BÀI báo cáo CÔNG NGHỆ ENZYME và PROTEIN

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ TP.HCM KHOA MÔI TRƯỜNG VÀ CÔNG NGHỆ SINH HỌC  BÀI BÁO CÁO CÔNG NGHỆ ENZYME VÀ PROTEIN GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN SVTH: THỜI THỊ BÍCH NGA TP.HCM, tháng 04 năm 2011 GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme protein MỤC LỤC BÀI1: XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG PROTEIN THEO PHƯƠNG PHÁP BRADFORD Bài 2: CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG HOẠT TÍNH CỦA ENZYME Bài 3: SẮC KÝ LỌC GEL SEPHADAX_G50 23 Bài 4: ĐIỆN DI 31 BÀI 5: CỐ ĐỊNH ENZYME 38 Trang GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme protein BÀI1: XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG PROTEIN THEO PHƯƠNG PHÁP BRADFORD Thu nhận chế phẩm enzyme cellulose thô a Thực hành - Cân g CPE cho vào cốc tách nước với tỉ lệ 1:5, tức g + 25 ml nước cất - Khuấy thời gian 30 phút - Lọc lấy dịch chiết thể tích 21 ml - Tủa cồn lạnh với tỷ lệ 1:3, tức 21 ml dịch chiết + 63 ml cồn lạnh - Cho hỗn hợp dung dịch vào bình erlen giữ lạnh 30 phút - Tách lấy phần tủa phần bình với thể tích 25 ml cho vào ống ly tâm 50 ml - Đem cân phân tích 33.4 g - Ly tâm 3000 vòng 10 phút - Tách lấy protein tủa, giữ lạnh để xác định hàm lượng protein hoạt tính enzyme trước sắc ký b Kết Hình 1: Dịch chiết bình erlen Trang GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme protein Hình 2: Dịch tủa protein ống ly tâm 50 ml Dựng đường protein chuẩn a Thực hành  Hóa chất - Dung dịch mẫu protein, cụ thể mẫu enzyme cellulose cần xác định - Dung dịch albumin 0.1mg/ml: Cân xác 10mg albumine pha 100ml nước cất Lắc cho tan Giữ 200C Khi dùng pha loãng 100 lần, dung dich albumine có nồng độ 0,01mg/ml - Dung dịch thuốc thử Bradford :  Coomassie Brilliant blue : 0,001g  Ethanl tuyệt đối 4,7g Trang GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme protein  Acid photphoric 85%: 8,5g -  Phẩm màu Coomassie Brilliant Blue làm tan ethanol chai đựng có nắp, bổ sung acid photphoric 85% chỉnh tới 100ml nước cất Thiết bị : máy quang phổ b Lập đồ thị chuẩn Để dung dich albumine chuẩn có nồng độ từ 10-50 µg/ml ta thực sau: - Dựng đường chuẩn protein( Albumine): Số ống Nồng độ albumin (µg) V(ml) albumin H2O (ml) Thuốc thử Coomassie Đối chứng 0 2 10 20 30 40 50 c Kết  Quan sát mắt thường, theo thứ tự từ phải sang trái ta thấy: ống đối chứng có màu xanh nhạt nhất, ống thí nghiệm từ ống số đến ống số có màu xanh đậm dần hình Hình 3: Kết so màu  Kết đo độ hấp thụ (OD) bước sóng 595 nm: Trang GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme protein Số ống OD Đối chứng  0.088 0.131 0.161 0.188 0.209 Dựng đường protein chuẩn Dựa vào kết đo độ hấp thụ (OD) bước sóng 595 nm, ta dựng đường protein chuẩn sau: d Nhận xét kết quả:  Dựa vào kết so màu ta thấy, nồng độ albumin cao màu xanh đậm  Dựa vào kết đo độ hấp thụ (OD) ta thấy, nồng độ albumin cao số OD cao Dựng đường chuẩn đường glucose a Thực hành  Hóa chất - Cồn 960C - Sodium acetate Trang GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme protein  - Acid acetic 1M - Cơ chất - Dung dich chất CMC pH5 - Dung dịch acid 2-hydroxy-3,5-dinitrobenzoic (DNS) - Dung dịch lactose - Dung dịch DNS-lactose - Dung dịch enzyme Dụng cụ thiết bị - Máy ly tâm - Bộ ổn nhiệt, máy đo quang phổ, máy Vortex, pH kế, cân phân tích - Bếp điện - Chậu nước lạnh - Que khuấy thủy tinh b Lập đồ thị chuẩn  Hòa tan 100 ml glucose monohydrate với 80 ml nước cất chuyển vào bình định mức 100 ml, thêm nước cất đến vạch lắc  Thực loạt ống nghiệm Ống số Nộng độ glucose (mg/ml) ml dd glucose (1mg/ml) ml nước cất ml dd CMC pH5 ml dd DNS-lactose  ĐC 0 1 0.1 0.1 0.9 2 0.2 0.2 0.8 0.3 0.3 0.7 0.4 0.4 0.6 0.5 0.5 0.5 Lắc ống nghiệm này, đem đun sôi cách thủy 15 phút Làm lạnh đến nhiệt độ phòng chậu nước lạnh Đặt độ hấp thụ ống đối chứng bước Trang GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme protein sóng 540 nm Đo độ hấp thụ ống lại bước sóng 540 nm ghi lại kết c Kết quả:  Quan sát mắt thường, theo thứ tự từ trái sang phải ta thấy: ống đối chứng có màu vàng, ống thí nghiệm có màu đỏ đậm dần từ ống thí nghiệm số đến ống thí nghiệm số hình Hình 4: Kết so màu  Ống số OD Kết đo độ hấp thụ (OD) bước sóng 540 nm ĐC 0.149 0.253 0.392  Dựng đường chuẩn đường glucose 0.504 0.675 Dựa vào kết đo độ hấp thụ (OD) đo bước sóng 540 nm, ta dựng đường chuẩn đường glucose sau: Trang GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme protein d Nhận xét kết quả:  Dựa vào kết so màu ta thấy, nồng độ đường glucose cao, đồng thời thể tích đường glucose cao thể tích nước cất giảm màu đỏ đậm  Dựa vào kết đo độ hấp thụ (OD) ta thấy, nồng độ đường glucose cao, đồng thời thể tích đường glucose cao thể tích nước cất giảm số OD cao Trang GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme protein Bài 2: CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG HOẠT TÍNH CỦA ENZYME Ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt tính enzyme (300C – 700C) a Nguyên tắc - Dựa vào thủy phân chất CMC enzyme, nhiệt độ khác 300C, 400C, 500C, 600C, 700C Cho kết so màu số OD, khác bước sóng 540 nm b Thực hành -    Chuẩn bị ống nghiệm: ống đối chứng, ống không phản ứng với enzyme, ống có phản ứng với enzyme Ống đối chứng : - Hút ml H2O cho vào ống nghiệm - Thêm 2ml dung dich DNS-Lastose lắc - Thêm ml dung dịch CMC pH5 vào ống nghiệm chứa enzyme lắc - Đem đun sôi cách thủy 15 phút Làm lạnh đến nhiệt độ phòng chậu nước lạnh Đo độ hấp thụ bước sóng 540 nm Ống nghiệm phản ứng enzyme - Hút ml dung dịch enzyme cho vào ống nghiệm đun sôi 10 phút để bất hoạt enzyme - Thêm ml dung dịch DNS-lactose lắc - Thêm ml dung dịch CMC pH5 vào ống nghiệm chứa enzyme lắc - Đem đun sôi cách thủy 15 phút Làm lạnh đến nhiệt độ phòng chậu nước lạnh Đo độ hấp thụ bước sóng 540 nm ống nghiệm có phản ứng enzyme, đánh số từ đến - Hút ml dung dịch enzyme cho vào ống nghiệm ủ nhiệt độ phòng (300C) 10 phút Đồng thời, ta để chai chứa dung dịch CMC pH5 thích hợp nhiệt độ phòng Trang GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme protein  Kết chung sau xác định hàm lượng protein hoạt tính enzyme trước sau sắc ký - Ta có bảng kết tính toán chung: Nghiệm thức HSR (u/mg) Độ tinh Hiệu suất (%) 10.52 11.04 1.05 100 3.02 (u) Trước sắc ký Sau sắc ký 645.8 19.5 - (mg) 61.4 1.766 Các công thức liên quan: Độ tinh sau sắc ký = Hiệu suất sau sắc ký = Trang 30 GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme protein Bài 4: ĐIỆN DI Nguyên tắc SDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamid Gel Eloctrophoresis)là kỹ thuật điện di gel polyacrylamid có diện SDS, tác nhân làm biến tính âm tính hóa phân tử protein Trong kỹ thuật protein xử lý với chất tẩy SDS tác nhân khử cầu nối disulfite mercaptoethanol dithiotheitol ( DDT) Với tác nhân protein từ cấu trúc bậc 2, 3, biến đổi thành chuỗi polypeptide ( bậc 1) tất protein tách điện âm Nhờ đó, di chuyển gel phân tử protein phụ thuộc vào kích thước, phân tử có kích thước lớn di chuyển chậm phân tử có kích thước nhỏ qua lỗ gel có kích thước định Dưới tác dụng điện trường phân tử tích điện âm di chuyển cực dương phân tử tích điện dương di chuyển cực âm điện trường Dụng cụ thiết bị - Bộ điện di đứng - Bộ nguồn chạy điện di - Pipetteteman 1000µl - Pipetteteman 200µl - Pipetteteman 10µl - Típ xanh: hộp - Típ vàng: hộp - Típ trắng: hộp - Giấy lọc - Giấy thấm - Giăng tay: đôi - Phao để eppendorf - Eppendorf - pH kế Trang 31 GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme protein Hóa chất - N, N, N’,N’-tetramethylenediamide - Dung dịch Acryamide/Bisacryamide 40% ( 29:1) (3.3%C) - β –Mercapptoethanol - Thang protein chuẩn SDS-PAGE ( Bio- Rad), gồm protein chuẩn có kích thước xác định sau: + Phosphorylase b 97.400 Daltons + Bovine serum albumin 66.200 Daltons + Ovalbumin 45.000 Daltons + Carbonic anhydrase 31.000 Daltons + Soybean trypsin inhibitor 21.500 Daltons + Lysozome 14.400 Daltons - Sodium Dodecyl Sulfate - Ammonium persulfate - Coomassie Brilliant Blue G 250 dạng viên ( Bio- Rad) - Cồn tuyệt đối 99,50 - Methanol - Tris ( hydroxymethyl ) amonimethane - Axit acetic - Bromophenol blue - Glycerol - Glycine - Axit clohydric - Sodium docecyl sulfate ( SDS) 10%: cân 10g SDS cho 100ml nước cất vào khuấy tan hết Trang 32 GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme protein - Dung dich đệm gel phân tách Tris-Cl 1.5M, Ph8.8-0.4%SDS: cân 36,3g Tris pha 100ml nước cất thêm dần HCl 6N khuấy dung dich pH kế 8.8 Hút 8ml dung dịch SDS 10% cho vào Thêm nước cất cho đủ 200ml, lắc giữ độ - Dung dịch đệm gel gom Tris – Cl 0.5M, pH 6.8-0,4 % SDS: cân 6.05g Tris pha 100ml nước cất thêm dần HCl 6N khuấy dung dịch ph kế 6.8 Hút 4ml dung dịch SDS 10% cho vào Thêm vào nước cho đủ 100ml, lắc giữ độ - Ammoniumpersulfate 10% ( pha trước dùng): cân 0.1g cho vào eppendorf 1000µl thêm ml nước cất, lắc đều, để nhiệt độ phòng - Dung dịch đệm điện di Tris-glycine ph 8.3: pha dung dịch mẹ 10X chứa 30g Tris, 144g Glycine, 10g SDS hòa 1000ml nước cất - Dung dịch nạp mẫu 2X: có thành phần sau: 2.5ml dung dịch đệm Tris-Cl 0.5M , ph 6.8,4ml 10%SDS; 2ml Glycerol; 2mg Bromophenol Blue; 0.2ml mercaptoethanol; thêm nước đủ 10ml - Dung dịch nhuộm gel: chuẩn bị 250ml dung dịch nhuộm gel chứa 0,625g Coomassie Blue G 250, 112.5ml ethanol tuyệt đối, 112.5ml nước cất 25ml acid acetic, lắc đều, giữ chai màu tối - Dung dịch giải nhuộm: 30ml methanol: 10ml acid acetic: 60ml nước cất Phương pháp  Đổ gel Chú ý: Polyacrylamide chất độc cho thần kinh Vì không hít uống dính vào nên rữa tay Chuẩn bị đổ gel có kích thước 100*100*0.75mm có nồng độ acrylamide 10% a Gel tách  Cho thành phần sau theo thứ tự vào becher 50ml : - Acrylamide ml - Đệm Tris-HCl1,5M pH 8,8 1.25 ml Trang 33 GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme protein - SDS 50 µl - Nước cất 1.7 ml - TEMED 5µl - b Fersulfatamonium 50 µl Sau cho Amonium persulfate 10% vào, lắc nhẹ ống Falcon vài lần (tránh tạo bọt khí), dùng pipette Pasteur pipetteman bơm dung dịch gel vào khuôn, đổ gel cho mức dung dịch gel cao 7cm( tránh tạo bọt khí khuôn gel) Sau đó, nhẹ nhàng đặt lớp nước cất lên lớp gel để mặt gel phẳng chờ gel đông( khoảng 2030 phút) Gel gom Cho thành phần sau theo thứ tự vào Becher50ml khác: Acrylamide 0,68 ml Tris-HCl1,5M ph6,8-0,4%SDS 1.25 ml SDS 50 µl Nước cất 3.05 ml TEMED µl Fersulfatamonium 50µl chuẩn bị mẫu chạy điện di Dùng pipetman 10µl nạp mẫu vào giếng chạy điện di ổn định dòng: 100 V.Sau điện di, nhuộn gel với dung dịch nhuộm chuẩn bị trước Sau giải nhuộm cách ngâm gel dung dịch giải nhuộm gel trở nên suốt không màu Kết quả: a Xác định trọng lượng phân tử protein  Đo khoảng cách di chuyển band protein Khoảng cách di chuyển từ gel phân tách tới vạch màu cuối cùng: 6.2 Giếng Giếng Giếng 0.5 1.5 2.2 1.1 1.9 2.5 1.5 2.3 3.1 2.2 2.5 2.5 3.1 3.1 Trang 34 GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme protein b Tính giá trị Rf  Giếng 1:  Giếng : Trang 35 GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme protein  Giếng 3: Biểu đồ log10 Trọng lượng phân tử protein (dalton) logWM Thang chuẩn 204.000 log (204.000) = 5.3 124.000 log (124.000) = 5.09 80.000 log (80.000) = 4.9 49.100 log (49.100) = 4.69 31.900 log (31.900) = 4.49 20.800 log (20.800) = 4.3 0.08 Log (M W ) 0.17 0.24 y = -2.3609x + 5.4847 0.35 0.4 R2 = 0.9952 0.5 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 Rf Hình 4.1: Đồ thị biểu diễn Trọng lượng phân tử vạch protein Phương trình đường chuẩn : Y = -2.360X + 5.484  Giếng 1: thang chuẩn nên biết MW  Giếng 2: chiều dài gel 6.2 Trang 36 0.6 GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme protein Với Rf = x tính  Tính MW: Ta có : Y= log MW  MW = 10y Y = -2.360X + 5.484 MW1 = 10-2.360(0.24 ) + 5.484 MW2 = 10-2.360(0.31 ) + 5.484 MW3 = 10-2.360(0.37 ) + 5.484 MW4 = 10-2.360( 0.4) + 5.484 MW5 = 10-2.360(0.5 ) + 5.484  Giếng 3: tương tự  Tính MW: Y = -2.360X + 5.484 = = = = = 82718 dal 56545.7 dal 40813.13 dal 34673.7 dal 20137.2 dal MW1 = 10-2.360(0.35) + 5.484 = 45498.8 dal MW1 = 10-2.360(0.4 ) + 5.484 = 34673.7 dal MW1 = 10-2.360(0.5) + 5.484 = 20137.2 dal Sau điện di phương pháp SDS-PAGE ta tiến hành thực bước cưới cùng, xác định hoạt tính enzyme cách cố định enzyme  Trang 37 GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme protein BÀI 5: CỐ ĐỊNH ENZYME Cố định enzyme cellulose lên chất mang Natrilginate a Thực hành  Cân 0.5 g enzyme cellulose hòa tan 16.5 ml dung dich đệm acetat pH5  Bổ sung 0.5 ml enzyme  Dùng ống xilanh có đầu kim tiêm, hút dung dịch enzyme hòa tan nhỏ từ độ cao 20 cm vào 50 ml dung dịch 0.2M CaCl2 để tạo gel  Quá trình tạo gel xảy 30 phút, nhiệt độ phòng  Lọc thu dịnh enzyme lại  Số lần tái sử dụng: - Thêm vào 50 ml nước cất để yên 10 phút, sau tiến hành lọc thu dịch enzyme lần1 - Thêm vào 50 ml nước cất để yên 10 phút, sau tiến hành lọc thu dịch enzyme lần2 - Thêm vào 50 ml nước cất để yên 10 phút, sau tiến hành lọc thu dịch enzyme lần b Kết Dịch enzyme thu cho lần lược vào bình erlen cốc thủy tinh buộc chặc miệng, đánh số thứ tự hình 13 Bảo quản lạnh bình để dùng cho thí nghiệm xác định hàm lượng protein sau cố định xác định hàm lượng enzyme sau cố định Trang 38 GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme protein Hình 13: Enzyme lại enzyme tái sử dụng Xác định hàm lượng protein sau cố định a Thực hành Chuẩn bị ống nghiệm: ống đối chứng ống thí nghiệm   Ống nghiệm đối chứng: quang phổ kế độ hấp thụ - Hút ml nước cho vào ống nghiệm - Thêm ml dung dịch thuốc thử Coomassie - Đo độ hấp thụ bước sóng 595 nm Ống nghiệm thực nghiệm - Hút ml dung dịch enzyme cho vào ống nghiệm - Thêm ml dung dịch thuốc thử Coomassie - Đo độ hấp thụ bước sóng 595 nm b Kết Kết đo độ hấp thụ bước sóng 595 nm Trang 39 GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme protein Số ống Còn lại Lần Lần Lần OD 0.23 0.18 0.17 0.019 c Tính toán kết Dựa vào số OD đường thẳng y=0.003x + 0.0675 Ta có: Xcd=2.738 mg Suy ra: Hàm lượng protein cố định=HLtcd-HLclai=61.4-2.738=58.7 mg Hiệu suất cd=(Ecd/Etcd)*100=95.6% Số lần tái sử dụng: Lần 1: x=1.905 mg Hiệu suất 100% Lần 2: x=1.738 mg Hiệu suất=(1.738*100)/1.905=91.2% Lần 3: x= 0.055 mg Hiệu suất = (0.055*100)/1.905=11.6% Vẽ đồ thị: Trang 40 GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme protein 120 100 80 60 Series1 40 20 0 0.5 1.5 2.5 3.5 d Nhận xét kết Dựa vào đồ thị ta thấy hiệu suất giảm dần qua ba lần tái sử dụng lần tái sử dụng lần thứ hai có hiệu suất 91.2% sử dụng hiệu suất lần thứ ba giảm nhanh 11.6% ([...]... Công nghệ enzyme và protein Tính F: Vẽ đồ thị: F= = 0.75 Thay vào phương trình ta có: x= = 1.17 Thế vào phương trình u ta được: * U = 1.17 * 0.75 * * 20 * 2 = 19.5 Vậy tổng hoạt tính của enzyme là: Ta có hoạt tính riêng là: Hoạt tính riêng = = Trang 29 = 11.04 = 19.5 GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme và protein  Kết quả chung sau khi xác định hàm lượng protein và hoạt tính enzyme trước và sau... và lắc đều Trang 13 GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme và protein  - Thêm 1ml dung dịch CMC pH4 vào ống nghiệm số 2 và lắc đều - Thêm 1ml dung dịch CMC pH5 vào ống nghiệm số 3 và lắc đều - Thêm 1ml dung dịch CMC pH6 vào ống nghiệm số 4 và lắc đều - Thêm 1ml dung dịch CMC pH7 vào ống nghiệm số 5 và lắc đều - Thêm 1ml dung dịch CMC pH8 vào ống nghiệm số 6 và lắc đều - Đem đun sôi cách thủy tất cả... TUYẾN Công nghệ enzyme và protein - Hút 1 ml dung dịch enzyme cho vào ống nghiệm 2 và ủ ở nhiệt độ 400C trong 10 phút Đồng thời, ta cũng để chai chứa dung dịch CMC pH5 thích hợp ở nhiệt độ 400C - Hút 1 ml dung dịch enzyme cho vào ống nghiệm 3 và ủ ở nhiệt độ 500C trong 10 phút Đồng thời, ta cũng để chai chứa dung dịch CMC pH5 thích hợp ở nhiệt độ 500C - Hút 1 ml dung dịch enzyme cho vào ống nghiệm 4 và. .. 700C thì enzyme dần dần bị biến tính nên hiệu suất thủy phân giảm dần g Đánh giá kết quả: Dựa vào kết quả so màu ta thấy: - Mẫu đối chứng có màu vàng là màu của thuốc thử DNS pha loãng với 1ml nước cất Trang 12 GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme và protein - - Ống không phản ứng có màu vàng đậm, chứng tỏ ở đây hoạt tính enzyme bị bất hoạt nên không xảy ra quá trình thủy phân giữa enzyme và dung... dung dich enzyme cho vào ống nghiệm và ủ ở nhiệt độ 400C trong 10 phút Đồng thời, ta cũng để chai chứa dung dịch: CMC pH3, CMC pH4, CMC pH5, CMC pH6, CMC pH7, CMC pH8, thích hợp ở 40 0C trong 10 phút - Thêm 1 ml dung dịch CMC pH3 vào ống nghiệm 1 chứa enzyme và lắc đều - Thêm 1 ml dung dịch CMC pH4 vào ống nghiệm 2 chứa enzyme và lắc đều - Thêm 1 ml dung dịch CMC pH5 vào ống nghiệm 3 chứa enzyme và lắc... chứa enzyme và lắc đều - Thêm 1 ml dung dịch CMC pH6 vào ống nghiệm 4 chứa enzyme và lắc đều - Thêm 1 ml dung dịch CMC pH7 vào ống nghiệm 5 chứa enzyme và lắc đều - Thêm 1 ml dung dịch CMC pH8 vào ống nghiệm 6 chứa enzyme và lắc đều - Để phản ứng ở 400C chính xác 10 phút - Thêm 2 ml dung dịch DNS-lastose vào 6 ống nghiệm và lắc đều để ngừng phản ứng enzyme - Đem đun sôi cách thủy tất cả 6 ống nghiệm... DNS-lactose và lắc đều - Thêm 1 ml dung dịch CMC pH5 vào ống nghiệm chứa enzyme và lắc đều - Đem đun sôi cách thủy trong 15 phút Làm lạnh đến nhiệt độ phòng trong một cốc nước lạnh Đo độ hấp thụ ở bước song 540 nm Trang 19 GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme và protein  Ống nghiệm có phản ứng enzyme - Hút 1 ml dung dich enzyme cho vào ống nghiệm và ủ ở nhiệt độ 400C trong 10 phút Đồng thời, ta cũng... H2O cho vào ống nghiệm - Thêm 2ml dung dich DNS-Lastose và lắc đều - Thêm 1ml CMC pH5 vào ống nghiệm và lắc đều - Đo độ hấp thụ ở bước sóng 540 nm 6 ống không phản ứng được đánh số thứ tự từ 1 đến 6 - Hút 1ml dung dịch enzyme cho vào 6 ống nghiệm và đun sôi 10 phút để bất hoạt enzyme - Thêm 2ml dung dịch DNS-lactose vào 6 ống nghiệm và lắc đều - Thêm 1ml dung dịch CMC pH3 vào ống nghiệm số 1 và lắc... bước sóng 540 nm Trang 14 GVHD: CN ĐỖ THỊ TUYẾN Công nghệ enzyme và protein c Kết quả:  Quan sát bằng mắt thường, theo thứ tự từ trái sang phải ta thấy: ống đối chứng có màu vàng và 6 ống nghiệm không phản ứng với enzyme, từ ống số 1 đến ống số 2 có màu vàng đậm dần Từ ống số 3 đến ống số 6 màu vàng nhạt dần như hình 6 Hình 6: Kết quả so màu của ống ĐC và 6 ống nghiệm không phản ứng  Quan sát bằng... cho vào ống nghiệm - Thêm 2 ml dung dịch DNS-lastose và lắc đều - Thêm 1 ml dung dịch CMC pH5 vào ống nghiệm chứa enzyme và lắc đều - Đem đun sôi cách thủy trong 15 phút Làm lạnh đến nhiệt độ phòng trong cốc nước mát Đo độ hấp thụ ở bước song 540 nm Ống nghiệm không có phản ứng enzyme - Hút 1 ml dung dịch enzyme cho vào ống nghiệm đun sôi 10 phút để bất hoạt enzyme - Thêm 2 ml dung dịch DNS-lactose và