Luận Văn Nguyên Cứu Xạ Khuẩn

-1-1ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM    BÙI THỊ HÀ NGHIÊN CỨU XẠ KHUẨN THUỘC CHI STREPTOMYCES SINH CHẤT KHÁNG SINH CHỐNG NẤM GÂY BỆNH TRÊN CÂY CHÈ Ở THÁI NGUYÊN Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60.42.30 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn -2-2- LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới cô giáo TS Vi Thị Đoan Chính tận tình giúp đỡ trình thực hoàn thành luận văn Xin chân thành cảm ơn ThS Nguyễn Phú Hùng cán môn Sinh học thuộc Khoa KHTN & XH - ĐHTN nhiệt tình giúp đỡ Xin chân thành cảm ơn PGS TS Ngô Đình Quang Bính cán phòng Di truyền vi sinh học - Viện Công nghệ sinh học thuộc Viện khoa học công nghệ Việt Nam Xin cảm ơn Ban lãnh đạo Trƣờng Đại học Y - Dƣợc Thái Nguyên, Khoa Sinh - KTNN, Khoa Sau Đại học - Trƣờng Đại học Sƣ phạm - ĐHTN tạo nhiều điều kiện để hoàn thành luận văn Xin cảm ơn Ban chủ nhiệm khoa KHCB, Bộ môn Hóa - sinh tạo điều kiện cho đƣợc học tập hoàn thành luận văn Tôi xin cảm ơn thầy cô, bạn bè đồng nghiệp động viên, tạo điều kiện giúp đỡ suốt trình làm luận văn Lời cảm ơn sâu sắc xin dành cho gia đình ngƣời thân yêu Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn -3-3- LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nghiên cứu luận văn trung thực chƣa đƣợc công bố công trình khác Thái nguyên, ngày 15 tháng năm 2008 Tác giả Bùi Thị Hà Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn -4-4- MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cảm ơn Lời cam đoan Mục lục Những chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình vẽ, đồ thị MỞ ĐẦU Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 GIỚI THIỆU KHUẨN VỀ XẠ 1.1.1 Phân bố xạ khuẩn tự nhiên 1.1.2 Đặc điểm hình thái xạ khuẩn 1.1.3 Sự hình thành bào tử xạ khuẩn .5 1.1.4 Cấu tạo xạ khuẩn 1.2 CÁC PHƢƠNG PHÁP PHÂN LOẠI XẠ KHUẨN HIỆN ĐẠI 1.2.1 Đặc điểm hình thái tính chất nuôi cấy 1.2.2 Đặc điểm hóa phân loại (Chemotaxonomy) 1.2.3 Đặc điểm sinh lý - sinh hóa .10 1.2.4 Phân loại số (Numerical taxonomy) 10 1.2.5 Phân loại xạ khuẩn chi Streptomyces 11 1.3 CHẤT KHÁNG KHUẨN .12 SINH TỪ XẠ 1.3.1 Lƣợc sử nghiên cứu chất kháng sinh 12 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn -5-51.3.2 Sự hình thành chất kháng sinh xạ khuẩn 15 1.3.3 Các yếu tố ảnh hƣởng đến sinh tổng hợp chất kháng sinh 16 1.4 MỘT SỐ BỆNH HẠI CHÈ DO NẤM GÂY RA VÀ ỨNG DỤNG CỦA CKS TRONG BẢO VỆ THỰC VẬT 18 1.4.1 Một số bệnh hại chè nấm 18 1.4.2 Các chất kháng sinh bảo vệ thực vật .21 Chƣơng - NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu chất .24 hóa 2.1.1 Nguyên liệu 24 2.1.2 Hóa chất, dụng cụ thiết bị .24 2.2 Phƣơng pháp cứu 27 2.2.1 Phƣơng pháp chè 27 phân lập nấm gây 2.2.2 Phân lập tuyển khuẩn 28 nghiên bệnh từ chọn mẫu xạ 2.2.2.1 Phân lập xạ khuẩn theo Vinogradski 28 2.2.2.2 Xác định hoạt tính kháng sinh 28 2.2.2.3.Tuyển chọn chủng xạ khuẩn sinh chất kháng sinh 29 2.2.3 Bảo giống 29 quản 2.2.4 Nghiên cứu đặc điểm sinh học phân loại xạ khuẩn 30 2.2.4.1 Đặc điểm hình thái 30 2.2.4.2 Đặc điểm nuôi cấy 31 2.2.4.3 Đặc điểm sinh lý - sinh hóa 31 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn -6-62.2.5 Lên men tạo sinh .32 kháng 2.2.5.1 Lựa chọn môi trƣờng lên men thích hợp 32 2.2.5.2 Ảnh hƣởng nguồn cacbon 33 2.2.5.3 Ảnh hƣởng nguồn Nitơ 33 2.2.6 Các phƣơng pháp sinh học phân tử phân lập gen 16S rRNA 33 2.2.6.1 Tách chiết DNA xạ khuẩn đệm CTAB 33 2.2.62 Khuếch đại gen 16S - rRNA phản ứng PCR 34 2.2.6.3 Phƣơng pháp điện di gel agarose 35 2.2.7 Phƣơng pháp xử liệu 36 lý số Chƣơng - KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Phân lập khiết chủng nấm gây bệnh chè 37 3.2 Phân lập tuyển chọn xạ khuẩn 38 3.2.1 Hoạt tính kháng nấm chủng xạ khuẩn 38 3.2.2 Tuyển chọn chủng xạ khuẩn có HTKN cao 41 3.3 Đặc điểm sinh học đặc điểm phân loại chủng XK Đ1 R2 42 3.3.1 Đặc điểm hình thái 42 3.3.2.Đặc điểm nuôi cấy 43 3.3.3 Đặc điểm sinh lý - sinh hóa .45 * Khả đồng hóa nguồn cacbon .45 * Nhiệt độ sinh trƣởng thích hợp 46 * Khả chịu muối 46 * Khả sinh enzym ngoại bào 47 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn -7-73.3.4 Hoạt tính kháng sinh chủng R2 Đ1 48 3.3.5 Vị trí phân loại hai chủng xạ khuẩn R2 Đ1 50 3.4 Khả sinh tổng hợp CKS chủng xạ khuẩn lựa chọn 52 3.4.1 Lựa chọn môi trƣờng hợp 52 lên men thích 3.4.2 Ảnh hƣởng cacbon 54 nguồn 3.4.3 Ảnh hƣởng nitơ 56 nguồn 3.5 Phân loại chủng xạ khuẩn theo phƣơng pháp sinh học phân tử 57 3.5.1 Kết tách chiết DNA tổng số chủng xạ khuẩn 57 3.5.2 Kết nhân gen 16S - rRNA phản ứng PCR 58 Chƣơng - KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận .60 Kiến nghị nghiên cứu 61 CÔNG TRÌNH CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN 62 TÀI LIỆU KHẢO 63 NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN XK : Xạ khuẩn VSV : Vi sinh vật Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên THAM http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn -8CKS -8: Chất kháng sinh HSCC : Hệ sợi chất HSKS : Hệ sợi khí sinh KTKS : Khuẩn ty khí sinh HTKS : Hoạt tính kháng sinh HTKN : Hoạt tính kháng nấm MT : Môi trƣờng KHVQH : Kính hiển vi quang học KHVĐT : Kính hiển vi điện tử DNA : Deoxyribonucleic Acid RNA : Ribonucleic Acid ISP : International Streptomyces Project TE : Tris - Ethylendiamin tetracetic acid SDS : Sodiumdodecyl sulfat TAE : Tris - Acetate - Ethylendiamin tetracetic acid PCR : Polymerase polymerase) chain reaction (phản ứng chuỗi DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn -9-9Bảng 3.1 Đặc điểm số mẫu chè làm nguồn phân lập chủng nấm 37 Bảng 3.2 Xạ khuẩn có màu 39 hoạt tính kháng nấm theo nhóm Bảng 3.Tính đối kháng xạ khuẩn với chủng nấm gây bệnh chè .40 Bảng Hoạt tính khuẩn 41 kháng Bảng 3.5 Đặc điểm nuôi Đ1 .44 nấm cấy của chủng xạ R2 chủng Bảng 3.6 Khả đồng hóa nguồn cacbon chủng xạ khuẩn Đ1 R2 45 Bảng 3.7 Nhiệt độ sinh trƣởng thích hợp chủng R2 Đ1 46 Bảng 3.8 Khả Đ1 47 chịu muối chủng R2 Bảng 3.9 Hoạt tính kháng sinh chủng R2 Đ1 với chủng nấm kiểm định .48 Bảng 3.10 So sánh đặc điểm phân loại chủng R2 với S misawaensis 50 Bảng 3.11 So sánh đặc điểm phân loại chủng Đ1 với A brunneofungu.52 Bảng 3.12: Hoạt tính kháng sinh chủng xạ khuẩn môi trƣờng lên men khác 53 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn -10-10Bảng 3.13 Ảnh hƣởng nguồn cacbon lên khả sinh tổng hợp CKS chủng R2 Đ1 55 Bảng 3.14 Ảnh hƣởng nguồn nitơ lên khả sinh tổng hợp CKS chủng R2 Đ1 .56 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Trang Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn -74-74Để nghiên cứu ảnh hưởng nguồn cacbon lên khả sinh trưởng hình thành CKS, đồng thời xác định nguồn cacbon thích hợp cho chủng R2 Đ1, tiến hành khảo sát số nguồn cacbon thông thường sử dụng để lên men CKS Bảng 3.13 Ảnh hƣởng nguồn cacbon lên khả sinh tổng hợp CKS chủng R2 Đ1 Các tiêu Ký hiệu chủng Nguồn cacbon Sinh khối R2 17,44 ± 0,22 16,23 ± 0,42 Đ1 18,53 ± 0,45 15,75 ± 0,33 11,55 ± 0,15 17,26 ± 0,34 HTKS R2 15,24 ± 0,36 18,21 ± 0,32 20,23 ± 0,61 21,22 ± 0,78 Đ1 17,53 ± 0,16 16,82 ± 0,58 16,34 ± 0,74 18,29 ± 0,65 Glucose Tinh bột Lactose Sacarose 13,58 ± 0,56 18,93 ± 0,57 Kết trình bày bảng 3.13 cho thấy: chủng xạ khuẩn R2 Đ1 có khả sử dụng nguồn đường nghiên cứu Tuy nhiên ảnh hưởng nguồn cacbon lên sinh trưởng khả tạo kháng sinh chủng có khác Đối với chủng R2 nguồn cacbon sacarose cho sinh khối lớn HTKS mạnh Chủng Đ1 nguồn cacbon Glucose cho sinh khối lớn sacarose có HTKS mạnh Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm http://www.lrc-tnu.edu.vn -75-75- Hình 3.11: Ảnh hƣởng nguồn cacbon đến khả tổng hợp CKS 3.4.3 Ảnh hƣởng nguồn nitơ Nitơ nguồn dinh dưỡng thiếu VSV nói chung xạ khuẩn nói riêng Trong môi trường lên men, nguồn nitơ có ảnh hưởng nhiều đến tổng hợp CKS xạ khuẩn [3] Nguồn nitơ sử dụng môi trường lên men xạ khuẩn dạng vô hữu Vì tiến hành khảo sát ảnh hưởng nguồn nitơ đến khả sinh tổng hợp CKS chủng xạ khuẩn nghiên cứu Bảng 3.14 Ảnh hƣởng nguồn nitơ lên khả sinh tổng hợp CKS Nồng Nguồn nitơ độ chủng R2 Đ1 Sinh khối Hoạt tính kháng sinh (mg/ml) Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Học liệu – Đại học Thái Nguyên (D-d,mm) http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm http://www.lrc-tnu.edu.vn -76(%) -76R2 Đ1 R2 Đ1 Bột đậu tương 12,6 ± 0,25 11,2 ± 0,32 21,63 ± 0,58 20,32 ±0,15 Cao nấm men 13,52 ± 0,23 13,28 ±0,17 19,78 ± 0,26 19,73 ±0,52 (NH4)2SO4 9,73 ± 0,18 8,01 ± 0,22 17,65 ± 0,44 16,82 ±0,38 KNO3 7,82 ± 0,52 8,56 ± 0,24 16,92 ±0,32 14,34±0,17 Nguồn nitơ hữu sử dụng cao nấm men bột đậu tương, nguồn nitơ vô nitrat kali (KNO3) muối sunfat amon ((NH4)2SO4.) Các nguồn nitơ bổ sung vào môi trường A - 4H Quá trình lên men tiến hành bình nón 250 ml có chứa 25 ml môi trường Sau 120 nuôi lắc, thu dịch lên men xác định HTKS Kết trình bày bảng 3.14 hình 3.12 Từ kết cho thấy chủng xạ khuẩn nghiên cứu sinh trưởng tốt môi trường có nguồn nitơ hữu bột đậu tương cao nấm men Song chưa rõ có khác rõ rệt nguồn nitơ Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm http://www.lrc-tnu.edu.vn -77-77Hình 3.12 : Ảnh hƣởng nguồn nitơ đến khả tổng hợp CKS Cũng sinh trưởng, HTKS chủng nghiên cứu cao môi trường có bột đậu tương cao nấm men Các kết khẳng định ưu nguồn nitơ hữu lên khả sinh trưởng sinh tổng hợp CKS xạ khuẩn nói chung Điều giải thích nguồn nitơ hữu cơ, thành phần protein chứa chất cần thiết cho trình tổng hợp CKS Kết nghiên cứu phù hợp với số kết công bố trước [14] 3.5 Phân loại chủng xạ khuẩn theo phƣơng pháp sinh học phân tử 3.5.1 Kết tách chiết DNA tổng số chủng xạ khuẩn Trong nghiên cứu này, tiến hành tách chiết DNA từ chủng xạ khuẩn Đ1 R2 Trước tiến hành tách chiết DNA, chủng xạ khuẩn nuôi cấy môi trường tăng sinh để thu sinh khối tế bào DNA tách chiết theo phương pháp Ausubel cs có cải tiến [39] trình bày Kết tách chiết kiểm tra cách điện di gel agarose 0,8% trình bày hình 3.13 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm http://www.lrc-tnu.edu.vn -78-78Đ1 R2 Hình 3.13 Ảnh điện di DNA tổng số chủng xạ khuẩn Trên sở kết thu hình 3.13 cho thấy DNA tách từ chủng xạ khuẩn nêu Tương ứng với chủng, sản phẩm điện di có băng chứng tỏ DNA không bị đứt gãy trình tách chiết Hàm lượng DNA thu tương đối lớn có độ cao Như vậy, nói DNA thu trình tách chiết đạt yêu cầu đề Sản phẩm DNA đáp ứng tốt cho nghiên cứu khuếch đại gen 16S - rRNA phản ứng PCR 3.5.2 Kết nhân gen 16S - rRNA phản ứng PCR Để tạo tiền đề cho việc định loại chủng xạ khuẩn phân lập nêu trên, nghiên cứu tiến hành khuếch đại gen 16S rRNA Đây gen thị dùng phổ biến định loại VSV Cặp mồi thiết kế để khuếch đại cho phản ứng PCR cho phép khuếch đại Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm http://www.lrc-tnu.edu.vn -79-79trình tự trọn vẹn gen 16S - rRNA, đảm bảo tốt cho nghiên cứu tách dòng xác định trình tự đầy đủ gen Kết khuếch đại gen trình bày hình 3.14 Hình 3.14 Ảnh điện di sản phẩm PCR chủng xạ khuẩn nghiên cứu M Maker ΦX174 cắt Hind III 3,4 chủng Đ1 5,6 Chủng R2 Dựa kết điện di hình 3.14 cho thấy chủng xạ khuẩn Đ1 R2 có nhân lên gen 16S - rRNA Sản phẩm PCR có độ đặc hiệu cao, sản phẩm phụ Mặt khác, dựa DNA maker chuẩn cho thấy sản phẩm PCR có kích thước khoảng 1,5 kb tương ứng với kích thước theo tính toán lý thuyết trình lựa chọn mồi Như kết luận đoạn DNA nhân lên gen 16S - rRNA Kết sở quan trọng để tiếp tục tách dòng xác định trình tự đầy đủ gen 16S chủng nghiên cứu Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm http://www.lrc-tnu.edu.vn -80-80- Chƣơng KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 KẾT LUẬN Từ mẫu đất khác nhau, phân lập khiết 80 chủng xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces, số có 30 chủng có hoạt tính kháng nấm gây bệnh chè mức độ khác nhau, chiếm tỷ lệ 37,5% Trong số chủng có hoạt tính kháng nấm, nhóm trắng chiếm 36,7%, xám 26,7%, xanh - 23,3%, hồng - 6,7%, nâu - 3,3%, lục - 3,3% Đã tuyển chọn chủng xạ khuẩn Đ1 R2 có hoạt tính mạnh số 30 chủng có hoạt tính kháng nấm, kháng chủng nấm gây bệnh chè CT - 2E CT - 5X, đồng thời có khả kháng nấm kiểm định Đã tiến hành xác định đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa, khuếch đại gen 16S - rRNA để nhận định: - Chủng R2 loài Streptomyces misawaensis - Chủng Đ1 loài Actinomyces brunneofungus Đã xác định số điều kiện lên men thích hợp cho sinh tổng hợp CKS chủng xạ khuẩn - Môi trường A - 4H thích hợp cho lên men tạo chất kháng sinh cho chủng xạ khuẩn Đ1 R2 - Nguồn cacbon thích hợp để tổng hợp CKS chủng R2 Sacarose chủng Đ1 glucose Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm http://www.lrc-tnu.edu.vn -81-81- Bột đậu tương cao nấm men nguồn nitơ hữu thích hợp cho lên men CKS chủng xạ khuẩn KIẾN NGHỊ VỀ NHỮNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO Tiếp tục nghiên cứu để giải trình tự gene 16S hai chủng xạ khuẩn Đ1 R2 Tiếp tục nghiên cứu khả tổng hợp CKS hai chủng Đ1 R2 Tách chiết xác định chất hóa học CKS Tìm hiểu khả ứng dụng CKS thô cần khảo nghiệm diện rộng để đánh giá hiệu sử dụng công tác bảo vệ thực vật Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm http://www.lrc-tnu.edu.vn -82-82- CÔNG TRÌNH CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN Bùi Thị Hà, Vi Thị Đoan Chính (2008), "Khả kháng nấm gây bệnh chè số chủng xạ khuẩn phân lập từ đất Thái Nguyên", Tạp chí khoa học công nghệ, số (46), tr 92 - 96 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm http://www.lrc-tnu.edu.vn -83-83- TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Bộ nông nghiệp phát triển nông thôn (2006), Kỹ thuật trồng,chăm sóc chế biến chè, NXB Nông nghiệp, tr 72 - 77 Ngô Đình Quang Bính (2005), Vi sinh vật học công nghiệp, Viện sinh thái tài nguyên sinh vật, Trung tâm khoa học Tự nhiên công nghệ Quốc gia, Hà Nội, tr.53 - 71 Nguyễn Văn Cách (2004), Công nghệ lên men chất kháng sinh, NXB khoa học kỹ thuật, Hà Nội Chi cục bảo vệ thực vật Phú Thọ, Sử dụng an toàn, hiệu thuốc bảo vệ thực vật chè, 07/2003, tr 24 - 30 Nguyễn Hoàng Chiến (2000), Nghiên cứu chủng xạ khuẩn Streptomyces V6 sinh chất kháng sinh chống vi khuẩn gây bệnh héo xanh cà chua, Luận văn thạc sĩ sinh học, Hà Nội Vi Thị Đoan Chính (2000), Nghiên cứu khả nâng cao hoạt tính kháng sinh chủng Streptomyces rimosus R77 Streptomyces hygroscopicus 5820 kỹ thuật dung hợp tế bào trần, Luận án TS sinh học, Viện công nghệ sinh học, Hà Nội Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm http://www.lrc-tnu.edu.vn -84-847 Nguyễn Lân Dũng, Phạm Thị Trân Châu (1978), Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học - Tập III NXB khoa học kỹ thuật, Hà Nội Nguyễn Lân Dũng, Đoàn Xuân Mượu, Nguyễn Phùng Tiến, Đặng Đức Trạch, Phạm Văn Ty (1972), Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học, Tập I, NXBKHKT Hà Nội, 328 - 345 Nguyễn Lân Dũng, Phạm Văn Ty, Nguyễn Đình Quyến (1977), Vi sinh vật học - tập II, Nhà xuất Đại học Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội 10 Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty (2002), Vi sinh vật học, Nhà xuất Giáo Dục, Hà Nội, tr 39 - 41 11 Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Nữ Kim Thảo, Các nhóm vi khuẩn chủ yếu, Vietsciences, 15/02/2006 12 Nguyễn Thành Đạt (2000), Sinh học vi sinh vật, NXB Giáo dục 13 Nguyễn Thành Đạt, K.A Vinogradva V.A.Poltorac (1974), Tính biến dị bề mặt bào tử Xạ khuẩn sinh choromomycin, Act.A buraviensis, microbiologia, TXL III, N5, NXB Academia cccp 14 Bùi Thị Việt Hà (2006), "Nghiên cứu xạ khuẩn sinh chất kháng sinh chống nấm gây bệnh thực vật Việt Nam", Luận án tiến sĩ sinh học, Hà Nội 15 Đỗ Thu Hà (2004) Nghiên cứu xạ khuẩn sinh chất kháng sinh chống nấm phân lập từ đất Quảng Nam-Đà Nẵng, Luận án tiến sĩ sinh học, Hà Nội Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm http://www.lrc-tnu.edu.vn -8516 -85Lê Gia Hy (1994), "Nghiên cứu Xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces sinh chất kháng sinh chống nấm gây bệnh đạo ôn thối cổ rễ phân lập Việt Nam", Luận án Tiến sĩ, Hà Nội 17 Lê Gia Hy, Nguyễn Quỳnh Châu, Phạm Kim Duy, "Ảnh hưởng canxi coban lên khả sinh tổng hợp clotetraxyclin vitamin B12 phương pháp lên men bề mặt", Tạp chí sinh học, số 4, 1992 18 Lê Gia Hy cộng (1992), "Tính đối kháng xạ khuẩn phân lập từ đất Việt Nam bệnh đạo ôn", Tạp chí Sinh học, tập 14, số 4, 11 - 12 19 Lê Mai Hương (1993), Nghiên cứu Xạ khuẩn sinh chất kháng sinh phân lập Hà Nội vùng phụ cận, luận án tiến sĩ, Hà Nội 20 Biền Văn Minh (2000), Nghiên cứu khả sinh chất kháng sinh số chủng xạ khuẩn phân lập từ đất Bình Trị Thiên, Luận án tiến sĩ sinh học, Hà Nội 21 Lương Đức Phẩm (1998), Công nghệ vi sinh vật, NXB Xây dựng, Hà Nội, tr.47-49 22 Lê Xuân Phương (2001), Vi sinh vật học công nghiệp, Nhà xuất xây dựng, Hà Nội, tr.47 - 49 TIẾNG ANH 23 Berdy,J (1974), "Recent development in antibiotic research and classification of antibiotic according to the chemical structure", Adv Appl.Microbiol, 18 309 - 406 24 Demain A.L.A (1974), "How antibiotic - producing microorganism avoid suicide" Annuals of the New York academy of science, 235, 601-602 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm http://www.lrc-tnu.edu.vn -8625 -86Demain A.L.A - Fang (1995) "Emerging concept of secondary metabolism in actinomycetes", J Actinomycetologica, 9, 98 - 117 26 Furimai,T,K.Saitoh, C.Ikeda,S M.Kakushima, S.Yamamuto, K.Suzuki, Kobaru, M.Hatori and T.Oki, BSM - 181184, A new pradimicins deverative, J Antibiotics 1993, N046 (2), p - 265 - 274 27 Goldat S iu., 1958, Antibiotiki, N4, p.14-18 28 Hamada M., Okami Y 1968c In: Sazaki M., Hara T., Takeuchi T et al J Antibiot., A 21, p 37-44 29 Hopwood D.A and MJ Merrick, (1997), "Genetics of antibiotic production" , J Bacteriol, pp 596 - 636 30 Jongsik Chun, Seung B.K, youn Kyung Oh, Goodfellow M (1999), "Amycolatopsis thermoflava sp.nov, anovel soil actinomycete from Hainan Island, China", Int J, Syst Bacteriol - 49, 1369 - 1373 31 Martin, J F, A.L Demain, (1980), "Control of antibiotics synthesis", Microbiol Rev, 44 (2): 230 - 252 32 Miyadoh S (2001), Identification manual of Actinomycetes, Business Center for Academic Scieties Japan 33 Newman D.J, Cragg G.M, Snader K.M, (2003), Natural products as ourees of new drugs over the period", J Nat Prod, 66, 1022 - 1037 34 Porter N, (1995), "Culture conditional for antibiotic - producing icroorganisms", Methods in enzymol, XVIII, - 23 35 Robert D Nolan, Thomas C (1988), "Isolation and Screeming of Actinomycetes" In Actinomycetes in Biotechnology, Academic Press, london Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm http://www.lrc-tnu.edu.vn -8736 -87Sezaki M, Miyadoh S, (2001), "Practically used Antibiotics and their related substances", In Indentification Manual of Actinomycetes, Japan 37 Shirling E.B, Gotilieb D (1966), " Methods for characterization of Streptomyces spectes", International Journal of Systematic Bacteriology, Vol 16, No 3, 313 - 340 38 Shirling E.B, Gotilieb D, "Cooperative deription of type cultures of Streptomyces" V.Additional descriptions, International journual of systematic Bacteriology Vol 22, 1972, p.265 - 394 39 Tobias Kieser, Mervyn Bibb, Mark J Buttner Keith F Chater, David A, Hopwood (2000), Practical Streptomyces genetics, The John Innes Foundation Norwich, p.170 - 171 40 Tong chai K, Phuripun.L, Charan, C (1995), Antibiotic Production of Actinomycetes in Forest Termite Soil, 20 - 40 41 Tresner H D, M C Davies, and E Jackus, (1961), "Electron icroscopy of Streptomyces spore morphology and its role in species ifferentiation" J Bacteriol 81, 70 - 80 42 Trerner, H.D, Buckus E.J (1963), "System of color wheels for Streptomyces taxonomy" Appl Microbiol, 11, 335 - 338 43 Waksman, S A (1961) The Actinomycetes Classification, identification and descriptions of genera and species, vol 2, The Williams & Wilkins Co., Baltimore, USA 44 Williams and Wilkin, Bergey's maunual of systematic Bacteriology, Vol 4, 1989, pp 2451 - 2492 45 Werner Braun (1976), Di truyền học vi khuẩn (Người dịch Lê Đình Lương), NXB khoa học kỹ thuật, Hà Nội Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm http://www.lrc-tnu.edu.vn -8846 -88Weinberrg E.D (1973), Secondary metabolism Control by temperature and inorganic photphate, Ind Microbiol 15, - 14 47 Yoo JC, Kim JH, Ha JW, Park NS, Sohng JK, Production and biological activity of laidlomycin, anti - MRSA/ VRE antibiotic from streptomyces sp, CS684, J Microbiol, 2007/ 2, 45 (1): - 16 TIẾNG NGA 48 Н.А Красилников (1971) Лучитые Грибки Издательство «Наука», Москва 49 Г Ф Гаузе, Свешникова, Т.П.Преображенская, М А Л.П.Терехова,Т.С.Максимова, (1983),Определитель Актиномицетов Издательство «Наука», Москва 50 http://www.vietnamgateway.org Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm http://www.lrc-tnu.edu.vn [...]... triển Một số xạ khuẩn có sinh ra nang bào tử bên trong chứa các bào tử nang [7] 1.1.3 Sự hình thành bào tử của xạ khuẩn Bào tử xạ khuẩn được hình thành trên các nhánh phân hóa của khuẩn ty khí sinh - gọi là cuống sinh bào tử Đó là cơ quan sinh sản đặc trưng cho xạ khuẩn Hình thái, cuống sinh bào tử và bào tử là các đặc điểm quan trọng nhất trong phân loại xạ khuẩn Cuống sinh bào tử của xạ khuẩn có dạng... thước của hệ sợi xạ khuẩn là một trong những đặc điểm phân biệt khuẩn lạc của xạ khuẩn và khuẩn lạc của nấm mốc vì hệ sợi của nấm mốc có đường kính rất lớn, thay đổi từ 5 50 m, dễ quan sát bằng mắt thường Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa bởi Trung tâm http://www.lrc-tnu.edu.vn -15-1 5Khuẩn lạc của xạ khuẩn thường chắc,... phong phú của Thái Nguyên Chúng tôi thực hiện đề tài: “Nghiên cứu xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces sinh chất kháng sinh chống nấm gây bệnh trên cây chè ở Thái Nguyên 2 Mục tiêu nghiên cứu của đề tài - Phân lập và tuyển chọn các chủng xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces có hoạt tính kháng nấm gây bệnh trên cây chè - Nghiên cứu một số đặc điểm sinh học và đặc điểm phân loại của một số chủng xạ khuẩn có hoạt tính... chất và quá trình hình thành bào tử của xạ khuẩn Nguyên sinh chất và nhân tế bào xạ khuẩn không có khác biệt lớn so với tế bào vi khuẩn Trong nguyên sinh chất của xạ khuẩn cũng chứa mezoxom và các thể ẩn nhập (các hạt polyphosphate: hình cầu, bắt màu với thuốc nhuộm sudan III và các hạt polysaccharide bắt màu với dung dịch lugol) Tuy nhiên, điểm khác biệt của xạ khuẩn so với các sinh vật prokaryote ở... nội dung nghiên cứu của đề tài * Đối tượng nghiên cứu - Các chủng xạ khuẩn sinh chất kháng sinh chống nấm phân lập từ đất Thái Nguyên - Các chủng vi nấm gây bệnh trên cây chè ở Thái Nguyên * Nội dung nghiên cứu 1 Phân lập các chủng nấm gây bệnh trên cây chè để sử dụng làm VSV kiểm định 2 Phân lập và tuyển chọn các chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng nấm từ các mẫu đất khác nhau 3 Nghiên cứu một số đặc... của khuẩn ty xạ khuẩn trong giai đọan phát triển là 11 m/giờ [43] và chất nhân của tế bào xạ khuẩn sắp xếp đều đặn theo chiều dài của sợi Do đó một đoạn sợi (mầm xạ khuẩn) hoặc một bào tử xạ khuẩn gặp điều kiện thuận lợi sẽ trương lên, sau đó 1 - 2 giờ xuất hiện quá trình tổng hợp ARN, nhân các gene cần thiết từ genom và tiến hành tổng hợp protein, cứ như vậy sợi được hình thành và phát triển Một số xạ. .. từ xạ khuẩn nói riêng là có tác dụng chọn lọc Mỗi CKS chỉ có tác dụng với một nhóm VSV nhất định Hầu hết CKS có nguồn gốc xạ khuẩn đều có Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa bởi Trung tâm http://www.lrc-tnu.edu.vn -27-27phổ kháng khuẩn rộng Khả năng kháng khuẩn của các CKS là một đặc điểm quan trọng để phân loại xạ khuẩn. .. chủng xạ khuẩn có hoạt tính chống nấm mạnh đã được lựa chọn Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa bởi Trung tâm http://www.lrc-tnu.edu.vn -13-134 Nghiên cứu ảnh hưởng của một số điều kiện nuôi cấy đến khả năng tạo thành CKS của các chủng đã lựa chọn Chƣơng 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 GIỚI THIỆU VỀ XẠ KHUẨN 1.1.1 Phân bố của xạ khuẩn. .. của xạ khuẩn Hopwood (1975) khẳng định rằng phần lớn các đặc điểm sinh lý - sinh hóa cùng đặc điểm nuôi cấy dễ bị biến động và có giá trị thấp về mặt phân loại Do tính không ổn định và biến dị cao của xạ khuẩn mà ngày nay những nguyên tắc sử dụng các đặc điểm sinh lý - sinh hóa để phân loại xạ khuẩn cũng phải thay đổi [29] Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Học liệu – Đại học Thái Nguyên. .. 1.2.5 Phân loại xạ khuẩn chi Streptomyces Chi Streptomyces là một giống xạ khuẩn bậc cao được Wakman và Henrici đặt tên năm 1943 [43] Đây là chi có số lượng loài được mô tả lớn nhất Các đại diện chi này có HSKS và HSCC phát triển phân nhánh Đường kính sợi xạ khuẩn khoảng 1 - 10 µm, khuẩn lạc thường không lớn có đường kính khoảng 1 - 5 mm Khuẩn lạc chắc, dạng da mọc đâm sâu vào cơ chất Bề mặt khuẩn lạc thường ... LIỆU 1.1 GIỚI THIỆU KHUẨN VỀ XẠ 1.1.1 Phân bố xạ khuẩn tự nhiên 1.1.2 Đặc điểm hình thái xạ khuẩn 1.1.3 Sự hình thành bào tử xạ khuẩn .5 1.1.4 Cấu tạo xạ khuẩn 1.2... trình trao đổi chất trình hình thành bào tử xạ khuẩn Nguyên sinh chất nhân tế bào xạ khuẩn khác biệt lớn so với tế bào vi khuẩn Trong nguyên sinh chất xạ khuẩn chứa mezoxom thể ẩn nhập (các hạt polyphosphate:... VỀ XẠ KHUẨN 1.1.1 Phân bố xạ khuẩn tự nhiên Xạ khuẩn (Actinobacteria) thuộc nhóm vi khuẩn thật (Eubacteria) phân bố rộng rãi tự nhiên Chúng có đất, nước, rác, phân chuồng, bùn, chí chất mà vi khuẩn