Nghiên cứu bán tổng hỢp haloperỉdol decanoat Đ o Thị Kim O a n h, N g u yễ n Hải Nam Trường Đại học Dược Hà Nội SUMMARY Haloperidol decanoate has been semisynthesized from haloperidol using an acylation reaction with decanoyl chloride The reaction conditions have been investigated and the results show that using decanoyl chloride in a 2/1 m olar equivalence to haloperidol with reaction time o f hours and dichloromethane as a solvent, the reaction yield o f 91% was obtained Đ ặ t vấn để Tâm thắn phân liệt m ộ t bệnh loạn thẩn nặng phổ biến Nhóm thuốc điều trị bệnh thuốc an thần kinh, chủ yếu dùng theo đường uổng Tuy nhiên, hấp thu theo đường uống khó kiểm soát thuốc phải dùng dài ngày nên thường gặp khó khăn điều trị Từ năm 60 kỷ XX, người ta trọng nghiên cứu phát triển thuốc tiêm tác dụng kéo dài thuận mỏng nhôm tráng sẵn silicagel GP-254 Phổ hổng ngoại ghi máy GX-Perkin-Elmer Phổ cộng hưởng từ hạt nhân ’ H ghi máy Bruker AV-500dùng DMSO làm dung m ỏi.Đ ộ chuyển dịch hóa học (6) biểu thị đơn vị phẩn triệu (ppm), lấy mốc pic chất chuẩn nội tetram ethylsilan (TMS) Phổ khối lượng ghi máy khối phổ HP-5989-MS, LC-MSDTrap-SL tiện cho người bệnh có hiệu điều trị cao [1], Thực n g h iệ m k ế t Để bán tổng hợp haloperidol khảo sát phản ứng acyl hóa haloperidol decanoyl clorid với điểu kiện phản ứng sau: Haloperidol decanoat m ộ t dạng thuốc tiêm bắp pha dầu, tác dụng kéo dài vòng tháng, đâ dùng lâm sàng [2],[3],[4],Trên th ị trường Việt Nam, thuốc tiêm bắp haloperidol decanoat có thuốc nhập ngoại, xí nghiệp nước chưa sản xuất nguyên liệu không bán rộng râi th ị trường Để bước góp phấn tự tú c nguồn nguyên liệu hóa dược nước tiến hành nghiên cứu triển khai quy trình tổng hợp haloperidol decanoat quy m ô phòng th í nghiệm Bài báo công bố kết thu từ nghiên cứu N guyên liệ u p h n g p h p n g h iê n cứu Haloperidol nguyên liệu (Merck) đạt tiêu chuẩn Dược điển Anh 98 Các hóa chất, dung môi thông thường nhập từ công ty Merck SigmaAldrich sử dụng trực tiếp không tin h chế thêm Nhiệt độ nóng chảy đo máy đo điểm chảy nhiệt điện, sắc ký lớp m ỏng sử dụng b hoâcc Điều kiện phàn ứng: a) i) NaH, DMF, 2h; ii) Decanoyl clorid; b) Pyridin, decanoyl clorid; c) Decanoyl clorid, DCM Kết thực nghiệm cho thấy phương pháp a thu sản phẩm sau phản ứng hỗn hợp chất Vết dự đoán vết sản phẩm có = 0,32 vết tạp có = 0,35 vết phụ dự đoán alken sinh từ phản ứng tách loại haloperidol Như vậy, phương pháp cho sản phẩm có lẫn tạp Phương pháp b cho thấy phản ứng xảy hoàn toàn, cho m ột vết sản phẩm Tuy nhiên, phương pháp dùng pyridin dung môi độc s khó loại sau phản ứng Phương pháp c phản ứng trực tiếp haloperidol decanoyi clorid xúc tác Kết phản ứng xảy hoàn toàn, sản phẩm thu có chất, loại xúc tác sau phản ứng Trong điểu kiện nhóm amin bậc haloperidol đóng vai trò hấp phụ HCI sinh từ phản ứng acỵl hóa Bưác xử lý phản ứng NaHCO chuyển ngược nhóm a m in đ â bị proton hóa vể dạng base ban đẩu Như vậy, điểu kiện c thuận lợi đơn giản, thích hợp cho việc thực quy mô lớn Sau lựa chọn điều kiện xúc tác cho phản ứng bán tổng hợp, tiến hành khảo sát m ột số thông số tỷ lệ chất phản ứng, thời gian phản ứng, dung mòi nhằm thu hiệu suất phản ứng cao a- Tỷ lệ m ol decanoyl clorid/haloperídol Tiến hành phản ứng acyl hóa với m mol haloperidol dung môi diclorom ethan (DCM) khan nhiệt độ 0-4°C, khuấy 10 p hú t rói nhỏ g iọ t decanoyl clorid vào bình phản ứng với tỷ lệ thay đổi Sau khuấy hỗn hợp 12 nhiệt độ phòng Kết hiệu suất thu ghi bảng Bâng Ảnh hưởng đung môi đến hiệu suâĩ phản ứng Dung môi Diclorom ethan Diethyl ether THF T o lu e n Hiệu suất (%) 92,3 90,4 94,5 60,5 64,8 95,8 94,0 633 70,6 65,1 66,5 92,4 62,9 67,4 94,0 Hiêu suất trúng bình (%) 92,3 tetrahydrofuran diclorom ethan toluen, th ời vết haloperidol nguyên liệu sau phản ứng Toluen diclorom ethan cho hiệu suất cao, diclorom ethan có nhiệt độ sôi thấp toluen độc Vì vậy, diclorom ethan lựa chọn làm dung môi phản ứng bán tổng hợp Qua khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến phản ứng bán tổng hợp, lựa chọn điểu kiện thích hợp cho phản ứng bảng Bâng Các thông sốlựa chọn cho phân ứng bán tổng /ỉợphũloperidol decơnoaĩ Tỷ iệ mol decanoyl clorid: haloperidol 2:1 Thời qian qiờ Dung môi phản ứng Dicloromethan Hiệu suất (%) 91,0 Bâng ĩỷìệdeconoyldoridvàhaloperidoí (mo!:mol) Hiệu suất (%) 3:1 83,3 85,5 85,4 Hiệu suất trung bình (%) 85,1 Tỷ lệ mol decanoyl clorid: haloperidol Nhận xét: Tỷ lệ mol :1 cho hiệu suốt cao b- Thời gian phản ứng Tiến hành phản ứng với Im m o l haloperidol dung môi diclorom ethan khan nhiệt độ 0-4°C, khuấy 10 p hú t rói nhỏ g iọ t decanoyl clorid vào bình phản ứng (tỷ lệ decanoyl clorid : haloperidol = : ) Theo dõi trình phản ứng sắc ký lớp m ỏng với mốc th ời gian 30 phút, giờ, giờ, giờ, Nhận thấy, sau giờ, lượng haloperidol phản ứng hoàn toàn Với mục tiêu rút ngắn thời gian phản ứng mà đảm bảo hiệu suất cao, chúng tô i chọn th ời gian phản ứng c- Dung m ôi phản ứng Sử dụng điều kiện tỷ lệ mol thời gian phản ứng trên, chúng tô i khảo sát phản ứng m ột số dung mòi hữu thông dụng Kết khảo sát ghi bảng 2:1 1,5:1 89,6 93,0 90,5 91,0 64,2 60,6 61,0 61,9 1,2:1 55,4 50,7 53,5 53,2 Q uy trìn h chi tiế t tổ n g hỢp h a lo p e rid o l d ecanoat th e o phư ơn g phá p triể n kh n g h iê n cứu th u n h sau: Trong bình phản ứng 240 ml, hòa tan 7,5 g haloperidol (20 m mol) 100 ml diclorom ethan khan, làm lạnh khay đá Nhỏ g iọ t 8,6 ml decanoỵl clorid (40 mmol) vào bình phản ứng 30 phút, trì nhiệt độ không 10“C Sau nhỏ g iọ t decanoyl clorid, tiếp tục khuấy hỗn hợp nhiệt độ phòng (20-25°C) Chuyển hỗn hợp phản ứng sang bình chiết có chứa 200 ml NaHC03 5% làm lạnh, thêm 100 ml DCM, lắc Lấy lớp DCM, rửa NaHCO^ 5% làm lạnh, rửa nước muối bão hòa, làm khan Na^so^ khan, cất quay loại dung m ôi thu sản phẩm thô màu vàng Tinh chê' cách hòa 100 ml ethanol, thêm 100 mg than hoạt, đun nóng khoảng 60“C, khuấy 10 phút, lọc nóng Dịch lọc cô loại dung môi th u cắn Kết tinh với n-hexan/ aceton thu 9,66 g Tiến hành mẻ thu SỐ 3/2012 : Nghiên CỨUduợcThống t ln t h u õ c : 83 BÀI N G H IÊ N C Ứ U |l|Ịr Ịisir M!I' 1B' ỉ [| ÌHIBÍ Hti«n M 28,93 g, hiệu suất trung bình 91,0% Cấu trúc sản phẩm khẳng định phương pháp phổ IR, MS, ’ H NMR, NMR Các liệu phổ thu hoàn toàn phù hợp với cấu trúc haloperidol decanoat IR (KBr, em ’): 2922 (C-H),1738 (C=0, ester), 1686 (C=0, ceton), 1598, 1471 (C=C vòng thơm ) EI-MS: m /z 530 [M +H ]^ 404 (M-C,H„-1), 357 (M-C,j,H,,0j-2) ^H-NMR (500MHz, CDC/y ppm): 7,98 (2H, dd, J = 8,8 Hz, 2,7 Hz); 7,29 (2H, d, J = 7.8 Hz); 7,24 (2H, d, J = 7,8 Hz); 7,13 (2H, dd, J = 8.8 Hz, 2,7 Hz); 3,19-3,16 (2H, m); 3,05-3,02 (2H, m); 2,75-2,73 (2H, m); 2,62-2,57 (2H, m); 2,53-2,51 (2H, m); 2,23-2,07 (4H, m); 2,06-2,03 (2H, m); 1,661,16 (14H, m); 0,96-0,94 (3H, m) '^C-NMR (500MHz, CDCl^ ppm): 197,6 (C:=0, ceton); 178,8 (C=0, ester); 169,6 (-c=, vòng thơm ); 133,4; 133,3; 133,2; 130,7; 130,6; U 8,6] 126,0; 1157; 116,6 (các carbon thuộc nhân thơm ); 35,8; 35,2; 35,1; 33,9; 31,8; 31,7; 29,44; 29,41; 29,33; 29,27; 29,24; 28,85; 25,19; 24,92; 24,22; 22,65; 19,82 Bàn luận Phản ứng bán tổng hợp haloperidol decanoat phẩn thực nghiệm phản ứng acyl hóa với tác nhân decanoyl clorid Thông thường phản ứng cẩn dùng m ộ t base có vai trò vừa chất xúc tác vừa trung hòa acid hydrocloric tạo thành Với alcol bậc 3, phản ứng nhóm OH với acyl clorid thường khó cản trở không gian Để tăng tính nhân nhóm OH cách chuyển chúng thành alkoxy (RO ), đâ sử dụng base mạnh natri hydrid (NaH) Kết cho thấy điều kiện phản ứng có xảy song song với sản phẩm (Rj = 0,32) xuất m ộ t sản phẩm phụ (Rj = 0,35) Sản phẩm có th ể alken sinh từ phản ứng tách loại nhóm hydroxyl làm cho việc tinh chế gặp khó khăn, hiệu suất phản ứng không cao Tiếp tục th nghiệm với xúc tác thông thường khác pyridin, triethylam in, kết cho m ộ t sản phẩm lại gặp khó khăn khâu tinh chẻ'vì cách loại pyridin hay sửdụng acid hóa để chuyển thành dạng m uối am oni bậc rửa với nước Tuy nhiên, haloperidol có chứa n itơ bậc nên cách làm không sử dụng Với quy mô nhỏ tinh chế sản phẩm » phương pháp cột chớp nhoáng, song sê không kinh tế tiến hành quy mô công nghiệp Bản thân phân tử haloperidol có chứa n itơ bậc đóng vai trò xúc tác nội phân tử, tiến hành phản ứng trực tiếp haloperidol với decanoyl ciorid không cẩn dùng xúc tác ngoại Kết phản ứng xảy nhanh, hoàn toàn, hiệu suất cao cho m ột sản phẩm Từ phương pháp bán tổ ng hợp đâ lựa chọn, khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ mol h a lo p e rid o l: decanoyl clorid, th i gian phản ứng dung môi đến hiệu suất phản ứng Kết với tỷ lệ mol haloperidohdecanoyl clorid / , th ời gian phản ứng cho hiệu suất cao, tiế t kiệm hóa chất th ời gian Khảo sát phản ứng với dung môi thông thường diethyl ether THF, phản ứng xảy khòng hoàn toàn cho hiệu suất thấp Lý haloperidol tan dung môi Với DCM toluen, hiệu suất phản ứng đạt 90%, sản phẩm thu tinh khiết Chúng định lựa chọn dung mòi DCM có nhiệt độ sôi thấp hơn, dễ cất loại khỏi sản phẩm mà ảnh hưởng đến chất lượng sản phẩm Sản phẩm thu bước đẩu tiến hành kiểm nghiệm theo tiêu chuẩn Dược điển Anh 2003[5] Kết cho thấy ch! tiêu định tính (phổ hồng ngoại, phản ứng ion clorid), thử tinh khiết (tạp chất liên quan, m ất khối lượng làm khô, tro Sulfat) đ ịn h lượng đểu đ t th e o ỵéu cẩu Dược điển Anh 2003 Đây kết khả quan ban đẩu cho phép tiếp tục nghiên cứu để tiến hành bán tổng hợp quy mô p ilo t (kg/mẻ) Kết luận Chúng tô l khảo sát lựa chọn phương pháp bán tổng hợp haloperidol decanoat quy mô g/m ẻ với hiệu suất cao (91 %) Từ kết thu tiến hành nghiên cứu bán tổng hợp quỵ mô p ilo t để kiểm định tính ổn định phương pháp, tiến tớ i ứng dụng vào tổng hợp nguyên liệu phục vụ sản xuất thuốc TÀI LIỆU THAM KHẢO Kim Yong et al., Prodrugs o f 4'-demethyl-4-deoxypodophyllotoxin: Synthesis and evaluation o f the antitum our activity, Bioorg Med chem Lett 2002,72,3435-3438 Hemstrom C.A., Evans R.L., Lobeck F.G., Haloperidol decanoate: a depot antlpsychotic, Drug Intel, in Pharm 1988,22,290295 (tiếp trang 85) 84 i Nghiên cứu duợc Thông tin th u õ c !số 3/201 Quraishi S., David A., Depot haloperidol decanoate for schizophrenia, The Cochrane Database o f Systematic reviews, 1999, Issue I Jann M.W., Ereshefsky L., Saklad S.R., Clinical pharmacokinetics o f the depot antipsychotics, Clin Phamiacoklnetlcs, , 10, 315-353 British Pharmacopoeia, volume 1,2003,1431-1433 THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CÀO ĐỊNH LƯỢNG CIPROFLOXACIN TRONG HUYẾT TƯƠNG NGƯỜI Nguyên Tứ Sơn, Phạm Thanh Hà, Nguyễn Thị Liên Hương Hoàng Thanh Thủy, Lê Bá Hải Trườrìg Đại học Dược Hà Nội SUMMARY This study aimed to validate a simple high-performace liquid chromatographic (HPLC) method for the quantitative analysis o f ciprofloxacin in human plasma Protein in plasma was precipitated with 20% percloric acid solution Chromatographic separation o f ciprofloxacin in plasma was achieved with a Cl column with ultraviolet detection a t278 nm The mobile phase consisted o f phosphate buffer (mixture of0.025M K H fO ^ O.OSM TBA.H^SO^ pH = 3.0) and acetonitril (87/13 v/v) The method was specific and validated with a lim it o f quantification o f 0.2 m g/L.Thelntra-and inter-day coefficients o f variation were between 0.91 and 7.24% and accuracy between 1.14 and 3.62% Ciprofloxacin was stable in plasma for Ì days a t - 40°c and after three freezing-thawing cycles The method was suc cessfully applied to determine ciprofloxacin concentration In some patient plasma samples Keywords: Ciprofioxacin: HPLC; Validation Đ ặ t vấn đề Ciprofloxacin (CIP) m ột kháng sinh tổ ng hợp th uộ c nhóm Q uinolon hệ II, có hoạt phổ kháng khuẩn rộng, có hiệu tố t chủng vi khuẩn G(-) n hư trự c khuẩn mủ xanh (p.aeruginosa) Cùng với việc dùng CIP phổ biến tính kháng vi khuẩn ngày gia tăng nay, nhà chuyên môn đặt câu hỏi vé nóng độ CIP huyết tương bệnh nhân có đạt yêu cẩu hay không Điều đòi hỏi cẩn có phương pháp định lượng CIP huyết tương nhanh xác Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) dùng phổ biến để định lượng CIP loại dịch sinh học th ế giới chưa có công bố thức Việt Nam Nghiên cứu nhằm giới thiệu m ột phương pháp định lượng CIP đơn giản, nhanh chóng kết tủa protein, không dùng chất chuẩn nội Phương pháp thẩm định theo tiêu chí FDA đâ áp dụng định lượng nóng độ ciprofloxacin huyết tương bệnh nhân Phương pháp áp dụng xác định nhanh nóng độ ciprofloxacin bệnh nhân dùng ciprofloxacin để đưa định điéu chỉnh liều lượng thuốc lâm sàng N guyên liệ u p hư n g p há p n g h iê n cứu N g u y ê n liệ u , h ó a ch ất: - Ciprofloxacin.HCI chất chuẩn quóc gia (Hàm lượng 99.40%, độ ẩm %) (Viện Kiểm nghiệm Trung ương),huyết tương trắng: Viện Huyết học Trung ương - AcetonitrilJBA.HjSO^ (dùng cho HPLC, Merck, Đức), K H /0 ^ , NaOH, HjPO^, HCIO^ (đạt tiêu chuẩn tin h khiết) H ệ th ố n g v đ iề u k iệ n s c k ý Hệ thống sắc ký Agilent 1100 với bơm mẫu tự động kết nói với hệ thống máy tính, máy in ... quan ban đẩu cho phép tiếp tục nghiên cứu để tiến hành bán tổng hợp quy mô p ilo t (kg/mẻ) Kết luận Chúng tô l khảo sát lựa chọn phương pháp bán tổng hợp haloperidol decanoat quy mô g/m ẻ với hiệu... hưởng đến phản ứng bán tổng hợp, lựa chọn điểu kiện thích hợp cho phản ứng bảng Bâng Các thông sốlựa chọn cho phân ứng bán tổng /ỉợphũloperidol decơnoaĩ Tỷ iệ mol decanoyl clorid: haloperidol 2:1... hiệu suất cao (91 %) Từ kết thu tiến hành nghiên cứu bán tổng hợp quỵ mô p ilo t để kiểm định tính ổn định phương pháp, tiến tớ i ứng dụng vào tổng hợp nguyên liệu phục vụ sản xuất thuốc TÀI