Tài liệu dinh dưỡng của vi sinh vật (tt)

13.3.1 Nguyên tắc pha chế môi trường nuôi cấy 13.3 MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY (Culture medium) - Căn vào mục đích sử dụng người ta chia môi trường nuôi cấy thành nhiều loại khác Môi trường sở (minimum medium): Các vi sinh vật có yêu cầu dinh dưỡng không giống nói chung chất dinh dưỡng giống Môi trường sở môi trường có chứa chất dinh dưỡng cần thiết cho sinh trưởng, phát triển đa số vi sinh vật Môi trường sở thông dụng Môi trường cao thịt - peptone Môi trường sở dùng làm thành phần cho môi trường đặc biệt, tùy theo yêu cầu nhóm vi sinh vật mà bổ sung thêm chất dinh dưỡng cần thiết Môi trường làm giàu hay gọi môi trường gia phú (enrichment medium): Trên môi trường sở cho thêm số chất dinh dưỡng đặc biệt để thích hợp với việc nuôi cấy số nhóm vi sinh vật Các chất bổ sung thêm máu, huyết thanh, cao nấm men, mô động vật hay thực vật Ví dụ để nuôi cấy vi khuẩn Bordetella pertussis người ta dùng môi trường sở Difco 0048 bổ sung thao tác vô trùng máu thỏ (đã lọc qua nến lọc) sau khử trùng môi trường 15 phút 1210C, cho nồng độ cuối 15% Bordetella pertussis Môi trường giám biệt (differential medium) Môi trường giám biệt dùng việc giám định loài vi sinh vật khác để xác định vị trí phân loại chúng Các môi trường giám biệt phương pháp sử dụng trình bày Tập I (Thế giới vi sinh vật) Chẳng hạn xác định khả sinh protease bổ sung casein hay gelatin, khả sinh amylase thêm tinh bột tan, khả sinh lipase thêm dầu ăn thị màu, khả sinh H2S thêm Pb acetat, Người ta thường dùng môi trường EMB (Eosin Methylene Blue) để giám biệt vi khuẩn đường ruột Môi trường có thành phần sau: Peptone-10g; Lactose-5g; Saccharose-5g K2HPO4- 2g; EosinY-0,4g; Methylene Blue0,065g; Nước cất-1000ml; pH=7,2 Môi trường ức chế vi khuẩn Gram (+) số vi khuẩn Gram (-) Từ môi trường kiểm tra thêm vài thí nghiệm với khuẩn lạc xuất phân lập nhiều loại vi khuẩn đường ruột Gram (-) theo sơ đồ sau đây: a- Lên men lactic, sinh acid b- Sinh acid mạnh,khuẩn lạc chiếu sáng thấy có màu tía, phản quang có màu lục ánh kim Escherichia coli bb-Sinh acid yếu, khuẩn lạc có màu nâu gụ Enterobacter,Serratia, Klebsiella, Hafnia aa- Không lên men lactic, không sinh acid, khuẩn lạc vô màu Proteus, Salmonella, Shigella Môi trường chọn lọc (Selective medium) Dùng môi trường chọn lọc để phân lập nhóm vi sinh vật riêng biệt từ quần thể vi sinh vật tự nhiên Dựa vào yêu cầu dinh dưỡng đặc biệt nhóm vi sinh vật tính mẫn cảm khác hóa chất, với chất kháng sinh mà đưa thêm vào môi trường chất tương thích, nhằm ức chế sinh trưởng nhóm vi sinh vật khác giúp cho phân lập nhóm vi sinh vật cần nghiên cứu Có môi trường chọn lọc thiết kế dựa nhu cầu dinh đưỡng đặc biệt nhóm vi sinh vật định Ví dụ dùng cellulose hay dầu parafin làm nguồn carbon phân lập nhóm vi sinh vật phân hủy celluose hay phân hủy parafin, dùng protein làm nguồn nitrogen để phân lập vi sinh vật sản sinh proteinase, dùng môi trường không chứa nitrogen để phân lập vi sinh vật cố định nitrogen Ví dụ môi trường vô đạm Ashby dùng để phân lập vi khuẩn Azotobacter có thành phần sau: Mannit-1%; KH2PO4-0,025%, MgSO4.7H2O0,02%; NaCl-0,02%; CaSO4.2H2O0,01%; CaCO3-0,5% Cũng có loại môi trường chọn lọc thêm 10% phenol làm ức chế sinh trưởng vi khuẩn vi nấm lại phân lập xạ khuẩn Nếu thêm vào môi trường Bi sulphat ức chế vi khuẩn Gram (+)và phần lớn vi khuẩn Gram (-), lại phân lập vi khuần thương hàn (Salmonella typhi) Thêm vào môi trường Brilliant green hay Crystal violet ức chế vi khuẩn Gram (+) lại phân lập vi khuẩn Gram (-) Trêm vào môi trường Streptomycin ức chế nhiều loại vi khuẩn lại phân lập vi nấm Thêm vào môi trường Na propionat ức chế nấm sợi lại phân lập nấm men Trong Kỹ thuật di truyền (Genetic engineering) người ta thường xuyên sử dụng môi trường chọn lọc chứa kháng sinh xác định để tách chủng mang gen tái tổ hợp Trong thực tế có môi trường vừa môi trường chọn lọc, vừa môi trường giám biệt Ví dụ để phân lập tụ cầu khuẩn vàng (Staphylococcus aureus) người ta thêm vào môi trường 7,5% NaCl, Mannit thị màu acid-kiềm Vi khuẩn vừa chịu nồng độ NaCl cao , vừa chuyển hóa mannit thành acid Staphylococcus aureus Sau số chất bổ sung vào môi trường (MT) chọn lọc cần thiết để phân lập số nhóm vi sinh vật định: Potassium tellurite (MT Mueller tellurite) để phân lập Corynebacterium diphtheriae; Tellurite Crystal violet (MT Mitis-salivarius) để phân lập Streptococcus; Na azide (MTAzide glucose) để phân lập Streptococcus; Phenylethanol (MT Phenylethanol) để phân lập Staphylococcus Streptococcu s; Nước ép cà chua (MT nước ép cà chua) để phân lập vi khuẩn lactic từ nước bọt; Desoxycholate, citrate (MT Desoxycholate citrate) để phân lập vi khuẩn đường ruột Gram(-); Mật(bile),citrate, brilliant green (MT SS) để phân lập Salmonella Shigella; Malachite green dye (MT Lowenstein-Jensen) để phân lập Mycobacterium; Chloramphenicol (MT Emmon) để phân lập nấm; Rose Bengal Streptomycin (MT Martin) để phân lập nấm Corynebacterium diphtheriae Ngoài loại môi trường kể có loại môi trường đặc biệt khác Đó Môi trường phân tích (assay medium) dùng để định lượng vitamin, chất kháng sinh Đó Môi trường khử (reduced medium) dùng để nuôi cấy vi sinh vật kỵ khí Đó Môi trường nuôi cấy mô (Tissue-culture medium) chuyên phục vụ cho việc nuôi cấy tế bào mô động, thực vật, dùng để nuôi cấy tế bào nhóm vi sinh vật chuyên ký sinh virút, Chlamydia, Rickettsia, Spirochete Một số virút Rickettsia không phát triển môi trường nhân tạo mà phải nuôi cấy phôi gà, tế bào thận khỉ, thể động vật thực nghiệm Vietsciences- Nguyễn Lân Dũng & Bùi Thị Việt Hà [...]... (assay medium) dùng để định lượng vitamin, chất kháng sinh Đó là Môi trường khử (reduced medium) dùng để nuôi cấy các vi sinh vật kỵ khí Đó là Môi trường nuôi cấy mô (Tissue-culture medium) chuyên phục vụ cho vi c nuôi cấy tế bào và mô động, thực vật, hoặc dùng để nuôi cấy trên tế bào các nhóm vi sinh vật chuyên ký sinh như virút, Chlamydia, Rickettsia, Spirochete Một số virút và Rickettsia không phát... Corynebacterium diphtheriae; Tellurite và Crystal violet (MT Mitis-salivarius) để phân lập Streptococcus; Na azide (MTAzide glucose) để phân lập Streptococcus; Phenylethanol (MT Phenylethanol) để phân lập Staphylococcus và Streptococcu s; Nước ép cà chua (MT nước ép cà chua) để phân lập vi khuẩn lactic từ nước bọt; Desoxycholate, citrate (MT Desoxycholate citrate) để phân lập vi khuẩn đường ruột Gram(-); Mật(bile),citrate,... Chlamydia, Rickettsia, Spirochete Một số virút và Rickettsia không phát triển được trên các môi trường nhân tạo mà phải nuôi cấy trên phôi gà, trên tế bào thận khỉ, trên cơ thể động vật thực nghiệm Vietsciences- Nguyễn Lân Dũng & Bùi Thị Vi t Hà ... vào yêu cầu dinh dưỡng đặc biệt nhóm vi sinh vật tính mẫn cảm khác hóa chất, với chất kháng sinh mà đưa thêm vào môi trường chất tương thích, nhằm ức chế sinh trưởng nhóm vi sinh vật khác giúp... nhóm vi sinh vật cần nghiên cứu Có môi trường chọn lọc thiết kế dựa nhu cầu dinh đưỡng đặc biệt nhóm vi sinh vật định Ví dụ dùng cellulose hay dầu parafin làm nguồn carbon phân lập nhóm vi sinh vật. ..nhau nói chung chất dinh dưỡng giống Môi trường sở môi trường có chứa chất dinh dưỡng cần thiết cho sinh trưởng, phát triển đa số vi sinh vật Môi trường sở thông dụng Môi trường