Luận văn Thạc sĩ Nghiên cứu nhân giống cây gấc (momordica cochinchinensis) bằng phương pháp nuôi cấy mô

đại học thái nguyên TRNG I HC KHOA HC Lấ TH HO NGHIấN CU NHN GING CY GC (MOMORDICA COCHINCHINENSIS) BNG PHNG PHP NUễI CY Mễ Chuyờn ngnh : Cụng ngh sinh hc Mó s : 60.42.80 LUN VN THC S CễNG NGH SINH HC Ngi hng dn khoa hc PGS TS Ngụ Xuõn Bỡnh Thỏi Nguyờn MC LC Trang Trang ph bỡa Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục đồ thị M U CHNG TNG QUAN TI LIU. TNG QUAN V CY GC 1.1 Gii thiu chung v cõy Gc 1.2 Ngun gc, phõn loi v c im thc vt hc ca cõy gc 1.2.1 Phõn b v gieo trng 1.2.2 c im thc vt hc 1.2.3 c im sinh trng, phỏt trin 1.2.4 Cụng dng ca cõy Gc9 TèNH HèNH NGHIấN CU TRấN TH GII V VIT NAM CY GC10 2.1 Tỡnh hỡnh nghiờn cu v mt dc lý ca cõy Gc 10 2.2 Tỡnh hỡnh nghiờn cu v nhõn ging cõy Gc bng phng phỏp nuụi cy mụ 13 KHI QUT V NUễI CY Mễ T BO THC VT 13 3.1 Khỏi nim nuụi cy mụ t bo thc vt 13 3.2 S lc lch s nuụi cy mụ t bo thc vt 14 3.3 C s khoa hc ca phng phỏp nuụi cy mụ t bo thc vt 16 3.4 iu kin v mụi trng nuụi cy mụ t bo thc vt 17 3.5 Cỏc cụng on ca nuụi cõy mụ t bo 25 CHNG NI DUNG V PHNG PHP NGHIấN CU 28 i tng, a im v thi gian nghiờn cu 28 1.1 i tng nghiờn cu 28 1.2 Thi gian nghiờn cu 28 Ni dung v phng phỏp nghiờn cu 28 2.1 Ni dung nghiờn cu 28 2.2 Phng phỏp nghiờn cu 28 2.3 X lý s liu 35 2.4 iu kin thớ nghim 36 2.4.1 Thớ nghim in vitro 36 2.4.2 Thớ nghim thớch ng cõy in vitro ngoi iu kin t nhiờn36 CHNG KT QU NGHIấN CU V THO LUN 37 3.1 Kt qu nghiờn cu nh hng ca húa cht v thi gian kh trựng n t l sng ca mu Gc 37 3.1.1 Kt qu nghiờn cu nh hng ca H2O2 n t l sng ca mu Gc 37 3.1.2 Kt qu nghiờn cu nh hng ca HgCl2 n t l sng ca mu Gc 38 3.2 Kt qu nghiờn cu nh hng ca cỏc cht kớch thớch sinh trng n kh nng tỏi sinh chi cõy Gc. 41 3.2.1 Kt qu nghiờn cu nh hng ca Kinetin n kh nng tỏi sinh chi cõy Gc . . 41 3.2.2 Kt qu nghiờn cu nh hng ca BAP n kh nng tỏi sinh chi cõy Gc. 42 3.3 Kt qu nghiờn cu nh hng ca cỏc cht kớch thớch sinh trng n kh nng nhõn nhanh chi cõy Gc 43 3.3.1 Kt qu nghiờn cu nh hng ca Kinetin n hiu qu nhõn chi 44 3.3.2 Kt qu nghiờn cu nh hng ca BAP n hiu qu nhõn chi 45 3.3.3 Kt qu nghiờn cu nh hng ca s kt hp gia BAP v Kinetin n hiu qu nhõn chi. 47 3.3.4 Kt qu nghiờn cu nh hng ca s kt hp gia BAP v nc da n hiu qu nhõn chi. 48 3.3.5 Kt qu nghiờn cu nh hng ca s kt hp gia BAP v IBA n hiu qu nhõn chi. 49 3.4 Kt qu nghiờn cu nh hng ca cỏc cht kớch thớch sinh trng n kh nng r chi Gc. 51 3.4.1 Kt qu nghiờn cu nh hng ca IBA n hiu qu r 51 3.4.2 Kt qu nghiờn cu nh hng ca NAA n hiu qu r 53 3.5 Kt qu nghiờn cu nh hng ca giỏ th n t l sng ca cõy m. 54 KT LUN V KIN NGH. 56 KT LUN. 56 KIN NGH 56 TI LIU THAM KHO PH LC DANH MUC CAC BANG TRONG LUN VN Bng Bng 3.1 Bng 3.2 Tờn cac bang luõn nh hng ca nng H2O2 v thi gian kh trựng n t l sng ca mu gc (Sau 15 ngy nuụi cy)) nh hng ca nng HgCl2 v thi gian kh trựng n t l sng ca mu gc (Sau 15 ngy nuụi cy) Trang 37 38 Bng 3.3 So sỏnh kt qu nghiờn cu kh trựng loi hoỏ cht (Oxy gi v HgCl2) 40 Bng 3.4 Kt qu nghiờn cu nh hng ca kinetin n kh nng tỏi sinh chi gc 41 Bng 3.5 Kt qu nghiờn cu nh hng ca BAP n kh nng tỏi sinh chi gc 42 Bng 3.6 Kt qu nghiờn cu nh hng ca nng kinetin n hiu qu nhõn chi 44 Bng 3.7 Kt qu nghiờn cu nh hng ca BAP n hiu qu nhõn chi 45 Bng 3.8 Kt qu nghiờn cu nh hng s phi hp gia BAP v kinetin n hiu qu nhõn chi gc 46 Bng 3.9 Kt qu nghiờn cu nh hng ca s kt hp gia BAP v nc da n hiu qu nhõn chi gc 48 Bng 3.10 Kt qu nghiờn cu nh hng ca s kt hp gia BAP v IBA n hiu qu nhõn chi gc 50 Bng 3.11 Kt qu nghiờn cu nh hng ca IBA n hiu qu r 51 Bng 3.12 Kt qu nghiờn cu nh hng ca NAA n hiu qu r 52 Bng 3.13 Kt qu nghiờn cu nh hng ca giỏ th n t l sng ca cõy m 54 DANH MUC CAC HèNH TRONG LUN VN Hinh Tờn cac Hỡnh luõn Trang Hỡnh 3.1 nh hng ca cht kh trựng H2O2 n t l sng ca mu gc 38 Hỡnh 3.2 nh hng ca cht kh trựng HgCl2 n t l sng ca mu gc 39 Hỡnh 3.3 nh hng ca kinetin n kh nng tỏi sinh chi cõy gc 41 Hỡnh 3.4 nh hng ca BAP n kh nng tỏi sinh chi cõy gc 42 Hỡnh 3.5 nh hng ca kinetin n hiu qu nhõn chi cõy gc 44 Hỡnh 3.6 nh hng ca BAP n hiu qu nhõn chi cõy gc 46 Hỡnh 3.7 nh hng ca s kt hp gia BAP v Kinetin n hiu qu nhõn chi cõy gc 47 Hỡnh 3.8 nh hng ca s kt hp gia BAP v nc da n hiu qu nhõn chi cõy gc 49 Hỡnh 3.9 nh hng ca s kt hp gia BAP v IBA n hiu qu nhõn chi cõy gc 50 Hỡnh 3.10 nh hng ca IBA n hiu qu r cõy gc 52 Hỡnh 3.11 nh hng ca NAA n hiu qu r cõy gc 53 Hỡnh 3.12 nh hng ca giỏ th n t l sng ca cõy m 55 NHNG CH VIấT TT BAP 6-benzylaminopurine CT Cụng thc TST iu tit sinh trng Kinetin furfurylaminopurine MS Murashinge and Skoog, 1962 NAA Naphlene acetic acid TN Thớ nghim IBA Indole butyric acid M U Gc cú tờn khoa hc l Momordica cochinchinensis thuc b Vioales, h bu (Cucurbitaceae) [8] Trong gc cú cha lycopen v -caroten vi hm lng cao gp nhiu ln cỏc thc phm ang c s dng ph bin trờn th gii Qu gc v ht gc cha nhiu hp cht cú hot tớnh sinh hc cú giỏ tr, c bit ht gc c dựng nhiu bi thuc dõn tc cha bnh [5, 6, 8] Ngoi ra, cỏc nghiờn cu gn õy cũn cho thy du gc cú kh nng sa cha sai lch DNA b chiu tia t ngoi [9], cú tỏc dng chng phúng x ú l nhng c s s dng du gc vic iu tr bnh ung th [5] V mt dinh dng, tỏc gi Vng Thuý L ó chng minh rng, gc cú hm lng -carotene cao nht cỏc loi trỏi cõy vi hm lng 35,5mg/100g tht trỏi [20] Hm lng lycopene gc cao gp 76 ln khoai tõy [18] Vng Thuý L v cs (2002) ó kho sỏt thc nghim tỏc dng ca -carotene gc n tr em ( Bc Vit Nam) cho thy, lng hng cu, -carotene, vitamin A mỏu ca nhúm n xụi gc tng lờn rừ rt so vi hai nhúm n du gc v -carotene tng hp [19] Aoki v cs (2002) nghiờn cu nhng cht mu cú gc Gc cha -carotene, lycopene, zeaxanthin, -cryptoxanthin Trong ú hm lng lycopene t 380àg/g tht trỏi [14] Ishida v cs (2004) nghiờn cu thnh phn acid bộo v carotenoid gc cho thy, tht gc cha 22% acid bộo gm cú 32% oleic acid, 29% palmitic acid v 28% linoleic acid [18] V mt dc hc, ó cú nhiu nghiờn cu v kh nng khc phc hu qu cht c mu da cam v phũng cha ung th gan ca -carotene cú gc Thi gian gõn õy , qu gc ó bt u c tip th khu vc chõu vi nhiờu dang san phõm nh nc ộp, du gc T nm 2002, Vit Nam san phõm dõ u Gõc (VINAGA) c ban nhiờu trờn thi trng va ngoi nc Nhu cõu c ng tng ca sn phm qu g c lm nguyờn liu chờ biờn mc cụng nghiờp a hinh cac vung san xuõt nguyờn liờu tai nhiờu tinh khu vc phớa Bc v phớa Nam ca Vit Nam Vit Nam cõy gc c trng ri rỏc khp ni, trung nhiu nht l cỏc vựng phớa Bc Gc cú th trng bng ht hay giõm cnh nhng cho h s nhõn ging khụng cao [8] Mt khỏc, gc l lo i cõy n tớnh khỏc gc, cõy moc t hat se phõn hoa cõy c va cõy cai ri ờng biờt Viờc trụng cõy gc bng phng phỏp gieo ht truyn thng lm gim hiu qu sn xut , tụn kem vờ cụng sc va chi ph khụng thờ phõn biờt c c iờm gii tớnh ca cõy giai on u trc cõy hoa Vỡ vy, phỏt trin vựng nguyờn liờu san xuõt gc, cõn thiờt phai tiờn hanh cac ky thuõt nhõn giụng vụ tớnh t cõy cỏi cú nng sut v cht lng n nh Phng phỏp ny ó v ang chng t l mt phng phỏp cú ý ngha quan trng cho cụng tỏc ging cõy trng, mang li hiu qu kinh t cao Xut phỏt t tớnh cp thit ca ti, chỳng tụi tin hnh: Nghiờn cu nhõn ging cõy gc (Momordica cochinchinensis) bng phng phỏp nuụi cy mụ Mc ớch nghiờn cu v ni dung nghiờn cu Mc ớch nghiờn cu Xõy dng thnh cụng quy trỡnh nhõn ging gc cú nng sut cao bng phng phỏp nuụi cy mụ Nh ú, ngi ta cú th nhõn lờn hng cõy cỏi v gi nguyờn tớnh trng di truyn ca cõy m ng thi, cỏc nghiờn cu v nuụi cy mụ s t c s cho cỏc nghiờn cu chn ging gc cú u th lai cao Ni dung nghiờn cu Nghiờn cu nh hng ca thi gian kh trựng v hoỏ cht kh trựng n t l sng ca mu gc; Nghiờn cu nh hng ca mt s cht iu tit sinh trng n kh nng tỏi sinh chi gc; Nghiờn cu nh hng ca mt s cht iu tit sinh trng n kh nng nhõn nhanh ca chi gc; Nghiờn cu nh hng ca mt s cht iu tit sinh trng n kh nng r ca chi gc; Xỏc nh giỏ th phự hp cho sinh trng phỏt trin ca cõy in vitro ngoi m í ngha ca ti: - í ngha khoa hc Kt qu nghiờn cu a mt s k thut vi nhõn ging cõy gc bng phng phỏp in vitro T ú, ỏnh giỏ c tỏc ng ca mt s cht iu tit sinh trng nhõn ging cõy gc B sung ngun ti liu tham kho phc v nghiờn cu, ging dy v sn xut ging gc thng phm cú nng sut cao - í ngha thc tin Kt qu nghiờn cu gúp phn hon thin k thut nhõn ging cõy gc nhm cung cp ging gc vi s lng ln, cht lng m bo, ng thi gi c c tớnh di truyn ca cõy chn lc 4.0 H s nhõn chi(ln) 3.5 Chiu cao chi (cm) 3.0 T l 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 Cụng thc thớ nghim Hỡnh 3.6 nh hng ca BAP n hiu qu nhõn chi cõy gc Kt qu sau 30 ngy nuụi cy cho thy: B sung BAP vo mụi trng nuụi cy thỡ h s nhõn chi ó tng lờn rừ rt cỏc nng BAP khỏc cho kt qu nhõn nhanh khỏc B sung BAP 0,2mg/l cho h s nhõn chi cao nht t 3,32 ln, õy cng l cụng thc cho cht lng chi tt, thõn chi mp, lỏ xanh m, cụng thc i chng h s nhõn ch t 1,00 ln Khi tng nng BAP lờn t 0,4mg/l n 1mg/l (cụng thc n cụng thc 6) h s nhõn chi, chiu cao trung bỡnh chi v cht lng chi gim So sỏnh cỏc kt qu nghiờn cu trờn cho thy, cụng thc cho h s nhõn chi tt hn so vi cỏc cụng thc khỏc Vỡ vy, mụi trng cú b sung BAP 0,2mg/l l mụi trng phự hp cho giai on nhõn nhanh trờn cõy gc 3.3.3 Kt qu nghiờn cu nh hng ca s kt hp gia BAP v kinetin n hiu qu nhõn chi Bng 3.8 Kờt qua nghiờn cu nh hng cua kờt hp BAP va kinetin n hiờu qua nhõn chụi cõy gc (Sau 30 ngy nuụi cõy) CT Nng BAP(mg/l) Nng kinetin (mg/l) S chi TB thu c H s nhõn chi (ln) Chiu cao chi (cm) Cht lng chi 1(/c) 0,2 0,0 398 3,32 3,70 + 0,2 0,1 540 4,50 4,65 ++ 0,2 0,2 461 3,84 4,22 ++ 0,2 0,3 453 3,77 3,97 ++ 0,2 0,4 443 3,69 3,79 + 0,2 0,5 427 3,56 3,73 + LSD05 0,11 CV % 0,5 Ghi chỳ: + Sinh trng kộm; ++ Sinh trng trung bỡnh; +++ Sinh trng tt 5.0 H s nhõn chi(ln) 4.5 Chiu cao chi (cm) 4.0 3.5 T l 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 Cụng thc thớ nghim Hỡnh 3.7 nh hng ca s kt hp gia BAP v kinetin n hiu qu nhõn chi cõy gc Kờt qua sau 30 ngy nuụi cõy trờ n mụi trn g nờn MS co bụ sung BAP (0,2mg/l) kờt hp vi kinetin cac nụng ụ khac c thờ hiờn bang 3.8 Cỏc cụng thc b sung thờm kinetin hờ sụ nhõn chụi at t 3,56 n 4,5 ln Cụng thc 2, b sung 0,1mg kinetin/l, cho h s nhõn chi cao nht (4,5 ln), chi sinh trng trung bỡnh, chiu cao t 4,65cm 3.3.4 Kt qu nghiờn cu nh hng ca s kt hp gia BAP v nc da n hiu qu nhõn chi Nc da l cht iu tit sinh trng t nhiờn rt giu cỏc hp cht hu c, cht khoỏng v cht kớch thớch sinh trng Nc da thng c s dng kớch thớch phõn húa v nhõn nhanh chi nuụi cy mụ t bo Hn na vi vai trũ l cht iu tit sinh trng t nhiờn nc da cú th mang li hiu qu khụng nhng v h s nhõn chi m cũn cho cht lng chi tt, bn vng trỡ in vitro Qua nhiu ln nhõn nhanh cht lng chi cú xu hng gim sỳt gii quyt ny v m bo h s nhõn chi nhõn nhanh, thỡ vic b sung nc da vo mụi trng nhõn nhanh tt nht ó thu c cỏc thớ nghim trờn (mụi trng cú b sung BAP 0,2mg /l) l phự hp vi mc ớch nghiờn cu kh nng nõng cao cht lng chi ca nc da nhõn nhanh Kt qu sau tun nuụi cy thu c bng 3.9 v Hỡnh 3.8 Bng 3.9 Nghiờn cu nh hng ca s kt hp gia BAP v nc da n hiu qu nhõn chi (Sau 30 ngy nuụi cõy) CT Nng BAP(mg/l) Nc da (ml) S chi TB thu c H s nhõn chi (ln) Chiu cao chi (cm) Cht lng chi 1(/c) 0,2 398 3,32 3,70 + 0,2 50 431 3,59 3,74 + 0,2 100 495 4,13 4,51 +++ 0,2 150 429 3,57 3,80 ++ 0,2 200 409 3,41 3,75 ++ 0,2 250 389 3,24 3,72 + LSD0,5 0,11 0,12 CV % 1,8 1,7 Ghi chỳ: + Sinh trng kộm; ++ Sinh trng trung bỡnh; +++ Sinh trng tt T l 5.0 H s nhõn chi(ln) 4.5 Chiu cao chi (cm) 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 Cụng thc thớ nghim Hỡnh 3.8 nh hng ca s kt hp gia BAP v nc da n hiu qu nhõn chi cõy gc Qua bng 3.9 v Hỡnh 3.8 cho ta thy, cụng thc i chng (mụi trng khụng b sung nc da) v cỏc cụng thc thớ nghim u cú kh nng nhõn chi, h s nhõn chi dao ng t 3,24 ln n 4,13 ln Trong ú, mụi trng b sung BAP 0,2mg/l v 100ml nc da cho h s nhõn chi cao nht t 4,13 ln, cao hn so vi mụi trng ch b sung BAP 0,2mg/l (3,32 ln) v chiu cao chi cng cao hn t 4,51cm Mt khỏc, chỳng tụi nhn thy b sung nc da nng 100ml/l kt hp vi BAP 0,2mg/l chi sinh trng v phỏt trin tt, thõn chi mp, lỏ xanh v hỡnh thỏi cõy khe hn khụng b sung kt hp 3.3.5 Kt qu nghiờn cu nh hng ca s kt hp gia BAP v IBA n hiu qu nhõn chi tng kh nng nhõn chi chỳng tụi nuụi chi trờn mụi trng MS + BAP 0,2mg/l (nng tt nht tỡm c thớ nghim 3.3.2) + 30g Sucrose/l + 5,7g aga/l + 100mg inositol/l, pH=5,6 v b sung thờm IBA cỏc mc nng thay i nh sau: Bng 3.10 Nghiờn cu nh hng ca s kt hp gia BAP v IBA n kh nng nhõn nhanh chi gc (Sau 30 ngy nuụi cy) CT Nng BAP (mg/l) Nng IBA (mg/l) S chi TB thu c H s nhõn chi (ln) Chiu cao chi (cm) Cht lng chi 1(/c) 0,2 0,0 398 3,32 3,70 + 0,2 0,02 606 5,05 5,63 +++ 0,2 0,04 483 4,02 4,30 ++ 0,2 0,06 465 3,88 3,80 ++ 0,2 0,08 451 3,76 3,40 + 0,2 0,1 421 3,51 3,00 + LSD0,5 0,44 0,19 CV % 0,6 2,8 T l Ghi chỳ: + Sinh trng kộm; ++ Sinh trng trung bỡnh; +++ Sinh trng tt 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 H s nhõn chi(ln) Chiu cao chi (cm) Cụng thc thớ nghim Hỡnh 3.9 nh hng ca s kt hp gia BAP v IBA n hiu qu nhõn chi cõy gc Qua bng 3.10 v Hỡnh 3.9 chỳng tụi nhn thy: Khi b sung t hp BAP v IBA thu c h s nhõn chi khỏ cao, dao ng t 3,32 ln n 5,05 ln cỏc cụng thc b sung IBA vi nng 0,04 n 0,1mg/l cho h s nhõn chi thp hn v gim dn t 4,02 ln xung 3,51 ln, cỏc cm chi phỏt trin khụng ng u, chi nh v thp Riờng cụng thc cú b sung BAP 0,2mg/l kt hp vi IBA 0,02mg/l cho h s nhõn chi cao nht t 5,05 ln, cht lng chi tt, ng u, lỏ xanh m So sỏnh cỏc kt qu nghiờn cu trờn cho thy cụng thc cho cht lng chi tt hn so vi cỏc cụng thc khỏc Do vy, mụi trng b sung t hp BAP 0,2mg/l v IBA 0,02mg /lc chn nhõn nhanh chi cho cỏc thớ nghim tip theo 3.4 Kt qu nghiờn cu nh hng ca cỏc cht kớch thớch sinh trng n kh nng r chi gc Giai on r l cụng on cui cựng ca quy trỡnh nhõn ging bng phng phỏp nuụi cy in vitro Kt thỳc giai on ny chỳng ta s thu c nhng cõy hon chnh (y r, thõn v lỏ) Trong giai on ny, ngi ta thng s dng cht TST thuc nhúm Auxin kớch thớch r Trờn thc t, gc l loi cõy cú b r chựm, m bo cõy sinh trng, phỏt trin tt ngoi t nhiờn, vic nghiờn cu to b r kho, cng cỏp l yu t then cht, quyt nh thnh cụng ca giai on ny Vi mc ớch trờn, chỳng tụi tin hnh nghiờn cu nh hng ca NAA v IBA n s r ca chi gc Sau 30 ngy nuụi cy thu c kt qu sau: 3.4.1 Kt qu nghiờn cu nh hng ca IBA n hiu qu r Bng 3.11 Kt qu nghiờn cu nh hng ca IBA n hiu qu r (Sau 30 ngy nuụi cõy) CT Nng IBA T l r (mg/l) (%) Sau 30 ngy S r/cõy (r) Chiu di r (cm) Mu sc r 0,0 0 0,1 100 1,16 2,44 Nõu 0,2 100 2,31 3,15 Trng 0,3 100 2,36 2,85 Nõu 0,4 100 3,04 2,59 Trng 0,5 100 3,71 3,93 LSD0,05 0,84 0,55 CV(%) 2,3 1,2 S r/cõy (r) 4.0 Chiu di r (cm) 3.5 T l Nõu 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 Cụng thc thớ nghi m Hỡnh 3.10 nh hng ca IBA n hiu qu r cõy gc Kt qu nghiờn cu cho thy: mụi trng khụng b sung IBA, r khụng c hỡnh thnh Sau 30 ngy nuụi cy, cỏc cụng thc b sung IBA (0,1mg/l IBA n 0,5 mg/l) r u hỡnh thnh S r v chiu di r t giỏ tr cao nht cụng thc b sung 0,2mg IBA/l Tuy nhiờn quan sỏt sinh trng ca cõy cho thy, mc dự r sinh trng khỏ tt nhng chi sinh trng kộm, lỏ vng, chi nh, thõn nh iu ny cho thy IBA cha thc s phự hp phự hp cho giai on r to cõy hon chnh trờn cõy gc 3.4.2 Kt qu nghiờn cu nh hng ca NAA n hiu qu r Bng 3.12 Kt qu nghiờn cu nh hng ca NAA n hiu qu r CT Nng NAA (mg/l) Sau 30 ngy T l r (%) S r/cõy (r) Chiu di r (cm) Mu sc r 0,0 0 0,10 100 4,23 4,2 Trng 0,20 100 3,62 3,2 Trng 0,30 100 2,41 2,91 Trng 0,40 100 2,35 2,62 Trng 0,50 100 1,19 2,48 Trng LSD0,05 0,11 0,29 CV(%) 1,8 0,6 T l 4.5 S r/cõy (r) 4.0 Chiu di r (cm) 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 Cụng thc thớ nghim Hỡnh 3.11 nh hng ca NAA n hiu qu r cõy gc Qua bng 3.12 v Hỡnh 3.11 chỳng tụi nhn thy: Mụi trng cú b sung NAA, chi gc u r vi t l 100% Sau tun nuụi cy cho t l r t 1,19 4,23 r/cõy v chiu di r t t 2,48 4,2cm Trong ú, mụi trng cú b sung 0,1mg NAA/l cho t l r cao nht c hai giỏ tr s r/cõy v chiu di r (sau tun t 4,23 r/cõy, chiu di r trung bỡnh l 4,2cm), cõy phỏt trin tt, lỏ xanh, thõn mp 3.5 Kt qu nghiờn cu nh hng ca giỏ th n t l sng ca cõy m Sau thi gian nuụi cy trờn mụi trng to r, cõy gc in vitro ó phỏt trin hon chnh 4- lỏ, chiu cao t - 8cm s c a trng m giỳp cõy thớch nghi t t vi mụi trng nờn m np bỡnh ng cõy in vitro, sau ú m khong vi ngy, dựng kp nh nhng gp cõy bỡnh, sch aga, em trng trờn cỏc giỏ th Trng cõy vo giỏ th l giai on cui cựng ca quỏ trỡnh nhõn ging, vic a cõy t mụi trng nhõn to sang mụi trng t nhiờn v la chn giỏ th thớch hp cho s sinh trng phỏt trin ca cõy l rt quan trng Mi mt giỏ th cú c tớnh khỏc Mi loi cõy trng cú yờu cu khỏc i vi iu kin ngoi cnh Nhỡn chung, cõy gc sau nuụi cy mụ cú yờu cu rt cht i vi iu kin mụi trng, m phi ln nhng khụng b ỳng, nhit mụi trng khụng quỏ cao, giỏ th sch v cú kh nng cung cp dinh dng cho giai on cõy m xỏc nh giỏ th phự hp, chỳng tụi tin hnh th nghim 45 ngy v kt qu thu c bng sau: Bng 3.13 Nghiờn cu nh hng ca giỏ th n t l sng ca cõy m (Sau 45 ngy) CT Giỏ th S cõy ngụi S cõy sng T l cõy sng (%) Chiu cao cõy (cm) Cỏt 60 12 20 2,5 t 60 30 50 3,12 t: tru hun (2 :1) 60 56 93,3 6,4 Cỏt: t: tru hun(1 :2 :1) 60 36,7 61,1 4,28 LSD 0,05 3,6 CV(%) 3,4 100 T l cõy sng (%) T l cõy sng (%) 90 80 70 60 50 40 30 20 10 Cụng thc thớ nghim Hỡnh 3.12 nh hng ca giỏ th n t l sng ca cõy m Qua bng 3.13 v Hỡnh 3.12 chỳng tụi nhn thy Cỏc giỏ th ó la chn a vo thớ nghim u khỏ thớch hp cho s phỏt trin ca cõy in vitro giai on luyn cõy T l cõy sng cỏc giỏ th sau 45 ngy, dao ng t 20% n 93,3% Trờn giỏ th cỏt, vi t l sng t 20%, cõy sinh trng yu, lỏ kộm phỏt trin, chiu cao cõy ch t 2,5cm Trờn giỏ th (t), t l cõy sng t 50%, cõy sinh trng bỡnh thng, lỏ nh xanh nht, chiu cao t 3,12cm Trờn giỏ th (t: tru hun = 2:1) t l cõy sng t 93,3%, cõy mp, khe, lỏ to xanh thm, dy bn, chiu cao cõy t 6,4cm Trờn giỏ th (Cỏt: t: tru hun theo t l 1: : 1), t l cõy sng t 61,1%, cõy sinh trng bỡnh thng, lỏ mng, chiu cao cõy t 4,28cm Nh vy, so sỏnh cỏc kt qu cho thy giỏ th phự hp luyn cõy m l giỏ th t : tru hun theo t l 2:1 KT LUN V KIN NGH KT LUN Kh trựng mu gc bng dung dch HgCl2 0,1% thi gian 15 phỳt l thớch hp nht, cho t l mu sng cao nht l 58,9% Mụi trng tỏi sinh MS + 1mg BAP/l + 5,7g aga/l + 30g Sucrose/l + 100mg inositol/l, pH = 5,6, l mụi trng thớch hp cho vic tỏi sinh chi gc, t l ny chi cao nht t 80,6% Mụi trng MS + BAP 0,2mg /l + IBA 0,02mg /l + 5,7g aga /l + 30g ng/l + 100mg inositol /l, pH= 5,6 l mụi trng thớch hp cho vic nhõn nhanh v cho h s nhõn chi cao nht t 5,05 ln Mụi trng 1/2MS + 0,1mg NAA/l + 30g Sucrose/l + 5,7g aga/l + 100mg inositol/l, pH = 5,6 l mụi trng thớch hp r gc Giỏ th t : tru hun theo t l (2:1) l cụng thc thớch hp nht cho cõy gc sinh trng v phỏt trin ngoi m KIN NGH Cn tip tc a ging gc nuụi cy mụ ngoi sn xut ng rung kho sỏt sinh trng, phỏt trin, nng sut v kim tra cht lng ging Xõy dng mụ hỡnh trng gc cụng ngh cao phc v nhu cu sn xut v thng phm TI LIU THAM KHO Ting Vit Lờ Trn Bỡnh (1997) Cụng ngh thc vt ci tin ging cõy trng, NXB nụng nghip, H Ni, tr 64, 100 Phm Hong H (1999) Cõy c Vit Nam (Quyn 1), Nh xut bn Tr, trang 568 Lờ Vn Ho (2009) Nhõn ging vụ tớnh cõy gc (momordica cochinchinensis (lour.) spreng) bng phng phỏp nuụi cy mụ t bo, Tp Khoa hc 2009:11,Tr 163-172, Trng i hc Cn Th Nguyn Vn Hng (2009) Nghiờn cu bin phỏp k thut nhõn ging hoa ng tin bng phng phỏp nuụi cy mụ ti Thỏi Nguyờn, Lun Vn Thc S khoa hc Nụng nghip, tr36-38 Nguyn Kim Ngõn (1991) Tỏc dng ca Gacavit vic bo v phúng x Túm tt bỏo cỏo hi ngh Húa sinh phc v sn xut v i sng ton quc ln th hai H Ni 17-18 thỏng 12, 1991, tr.85 Phan Tun Ngha (1988) Bc u nghiờn cu cỏc cht kỡm hóm trypxin ca ht mp ng (Momodica charantia L.) Lun ỏn phú tin s Sinh hc, Trng i hc Tng hp H Ni Phan Tun Ngha (1996) Nhõn nhanh cõy gc (momordica cochinchinensis spreng) bng phng phỏp nuụi cy mụ Kt qu nghiờn cu khoa hc 1986- 1996 NXB Nụng nghip, tr.141 Tt Li (2003), Nhng cõy thuc v v thuc Vit Nam, Nh xut bn y hc, Trang 886 Lờ ỡnh Lng, H Vn Mo, Mai Hng Bng (1988) Tỏc dng sa cha AND b tn thng tia t ngoi ca du gc Vit Nam Tp di truyn hc v ng dng, s 2: tr.8 10 V Vn V, Nguyn Mng Hựng, Lờ Hng ip, (2006) Cụng ngh sinh hc NXB Giỏo dc 11 Nguyn Tng Vy (2008) Nghiờn cu thnh phn hoỏ hc v gúp phn tiờu chun hoỏ cht lng du gc Vit Nam dựng l thuc Lun ỏn tin s dc hc, Trng i hc Dc H Ni 12 Th Ngc Oanh (2004) Giỏo trỡnh phng phỏp thớ nghim ng rung NXB Nụng nghip, H Ni 13 Nguyn Trung Phong (2005) Phõn lp,nhn dng cu trỳc v kho sỏt hot tớnh sinh hc ca saponin t r gc(momordica cochinchinensis (lour.) spreng) Tp Dc hc s 356, T14-16,28 Ting Anh 14 Aoki, H., N.T Kieu, N Uze, K Tomi Saka, N.V Chuyen (2002) Carotenoid Pigments in Gac Fruit (Momordica cochinchinensis Spreng.), Biosci Biotechnol Biochem 66, pp 2479-2482 15 D S Burke, C.R Smidt, L.T Vuong (2005) "Momordica cochinchinensis, rosa roxburghii, wolfberry, and sea buckthornhighly nutritional fruits supported by tradition and science", Current Topics in Nutraceutical Research Vol 3, No 4, pp 259-266, 16 George, E.F.(1993) Plant Propagation by Tissue Culture, 2nd Ed Exegetics Limited, pp 441 17 Huda A K M N, B Sikdar (2006) In vitro plant production through apical meristem culture of Bitter Gourd ( Momordica charantia L.) Plant Tissue Cult & Biotech, pp 31-36 18 Ishida, B.K., C Turner, M.H Chapman, T.A Mckeon (2004) Fatty acid and carotenoid composition in Gac (Momordica cochinchinensis Spreng.) fruit, J Agric Food Chem 52, pp 274-279 19 Le T Vuong, S.R Ducker, S.P Murphy (2002) Plasma -carotene and retinol concentration of children increase after a 30-d supplementation with the fruit Momordica cochinchinensis (gac) Am J Clin Nutr 75, pp 872-879 20 Murashige T, Skoog (1962) A revised medium for rapid growth and biossays with tobacco tissue culture Physiol.plant 15, pp 473 21 Overbeek J van et al (1944) Coconut Milk used for growth and development of very young Datura embryos, Science, 94, pp 350-351 PH LC HèNH NH MINH HO Hỡnh nh minh chi gc tỏi sinh sau 20 ngy nuụi cy trờn mụi trng: MS + 5,7g agar/l + 1mg BAP/l + 30g saccharose/l + 100mg inositol/l Hỡnh nh minh giai on nhõn nhanh chi gc sau 30 ngy nuụi cy trờn mụi trng MS khụng b sung cht kớch thớch sinh trng Hỡnh nh minh giai on nhõn nhanh chi gc sau 30 ngy nuụi cy trờn mụi trng MS cú b sung kt hp 0,2mg BAP/l + 0,02mg IBA/l Hỡnh nh minh giai on r chi gc sau 30 ngy nuụi cy trờn mụi trng 1/2MS cú b sung 0,1mg NAA/l Hỡnh nh minh giai on hun luyn cõy sau 45 ngy trờn giỏ th t : tru hun [...]... cho trẻ em [8] 2.2 Tình hình nghiên cứu về nhân giống cây gấc bằng phƣơng pháp nuôi cấy mô Hiện nay, trên thế giới và Việt Nam chưa có nhiều nghiên cứu về nuôi cây mô tế bào thực vật cây gấc Năm 1996, tác giả Phan Tuấn Nghĩa và cộng sự đã hoàn thiện quy trình nhân nhanh cây gấc từ nguyên liệu ban đầu là hạt gấc bằng phương pháp nuôi cấy mô cho phép sản xuất hàng loạt cây gấc trong khoảng thời gian 10... Thời gian nghiên cứu: Từ tháng 01 /2010 đến 01 /2011 2 Nội dung và phƣơng pháp nghiên cứu 2.1 Nội dung nghiên cứu - Nghiên cứu ảnh hưởng của hóa chất và thời gian khử trùng đến tỉ lệ sống của mẫu gấc - Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất điều tiết sinh trưởng đến khả năng tái sinh chồi gấc - Nghiên cứu ảnh hưởng của các chất kích thích sinh trưởng đến khả năng nhân nhanh chồi cây gấc - Nghiên cứu ảnh... tạo rễ chồi gấc in vitro; (3) Sử dụng môi trường chất nền là tro trấu có phủ màng nylon thích hợp cho bước đầu thuần dưỡng cây gấc ex vitro [3] 3 KHÁI QUÁT VỀ NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT 3.1 Khái niệm nuôi cấy mô tế bào thực vật Nuôi cấy mô tế bào thực vật là phạm trù khái niệm chung cho tất cả các loại nuôi cấy nguyên liệu thực vật hoàn toàn sạch các vi sinh vật trên môi trường dinh dưỡng nhân tạo,... gọi là Phòng kỷ nam [13] 5 Lá gấc: Viện Đông y dùng lá gấc với tầm gửi đắp ngoài ra làm thuốc tiêu sưng tấy [8] 2 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRÊN THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM VỀ CÂY GẤC 2.1 Tình hình nghiên cứu về mặt dƣợc lý của cây gấc Thực tế nghiên cứu khoa học cho thấy, công dụng của gấc với sức khỏe con người còn hơn thế rất nhiều Trong trái gấc, dầu gấc là phương thuốc kỳ diệu Dầu gấc sánh, trong, màu đỏ tím... phần môi trường, khi bắt đầu nghiên cứu một số loài mới hoặc giống mới cần phải chọn lựa cho đối tượng nghiên cứu một loại môi trường cơ bản phù hợp Từ những năm 1933, Tukey đã nghiên cứu tạo ra môi trường nuôi cấy thực vật, cho đến nay đã có rất nhiều loại môi trường khác nhau được sử dụng cho mục đích này, trong đó có một số môi trường cơ bản được sử dụng rất phổ biến như MS, LS, WP Ví dụ, môi trường... Văn Hoà và cs đã thử nghiệm vi nhân giống cây gấc bằng nuôi cấy mô tế bào và đưa ra được một số môi trường nhân nhanh cơ bản và giá thể thử nghiệm ra vườn ươm, kết quả như sau: (1) Môi trường thích hợp cho sự nhân chồi gấc in vitro là môi trường cơ bản MS có bổ sung 100ml/l nước dừa, 7,5g/l agar, 25g/l đường, 0,2mg/l BA và 0,2mg/l IBA cho hiệu quả cao nhất; (2) Sử dụng môi trường cơ bản MS có bổ sung... đến khả năng ra rễ - Nghiên cứu loại giá thể phù hợp cho sự thích ứng cây in vitro ngoài điều kiện tự nhiên 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu Các thí nghiệm được tiến hành theo sơ đồ sau: Giai đoạn tái sinh chồi Mẫu: Ngọn gấc Giai đoạn khử trùng ( Giai đoạn vào mẫu) Cây gấc nuôi cấy mô Giai đoạn vườn ươm Mẫu: Cây con in vitro Giai đoạn nhân nhanh cụm chồi Mẫu: Chồi invitro Giai đoạn tạo cây hoàn chỉnh Mẫu:... sự phát triển của mô sẹo hay cơ quan nuôi cấy Agar: Trong môi trường nuôi cấy đặc, người ta thường sử dụng agar để làm rắn hoá môi trường Nồng độ agar sử dụng thường là 0,6 - 1%, đây là loại tinh bột đặc chế từ rong biển để tránh hiện tượng mô chìm trong môi trường hoặc bị chết vì thiếu O2 nếu nuôi trong môi trường lỏng và tĩnh pH môi trường: Với mỗi loại cây trồng yêu cầu một loại môi trường khác nhau... cơ quan nuôi cấy a) Điều kiện nuôi cấy mô tế bào thực vật * Điều kiện vô trùng Nuôi cấy in vitro là nuôi cấy trong điều kiện vô trùng Nếu không đảm bảo tốt điều kiện vô trùng nuôi cấy thì môi trường sẽ bị nhiễm, mô nuôi cấy sẽ bị chết Điều kiện vô trùng có ý nghĩa quyết đến sự thành bại của nuôi cấy mô invitro Phương pháp vô trùng vật liệu thông dụng nhất hiện nay là dùng các chất hóa học, tia cực tím... mô của cơ thể thường bị ức chế bởi các tế bào xung quanh Khi tách riêng tế bào tạo điều kiện thuận lợi cho các gen được hoạt hoá Quá trình phân hoá được xảy ra theo một chương trình định sẵn [10] 3.4 Điều kiện và môi trƣờng nuôi cấy mô tế bào thực vật Môi trường nuôi cấy là yếu tố quyết định cho sự phân hoá tế bào và cơ quan nuôi cấy a) Điều kiện nuôi cấy mô tế bào thực vật * Điều kiện vô trùng Nuôi