CHUẨN ĐOÁN VIRUS HPV

BỘ CÔNG THƯƠNG Đại học Công nghiệp thực phẩm TPHCM KHOA: Công nghệ sinh học Tiểu luận Chuẩn đoán bệnh Ung thư cổ tử cung GVHD: Nguyễn Thị Liên Thương NỘI DUNG I Virus HPV II Bệnh ung thư cổ tử cung III Các phương pháp chuẩn đoán IV Cách điều trị V Cách phòng ngừa I Virus HPV HPV (Human papilloma virus): Là loại virus gây u nhú người, lây truyền qua đường tình dục Gây mụn cơm, mụn cóc, sùi mào gà (u nhú) da, dương vật, âm hộ, hậu môn Gây viêm da lành tính, viêm quan sinh dục dẫn đến vô sinh   I Virus HPV I Virus HPV Virus HPV • I Type 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 66, 68 , 70 HPV nguy cao HPV nguy thấp • • Type 16, 18 chiếm tỷ lệ cao Gây tổn thương nghiêm trọng phát triển thành UTCTC • Type HPV 1, 2, 6, 8, 9, 11, 42, 43, 44, 48, 49, 50, 64 • Phổ biến HPV 6, 11 • Mụn cơm, mụn cóc sinh dục, sùi mào gà chân, tay dạng viêm nhiễm khác II Bệnh ung thư cổ tử cung  Khái niệm: Là tổn thương ác tính phát triển cổ tử cung Ung thư xuất tế bào cổ tử cung biến đổi phát triển bất thường cách không kiểm soát Nguyên nhân:  II Bệnh ung thư cổ tử cung  Cơ chế gây bệnh HPV nhiễm vào thể vật chủ Tích hợp với hệ gen vật chủ Gen E2 gene HPV bị phá vỡ, không kiểm soát hai gen gây ung thư E6 E7 Gen E6, E7 mã, tổng hợp protein tương ứng Protein E6, E7 tương tác với protein tế bào: protein RB (điều hoà chu trình tế bào) protein p53 (điều hòa sinh trưởng khối u) Tế bào bị nhiễm HPV sinh sản tự phát, không bị kiểm soát, phát triển thành tế bào ung thư  II Bệnh ung thư cổ tử cung Biểu  Kinh nguyệt kéo dài, nhiều bình thường  Chảy máu âm đạo sau giao hợp thời kỳ kinh nguyệt  Phụ nữ tắt kinh bị máu âm đạo (mặc dù máu ít)  Đau phần bụng (không liên hệ với kinh nguyệt)  Ra huyết trắng • 70% trường hợp không bị nhiễm GiaiCácđoạngiai1: đoạn UTCTC • Mắc vài bệnh liên quan đến cổ tử cung bị nhiễm HPV • 10% trở thành “tiền ung thư” II Bệnh ung thư cổ tử cung Giai đoạn 2: tiền ung thư Giai đoạn 3: ung thư chưa/không di Giai đoạn 4: ung thư di •Kéo dài từ - 10 năm •1/3 ca không phát triển thành ung thư •12% phát triển thành ung thư chưa di •Ung thư giới hạn cổ tử cung •Một số trường hợp, bệnh tự nhiên biến •Ung thư xâm lấn sang quan phận khác • Gặp phụ nữ sau thời kì mãn kinh III Các phương pháp chuẩn đoán Nested - Real time PCR III Các phương pháp chuẩn đoán Nested - Real time PCR Taqman probe III Các phương pháp chuẩn đoán Cách tiến hành: III Các phương pháp chuẩn đoán Nested - Real time PCR  Ưu điểm: Là kĩ thuật định lượng có độ nhạy cao Thời thực gian ngắn Tránh ngoại nhiễm sản phẩm Xác định 24 type HPV III Các phương pháp chuẩn đoán Kỹ thuật reverse dot blot Dùng để định type HPV Sử dụng mẫu dò đặc hiệu cho:  type HPV nguy thấp (6, 11, 42, 43, 61, 70,71, 81)  16 type HPV nguy cao (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 82) Các mẫu dò cố định sẵn màng lai nylon Tín hiệu dương tính phát qua phản ứng tạo màu III Các phương pháp chuẩn đoán Cách tiến hành: Khuếch đại đoạn gen đặc hiệu HPV Đánh dấu mồi biến đổi đầu 5’ có gắn biotine Cố định mẫu dò đặc hiệu màng nylon Hoạt hóa lai III Các phương pháp chuẩn đoán Biến tính sản phẩm phóng đại thêm vào màng lai Ủ, rửa màng lai Gắn streptavidin – Ankaline Photphatase Ủ màng với chất phát màu Xác đinh type HPV dựa kết phát huỳnh quang III Các phương pháp chuẩn đoán Kỹ thuật ELISA Nguyên tắc: kháng thể đánh dấu cách gắn với enzyme Khi thêm chất thích hợp, enzyme phân giải chất cho sản phẩm có màu Đo cường độ màu để biết mức độ phản ứng xảy Sử dụng phản ứng kháng nguyên – kháng thể để phát kháng nguyên vỏ HPV (chủ yếu protein L1 có mặt capsid vỏ) Cách tiến hành: III Các phương pháp chuẩn đoán • Biến tính DNA virus HPV • Lai với hỗn hợp đầu dò RNA có gắn với kháng thể sơ cấp nhóm nguy • cao nguy thấp Tạo phức lai DNA – RNA III Các phương pháp chuẩn đoán • • • Gắn lên giếng đĩa lai chứa kháng nguyên tương ứng với kháng thể sơ cấp gắn đầu dò RNA Phức hợp lai cố định nhận biết kháng thể thứ cấp có gắn enzyme Alkaline Photphatase Enzyme phân giải chất làm xuất màu nhận biết máy đo màu III Các phương pháp chuẩn đoán IV Cách điều trị Giai đoạn chưa xâm lấn: đốt điện, đốt lạnh, khoét chóp cổ tử cung dao điện hình vòng, cắt toàn tử cung Khi có xâm lấn: hóa liệu, xạ trị áp sát tia xạ đơn thuần, phẫu thuật nạo vét phần bị tổn thương   V Cách phòng ngừa  Sống chung thuỷ vợ chồng  Không quan hệ sớm (ở tuổi dậy thì)  Quan hệ tình dục an toàn  Không hút thuốc, nói không với rượu  Thăm khám phụ khoa định kỳ  Tiêm Vacine đặc hiệu cho HPV TÓM TẮT Phương pháp PAP’s smear cho biết có nhiễm HPV hay không mà không xác định type HPV Kỹ thuật ELISA xác định type HPV lây nhiễm type nguy cao hay nguy thấp, không xác định riêng type Kỹ thuật Real - time PCR Reverse Dot Blot có nhiều ưu điểm so với phương pháp khác: thao tác đơn giản, cho kết nhanh, có độ nhạy cao, độ đặc hiệu 100%, xác định 24 type HPV CÁM ƠN CÔ VÀ CÁC BẠN ĐÃ LẮNG NGHE [...]... III Các phương pháp chuẩn đoán 1 Phết tế bào cổ tử cung (Pap’ smear) III Các phương pháp chuẩn đoán 2 Nested - Real time PCR Real time PCR III Các phương pháp chuẩn đoán b Nested PCR III Các phương pháp chuẩn đoán 2 Nested - Real time PCR III Các phương pháp chuẩn đoán 2 Nested - Real time PCR Taqman probe III Các phương pháp chuẩn đoán Cách tiến hành: III Các phương pháp chuẩn đoán 2 Nested - Real... type HPV III Các phương pháp chuẩn đoán 3 Kỹ thuật reverse dot blot Dùng để định type HPV Sử dụng các mẫu dò đặc hiệu cho:  8 type HPV nguy cơ thấp (6, 11, 42, 43, 61, 70,71, 81)  16 type HPV nguy cơ cao (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 82) Các mẫu dò đã được cố định sẵn trên màng lai nylon Tín hiệu dương tính được phát hiện qua phản ứng tạo màu III Các phương pháp chuẩn. .. Các phương pháp chuẩn đoán Cách tiến hành: Khuếch đại các đoạn gen đặc hiệu của HPV Đánh dấu bằng mồi biến đổi đầu 5’ có gắn biotine Cố định các mẫu dò đặc hiệu trên màng nylon Hoạt hóa và lai III Các phương pháp chuẩn đoán Biến tính sản phẩm phóng đại và thêm vào màng lai Ủ, rửa màng lai Gắn streptavidin – Ankaline Photphatase Ủ màng với các chất phát màu Xác đinh type HPV dựa trên kết quả... phương pháp chuẩn đoán 4 Kỹ thuật ELISA Nguyên tắc: kháng thể được đánh dấu bằng cách gắn với enzyme Khi thêm cơ chất thích hợp, enzyme sẽ phân giải cơ chất cho sản phẩm có màu Đo cường độ màu để biết mức độ phản ứng xảy ra Sử dụng phản ứng kháng nguyên – kháng thể để phát hiện kháng nguyên vỏ của HPV (chủ yếu là protein L1 có mặt trong capsid vỏ) Cách tiến hành: III Các phương pháp chuẩn đoán • Biến... HPV (chủ yếu là protein L1 có mặt trong capsid vỏ) Cách tiến hành: III Các phương pháp chuẩn đoán • Biến tính DNA của virus HPV • Lai với hỗn hợp đầu dò RNA có gắn với các kháng thể sơ cấp của nhóm nguy cơ • cao và nguy cơ thấp Tạo phức lai DNA – RNA III Các phương pháp chuẩn đoán • • • Gắn lên các giếng của đĩa lai chứa kháng nguyên tương ứng với kháng thể sơ cấp đã được gắn trên đầu dò RNA Phức... dậy thì)  Quan hệ tình dục an toàn  Không hút thuốc, nói không với rượu  Thăm khám phụ khoa định kỳ  Tiêm Vacine đặc hiệu cho HPV TÓM TẮT Phương pháp PAP’s smear chỉ cho biết có nhiễm HPV hay không mà không xác định được type HPV Kỹ thuật ELISA chỉ xác định được type HPV lây nhiễm là type nguy cơ cao hay nguy cơ thấp, không xác định riêng từng type Kỹ thuật Real - time PCR và Reverse Dot Blot có... dò RNA Phức hợp lai cố định được nhận biết bởi kháng thể thứ cấp có gắn enzyme Alkaline Photphatase Enzyme phân giải cơ chất làm xuất hiện màu được nhận biết bởi các máy đo màu III Các phương pháp chuẩn đoán IV Cách điều trị Giai đoạn chưa xâm lấn: đốt điện, đốt lạnh, khoét chóp cổ tử cung bằng dao điện hình vòng, cắt toàn bộ tử cung Khi có sự xâm lấn: hóa liệu, xạ trị áp sát hoặc tia xạ đơn thuần,...III Các phương pháp chuẩn đoán 1 Phết tế bào cổ tử cung (Pap’ smear) a Mục đích: tìm những bất thường trong lớp biểu mô cổ tử cung, để phát hiện ung thư cổ tử cung b Nguyên lý: dựa trên tính chất bong ra một cách tự nhiên, liên... riêng từng type Kỹ thuật Real - time PCR và Reverse Dot Blot có nhiều ưu điểm hơn so với các phương pháp khác: thao tác đơn giản, cho kết quả nhanh, có độ nhạy cao, độ đặc hiệu 100%, xác định được 24 type HPV CÁM ƠN CÔ VÀ CÁC BẠN ĐÃ LẮNG NGHE ...NỘI DUNG I Virus HPV II Bệnh ung thư cổ tử cung III Các phương pháp chuẩn đoán IV Cách điều trị V Cách phòng ngừa I Virus HPV HPV (Human papilloma virus) : Là loại virus gây u nhú người,... viêm quan sinh dục dẫn đến vô sinh   I Virus HPV I Virus HPV Virus HPV • I Type 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 66, 68 , 70 HPV nguy cao HPV nguy thấp • • Type 16, 18 chiếm tỷ lệ... pháp chuẩn đoán Phết tế bào cổ tử cung (Pap’ smear) III Các phương pháp chuẩn đoán Nested - Real time PCR Real time PCR III Các phương pháp chuẩn đoán b Nested PCR III Các phương pháp chuẩn đoán