PHƯƠNG PHÁP xác ĐỊNH VIBRIO và hàm LƯỢNG AMONI TRONG mẫu nước

TRƯỜNG ĐẠI HỌC HẢI PHÒNG VIỆN SINH NÔNG  BÁO CÁO RÈN NGHỀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH VIBRIO VÀ HÀM LƯỢNG AMONI TRONG MẪU NƯỚC Giảng viên hướng dẫn : TS Đỗ Mạnh Hào Sinh viên thực hiện: : Hoàng Thị Thanh Nga Lớp : Công nghệ Sinh học K13 Địa điểm thực tập : Trạm nghiên cứu biển Đồ Sơn, Viện Tài nguyên Môi trường Biển Hải Phòng, tháng năm 2015 Năm học 2013 - 2014 Phương pháp xác định Vibrio Amoni mẫu nước PHẦN 1: GIỚI THIỆU Vi khuẩn Vibrio tác nhân gây ngộ độc cho thủy sản đáng lo ngại Thủy sản cá bị nhiễm bệnh thường bỏ ăn, chết rải rác, bụng trương to, thức ăn không tiêu Cá hoạt động kém, bơi chậm chạp, màu sắc cá chuyển từ màu nâu sang xám đen Bệnh xuất nhiều cá giống giai đoạn nuôi cá thương phẩm mật độ cao, nước bị nhiễm bẩn Vì nuôi cá giai đoạn làm giống, cần phân tích mẫu nước để xác định vi khuẩn gây bệnh Vibrio anguillarum Amoni không gây độc trực tiếp cho người, động thực vật sản phẩm chuyển hoá từ amoni nitrit nitrat yếu tố gây độc Các hợp chất nitrit hình thành trình oxi hoá vi sinh vật trình xử lý, tàng trử chuyển tải nước đến người nhiều loài động thực vật nói chung làm giảm suất nuoi trồng thủy sản nói riêng Vì việc xử lý amoni nước đối tượng đáng quan tâm Phương pháp xác định Vibrio Amoni mẫu nước PHẦN 2: TỔNG QUAN 2.1 Tổng quan Vibrio 2.1.1 Đặc điểm vi khuẩn Vibrio Một số đặc điểm nhóm vi khuẩn Vibrio spp khả gây bệnh động vật thủy sản: - Giống : Vibrio - Họ : Vbrionales - Lớp: Gammaproteobacteria - Ngành : Proteobacteria Đặc điểm chung loài vi khuẩn thuộc giống Vibrio Gram âm, hình que thẳng uốn cong, kích thước 0,3-0,5×1,4-2,6µm, chúng không hình thành bào tử chuyển động nhờ tiên mao nhiều tiên mao mảnh Tất chúng yếm khí không bắt buộc ( tùy nghi) hầu hết oxy hóa lên men môi trường O/F Glucose TCBS agar môi trường chọn lọc Vibrio Hầu hết loài phát triển môi trường nước biển bản, Na+ kích thích cho phát triển tất loài Vibrio nhiều loài nhu cầu tuyệt đối, chúng không phát triển môi trường không muối NaCl, không sinh H2S Cơ chúng sống môi trường nước, đặc biệt nước biển cửa sông, liên quan đến động vật biển số loài tác nhân gây bệnh cho người động vật biển Ngoài nhóm Vibrio có đặc điểm di động, cho phản ứng dương tính với catalase oxydase, vi khuẩn gram âm, hình que, có khả lên men hai trường hợp hiếu khí kỵ khí, tạo nitrit từ nitrat, nhạy với hợp chất 2,4-diamino-6,7-diisopropyl pteridine(O/129,150µm) hợp chất giúp phân biệt vi khuẩn Vibrio Aeromonas Các vi khuẩn phát sáng phát Phương pháp xác định Vibrio Amoni mẫu nước triển tốt môi trường có 3%NaCl, sinh indol tạo axit từ mannitol trehalose 2.2.2 Một số loài vi khuẩn Vibrio gây bệnh cho động vật thủy sản người Có loài vi khuẩn Vibrio gây bệnh cho người: V.cholerae, V.vulnificus, V.parahaemolyticusvà V.alginolyticus phân lập dựa đặc điểm sau: - V.cholerae có phản ứng oxidase (+), tăng trưởng môi trường canh Trypton 42oC, arginine dehydrolase(-), lysine dehydrolase(+), lên men sucrose, khử nitrat thành nitrite, tăng trưởng môi trường chứa 6,8,10% - V.parahaemolyticus có phản ứng oxidase(+), phát triển trypton 24oC, phản ứng ADH(-), LDC(+), có khả phản ứng nitrate thành nitrite không lên men sucrose, sử dụng số nguồn carbohydrate khác để lên men không sinh hơi, không tăng trưởng môi trường muối, tăng trưởng tốt môi trường có đến 8% muối bị ức chế môi trường chứa 10% muối - V.vulnificus khác với hai loài không lên men sucrose, không tăng trưởng môi trường muối, bị ức chế môi trường có 810% muối - V.alginolyticus có khả lên men đường sucrose, không tăng trưởng môi trường muối phát triển môi trường chứa đến 10% muối Vibrio gây bệnh cho động vật thủy sản gồm: - Vibrio spp thường gây bệnh động vật thuỷ sản nước mặn nước ngọt: cá, giáp xác, nhuyễn thể Những vi khuẩn thường tác nhân hội, động vật thuỷ sản sốc môi trường biến đổi xấu bị nhiễm bệnh khác Phương pháp xác định Vibrio Amoni mẫu nước virus, nấm, ký sinh trùng Động vật thuỷ sản yếu sức đề kháng, loài vi khuẩn Vibrio spp hội gây bệnh nặng làm động vật thuỷ sản chết rải rác tới hàng loạt - Vibrio alginolyticus: Bệnh đỏ dọc thân ấu trùng tôm, bệnh đỏ thân ăn mòn vỏ ki tin tôm, bệnh xuất huyết cá biển - Vibrio anguillarum: bệnh đỏ thân ăn mòn vỏ ki tin tôm, bệnh xuất huyết cá - Vibrio harveyi: Bệnh phát sáng, đỏ thân ăn mòn vỏ kitin giáp xác Vibrio parahaemolyticus: Bệnh phát sáng, đỏ thân ăn mòn vỏ kitin - giáp xác Vibrio vulnificus: Bệnh đỏ thân ăn mòn vỏ kitin giáp xác, bệnh xuất - huyết cá biển Vibrio ordalii: Bệnh đỏ thân ăn mòn vỏ kitin giáp xác, bệnh xuất huyết cá biển Vibrio salmonicida: Bệnh Hitra cá 2.2 Tổng quan amoniac Amoniac tồn nước dạng: NH NH4+ hay gọi tổng amoniac (TAN) Trong đó, amoni dạng khí (NH3) có mức gây độc cao so với dạng ion (NH4+) xâm nhập trực tiếp vào thể qua đường mang công thẳng vào tế bào động vật thủy sản Không giống người động vật, cá giáp xác khả tiết chuyển hóa ammonia thành dạng độc Do , động vật thủy sản thường bị ngộ độc amoniac nồng độ cao Phương pháp xác định Vibrio Amoni mẫu nước PHẦN 3: PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH VIBRIO VÀ HÀM LƯỢNG AMONI TRONG MẪU NƯỚC a 3.1 Phương pháp xác định vi khuẩn Vibrio nước Xác định Vibrio phương pháp sinh hóa truyền thống Tăng sinh chọn lọc - Chuẩn bị mẫu nước sau cấy mẫu nước vào môi trường tăng sinh môi trường canh thang tăng sinh chọn lọc( dùng nước pepton kiềm chứa 1% muối NaCl cho trường hợp V.cholerae, V.vulnificus, V.alginolyticus, canh Colistine cho trường hợp V.parahaemolyticus) b Sau ủ 37oC 6-8 Phân lập - Dùng que cấy vòng ria váng bề mặt môi trường tăng sinh chọn lọc lên bề mặt đĩa thạch TCBS để phân lập khuẩn lạc đơn, ủ 37oC 18-22 - Hình dạng khuẩn lạc đặc trưng loài Vibrio môi trường sau: Khuẩn lạc V.cholerae V.alginolyticus lớn đường kính khoảng 2-3mm, láng, có màu vàng, phẳng, tâm đục chung quanh khuẩn lạc có quầng trắng đục Khuẩn lạc V.parahaemolyticus V.vulnificus lớn, đường kính khoảng 34mm, có màu từ xanh đến xanh dương a - 3.2 Cách tiến hànhxác định vi khuẩn Vibrio nước Chuẩn bị mẫu phân tích Lấy mẫu Địa điểm lấy mẫu: Đồ Sơn - Dụng cụ mang lấy mẫu gồm có lọ đựng mẫu nước qua khử trùng - Trước lấy mẫu ta chọn bể cá có hoạt động cung cấp nước từ vào, bể nuôi cá có tỉ lệ cá phát triển không đông kích thước số lượng b Chuẩn bị mẫu nước Phương pháp xác định Vibrio Amoni mẫu nước - Lắc chai mẫu nước ta hệ số pha loãng 100 Dùng pipet chuyển 1ml mẫu nước vào ống nghiệm thứ nhất, dùng máy trộn lắc - ta hệ số pha loãng 10-1 Tiếp tục chuyển 1ml mẫu từ ống nghiệm có hệ số pha loãng 10 -1, dùng máy trộn - lắc ta hệ số pha loãng 10-2 Tiếp tục chuyển 1ml mẫu từ ống nghiệm có hệ số pha loãng 10 -2, dùng máy trộn a - lắc ta hệ số pha loãng 10-3, pha 10-4 Mẫu nước lại đem bảo quản tủ lạnh để giữ mẫu Nuôi cấy vi khuẩn Cấy mẫu Dùng pipet hút 0,1ml nồng độ nhỏ vào đĩa petri sau dùng que cấy khử trùng rồi, trang mẫu lên mặt thạch Trong trình trang lưu ý phải mặt thạch khô, tránh tình trạng mặt thạch ướt vi khuẩn phát triển tập trung chỗ không đếm số lượng khuẩn lạc Sau cấy xong ta úp ngược đĩa xuống ghi mặt đĩa ngày tháng cấy, nồng độ, tên mẫu, lượng thể tích b lấy để cấy Nuôi vi khuẩn o - Vi khuẩn nuôi tủ nuôi với điều kiện nhiệt độ 37 C khoảng thời gian 24h Nếu thấy tượng khuẩn lạc mọc không đồng đều, ta nuôi tiếp vi khuẩn thời gian 48h Phương pháp xác định Vibrio Amoni mẫu nước c - Các đĩa petri nuôi tủ nuôi nhiệt độ 37oC Giữ mẫu Vibrio Nếu thời gian ngắn không tiến hành phản ứng sinh lý,sinh hóa hay nghiên cứu ta tiến hành giữ mẫu vi khuẩn vừa phân lập - - môi trường môi trường Canh thang Môi trường Canh thang: Peptone 5g Lactose 5g K2HPO4 2,75g KH2PO4 2,75g Sodium laurly sulfase 0,1g DW: 1l Khi chuẩn bị xong môi trường ta tiến hành tạo ống thạch nghiêng cách cho 5ml môi trường vào ống nghiệm khử trùng sau để gỗ cao khoảng 5cm đặt ống nghiệm lên để tạo bề mặt - nghiêng Sau ống thạch nghiêng môi trường cứng lại tiến hành dùng que cấy vòng cấy đường ziczac bề mặt ống thạch Sau ủ mẫu tủ nuôi 24h Khi nhìn thấy vi khuẩn phát triển môi trường, ta cho mẫu vào tủ lạnh ngăn 4oC để bảo quản mẫu 3.3 Phương pháp xác định amoniac mẫu nước Dựa phản ứng Berthelot, phản ứng tạo màu xanh Indophenol amoniac phản ứng với phenol môi trường kiềm với có mặt hypoclorit Natri nitroprusit cho vào nhằm xúc tác cho phản ứng Phương pháp phát xác đến hàm lượng 0,1 µgN/l Sơ đồ phản ứng biểu diễn sau: Đầu tiên, p-amino phenol tạo thành theo phản ứng (1): Phương pháp xác định Vibrio Amoni mẫu nước Tiếp theo, p- amino phenol phản ứng với natri hypoclorit tạo thành quinocloro imin: Cuối cùng, quinocloro imin phản ứng với phenol thứ tạo thành Indophenol có màu xanh Đo mật độ quang hợp chất sinh 630nm xác định hàm lượng amoni có mẫu nước Phương pháp tiến hành thành công trực tiếp mẫu nước có tổng độ cứng nhỏ 400mg/l nồng độ nitơ nitri nhỏ 5mg/l , ứng dụng thành công phân tích nước biển ven bờ mà không qua chưng cất ( hệ số tương quan 0,989) Thuốc thử dùng cho phản ứng thay đổi theo thời gian Do đó, không nên xây dựng đường chuẩn sử dụng dung dịch chuẩn biết nồng độ cho Phương pháp xác định Vibrio Amoni mẫu nước trước phương pháp Với mẫu phân tích, cần song song tiến hành phân tích chuẩn có nồng độ biết trước Hàm lượng amoni tổng cộng mẫu xác định theo biểu thức: C1/C2 = D1/D2 Trong đó; C1,C2 : nồng độ tương ứng mẫu chuẩn mẫu phân tích D1,D2 : mật độ quang đo mẫu chuẩn mẫu phân tích * Ưu điểm nhược điểm: + Có độ nhạy cao, phân tích đối tượng hàm lượng amoni thấp + Phương pháp tiến hành trực tiêp mẫu nước mà không cần qua công đoạn chưng cất đảm bảo độ xác cao Có thể phân tích đồng loạt mẫu với số lượng lớn thời gian ngắn + Đây phương pháp thích hợp sử dụng phổ biến để phân tích amoni nước biển Tuy nhiên, nhược điểm lưu ý thuốc thử dễ thay đổi theo thời gian, sử dụng đường chuẩn để xác định theo phương pháp 3.4 Cách tiên hành xác định amoniac mẫu nước a) Chuẩn bị hóa chất + Nước cất khử amoni: Loại bỏ amoni khỏi nước cát cách cho chúng chạy qua cột nhỏ (30 cm chiều dài 1-2 cm đường kính trong) có chứa nhựa trao đổi cation dạng H + trước sử dụng bảo quản chai thủy tinh có nút kín + Dung dịch phenol: Hòa tan 20g phenol dạng tinh thể loại tinh khiết phân tích (PA) 200 ml cồn 95% (v/v) Bảo quản chai thủy tinh màu nâu có nút tốt 10 Phương pháp xác định Vibrio Amoni mẫu nước + Dung dịch natri nitroprusit: Hòa tan 1,0 g natri nitroprusit Na₂Fe(CN)₅NO.2H₂O 200 ml nước khử ion Bảo quản chai màu nâu, dung dịch bền tháng + Dung dịch đệm kiềm xitrat: Hòa tan 100 g natri xitrat g NaOH (loại tinh khiết phân tích) 500 ml nước khử ion Dung dịch bền không giới hạn + Dung dịch natri hypoclorit: Sử dụng loại hypoclorit thương mại có nồng độ khoảng 1,5N Dung dịch bị phân hủy chậm theo thời gian nồng độ chúng kiểm tra tường xuyên theo định kỳ Hòa tan 12,5 g natri thiosunphat loại chất lượng tốt 500 ml nước Thêm vài tinh thể KI vào khoảng 50 ml nước bình tam giác 125 ml thêm ml dung dịch NaOCl cần kiểm tra Thêm 5-10 giọt HCl đặc chuẩn độ hàm lượng iot giảm phóng dung dịch Na 2S2O4 chuẩn bị Loại bỏ dung dịch NaOCl lượng thiosunphat sử dụng nhỏ 12 ml + Dung dịch oxi hóa: Trộn lẫn dung dịch đệm xitrat dung dịch natri hypoclorit chuẩn bị theo tỷ lệ thể tích 4:1 (4 thể tích dung dịch đẹm với thể tích NaOCl) Nút kín dung dịch không sử dụng Dung dịch bảo quản tủ lạnh Dung dịch sử dụng ngày + Dung dịch chuẩn amoni gốc: Amoni clorua NH₄Cl sấy khô 100C đến trọng lượn không đổi Cân 0,3820 g NH₄Cl khô hòa tan vào nước cất bình định mức lít định mức tới vạch Bảo quản dung dịch tủ lạnh ml dung dịch chứa 0.1 µg N + Dung dịch amoni chuẩn (1,0 µg N/l): Lấy xác 10,0 ml dung dịch gốc vào bình đinh mức lít, định mức đến vạch nước biển nhân tạo Dung dịch chuẩn bị ngày 11 Phương pháp xác định Vibrio Amoni mẫu nước + Nước biển nhân tạo: Hòa tan 310 g Natri Clorua, 100 g Magie sunfat 0,5 g Natri bicacbonat 10 lít nước cất khử ion b) Cách làm Dùng ống đong loại 5ml lấy xác 5ml dung dịch mẫu vào lọ penicilin 10ml Thêm 200 µl dung dịch phenol, lắc kĩ dung dịch tiếp tục thêm 200µl dung dịch natri nitroprusit tiếp tục lắc Cuối thêm 500µl dung dịch oxi hóa lắc Bịt miệng bình tam giác giấy nhôm để bóng tối nhiệt độ phòng Sau 1-2 giờ, tiến hành đo mật độ quang học bước sóng 630 nm với mẫu đối chứng nước biển nhân tạo Song song với trình phân tích mẫu, tiến hành tương tự với mẫu trắng chứa 5ml nước biển nhân tạo mẫu dung dịch chuẩn amoni biết trước nồng độ 12 Phương pháp xác định Vibrio Amoni mẫu nước 13 Phương pháp xác định Vibrio Amoni mẫu nước PHẦN 4: KẾT QUẢ THỰC HÀNH 4.1 số lượng khuẩn lạc Vibrio Bảng kết số lượng khuẩn lạc: đơn vị cfu/ml Vi khuẩn Vibrio vàng Vibrio xanh màu Đĩa Số1 Số2 0.1ml 12 215 1ml 120000 2150000 1 81,6×104 100 106 màu Số3 Số4 Trung bình Số Số Số Số Trung bình 13 70000 40000 60000 130000 50000 Hình ảnh khuẩn lạc mọc môi trường TCBS-agar 4.2 Đối với Amoni Hàm lượng amoni tổng cộng mẫu nước xác định sau: 14 Phương pháp xác định Vibrio Amoni mẫu nước Trong đó:C1, C2 nồng độ tương ứng mẫu chuẩn mẫu phân tích D1, D2 mật độ quang đo mẫu chuẩn mẫu phân tích D0 mật độ quang đo mẫu trắng Phấn tích xác định hàm lượng vòng ngày liên tiếp ta thu bảng sau : Falcon 15 ml Time (h) Đồ Sơn Tiên Lãng Phú Long 11.050 11.050 11.050 24 6.193 6.193 5.832 48 3.961 2.801 0.000 72 4.551 0.000 0.000 Biểu đồ minh họa Phân tích số liệu: + Trong 24h đầu, hạm lượng amoni mẫu thu Đồ Sơn Tiên Lãng cao (6,193µgN/l) thấp mẫu Phù Long (5,832µgN/l) + Sau 48h, hàm lượng amoni mẫu Đồ Sơn cao ( 3,961µgN/l) , Tiên Lãng (2,801µgN/l) , mẫu Phù Long lượng amoni bị khử hoàn toàn + Sau 72h, hàm lượng amoni mẫu Đồ Sơn (4,551µgN/l), mẫu Tiên Lãng hoàn toàn bị khử hết amoni Qua số liệu ta thấy nhóm vi khuẩn nitrate địa khu vực Phú Long có tốc độ nitrate hóa khử nitrate hóa nhanh mạnh so với hai vùng lại Tiếp đến nhóm khuẩn khu vực Tiên Lãng cuối Đồ Sơn 15 Phương pháp xác định Vibrio Amoni mẫu nước 16 Phương pháp xác định Vibrio Amoni mẫu nước PHẦN 5: TÀI LIỆU THAM KHẢO Trần Linh Phước (2009), phương pháp phân tích vi sinh vật nước, thực phẩm mỹ phẩm, Nxb Giáo Dục, Hà Nội Lê Đình Hùng, Nguyễn Đức Hùng, Huỳnh Lê Tâm (2004), Sổ tay kiểm nghiệm vi sinh thực phẩm thủy sản, Nxb Nông Nghiệp Bộ y tế (2008), vi sinh vật y học, Nxb y học, Hà Nội Thực hành vi sinh vật – Phạm Thị Minh Đức Thực tập vi sinh vật chuyên ngành- Nguyễn Như Thanh Tài liệu hướng dẫn học tập (tại Trạm Biển Đồ Sơn) Hình ảnh sử dụng trình thực hành http://www.nihe.org.vn/new-vn/dao-tao-ngan-han tap-huan412312272/511/Dac-tinh-mot-so-moi-truong-phan-lap-va-chan-doan-vi- khuan-gay-benh.vhtm http://aquanetviet.org/post/274772/m-t-s-c-i-m-sinh-h-c-c-a-nh-m-vi-khu- n-vibrio-spp-v-kh-n-ng-g-y 10 http://aquanetviet.org/post/2295580/ph-t-hi-n-vi-khu-n-vibrio-harveyi-vstreptococcus-agalactiae-b-n 11 http://d.violet.vn/download.php?id=3182025&path=%2Fuploads %2Fresources %2F573%2F3182025%2FBENH_CA_4_BENH_DO_VK_va_NAM.ppt& file=benh+ca+ca+loc&user=7971522 17 Phương pháp xác định Vibrio Amoni mẫu nước MỤC LỤC [ 18 [...]... trên môi trường TCBS-agar 4.2 Đối với Amoni Hàm lượng amoni tổng cộng trong mẫu nước được xác định như sau: 14 Phương pháp xác định Vibrio và Amoni trong mẫu nước Trong đó:C1, C2 là nồng độ tương ứng của mẫu chuẩn và mẫu phân tích D1, D2 là mật độ quang đo được của mẫu chuẩn và mẫu phân tích D0 là mật độ quang đo được tại mẫu trắng Phấn tích và xác định hàm lượng trong vòng 3 ngày liên tiếp ta thu được... với quá trình phân tích mẫu, tiến hành tương tự với một mẫu trắng chứa 5ml nước biển nhân tạo và một mẫu dung dịch chuẩn amoni đã biết trước nồng độ 12 Phương pháp xác định Vibrio và Amoni trong mẫu nước 13 Phương pháp xác định Vibrio và Amoni trong mẫu nước PHẦN 4: KẾT QUẢ THỰC HÀNH 4.1 số lượng khuẩn lạc Vibrio Bảng kết quả số lượng khuẩn lạc: đơn vị cfu/ml Vi khuẩn Vibrio vàng Vibrio xanh màu Đĩa Số1... cũng đã hoàn toàn bị khử hết amoni Qua số liệu trên ta thấy rằng các nhóm vi khuẩn nitrate bản địa tại khu vực Phú Long có tốc độ nitrate hóa và khử nitrate hóa nhanh và mạnh hơn so với hai vùng còn lại Tiếp đến là các nhóm khuẩn ở khu vực Tiên Lãng và cuối cùng là Đồ Sơn 15 Phương pháp xác định Vibrio và Amoni trong mẫu nước 16 Phương pháp xác định Vibrio và Amoni trong mẫu nước PHẦN 5: TÀI LIỆU THAM... dung dịch trong tủ lạnh 1 ml dung dịch này chứa 0.1 µg N + Dung dịch amoni chuẩn (1,0 µg N/l): Lấy chính xác 10,0 ml dung dịch gốc vào bình đinh mức 1 lít, định mức đến vạch bằng nước biển nhân tạo Dung dịch này chuẩn bị trong ngày 11 Phương pháp xác định Vibrio và Amoni trong mẫu nước + Nước biển nhân tạo: Hòa tan 310 g Natri Clorua, 100 g Magie sunfat và 0,5 g Natri bicacbonat trong 10 lít nước cất... số liệu: + Trong 24h đầu, thì hạm lượng amoni ở 2 mẫu thu tại Đồ Sơn và Tiên Lãng cao như nhau (6,193µgN/l) và thấp nhất là mẫu tại Phù Long (5,832µgN/l) + Sau 48h, thì hàm lượng tại amoni ở mẫu tại Đồ Sơn cao nhất ( 3,961µgN/l) , tại Tiên Lãng (2,801µgN/l) , đối với mẫu tại Phù Long thì lượng amoni đã bị khử hoàn toàn + Sau 72h, hàm lượng amoni đối với mẫu tại Đồ Sơn vẫn còn (4,551µgN/l), mẫu tại Tiên.. .Phương pháp xác định Vibrio và Amoni trong mẫu nước + Dung dịch natri nitroprusit: Hòa tan 1,0 g natri nitroprusit Na₂Fe(CN)₅NO.2H₂O trong 200 ml nước khử ion Bảo quản trong chai màu nâu, dung dịch bền ít nhất 1 tháng + Dung dịch đệm kiềm xitrat: Hòa tan 100 g natri xitrat và 5 g NaOH (loại tinh khiết phân tích) trong 500 ml nước khử ion Dung dịch bền không giới... theo thời gian và nồng độ của chúng được kiểm tra tường xuyên theo định kỳ Hòa tan 12,5 g natri thiosunphat loại chất lượng tốt trong 500 ml nước Thêm vài tinh thể KI vào khoảng 50 ml nước trong bình tam giác 125 ml và thêm 1 ml dung dịch NaOCl cần kiểm tra Thêm 5-10 giọt HCl đặc và chuẩn độ hàm lượng iot giảm phóng ra bằng dung dịch Na 2S2O4 đã chuẩn bị trên Loại bỏ dung dịch NaOCl nếu lượng thiosunphat... đệm xitrat và dung dịch natri hypoclorit đã chuẩn bị theo tỷ lệ thể tích 4:1 (4 thể tích dung dịch đẹm với 1 thể tích NaOCl) Nút kín dung dịch khi không sử dụng Dung dịch bảo quản trong tủ lạnh Dung dịch sử dụng trong ngày + Dung dịch chuẩn amoni gốc: Amoni clorua NH₄Cl được sấy khô ở 100C đến trọng lượn không đổi Cân 0,3820 g NH₄Cl khô hòa tan vào nước cất trong bình định mức 1 lít và định mức tới... http://aquanetviet.org/post/2295580/ph-t-hi-n-vi-khu-n -vibrio- harveyi-vstreptococcus-agalactiae-b-n 11 http://d.violet.vn/download.php?id=3182025&path=%2Fuploads %2Fresources %2F573%2F3182025%2FBENH_CA_4_BENH_DO_VK_va_NAM.ppt& file=benh+ca+ca+loc&user=7971522 17 Phương pháp xác định Vibrio và Amoni trong mẫu nước MỤC LỤC [ 18 ... chính xác 5ml dung dịch mẫu vào một chiếc lọ penicilin 10ml Thêm 200 µl dung dịch phenol, lắc kĩ dung dịch rồi tiếp tục thêm 200µl dung dịch natri nitroprusit và tiếp tục lắc đều Cuối cùng thêm 500µl dung dịch oxi hóa và lắc đều Bịt miệng các bình tam giác bằng giấy nhôm và để trong bóng tối ở nhiệt độ phòng Sau 1-2 giờ, tiến hành đo mật độ quang học ở bước sóng 630 nm với mẫu đối chứng là nước biển