Các phương pháp đo sinh khối của vi sinh vật

Các phương pháp đo sinh khối của vi sinh vật

BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP HỒ CHÍ MINH KHOA: CNSH & KTMT MÔN: VI SINH KĨ THUẬT MÔI TRƯỜNG ĐỀ TÀI: CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VI SINH VẬT GVHD: Phạm Duy Thanh NHÓM : Nhóm NỘI DUNG I MỞ ĐẦU II KHÁI NIỆM III.CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV IV ỨNG DỤNG SINH KHỐI VSV I MỞ ĐẦU  Trong loại mẫu vật nào, muốn biết số lượng VSV, cần phải đếm số lượng tb chúng  Để xác định số lượng VSV đất, nước, không khí dịch nuôi cấy… sử dụng nhiều phương pháp khác  Trong đó, có phương pháp dùng nhiều: – Định lượng buồng đếm – Định lượng phương pháp đếm gián tiếp  Cả phương pháp phải tiến hành: lấy mẫu pha loãng mẫu II KHÁI NIỆM Phương pháp định lượng Là phương pháp để xác định số lượng VSV mẫu Trả lời cho câu hỏi: “ Hàm lượng VSV mẫu bao nhiêu?” II KHÁI NIỆM Sinh khối VSV gì? Là tổng trọng lượng VSV sống sinh số lượng VSV sống đơn vị diện tích, thể tích vùng Khối lượng sinh khối sinh ước tính 1,1014- 2,1016 III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV Phương pháp hộp trải Định lượng trực tiếp buồng đếm Định lượng phương pháp đếm gián tiếp Phương pháp hộp đổ III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV A Chuẩn bị mẫu Lấy mẫu: • Mẫu có tính chất đại diện • Lượng mẫu lấy vừa phải, đủ để phân tích đặc tính lý, hóa, sinh học • Dụng cụ lấy mẫu, chứa mẫu phải vô trùng • Lấy mẫu xong phải phân tích không để 24h • Mẫu lấy phải có nhãn ghi ký hiệu ghi vào sổ đặc điểm mẫu, nơi thu mẫu III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV 2.Pha loãng mẫu:  Mẫu trạng thái lỏng: Pha loãng mẫu theo dãy thập phân  Mẫu trạng thái đặc: ( đất, lương thực, thực phẩm)  Chuẩn bị bình hình nón có dung tích 250 ml o Bình chứa 90 ml nước cất vô trùng o Bình vô trùng không chứa III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV  Chuỗi pha loãng mẫu III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV c) Ưu điểm, nhược điểm  Ưu điểm  Nhược điểm • Không phân biệt tb sống &tb chết • Xác định nhanh chóng mật độ VSV chứa mẫu • Dễ nhầm lẫn tb VSV với vật thể khác mẫu • Độ xác không cao • Không thích hợp với huyền phù VSV có mật độ thấp III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV Định lượng phương pháp đếm gián tiếp 2.1 Phương pháp hộp trải ( spread plate) a) Cơ sở lý thuyết Kỹ thuật pha loãng theo bậc 10 dịch chứa VSV thành mức pha loãng khác  Lưu ý: Kỹ thuật để nuôi cấy, phân lập hay phân tích số nấm men, nấm mốc III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV b) Cách tiến hành Bước 1: Dùng micropipette đầu tip vô trùng hút 0,1ml dịch VSV lên bề mặt môi trường thạch đĩa không gian vô trùng Bước 2: Nhúng đầu que trang cốc thủy tinh chứa cồn 70 đốt lửa đèn cồn để khử trùng, để đầu que trải nguội không gian vô trùng III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV Bước 3: Mở đĩa Petri, dùng que trang gạt VSV bề mặt thạch Trong gạt, xoay đĩa tới lui 3-4 lần, lần 1/2 chu vi cho dịch VSV trải khắp bề mặt môi trường Bước 4: Rút que trang khỏi đĩa, đậy đĩa, gói giấy, ủ nhiệt độ thời gian thích hợp III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV c) Ưu điểm, nhược điểm  Ưu điểm • Định lượng VSV nhạy nhiệt  Nhược điểm • Chỉ cấy thể tích mẫu nhỏ • Có thể nhận dạng khuẩn lạc đặc trưng • Chỉ cho đếm số lượng khuẩn lạc thấp • Dễ dàng làm chủng VSV mục tiêu III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV 2.2 Phương pháp hộp đổ ( pour plate) a) Cơ sở lý thuyết: III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV b) Cách tiến hành: Một số hình ảnh khuẩn lạc đĩa Petri Máy đếm khuẩn lạc III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV c) Ưu điểm, nhược điểm:  Ưu điểm o Cấy thể tích mẫu lớn (1ml) o Xác định VSV cần dinh dưỡng tiếp xúc từ nhiều phía o Cho phép đếm mật độ VSV cao, khoảng 150- 300 khuẩn lạc Khuẩn lạc xoáy Paenibacillus III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV  Nhược điểm IV ỨNG DỤNG SINH KHỐI VSV  Sinh khối giàu protein, vitamin nhóm B,… dùng làm thực phẩm cho người thức ăn cho gia súc (những tế bào VSV sấy khô chết)  Sinh khối nấm men tb sống để dùng CN bánh mì, sinh khối vi khuẩn lactic sống có hoạt tính enzyme tiêu hóa để sản xuất thuốc hỗ trợ tiêu hóa biolactovin,… IV ỨNG DỤNG SINH KHỐI VSV  Sinh khối cố định đạm làm phân bón vi sinh  Sinh khối VSV có hệ enzyme phân giải CHC(kể thuốc trừ sâu hydrocarbon) để sản xuất chế phẩm vi sinh xử lý nước thải ô nhiễm bảo vệ môi trường  TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty, Vi sinh vật học, NXB Giáo Dục, 2000 Đỗ Hồng Lan Chi, Lâm Minh Triết, Vi sinh vật môi trường, NXB ĐHQG Tp Hồ Chí Minh, 2004 Trần Linh Thước, Phương pháp phân tích vi sinh vật nước, thực phẩm mĩ phẩm, NXB Giáo Dục, 2000 Vũ Thị Minh Đức, Thực tập vi sinh vật học, NXB ĐHQG Hà Nội, 2001 [...]... thuần chủng VSV mục tiêu III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV 2.2 Phương pháp hộp đổ ( pour plate) a) Cơ sở lý thuyết: III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV b) Cách tiến hành: Một số hình ảnh của khuẩn lạc trên đĩa Petri Máy đếm khuẩn lạc III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV c) Ưu điểm, nhược điểm:  Ưu điểm o Cấy được thể tích mẫu lớn (1ml) o Xác định được các VSV cần dinh dưỡng tiếp xúc...III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV  Khử trùng cối chày sứ: một ít cồn + đốt lên, để nguội  Cân 1g mẫu cho vào cối sứ và nghiền nát  Dùng nước ở bình1 để chuyển mẫu sang bình 2  Lắc 5p, để lắng 30s, pha loãng như mẫu ở trạng thái lỏng  Ước đo n số lượng VSV trong mẫu, pha loãng phù hợp III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV B Phương pháp đo sinh khối của VSV 1 Định lượng... III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV  Nhược điểm IV ỨNG DỤNG SINH KHỐI VSV  Sinh khối giàu protein, vitamin nhóm B,… dùng làm thực phẩm cho người và thức ăn cho gia súc (những tế bào VSV đã sấy khô và chết)  Sinh khối nấm men là những tb sống để dùng trong CN bánh mì, sinh khối vi khuẩn lactic sống có hoạt tính enzyme tiêu hóa để sản xuất thuốc hỗ trợ tiêu hóa biolactovin,… IV ỨNG DỤNG SINH KHỐI... III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV Bước 3: Mở đĩa Petri, dùng que trang gạt đều VSV trên bề mặt thạch Trong khi gạt, xoay đĩa tới lui 3-4 lần, mỗi lần 1/2 chu vi cho dịch VSV được trải đều khắp trên bề mặt môi trường Bước 4: Rút que trang khỏi đĩa, đậy đĩa, gói giấy, ủ ở nhiệt độ và thời gian thích hợp III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV c) Ưu điểm, nhược điểm  Ưu điểm • Định lượng được các. .. ỨNG DỤNG SINH KHỐI VSV  Sinh khối cố định đạm làm phân bón vi sinh  Sinh khối VSV có hệ enzyme phân giải các CHC(kể cả thuốc trừ sâu và hydrocarbon) để sản xuất các chế phẩm vi sinh xử lý nước thải và ô nhiễm bảo vệ môi trường  TÀI LIỆU THAM KHẢO 1 Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty, Vi sinh vật học, NXB Giáo Dục, 2000 2 Đỗ Hồng Lan Chi, Lâm Minh Triết, Vi sinh vật môi trường, NXB ĐHQG... PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV c) Ưu điểm, nhược điểm  Ưu điểm  Nhược điểm • Không phân biệt được tb sống &tb chết • Xác định nhanh chóng mật độ VSV chứa trong mẫu • Dễ nhầm lẫn tb VSV với các vật thể khác trong mẫu • Độ chính xác không cao • Không thích hợp với huyền phù VSV có mật độ thấp III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV 2 Định lượng bằng phương pháp đếm gián tiếp 2.1 Phương pháp hộp trải (... trực tiếp trên kính hiển vi nhờ buồng đếm hồng cầu Buồng đếm Hemocytometer III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV b) Cách tiến hành Bước 1: Pha loãng mẫu Bước 2: Lắc đều ống nghiệm Bước 3: Nhỏ 1 giọt dd mẫu vào giữa phòng đếm và đậy lại bằng lá kính (không để tạo bọt khí) Bước 4: Di chuyển nhẹ nhàng phòng đếm để dd mẫu tràn đầy các khoang Bước 5: Đặt phòng đếm lên bàn kính hiển vi, để yên 3-5p, sau đó... đếm gián tiếp 2.1 Phương pháp hộp trải ( spread plate) a) Cơ sở lý thuyết Kỹ thuật pha loãng theo bậc 10 dịch chứa VSV thành các mức pha loãng khác nhau  Lưu ý: Kỹ thuật này để nuôi cấy, phân lập hay phân tích số nấm men, nấm mốc III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH KHỐI CỦA VSV b) Cách tiến hành Bước 1: Dùng micropipette và đầu tip vô trùng hút 0,1ml dịch VSV lên bề mặt môi trường thạch đĩa trong không gian... sinh vật học, NXB Giáo Dục, 2000 2 Đỗ Hồng Lan Chi, Lâm Minh Triết, Vi sinh vật môi trường, NXB ĐHQG Tp Hồ Chí Minh, 2004 3 Trần Linh Thước, Phương pháp phân tích vi sinh vật trong nước, thực phẩm và mĩ phẩm, NXB Giáo Dục, 2000 4 Vũ Thị Minh Đức, Thực tập vi sinh vật học, NXB ĐHQG Hà Nội, 2001 ... Cách đếm số lượng VSV  Mỗi ô nhỏ có 4 cạnh giới hạn, đếm số lượng tế bào nằm trọn trong ô và những tế bào nằm trên 2 cạnh liên tiếp cùng chiều  Cách tính toán  Gọi A là số lượng tế bào đếm được trong 80 ô nhỏ  Số lượng tế bào trong 1 mm3 =   Trong đó: 4000= 400*10 (1/400 mm2 : diện tích một ô nhỏ; 1/10 mm: chiều cao từ mặt buồng đếm tới lammelle)  APL: độ pha loãng   III CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐO SINH