Xác định vai trò gây bệnh viêm phổi màng phổi ở lợn của vi khuẩn actinobacillus pleuropneumoniae, pasteurella multocida và thử nghiệm vacxỉn phòng bệnh

BỌ LỜI GIAOCAM DỤC VA ĐAO TẠO ĐOAN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố công trình khác vữ NGỌC QUÝ Tôi xin cam đoan thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2008 XÁC ĐỊNH VAI TRÒ GÂY BỆNH VIÊM PHOI 'T •2 Tác giá MÀNG PHỔI Ở LỢN CỦA VI KHUẨN ACTINOBACILLUS '' PLEUROPNEUMONIAE, PASTEURELLA MULTOCIDA VÀ Ngọc BỆNH Quý THỦ NGHIỆM VACXIN Vũ PHÒNG LUẬN VĂN THẠC sĩ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành : THÚ Y Mã sô : 60.62.50 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS cù HỮU PHÚ HÀ NỘI - 2008 LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn: - PGS.TS Cù Hữu Phú, người hướng dẫn khoa học trực tiếp giúp đỡ, hướng dẫn, bảo tận tình, tạo điều kiện cho trình thực đề tài hoàn thành luận văn - TS Nguyễn Hữu Nam, thầy cô môn Vi sinh vật - Truyền nhiễm - Bệnh lý toàn thể thầy cô giáo Khoa Thú y; khoa Sau đại học-Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội tận tình giúp đỡ tạo điều kiện cho hoàn thành luận văn - Cán nghiên cứu công tác Bộ môn Vi trùng- Viện Thú y - Sự giúp đỡ nhiệt tình lãnh đạo Công ty Giống Chăn nuôi Thái Bình, Hải Phòng, Hà Tây bạn đồng nghiệp đặc biệt gia đình tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ trình thực đề tài Hà Nội, Ngày tháng năm 2008 Tác giả Vũ Ngọc Quý 11 MỤC LỤC Lời cam đoan Lời cám ơn Mục lục Danh mục chữ viết tắt ký hiệu Danh mục bảng Danh mục biểu, hình Mở Đầu i ii iii V vi vii 1 Tổng quan tài liệu 1.1 Vi khuẩn Pasteurella multocida bệnh vi khuẩn gây lợn 1.2 Vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae bệnh vi khuẩn gây lợn 13 Nội dung - nguyên liệu phương pháp nghiên cứu 29 2.1 Nội dung nghiên cứu 29 2.2 Nguyên liệu nghiên cứu 29 2.3 Phương pháp nghiên cứu 32 Kết nghiên cứu thảo luận 38 3.1 Kết thu thập mẫu bệnh phẩm đường hô hấp 38 3.2 Tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Actinobacilỉus Pasteurella đường hô hấp lợn theo địa phương 39 3.3 Kết phân lập vi khuẩn Actinobacillus Pasteurella từ dịch ngoáy họng phổi lợn 42 3.4 Kết phân lập vi khuẩn đường hô hấp lợn theo lứa tuổi 45 3.5 Kết giám định hình thái, nuôi cấy số đặc tĩnh sinh hoá vi khuẩn phân lập 47 3.5.1 ặc điểm hình thái tính chất nuôi cấy iii Đ 50 47 GID: pleuropneumoniae: bronchiseptica: AMP: NA: DTA: ISA: parasuis: pleuropneumoniae: hyopneumoniae: AD: multocida: RS: Agargel Immuno Diffuse Actinobacillus pleuvopneumoniae Bordetella bronchiseptica Brain Heart Infusion Christie - Atkinson - Munch - Peterson DANH MỤC CHỮtra VIẾT TẮTlên VÀmen KÝ đường HIỆU vi khuẩn 3.5.3 KếtCÁC kiểm khả Complement Fixation Test phân cộns lập 51 Deoxyribonucleic Acid 3.6 Kết kiểm tra độc lực vi khuẩn phân lập 54 Ethylene Diamine Tetra Acetic acid 3.6.1 Kết kiểm tra độc lực vi khuẩn p multocỉda phân lập Enzyme - linked Immunosorbant assay 54 Haemophilus parasuis 3.6.2 Kết kiểm tra độc lực vi khuẩn A pleuropneumoniae Haemophilus pỉeuropneumoniae phân Indirect Haemagglutination test lập 55 LypoPolysaccarit 3.7 Kết xác định serotype vi khuẩn đường hô hấp phân lập 57 Mycoplasma 3.8 Kếthyopneumoniae chế tạo thử nghiệm Autovacxin phòng bệnh viêm phổi Methyl red phổi cho lợn màng 61 3.8.1 Autovacxin vô hoạt có bổ trợ keo phèn phòng bệnh Nicotinamide Adenine Chế Dinucleotide viêm phổi Organisation for International Epidemic - màng phổi cho lợn 61 Phosphat buffer 3.8.2 solution Kết kiểm tra an toàn hiệu lực vacxin chuột thí nghiệm 62 Polymerase Chain Reaction 3.8.3 Kết thử nghiệm autovacxin lợn Pasteurella multocida 64 Kết luận đề nghị 68 Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Tryptic Soy Agar vi khuẩn Voges - Prokauer V IV DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 2.1 Trình tự cặp mồi dùng để xác định type giáp mô A, B, D vi khuẩn p multocida 36 3.1 Kết thu thập mẫu bệnh phẩm 39 3.2 Tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Actinobacillus Pasteurella đường hô hấp lợn theo địa phương 40 3.3 Kết phân lập vi khuẩn Actinobacillus Pasteurella từ dịch ngoáy họng phổi lợn 43 3.4 Kết phân lập vi khuẩn đường hô hấp lợn theo lứa tuổi 3.5 45 Kết giám định số đặc tính sinh hoá chủng vi khuẩn phân lập 50 3.6 Kết kiểm tra khả lên men đường chủng vi khuẩn phân lập 52 3.7 Kết kiểm tra độc lực vi khuẩn p multocida phân lập 55 3.8 Kết kiểm tra độc lực vi khuẩn A pleuropneumoniae phân lập 56 3.9 Kết xác định serotype chủng vi khuẩn A pleuropneumoniae p.multocida phân lập 3.10 Kết 58 kiểm tra số tiêu lô vacxin 62 3.11 Kết thử hiệu lực vacxin chuột bạch VI DANH MỤC BIỂU, HÌNH Biểu đồ 3.1 Tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Actinobacillus Pasteurella đường hô hấp lợn theo địa phương 41 Biểu đồ 3.2 Kết phân lập vi khuẩn Actinobacillus Pasteurella từ dịch ngoáy họng phổi lợn 43 Ánh 3.1 Bệnh tích phổi lợn bị viêm phổi - màng phổi 45 Ánh 3.2 Khuẩn lạc vi khuẩn Pasteurella phân lập môi trường thạch máu 48 Ảnh 3.3 Hình thái vi khuẩn Pasteurella phân lập (1500 x) 48 Ánh 3.4 Khuẩn lạc vi khuẩn Actinobacilỉus phân lập môi trường thạch máu 49 Ánh 3.5 Hình thái vi khuẩn Actinobacillus phân lập (1500 x) 49 Ánh 3.6 Phản ứng lên men đường vi khuẩn Actinobacillus phân Ảnh 3.7 lập 53 Phản ứng lên men đường vi khuẩn Pasteurella phân lập 53 MỞ ĐẦU Hiện chăn nuôi gia súc nói chung chăn nuôi lợn nói riêng chiếm vị trí quan trọng ngành nông nghiệp nước ta, đặc biệt tỉnh thuộc đồng Bắc Bởi đa số dân số nước ta sống nông thôn nguồn sống dựa vào nông nghiệp, chủ yếu trồng lúa chăn nuôi lợn Thịt lợn nguồn thực phẩm bữa ăn hàng ngày người dân chúng ta, sản phẩm thịt lợn phần lớn đé đáp ứng nhu cầu nước phần dành cho xuất khẩu, lợn nguồn cung cấp phân hữu cho thâm canh tăng suất trồng Trong năm gần đây, ngành thú y có số thành tựu góp phần phòng chống dịch bệnh, bảo vệ đàn lợn Tuy nhiên, lúc nơi mà điều kiện sinh thái không thuận lợi, số dịch bệnh xảy gây thiệt hại đáng kể cho đàn lợn, đặc biệt lợn trước sau cai sữa lợn giai đoạn vừa thay đổi điều kiện sinh lý vừa dần thích nghi với điều kiện sống nên dễ mắc bệnh Có nhiều loại bệnh khác lợn, phải kể đến bệnh đường hô hấp như: Ho thở truyền nhiễm, viêm phổi, viêm phế quản, viêm teo mũi truyền nhiễm, Đây bệnh đáng quan tâm giai đoạn ngành chăn nuôi lợn Trong chăn nuôi lợn nói chung, bệnh đường hô hấp thường không gây tỷ lệ chết lợn cao bệnh dịch tả lợn, tụ huyết trùng, chúng gây tổn thất nặng nề mặt kinh tế cho ngành chăn nuôi, gây thiệt hại cho kinh tế quốc dân Lợn thường mắc bệnh hô hấp, đặc biệt lợn chăn nuôi tập trung bệnh lại xuất quanh năm Lợn mắc bệnh bị còi cọc, chậm lớn, tiêu tốn thức ăn nhiều tăng trọng chi phí điều trị lớn đường hô hấp lợn lứa tuổi thường có số loại vi khuẩn cư trú thường trực vi khuẩn: Actinobacillus pleuropneumoniae, Pasteurella multocida, Haemophillus parasuis, Bordetella bronchiseptica, Stveptococcus suis Khi sức đề kháng thể gia súc giảm xuống điều kiện nuôi dưỡng, vệ sinh, chăm sóc kém, vi khuẩn nhân lên nhanh chóng số lượng tăng cường độc lực phát thành bệnh gây thiệt hại lớn cho đàn lợn Vì để góp phần giải yêu cầu thực tế sản xuất, giúp người chăn nuôi có biện pháp phòng trừ bệnh đường hô hấp có sở khoa học, tiến hành nghiên cứu đề tài: “Xác định vai trò gây bệnh viêm phổi - màng phổi lợn vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae, Pasteurella multocida thử nghiệm vacxỉn phòng bệnh ” Mục đích đề tài Xác định tỷ lệ nhiễm số loại vi khuẩn cư trú đường hô hấp lợn lứa tuổi khỏe mạnh nghi mắc bệnh đường hô hấp Xác định độc lực vi khuẩn đường hô hấp phân lập để đưa đánh giá vai trò gây bệnh hô hấp số vi khuẩn Chế tạo thử nghiệm Autovacxin sử dụng phòng bệnh đường hô hấp cho lợn TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Vi khuẩn Pasteurella multocida bệnh vi khuẩn gây lợn 1.1.1 Vi khuẩn Pasteurella multocida Năm 1836 coi cột mốc lịch sử nghiên cứu bệnh tụ huyết trùng (Pasteurellosis) người Đây năm mà Maillet người mô tả bệnh tụ huyết trùng gà, sau Bollinger phát bệnh bò vào năm 1878 Nhưng đến năm 1880, Louis Pasteur người nuôi cấy phân lập mầm bệnh vi khuẩn gây bệnh tụ huyết trùng gà Sau đó, Gaffky (1881) phân lập mầm bệnh thỏ Kitt (1885) phân lập mầm bệnh bò Năm 1886, Loeffer phát bệnh tụ huyết trùng lợn Năm 1887, Trevisan đề nghị đặt tên vi khuẩn Pasteurella để ghi nhớ công lao Louis Pasteur Tất loại Pasteurella gây bệnh bại huyết, xuất huyết cho loài gia súc, gia cầm thuộc giống có đặc tính giống mặt hình thái, nuôi cấy, khác tính thích nghi gây bệnh loài vật chủ (Theo Nguyễn Như Thanh, 2001 [9]) Theo phân loại Bergey (1994) [14] Pasteurella multocida nằm Eubacteriaỉes thuộc họ Pasteurellaceae, thuộc giống Pasteurella thuộc loài p multocida 1.1.1.1 Đặc tính hình thái tính chất nuôi cấy nguyên sinh chất dung dải dồn hai đầu Trong canh khuẩn thường thấy vi khuẩn hình trứng, hình cầu, đứng riêng lẻ thành chuỗi ngắn Trong canh khuẩn già vi khuẩn suy yếu, biến dạng, thay đổi hình thái p multocida loại vi khuẩn hiếu khí yếm khí tùy tiện, nhiệt độ thích hợp cho vi khuẩn phát triển từ 13 - 38°c, tốt 37°c, pH thích hợp từ 7,2 - 7,4 Trên môi trường nuôi cấy thông thường vi khuẩn phát triển kém, môi trường bổ sung thêm máu hay huyết vi khuẩn phát triển tốt Khuẩn lạc vi khuẩn p multocida khône gây dung huyết môi trường thạch máu, vi khuẩn không mọc môi trường MacConkey Vi khuẩn có khả lên men đường Glucose, Saccarose, Succrose, Mannitol, Xylose, không lên men Lactose, Maltose, Arabinose, Salixin Phản ứng Indol, Catalase, Oxydase dương tính Phản ứng Urease, VP, MR âm tính không làm tan chảy gelatin 1.1.12 Sức đề kháng p multocida có sức đề kháng yếu, dễ dàng bị tiêu diệt nhiệt độ, ánh sáng mặt trời chất sát trùng thông thường: Vi khuẩn bị diệt sau đun 58°C/20 phút, 80°c/10 phút, 100°c vài giây, ánh sáng mặt trời chiếu trực tiếp diệt vi khuẩn canh trùng sau ngày Axit phenic 5% diệt vi khuẩn phút, nước vôi 1% 3-5 phút Trong đất ẩm có nhiều Nitrat thiếu ánh sáng vi khuẩn sinh sản sống lâu Trong chuồng nuôi súc vật, đồng cỏ, đất vi khuẩn sống hàng tháng có hàng năm (Nguyễn Như Thanh, ỉ 1.1.3 Giáp mô yếu tố độc lực vi khuẩn p multocida 2001 [9]) Vi khuẩn pleuropneumoniae multocida Sô chủng thử Kết định Phương pháp type Sô mẫu (+) Serovar 1 Tỷ lê (%) 6,67 15 Ngưng kết Serovar 11 73,33 Phần lớn chủng vi khuẩn A pleuropneumoniae p multocida Serovar 20,00 phân lập có độc lực vàvàvìp.vậy chúng phân có khả A pleuropneumonỉae multocida lậpnăng đượcgây bệnh cho lợn A 22 88,00 có đủ điều kiện thích hợp tácType động 25 PCR Type D 12,00 3.7 Kết xác định serotype vi khuẩn đường hô hấp phân lập Sau có kết khẳng định chắn chủng vi khuẩn mà phân lập A pleuropneumoniae p muỉtocida, tiến hành xác định serotype chúng - Với vi khuẩn A pleuropneumoniae: Chúng tiến hành định type huyết học chúng kháng huyết chuẩn Nhật Bản Úc - Với vi khuẩn p multocida: Chúng sử dụng phản ứng MultiplexPCR để xác định type giáp mô A, B, D chủng p multocida phân lập theo quy trình chuẩn hóa Bộ môn Vi trùng - Viện Thú y (Đỗ Ngọc Thúy cs, 2007 [10]) Giáp mô yếu tố độc lực quan trọng vi khuẩn p multocida, đóng vai trò quan trọng trình gây bệnh vi khuẩn p multocida chia làm type giáp mô A, B, D, E F tùy thuộc Polysaccharit bề vi mặt.khuẩn TrongA.đópleuropneumoniae type gây bệnhđem Kếtvào quảcấu chotrúc thấy, 10 chủng lợn độc đượclực thông B D thử báo có là3 A, chủng có độc lực mạnh, giết chết chuột thí nghiệm Các cặp mồi mà phản ứng (tỷ lệ 100,0%) vòngchúng - 2tôi4 sử giờdụng sau cho tiêm, làPCR định chủngtype A2,giáp A6, mô Các vi khuẩn multocida CAPA-F giết CAPA-R để thí xác nghiệm định type A7 chủngp.Al, A3, A5,là:A9, A10 chết dùng chuột (tỷ Alệ cho kíchtrong cỡ sản phẩmthời 1044 CAPB-R định A4, type A8 B cho 50,0%) khoảng gian bp, từ CAPB-F 24 - 48 Còn lạiđể 2xác chủng sản phẩm 760chuột bp, CAPD-F CAPD-R xác tim địnhcủa typenhững D chochuột sản phẩm không giết làchết thí nghiệm Khi lấyđểmáu chết làđể 657 bp Cácđều bước tiếnlập hành PCR mô tả phần nguyên kiểm tra phân lại phản ứng vi khuẩn A pleuropneumoniae Kết quảliệu phương pháplớn nghiên chứng tỏ phần cứu chủng vi khuẩn A pleuvopneumoniae phân lập có chúng thu độc lựcKết caoquảđối với chuột bạchtrình bày có thểbảng 3.9 nguyên nhân gây bệnh đường hô hấp lợn Với kết thử độc lực thu trên, kết luận: 56 57 12345 67M 1044 bp 1000 bp De Alwis (1992) [23][24]; TácBrandreth giả tổng nghiên Theo cs (1984) vàkết Smith (1985) cứu [16]: 10 11 12 bệnh13trên 14 MlợnDesrosiers Bệnh viêm nhiều nước phổi truyền giớinhiễm kếtcủa luậnlợn có phânchủng bố rộng p multocida rãi Nó ngày thuộccàng typetrở A 1044 bp nên quan trọng việc thấy chănởnuôi ngày hô phát có khỏe mặt lan thường phát phổilợn đường hấptriển Bệnh lợn mạnh 657 bp 1000 bp truyền hầu nướcgây châu Âu ởvàphổi, phầnchủng Mỹ, Canada, mà không gâyhết bệnh bệnh thuộc type Mexico, D đôiNam Mỹ,type NhậtABản, Hànphát Quốcvớivà úc Mặc dù vài khác serovar hành cộng số loại vi khuẩn nhưlà thịnh Borcỉetella nước gây định,bệnh viêm serovar Thụy Đức Sĩ bronchiseptica thường teo2 mũi, Điển, chủng typeThụy B thường serovar bệnh bại Mỹ xuất Canada thấy số serovar gây thể huyết huyết (bệnhcũng Tụ huyết trùng) nước Một số serovar coi độc (ví dụ serovar có độc lực thấp) dịch tễ chúng không quan trọng số nước lại gây nên dịch số nước khác - Với 25 chủng p multocỉda phân lập đem định type phản ứng PCR cho thấy: Kết bảng 3.9 cho thấy: + Hầu hết chủng thuộc type A với 22/25 chủng (chiếm tỷ lệ - 15 chủng A pleuropneumoniae phân lập thuộc serovar 88,00%), chủng cho sản phẩm PCR 1044 bp (ảnh 3.8) 1, Trong đó, đa số chủng thuộc serovar 2, với 11/15 chủng, + chủng lại thuộc type D (chiếm tỷ lệ 12,00%), với sản phẩm chiếm tỷ lệ 73,33%; tiếp đến chủng thuộc serovar 5, chiếm tỷ lệ 20,00%, PCR 657 bp (ảnh 3.8) lại chủng thuộc serovar (tỷ lệ 6,67%) Như vậy, chủng A Qua có mà thể chúng kết luận multocida mà serovar phân pleuropneumoniae tôirằng phâncác lậpchủng p phần lớn thuộc 5, lập đềuthấy thuộc D lớn với bệnh viêm phổi lợn, đặc biệt nênđược vaicác tròtype củaAchúng Đỗ 2.Ngọc Thúy cs (2007) [10] ứng dụng kỹ thuật PCR để định serovar type giáp type chủng multocida Kết mô quảcủa định củap Hầu hếtcứu chủng Lê từ Hoa dịch nghiên tácphân giả lập Nguyễn phân vật nuôi lập tươngtừ đồng với cho kết biết: ngoáy khỏe, (2001) mũi [3], cũnglợnxác địnhphổi - M: Thang chuẩn 1000đều bp thuộc type A, trừ chủng phân lập từ dịch hầutrên họng lò với mổ serovar song tỷlọnlệ khác Riêng serovar chiếm đến 10,3% phổi lọn bịsobệnh viêm phổi thuộc type D - Giếng 1, 2, 3,4, 5,9, 11: p muỉtocida phẩm 1044 bp)tỷ lệ cao cao với kết chúng tôi, serovartype A và(sản chiếm 41,4%.Kết hoàn toàn phù họp với nghiên cứu - Giếng 7: Đ/C dương p multocida type A công bố trước cs Hiệp (2000) [58] [4]; Tác giả luậnvàrằng Theo cácđâytáccủa giảTownsend Trịnh Quang (2004) Cù HữukếtPhú cs Giếng 10, 12, 13: p multocida type D (sản phẩm 760 bp) 17 chủng multocida lập họng củatrại lợnlợn khỏe ta lò song mổ ởtheo (2005) [7],p.serovar 1, 2,phân từ tìmhầu thấy nước tỉnh Cần Tho Kiên Việtp Nam đềuhơn thuộc serovar type A3,2, DI hoặcgiống D3 Giếng 14: Đ/C dương multoàda type D hai nhóm tác - giả thìGiang, tỷ lệ serovar cao so với không Đồng phù nghiên cứu vi khuẩn p multocida gây với kếtthời quảcũng chúng tôihợp thuvới - Giếng 6, 8: Đ/C âm Tuy nhiên, so sánh với kết nghiên cứu Cù Hữu Phú cs 59 58 60 Chỉ tiêu kiểm tra Lô vacxin p multocida 10xl09vk/ml m độ vi khuẩn uần khiết A pleuropneumoniae 8,5xl09 vk/ml đạt đạt lợn chúng ml/con khỏe tôichứa lấy mẫu 4kết- 5quả canh tỷ kháng trùng 100% để nguyên, xác cácđịnh chủng rồisốlắc lượng kiểm đềuvi tra đểkhuẩn/ml, thuộc kháng type nguyên kiểm D.tra Sởsựkeo dĩ có phèn đạt đạt gắn kết khiết tốtnày vớitiến hành vô hoạt tiến vi khuẩn hành lấy formol để kiểm vớimà nồng tracác an độ tác toàn 0,5% vàKết hiệu lực khác biệt Sau chủng p mẫu multocida giả kiểm tra trùng trênthu động vật trình thítừnghiệm bày bảng 3.10 phân lập dịchở ngoáy mũi, phân lập từ dịch ngoáy họng Thời Liều gian Sô Sô Tỷ lệ phổi.- Kiểm tra an toàn chuột bạch: công theo dõi chuột chuột bảo hộ Sô chuột tiêm vx Lô (mỉ) (%) (ml) 10 chuột khỏe mạnh chết tiêm sông Chọn vacxin với liều 0,5 ml/con vào phúc TN (con) 3.8 Kết chê tạo thử nghiệm Autovacxin phòng bệnh viêm phổi (con) xoang chọn chuột tiêm 0,2 ml nước(con) phía lọ vacxin vào tĩnh màng phổi cho lợn 0,2 mạch đuôi 0,5 Theo dõi ngày 100,0 tiêm vacxin sau ngày cho 10 thấy tất chuột 3.8.1 Chê Autovacxin vô hoạt có bổ trợ keo phèn phòng bệnh viêm phổi TN 10 màng phổi cho lợnkhông có biểu phản ứng sau tiêm Điều sống khỏe mạnh, khẳng 24-48 0,5định đạt cầu Căn vào phân lập,yêu kết giám định đặc tính rằngkếtvacxin độ0,0 an toàn độngsinh vật vật thí ĐC hoá học,và độc lựctiến hành xác kiểm định tra serotype chủng khuẩn A nghiệm hiệu lựccủacủacác vacxin viđộng vật thí Liều pleuropneumoniae p multocida phân lập được, kết hợp với kết nghiệm Kết cho thấy: đề tài -nghiên kháclựcvềbảo vi khuẩn đường hô hấp thường gặp gây Kiểm cứu tra hiệu hộsố củaloại vacxin chuột bạch: - Đậm độ vi khuẩn lô canh trùng p multocida đạt khoảng 10xl09 bệnh lợn trone có hai loại vi khuẩn tiến hành Bộ môn Vi Chọn 10 chuột khỏe mạnh, tiêm 0,2 ml vacxin vào da vk/ml canh trùng, với lô canh trùng A pleuropneumoniae 8,5xl09 trùng - Viện Thú y Chúng nhận thấy vi khuẩn A chuột đối chứng không tiêm vacxin Sau 21 ngày, tiến hành thử thách cường vk/ml Với số lượng vi khuẩn yêu cầu ml canh trùng để chế tạo vacxin pleuropneumoniae có serovar gây bệnh cho lợn địa phương độc với hỗn họp canh trùng A pleuropneumoniae p multocida tương ứng, phải đạt tối thiểu l,5xl09 vi khuẩn lô canh trùng nuôi cấy chúng nghiên cứu serovar serovar 5, vi khuẩn p multocida với liều 0,5 ml/con cho tất chuột thí nghiệm đối chứng Kết thu đủ tiêu chuẩn chế vacxin type A type D Do đó, tiến hành chọn chủng A trình bày bảng 3.11 - Cả lô canh trùng đạt tiêu khiết canh trùng sau pleuropneumonỉae (một chủng thuộc serovar chủng thuộc serovar 5) 3.110,5% Kết lực vacxinkhi chuột diệt bằngBảng íormol thử đạt hiệu tiêu vô trùng kiểm tra bạch loại môi chủng p multocida (một chủng type A chủng type D) Những trường: Thạch máu, thạch nấm, nước thịt thường, nước thịt yếm khí, chủng vi khuẩn chủng có đầy đủ đặc tính sinh hoá điển hình, Từ kết kiểm tra cho thấy, lô canh trùng đạt tiêu độc lực cao tính kháng nguyên ổn định qua nhiều lần kiểm tra để chế cần thiết để sử dụng làm vacxin thử nghiệm autovacxin phòng bệnh viêm phổi - màng phổi cho lợn 3.8.2 Kết kiểm tra an toàn hiệu lực vacxin chuột thí nghiệm Chúng chế tạo autovacxin dạng vô hoạt có bổ trợ keo phèn theo Sauthường trùng- Viện Thú y:chủng vi khuẩn A quy trình quy kiểm Bộtramôncanh Vi trùng Các chủng vi khuẩn pleuropneumoniae và p p multocida đềuđược đạt nuôi tiêu dùng A pleuropneumoniae multocida cấy chuẩn riêng rẽ theolàm lôvacxin, khác tiến hành trộn lẫn lô canh trùng với để đạt hỗn hợp canh phương pháp lên men sục khí (riêng lô vi khuẩn A trùng A pleuropneumoniae p multocida đồngbổnhất vào pha môi canhtrường trùng pleuropneumonỉae quávàtrình nuôi cấy phải sungSau thêm với sinh lý vô trùng, bổ sung với tỷkhí lệ CO-,) 1/5, đểSau với 8liều chấtnước NAD, huyết ngựa bổ keo sungphèn - 10% giờtiêm nuôi2cấy, 62 61 vacxin Tiêm Lô lợn Sô lợn TN TN 10 ĐC TT I rtn T1V 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 10 Luĩl I iì Công cường độc Kết Liều tiêm Đường tiêm Liều Đường Sô tiêm tiêm sông/sô công Tỷ lệ 2ml Dưới da 2ml Dưới da 10/10 100% diện rộng tương ứng để vớicó Ớđã đánh giánghiệm, đểchính chế xác vacxin kếtđuợc Theo tiêm phòng dõi bệnh10 ngày vacxin Kết Kết chokếtchủng thấy: lôdùng thí chuột miễn dịch với liều trình bày khoẻ bảngmạnh 3.12.và sau 21 ngày, thử thách cuờng độc với thựcđược địa.đều 0,2 thu ml/con sống 2ml Dưới da 1/5 20% 3.12 thử hiệu lực vacxin lợn tương ứng với hỗn hợp canhBảng trùng A.Kết pleuropneumoniae p multocida (%) 3.8.32 Kết kiểm hiệu kháng lợn tiêm vacxin bị chết, chủng sản xuất vacxin, vớigiá liều 0,5 thể ml/con sau chuột Hiệu giátra kháng thể điều có nghĩa làp.100% số chuột bảo hộ Trong đó, chuột lô A pleuropneumoniae multocida đối chứng sau công cường độc với liều tương tự 1/64không tiêm vacxin,1/64 bị 1/64 chết vòng 24 - 48 1/32 (tỷ lệ chết 100%) phân lập lại Đểkhuẩn đánhnày giátừkhả loại vi máunăng tim tạo đáp ứng miễn dịch vacxin cho lợn, chúng 1/32 1/64 tiếnTổng hànhhợp lấy máukếtchắt kiểm tra hiệu giá hộ kháng lợn quảhuyết kiểm tra an để toàn hiệu lực bảo thể vacxin 1/64 1/128 thí sau lôkhi tiêmchế vacxin 21sánh ngàyvớivới vi tâm khuẩn A chuộtnghiệm bạch vacxin thử, so tiêukháng chuẩn nguyên Tmng Kiểm pleuropneumoniae p gia muỉtocida, sử dụng vacxin phươngchết pháp kết phèn, hồng cho cầu nghiệm1/32 thuốc thú yvà quốc kiểm1/64 nghiệm có ngưng bổ trợ keo Kết cho thấy: 1/64quả 1/32 phép đánh giá: Lô vacxin đạt tiêu an toàn 100% có hiệu lực bảo hộ cao - Lô thí nghiệm: Sau tiêm vacxin, 10 lợn khoẻ mạnh, ăn chuột để kiểm tra động vật 1/64bạch (100%), đủ tiêu chuẩn1/64 uống lại bình thường Sau tiến hành công cường độc theo dõi 1/32 1/64 vòng tất nghiệm lợn autovacxin lô 3.8.3 10Kếtngày, thử khoẻ lợn mạnh phát triển bình thường, 1/64 không 1/64 thấy có biểu triệu chứng bệnh đường hô hấp Chứng tỏ vacxin có hiệu quả1/32 bảo hộ tốt với tỷ lệ 100% 1/64 - Lô đối chứng: Sau công cường độc, lợn có biểu bệnh đường hấpquả nặng: sốt, bỏ ho, ủ rũ, 3.8.3.1.hôKết thử hiệu lực ăn, autovacxin Sau lợn từ ngày thứ đến ngày thứ 5, lợn lô bị chết, lợn sau 10 ngày theo dõi sống có biểu hô hấp nặng Khi tiến hành mổ khám lợn chết lợn sống có bệch tích điển hình bệnh viêm phổi - màng phổi phổi viêm nặng, đámtrên tụ huyết, xuất huyết, tượng Để đánhbị giá hiệu lực cócủa vacxin lợn, có tiếnhiện hành thí viêm dính nghiệm nhưvào sau:lồng ngực vv Đồng thời phân lập loại vi -khuẩn A pleuropneumoniae p multocida máu lợn.tuổi, khoẻ mạnh, Lô thí nghiệm: Chúng tôivàchọn 10 lợn từ 35tim ngày Qua tiêm kết nàyloại khẳng định điều kiện thí nghiệm chưa Kết bảng 3.13 chovacxin thấy: mà vacxin có chứa kháng nguyên vacxin mà chế tạo có khả bảo hộ tốtđãcho lợn vớilấy bệnh viêm A pleuropneumoniae tiếnthí hành máu - Hầu hết p cácmultocidsL mẫu huyếtChúng củacũng lợn nghiệm có phổi màng phổi loại vi khuẩn A pleuropneumoniae p multocida gây 10 lợn nghiệm, tra huyết vi đềukhuẩn thấy máu âm tính hiệu giáthíngưng kết kiểm cao với kháng nguyên A pleuropneumonia, đavới số Để đánh giá hiệu thực vacxin, cần tiến hành thử nghiệm mức loại 1/64, vi khuẩn có tiêm vacxin cho lợn với1/32 liềulà2các ml/con vào với 6này mẫu;Chúng lại mẫu hiệu giá ngưng kết đạt 64 63 65 66 mẫu huyết lợn số 3, 5, 8, 10 - Kết tương tự với kháng nguyên vi khuẩn p multocida, đa số lợn có mẫu huyết với hiệu giá ngưng kết đạt 1/64 (7 lợn), lợn có hiệu giá 1/32 lợn số số 6, đặc biệt có lợn có hiệu giá kháng thể đạt 1/128 lợn số Theo quy định với vacxin phòng bệnh viêm phổi - màng phổi cho lợn đạt hiệu giá 1/16 có khả năne bảo hộ tốt cho lợn tiêm vacxin Từ kết bảng cho thấy, vacxin mà sản xuất có khả bảo hộ tốt lợn, đạt yêu cầu dùng làm vacxin phòng bệnh viêm phổi - màng phổi cho lợn loại vi khuẩn A pleuropneumoniae p multocida gây Do đó, nghiên cứu thử nghiệm diện rộng để áp dụng vào sản xuất 67 KẾT LUẬN VÀ ĐỂ NGHỊ 4.1 Kết luận Từ kết thu được, rút kết luận sau: 4.1.1 Tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Actinobacillus Pasteurella đường hô hấp lợn địa phương có khác nhau, sai khác không lớn Với 236 mẫu bệnh phẩm có 25 mẫu phân lập vi khuẩn Pasteurella, chiếm tỷ lệ 10,59% 15 mẫu phân lập Actinobacillus, chiếm tỷ lệ 6,35% Ở Hà Tây tỷ lệ phân lập Pasteurella 15,00% Actinobacillus 8,33% Hải Phòng, tỷ lệ phân lập Pasteurella 10,00% Actinobacillus 7,78%; tỷ lệ phân lập Pasteurella Actinobacillus Thái Bình 8,14% 3,39% 4.1.2 Các chủng vi khuẩn Pasteurella Actinobacillus phân lập mang đầy đủ đặc tính sinh vật hóa học p multocida A pleuropneumoniae tài liệu nước công bố 4.1.3 Vi khuẩn phân lập có độc lực mạnh: Có chủng p multocida giết chết 100,0% chuột thí nghiệm vòng 24 - 48 có chủng A pleuvopneumoniae giết chết 100,0% chuột vòng 12-24 4.1.4 Trong số 15 chủng vi khuẩn A pleuropneumoniae phân lập chủng thuộc serovar (6,67%), 11 chủng thuộc serovar (73,33%) chủng thuộc serovar (20%) Trong 22/25 chủng p multocida phân lập thuộc serotype A (88,0%), có 3/25 chủng thuộc serotype D ( 12, 0%) 4.1.5 Chọn chủng A pleuropneumoniae chủng p multocida để chế thử nghiệm autovacxin phòng bệnh viêm phổi - màng phổi cho lợn Autovacxin chế dạng vô hoạt có bổ trợ keo phèn với liều tiêm ml/ có chứa - tỷ kháng nguyên 4.1.6 Autovacxin an toàn bảo hộ 100% chuột lợn thí nghiệm 68 Lợn 35 ngày tuổi sau tiêm vacxin máu có kháng thể kháng A pleuropneumoniat p multocida với hiệu giá cao Có khả bảo hộ với bệnh viêm phổi - màng phổi vi khuẩn A pỉeuvopneumonia p multocida gây lợn 4.2 Đề nghị - Tiếp tục thử nghiệm để đánh giá khả bảo hộ Autovacxin với bệnh viêm phổi - màng phổi lợn nuôi sở - Xác định độ dài miễn dịch Autovacxin để đề xuất quy trình sử dụng lịch tiêm phòng vacxin phù họp 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt: Nguyễn Xuân Bình (1996), Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ bệnh tụ huyết trùng gia cầm Long An biện pháp phòng trừ thích liợp Luận án Phó tiến sĩ khoa học nông nghiệp, Hà Nội M w Eastaugh (2001), Bệnh hô hấp lợn - Tổng quan (Thanh Thuận dịch) Tạp chí KHKT thú y, 7(2), tr 76-82 Nguyễn Lê Hoa (2001), Xác định tỷ lệ nhiễm số đặc tính sinh vật hoá học vi khuẩn gây bệnh đường hô hấp lợn: p multocida, B bronchiseptica, H parasuis, A pleuropneumonia biện pháp phòng trị Luận văn Thạc sĩ khoa học nông nghiệp, Viện Thú y quốc gia, Hà Nội Trịnh Quang Hiệp (2004), Xác định số đặc tính sinh vật hoá học, độc 70 bệnh đường hô hấp lợn nuôi số tỉnh phía Bắc Tạp chí KHKT thú y, 7(4), tr 25-32 Nguyễn Vĩnh Phước (1978) Giáo trình bệnh truyền nhiễm gia súc Nhà xuất Nông thôn Nguyễn Như Thanh (2001) Giáo trình Vi sinh vật thú ỵ Nhà xuất Nông nghiệp 10 Đỗ Ngọc Thuý cs (2007) ứng dụng kỹ thuật PCR để định type giáp mô Tài liệu nước ngoài: 12 Ahn, D c and Kim, B H (1994), Toxigenicity ancl capsular serotypes of pasteureỉỉa multocida isolated from pneumonic lungs of slaughter pigs, Pi "OC, Int, Pig vet, Soc Congr, p 165 13 Bain, R V s.; De Alwis, M c L.; Carter, G R and Gupta, B K (1982), Haemorrhagic septỉcemiae, Animal Production and Health, Paper N°33, FAO, Roma 71 pleuropneumoniae in eastern England, Vet Rec 117: p 143 - 147 17 Buttenschon, J (1991), The Primary structure of staphylococcal enterotoxin B.3 The cyanogen bronmide peptides of reduced and aminoethylated enterotoxin B, and the complete amino acid sequence 18 Carter, G R (1952), Type speciỷĩc capsular antigens of Pasteurella multocida Canadian Joumal of Medical Science, 30: p 48 - 53 19 Carter, G R (1955), Studies on Pasteurelỉa multocida I.A Haemagglutination test for identiỷỉcation of serological types American Joumal of Veterinary Research, 16: p 481 - 484 20 Carter, G R (1984), Pasteuralla, Yersinia, and Franciella, p 111 - 121 in: Diagnostic procedures in veterinary bacteriology and Mycology 4th ed (Carter G.R, ed) Charles c, Thomas Publisher, Springíield 21 Carter, G R (1987), Serological classiỷìcation of Pasteurella multocida Vet Rec, 121(16), p 382-383 22 Cho, w s and Chae, c (2001), Expression of the Apx IV Gene in pigs 72 toxins: Uniỷbrm designation of haemolysins, cytolysins pleurotocin and their genes J Gen Microbiol, 139: p 1723 - 1728 27 Fuentes, M and Pijoan, c (1986), Phagocytosis and intracellular killing of Pasteurella multocida by porcine alveolar macrophages ạỷìer inýection xvith pseudorabies virus Vet Immunol Immunopathol, 13(1-2), p: 165-172 28 Gilbride, K A and Rosendal, s (1984), Antimicrobial susceptibility of 51 strains of Heamophilus pleuropneumoniae Can J Comp Med, 48: p 47 - 50 29 Heddleston, K L (1972), Fowl cholera: Gel Dijfusion Precipitation test for serotyping Pasteurella multocida oý avian species Avian disease, 16, p 925-936 30 Inoue, A.; Yamamoto, K.; Hirano, N.; and Murakami, T (1984), Drug 73 porcine upper respiratory tract cells Current Microbiol 15: p 115-119 36 Jensen, A E and Bertram, T A (1986), Morphological and biochemỉcal comparison of virulent and avirulent isolates of Haemophilus pleuropneumoniae serotype Infect Immun, 51, p 419-424 37 Kilian, M.; Nicolet, J.; and Biberstein, E L (1978), Biochemical and serological characterization of Haemophilus pleuropneumoniae Int J Syst Bacteriol 28: p 20 - 26 38 Lariviere, s.; Nadaeu, M.; Higgins, R.; and Martineau, G p (1988), Minimal inhibitory concentrations of antimicrobial agents againts Actinobacilluspleuropneumoniae Can J Vet Res 52: p 315 - 318 39 Manninger, R (1991), Concernỉng a mutation of the fowl choỉera bacillus Zentralblbakteriol Abt I Orig, 83, p 520 - 528 40 Mittal, K R.; Higgins, R.; and Lariviere, s (1983), An evaluation of agglutination and coagglutination 74 techniques for serotyping of Actinobacillus pleuropneumoniae Can Vet J, 29: p 578 - 580 45 Nielsen, J p and Rosdahl, V T (1988), Phage - typing of toxigenic Pasteurella multocida Proc Int Congr Pig Vet Soc 10: 34 46 Pattison, I H.; Howell, D G and Elliot, J (1957), A Haemơphilus like organism isolated from pig lung and associated pneumonic lesion J Comp Pathol, 67, p 320-329 47 Perry, M B.; Altman, E.; Brisson, J R.; Beynon, L M and Richards, J c (1990), Structural Polysaccarits and classiỷỉcation of characteristics Lipopolysaccarits Actinobacillus of the involved antigenic in ịHaemophilus) the c seroỉogical pleuropneumoniae strains Serodiagnosis and Immunotherapy in Inf Dis, 4: p 299 - 48 Pijoan, capsular 308 and Fuentes, M (1987), Severe pleuritis associated with certain strains of Pasteurella multocida in swine J Am Vet Med Assoc ,191: p 823826 49 Pijoan, c and Fuentes, M (1989), Pleuritis ejfect on growth understimated Int Pig Lett 9: p 17 - 19 50 Pijoan, c and Troso, E (1989), Bacterial adhesion to mucosal surỷaces with special reýerence to the Pasteurella multocida isolates from atrophic rhinitis Can J vet Sci 54: p 516 - 521 75 52 Prescott, J F and Baggot J D (1993), Antimicrobial Therapy in veterinarỵ Medicine Ames: Iowa State Univ Press 53 Rapp - Gabrielson, V J; Kocur, G J.; Clark, J T.; and Muir, s K (1985), Virulence of dijferent serovars of Haemophilus parasuis for cesarean derived, colostrum deprived pigs In Haemophilus, ActinobacUlus, and pasteurella Ed w Donachie, F.A Lainson, and J.c Hodgson New York: Plenum Press, p 204 54 Salmon, s A.; Watts, J.L.; Case , C.A.; Hoffman LJ.; Wegener, H.C.; and Yancey, R.J Jr., (1995), Comparison of MICs of Ceỷìioỷur and other antimicrobial agent against bacterial pathogens of swine from the United State Canada and Denmark J Clin Microbiol 33 (9): p 2435 - 2444 55 Smith, I M and Baskerville, A J A selection medium for isolation of Pasteurella multocida in nasal specimens pigs British Veterinary Joumal, 139 183, p 476-486 56 Steffens, w L.; Byrd, w and Kadis, s (1990), identiỷĩcation and localization of surýdce sialylated glycoconjugates in Actinobacillus pleuropneumoniae by direct emyme-colloidal gold cytochemistry Vet Microbiol 25, p 217-227 76 [...]... nhiên cơ chế gây bệnh khác có thể tham gia trong quá trình sinh bệnh khi sự tổn thương vẫn phát triển sau khi lợn bị phơi nhiễm với vi khuẩn sống, có hiệu giá huyết thanh cao với lipit A và phần carbohydrat của phân tử LPS 1.2.2 Bệnh vi m phổi - màng phổi ở lợn do vi khuẩn A pleuropneumoniae gây ra Vi khuẩn A pleuropneumoniae là một tác nhân gây bệnh vi m phổi màng phổi ở lợn Đây là một bệnh truyền... tiêu chuẩn xác định mức độ nghiêm trọng của bệnh Triệu chứng lâm sàng của bệnh ở thể này giống như vi m màng phổi do A pleuropneumoniae gây ra, nhưng những đặc điểm phân biệt chính là bệnh vi m phổi do p multocida hiếm khi gây ra chết đột ngột, hơn nữa lợn mắc bệnh vi m phổi do p multocida gây ra có thể tồn tại một thời gian dài - Thể mãn tính: Đây là thể đặc trưng thường thấy của bệnh, lợn bệnh thỉnh... lại vi khuẩn p multocida Tuy nhiên, để điều trị có hiệu quả bệnh đường hô hấp do vi khuẩn p multocida gây ra phải dựa trên kết quả kháng sinh đồ vì vi khuẩn rất dễ kháng thuốc và thường kết hợp gây bệnh với một số loại vi khuẩn đường hô hấp khác như Mycoplasma, Actinobacillus, 12 1.2 Vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae và bệnh do vi khuẩn gây ra ở lợn 1.2.1 Vi thuộc khuẩn giống Vi khuẩn Actinobcicillus... những vi khuẩn này sẽ nhanh chóng tăng cường về số lượng, độc lực, xâm nhập sâu vào bên trong đường hô hấp đến phổi và gây bệnh 1.1.2 Bệnh vi m phổi ở lợn do vi khuẩn p multocida gây ra 7 truyền nhiễm do M hyopneumoniae khởi phát hoặc ở những bệnh ghép 1.12.1 Đặc điểm dịch tễ Vi khuẩn p multocida được phát hiện thấy trong tất cả các đàn lợn ở mọi lứa tuổi, có thể tồn tại trong niêm mạc mũi và hầu họng của. .. đại thể ở các trường hợp quá cấp tính, các vùng vi m phổi trở nên sẫm màu và chắc kèm theo vi m màng phổi có ít hoặc không có tơ huyết Vi m màng phổi tơ huyết thường rất rõ ở các gia súc chết trong giai đoạn cấp tính của bệnh ít nhất 24 giờ sau khi nhiễm trùng và khoang màng phổi chứa dịch lẫn máu Khi tổn thương tiến triển nặng hơn, vi m màng phổi tơ huyết trên vùng phổi tổn thương trở nên xơ và có thể... để phòng các bệnh truyền nhiễm nói chung và bệnh vi m phổi do p multocida gây ra nói riêng như: Giữ vệ sinh chuồng trại, chuồng nuôi thông thoáng, hợp lý, quản lý chăm sóc tốt, nhất là thức ăn, nước uống cho lợn phải đầy đủ Bên cạnh đó cần sử dụng vacxin để phòng bệnh vi m phổi do p multocida gây ra cho lợn Hiện nay, ở nước ta đã có một số loại vacxin vô hoạt dùng cho vi c phòng bệnh vi m phổi do p multocida. .. có vai trò quan trọng trong sự bám dính của vi khuẩn lên tế bào biểu mô và lớp màng nhầy khí quản của lợn (Perry và cs, 1990 [47]) Bám dính là hoạt động ban đầu giúp cho sự xâm nhập của vi khuẩn và có thể là đặc tính gây bệnh, là nguyên nhân gây ra bệnh Những nghiên cứu gần đây chỉ ra rằng phần LPS của A pleuropneumoniae có vai trò trong sự phát triển tổn thương hay gây chết lợn khi bị nhiễm vi khuẩn. .. những bệnh tích ở phổi 1.1.2.4 Chẩn đoán Vi c chẩn đoán đúng bệnh do vi khuẩn p multocida gây ra là hết sức cần thiết, do đó cần tiến hành đồng thời nhiều phương pháp như: Dịch tễ học, chẩn đoán lâm sàng, giải phẫu bệnh lý và đặc biệt là dựa trên kết quả xét nghiệm vi khuẩn học trong phòng thí nghiệm Vi khuẩn p multocida là vi khuẩn tương đối dễ nuôi cấy, phân lập trong phòng thí nghiệm Những mẫu bệnh. .. không Những lợn bị bệnh thường ở giai đoạn lớn (10 16 tuần tuổi) 9 bệnh tích chủ yếu để phân biệt bệnh vi m phổi do Pasteurella với vi m phổi do Actinobacillus, trong đó thường thấy mủ chảy ra có màu vàng và dính cùng với rất nhiều sợi fibrin (Pijoan, 1989 [49]) Một đặc điểm nữa là ở thuỳ phụ có dịch rỉ vi m của phế quản Mức độ nghiêm trọng của vi m phế quản là do sự tăng sản của tế bào nội mô và sự có... rất chặt màng phổi vào thành ngực Ở thể mãn tính, bệnh tích quan sát thấy là các ổ áp xe có kích thước khác nhau nằm chủ yếu ở trên thùy hoành và giới hạn với tổ chức xung quanh bởi một vỏ mô liên kết mỏng, một số vùng của màng phổi có thể bị vi m dính vào thành ngực 1.22.4 Bệnh lý học Bệnh lý học của bệnh vi m phổi - màng phổi đã được nghiên cứu một cách kỹ lưỡng về cả vấn đề phát triển của các tổn ... trừ bệnh đường hô hấp có sở khoa học, tiến hành nghiên cứu đề tài: Xác định vai trò gây bệnh vi m phổi - màng phổi lợn vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae, Pasteurella multocida thử nghiệm. .. 1.2.2 Bệnh vi m phổi - màng phổi lợn vi khuẩn A pleuropneumoniae gây Vi khuẩn A pleuropneumoniae tác nhân gây bệnh vi m phổi màng phổi lợn Đây bệnh truyền nhiễm quan trọng đường hô hấp lợn xảy... giá vai trò gây bệnh hô hấp số vi khuẩn Chế tạo thử nghiệm Autovacxin sử dụng phòng bệnh đường hô hấp cho lợn TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Vi khuẩn Pasteurella multocida bệnh vi khuẩn gây lợn 1.1.1 Vi