệt thuộc Đậu lim xanh, lim vàng…Đây lồi nhiệt đới cổ Bào tử hình trứng bầu Cổ Linh chi vỏ rắn Ganoderma annulare Đây lồi phức tạp khó phân định với G applanatum, đặc tính khơng phân tầng đa niên – nghĩa chủ yếu phát triển theo hướng nằm ngang Đặc điểm quan trọng để xác định lớp vỏ bề mặt tán dày rắn cứng Cổ Linh chi Ganoderma applanatum Ganoderma applanaium (Pers, ex Wallr) Pat., Docl Mycol France 5: 67 (1889); Bondazew, 426 (1953); Teng, 450 (1964) Syn Fomes appalanatus (Pers Ex Wallr) Gill, Boletus applanalus Pers Polyporus applanatus Pers Ex Wallr Nấm lim ống nhiều tầng Quả giả khơng cuống dạng quạt dày đến dạng mỏng, nhiều năm, bào tử có lớp vỏ cụt đầu Mũ nấm hình thành có dạng u lồi màu trắng, sau hình thành mũ dạng nửa tròn, dạng quạt: dày to dần hàng năm đến dạng móng lớn, khỏe Mặt mũ nấm có vòng lồi lên, rộng, xen rãnh chìm nhỏ tạo nên vòng đồng tâm rõ; có xen lẫn u lồi khơng có quy luật Mũ nấm lúc đầu màu trắng, sau chuyển sang màu nâu nhạt, nâu xám, nâu đất mờ đục Mép mũ tù, thường có màu xanh nhạt phần mũ phía Khi trưởng thành nấm phủ lớp vỏ chắc, rắn dòn; người khỏe dùng ngón tay để ấn vỡ Kích thước mũ – 20 (30) x – 30 (50) cm: dày 1,5 – 10cm Mơ thịt nấm chất lie điển hình, phát triển mạnh, đồng nhất, khơng phân tầng, dày 0,5 – 8cm hay Mơ màu nâu rỉ sắt sáng đến nâu đỏ Ống nấm thường nhiều năm, phân tầng rõ rệt, có mờ (những năm đầu); tầng dày – 15mm Màu ống nấm sẫm so với thịt nấm Trong ống nấm chứa nhiều sợi nấm hay bó sợi màu trắng Miệng ống nấm màu trắng, màu vàng nhạt, vàng Khi bị chạm vào biến thành màu nâu rỉ Miệng lỗ hình tròn, hồn chỉnh, 1mm có – (6) lỗ Bào tử giá hình trứng cụt đầu, có phần phụ khơng có màu bao quanh lỗ nảy mầm phát triển Bào tử hai lớp điển hình, màu nâu rỉ sắt, có giọt dầu lớn Kích thước bào tử (4,5) x (6,5) x (7,5) – μm Hệ thống sợi nấm thể thường sợi cứng khơng vách ngăn Màng dày, phân nhánh, đường kính – 6,5 μm Và sợi bện có kích thước nhỏ hơn, 3,5 – 4,5 μm đường kính Sợi ngun thủy có vách ngăn gặp giai đoạn đầu phát triển, mơi trường ni cấy khiết Nấm mọc gỗ sống chết, mục; Ở nước ta phát triển quanh năm, gặp rừng cơng viên, ven làng, khắp nơi Đây lồi phân bố khắp giới Là lồi phá hoại gỗ đứng gỗ chặt hạ Có thể dùng làm thuốc (chống mệt mỏi, tăng trưởng lực) Đơng y cần kiểm tra kỹ lại Mẫu thu Huế (Bào tầng chồng chất – đa niên) Cổ Linh chi tầng Ganoderma australe Thể mọc xếp nếp dày Thể non phân tầng lần thứ (4/2008) Thể phân tầng xòe rộng trưởng thành (đa niên) – 10/2008 [...]... (2006) đã nghiên cứu chuẩn hóa các kỹ thuật phân tích ADN cơ bản áp dụng cho thẩm đònh phân loại và chủng loại phát sinh Từ sau công trình nghiên cứu của Brun, White và Taylor, nghiên cứu này đã chỉ ra một loạt các kỹ thuật phân tích ADN là một công cụ rất hữu hiệu trong phân tích giới Nấm Các kỹ thuật này không chỉ giúp thẩm đònh phân loại nấm mà còn được ứng dụng rộng rãi trong đời sống con người,... lucidum trong các nấm nhiều lỗ (Polypores) theo dẫn liệu ADN (Hibbett và Donoghue, 1994) Hình 1.5 Quan hệ chủng loại phát sinh của Linh chi đa niên Ganoderma australe với các nấm đồng đảm theo dẫn liệu cấu trúc ADN (Hibbett et al., 1997) Tiếp đó Hibbett et al (1997) trong Kỷ yếu Viện Hàn lâm Khoa học Quốc gia Hoa Kỳ lại xác định vị trí chủng loại phát sinh của nấm Cổ Linh chi đa niên Ganoderma australe trong. .. mARN của gen nào đã được xuất hiện trong các điều kiện thí nghiệm Kết quả sẽ phát hiện sược gen nào hoạt động, gen nào không hoạt động (ở các mô tế bào khác nhau cũng như dưới tác động của môi trường khác nhau) Khả năng ứng dụng: microarray là một công cụ cực kỳ hữu hiệu phục vụ lónh vực genom học chức năng (functional genomics), nghiên cứu và xác đònh chức năng của gen trong genom cho biết tính trạng... ITS Trong đó, vùng ITS có lẽ là vùng ADN được giải trình tự rộng rãi nhất trong giới nấm Nó là vùng tiêu biểu được sử dụng nhiều nhất đối với hệ thống hệ thống học phân tử ở mức độ loài, và thậm chí là trong các loài (ví dụ để xác đònh các loài đòa lý) Bởi vì mức độ biến đổi của vùng ITS cao hơn các vùng gen khác của rADN Gần đây, để đánh giá tiến trình phát triển của hệ thống học phân tử của nấm, ... Linh chi đa niên Ganoderma australe trong 81 lồi nấm đồng đảm liên hệ trên cơ sở các dẫn liệu giải trình tự ADN gene trong nhân (nu rADN) và gene ty thể (mt rADN) (Hình 1.5) I.2 HỆ THỐNG HỌC NẤM LINH CHI GANODERMATACEAE DONK TRÊN CƠ SỞ TỔNG HỢP CÁC DẪN LIỆU VỚI GIẢI TRÌNH TỰ ADN Khởi đầu ứng dụng phương pháp phân tích ADN trong nghiên cứu các taxon nấm Linh chi có thể coi như bắt đầu cách đây 15 năm,... (Moncalvo et al., 1995b) Trong chi Ganoderma có nhiều lồi khá gần về hình thái với lồi chuẩn và do vậy đã tồn tại khái niệm “nhóm Ganoderma lucidum” hay “tổ hợp Ganoderma lucidum” (group, complex) Gần đây các dẫn liệu trắc nghiệm phân tử: phân tích chuỗi cấu trúc ADN (kỹ thuật PCR), phổ điện di các hệ enzyme, isozyme,… cũng chỉ ra q trình phân hóa tinh vi trong các lồi Ganoderma và ngay trong lồi chuẩn Ganoderma... này cho phép xác đònh được sự có mặt của những trình tự nucleotide trên một đoạn ADN nào đó trong một hỗn hợp các đoạn ADN khác nhau dựa trên sự bắt cặp của mẫu dò (ADN mẫu dò) đã được đánh dấu (P32) với đoạn ADN có chứa trình tự bổ sung với mẫu đó Đây là một phương pháp chuẩn xác được áp dụng rất thành công trong việc đánh giá tính đa hình của các đoạn giới hạn Do yêu cầu về số lượng tương đối lớn... điện di trên gel Do sự khác nhau về số lượng nucleotide trong mỗi đơn vò lặp lại và số đơn vò lặp lại mà sự đa hình về độ dài của SSR được nhân bản sẽ được phát hiện sau khi điện di trên gel Phương pháp SSR có thể được sử dụng trong nhiều nghiên cứu di truyền của các quần thể, từ mức độ cá thể đến mức độ loài Tuy nhiên, chỉ thò SSR cũng gặp khó khăn trong nghiên cứu đa hình trên các đối tượng mới vì phải... những cơ sở quyết định cho phân tích ADN trong nghiên cứu chủng lọai phát sinh các nhóm Linh chi Cho đến nay đây vẫn là những thành tựu kinh điển nhất về phân tích ADN các lòai thuộc chi Ganoderma Karst., góp phần kiểm định các quan điểm phân lọai cổ điển và hệ thống học truyền thống trong họ Linh chi Ganodermataceae Donk Ngay từ 1994 Moncalvo et al tại Đại hội Nấm học Quốc tế ở Vancouver, Canada đã... Ganoderma lucidum (W.Curt.: Fr.) Karst (chủ yếu là các chủng từ các vùng địa lý khác nhau) phải xếp trong một dải rộng, nhiều chủng phải xếp gần các lồi rất khác biệt vơi lồi chuẩn chẳng hạn như: G pfeiferii, G oerstedii, Đã có nhiều mơ tả khảo cứu về nấm linh chi chuẩn Ganoderma lucidum (W Curt.: Fr) Karst - một trong những lồi tồn thế giới (cosmopolitan), do vậy, có những sai biệt hình thái ngồi và sự phân