Báo cáo vi sinh học thực phẩm

BÀI 1: HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG THIẾT BỊ, DỤNG CỤ PHÒNG THÍ NGHIỆM QUAN SÁT TIÊU BẢN VI SINH VẬT DƯỚI KÍNH HIỂN VI QUANG HỌC Mục tiêu: - Chuẩn bị trang thiết bị cần thiết của một phòng thí nghiệm vi sinh vật. - Vận dụng được các quy tắc an toàn trong phòng thí nghiệm vi sinh vật I – Cơ sở lý thuyết 1. Các quy tắc an toàn trong phòng thí nghiệm vi sinh vật • Hiểu đúng nguyên tắc, phương pháp làm việc với vi sinh vật. • Thao tác an toàn trên đối tượng vi sinh vật ở mật độ cao. • Không ăn uốn, hút thuốc trong phòng thí nghiệm vi sinh vật • Mặc áo blouse trong thời gian thực hành. • Không dùng miệng hút bằng ống hút ( pipette) để định lượng vi sinh vật hay hóa chất, mà phải dùng quả bóp cao su khi thao tác hút bằng ống hút. • Hộp Petri đã đổ môi trường hoặc sau nuôi cấy vi sinh vật, không mở nắp, dùng tay để sờ và dùng mũi để ngửi. • Khi lỡ tay làm đổ vi sinh vật ra nơi làm việc, dùng khăn hay giấy tẩm cồn 70 độ để lau và lau sạch lại bằng khăn hay giấy tẩm cồn 70 độ khác. • Khi sử dụng que cấy để gieo cấy vi sinh vật cần phải được khử trùng bằng cách đốt trên ngọn lửa đèn cồn tránh vươn vãi ra xung quanh. • Trước và sau khi thao tác trên vi sinh vật cần lau tay kỹ bằng cồn 70 độ. Khi thực hiện thao tác này cần phải tránh xa ngọn lửa đèn cồn khi tay còn ướt. • Cần ghi chú tên chủng vi sinh vật và ngày tháng thí nghiệm lên các dụng cụ chứa môi trường nuôi cấy vi sinh vật. • Tất cả các chất thải và môi trường chứa hoặc nhiễm vi sinh vật cần được hấp khử trùng trước khi đem đổ vào thùng rác. Các dụng cụ nhiễm vi sinh vật cần được ngâm trong dung dịch sát khuẩn trước khi rửa. • Không đổ thạch vào bồn rửa và ống thoát nước. 2. Dụng cụ và thiết bị thí nghiệm vi sinh vật II – Tiến hành thí nghiệm 1. Làm nút bông - Sau khi nhận dụng cụ ta phải làm sạch dụng cụ bằng nước. - Sau đó dùng bông thấm nước làm khô.  Ng n ng a các ch t t môi tr ng nuôi c y vào trong mi ng và tránhă ừ ấ ừ ườ ấ ệ nhi m t p t mi ng vào môi tr ng.ễ ạ ừ ệ ườ B c 1ướ : Dùng tay xé 1 mi ng l p bông hình ch nh t, g p các rìa mi ng bôngế ớ ữ ậ ấ ế vào trong cho g n không b xù.ọ ị B c 2ướ : cu n ch t l i thành nút sao cho v a khít ng nghi m (không quá ch tố ặ ạ ừ ố ệ ặ c ng không quá l ng) :ũ ỏ để  Không làm nút bông quá ch t gây v ng nghi m. ặ ỡ ố ệ  Không làm nút bông quá l ng vì d b nhi m t p.ỏ ễ ị ễ ạ 2. Bao gi y d ng cấ ụ ụ M c íchụ đ : Tr c khi h p kh trùng d ng c , v t li u, c n ph i ti n hành baoướ ấ ử ụ ụ ậ ệ ầ ả ế gói k càng và úng k thu t thu n ti n cho công vi c kh trùng, tránh hi nỹ đ ỹ ậ để ậ ệ ệ ử ệ t ng n t v hay b t p nhi m sau khi h p.ượ ứ ỡ ị ạ ễ ấ Trong phòng thí nghi m vi sinh v t, ng i ta th ng cu n gi y trên nhi uệ ậ ườ ườ ố ấ ề d ng c : ng nghi m, a Petri, bình tam giác,…ụ ụ ố ệ đĩ Bao gói d ng c : Sau khi ã làm nút, các d ng c ph i c bao gói quy cách ụ ụ đ ụ ụ ả đượ để em h p.đ ấ B c 1ướ : i v i ng nghi m ng môi tr ng ã có nút bông, c n dùng gi y b cĐố ớ ố ệ đự ườ đ ầ ấ ọ ch t phía u nút bông l i.ặ đầ ạ B c 2ướ : Chai l c ng c b c ch t ph n nút b ng gi y.ọ ũ đượ ọ ặ ầ ằ ấ B c 3ướ : Pipette c gói b t u t phía u nh gi t, cu n gi y d n theođượ ắ đầ ừ đầ ỏ ọ ộ ấ ầ ki u xoáy trôn c cho t i h t phía u có nút bông.ể ố ớ ế ở đầ B c 4ướ : Các pipet có th c gói t 1 t i vài chi cể đượ ừ ớ ế Các a Petri c gói thành ch ng, m i ch ng t 3-5 chi c đĩ đượ ồ ỗ ồ ừ ế Các d ng c khác, tu theo yêu c u mà có s bao gói cho thích h p. N u h p ụ ụ ỳ ầ ự ợ ế ấ ở n i h p áp l c thì không c bao gói b ng gi y th m n c mà ph i dùng lo iồ ấ ự đượ ằ ấ ấ ướ ả ạ gi y dai, không th m n c.ấ ấ ướ Các d ng c bao gói ph i th t khô, s ch, tránh v trong khi h p. D ng c baoụ ụ ả ậ ạ ỡ ấ ụ ụ gói xong ph i dán nhãn, ngày em h p ti n vi c theo dõi, s d ng.ả đề đ ấ để ệ ệ ử ụ 3. H p ti t trùng d ng cấ ệ ụ ụ  N I H P (AUTOCLAVE)Ồ Ấ Nguyên lý: Ph ng pháp s d ng n i h p áp l c d a trên nguyên t c làm giaươ ử ụ ồ ấ ự ự ắ nhi t các v t b ng h i n c bão hoà d i áp su t l n h n áp su t khí quy n. Khiệ ậ ằ ơ ướ ướ ấ ớ ơ ấ ể áp su t t ng, nhi t c ng t ng theo. Tác d ng ph i h p gi a nhi t cao vàấ ă ệ độ ũ ă ụ ố ợ ữ ệ độ áp su t m b o cho vi c kh trùng th c hi n c t t. Khi h p, áp l c s tiêuấ đả ả ệ ử ự ệ đượ ố ấ ự ẽ di t c t bào và sinh d ng l n bào t c a vi sinh v t .ệ ả ế ưỡ ẫ ử ủ ậ  CÁCH V N HÀNH N I H P C :Ậ Ồ Ấ Ơ B c 1ướ : Ki m tra m c n c trong kho ng an toànể ự ướ ở ả n c vào n i h p v i l ng thích h p ( n v ch chu n trên ng thu tinhĐổ ướ ồ ấ ớ ượ ợ đế ạ ẩ ố ỷ t d i ph u rót n c). N c ph i , không nên quá vì khi sôi n c cóđặ ướ ễ ướ ướ ả đủ đổ ướ th l t vào ng d n n áp k và làm sai l c ch s áp. N u ít, hi u qu khể ọ ố ẫ đế ế ạ ỉ ố ế đổ ệ ả ử trùng kém, có th gây cháy n i. T t nh t nên dùng n c c t cho vào n i h p vì nóể ồ ố ấ ướ ấ ồ ấ s không t o ra canxi.ẽ ạ B c 2ướ : B t công t c gia nhi t tr c (10-15 phút).ậ ắ để ệ ướ B c 3ướ : t các d ng c vào bu ng h p.Đặ ụ ụ ồ ấ Các dùng ph i bao gói k r i m i x p vào n i h p. n ng trên. Không nênđồ ả ỹ ồ ớ ế ồ ấ Đồ ặ ở x p d ng c quá sát nhau h i n c có th di chuy n d dàng .ế ụ ụ để ơ ướ ể ể ễ B c 4ướ : Ki m tra và óng các valve x và valve an toàn.ể đ ả B c 5ướ : y n p và v n c i x ng nhau t ng ôi m t.Đậ ắ ặ ố đố ứ ừ đ ộ B c 6ướ : Khi ng h áp l c ch 0.4-0.5 kg/cm2 thì x khí l n 1 cho t i khiđồ ồ ự ỉ ả ầ ớ ng h áp l c ch 0.1 kg/cm2 hay khi th y bu ng khí x xu t hi n dòng khíđồ ồ ự ỉ ấ ồ ả ấ ệ tr ng liên t c thì ng valve x .ắ ụ đố ả B c 7ướ : Ch cho ng h áp l c ch 1 atm hay nhi t ch 1210 C tính gi vàờ đồ ồ ự ỉ ệ độ ỉ ờ canh 15 phút. B c 8ướ : Khi ã th i gian kh trùng, i áp su t trong n i h d n t i v chđ đủ ờ ử đợ ấ ồ ạ ầ ớ ạ s 0, m van thông h i x h t khí. V n c, m n p, l y các dùng ã cố ở ơ ả ế ặ ố ở ắ ấ đồ đ đượ kh trùng ra.ử III - Câu hỏi thảo luận 1. Nêu kỹ thuật chỉnh kính hiển vi khi quan sát trạng thái sống và trạng thái chết  Khi vi sinh vật ở trạng thái sống: • Lấy một phiến kính sạch cho 1 giọt nước hay 1 giọt phẩm màu methylene blue (0.1%). Sau đó cho vi sinh vật hòa tan trong giọt nước hay giọt màu loãng đó. • Đậy lá kính sao cho chân của lá kính chạm vào giọt nước hay giọt màu, nghiêng một góc <= 45 độ và hạ lá kính xuống để không có bọt khí. • Đặt phiến kính lên bàn mẫu, hạ tụ quang, đóng bớt chắn sáng, quang sát ở vật kính 10X, dùng ốc chỉnh thô hạ bàn mẫu chạm tới vật kính, đặt mắt vào quan sát, dùng ốc chỉnh thô hạ bàn mẫu xuống cho đến khi thấy ảnh vi sinh vật rồi dùng nút chỉnh tinh vặn để xem rõ ảnh vi sinh vật. Trên bàn mẫu, dùng ốc di chuyển mẫu vật di chuyển phiến kính đến vùng muốn quan sát trong thị trường. • Để quan sát ảnh có độ phóng đại lớn hơn, chuyển sang vật kính 40X và điều chỉnh ốc chỉnh tinh để tìm ảnh.  Khi vi sinh vật ở trạng thái chết: • Cố định vi sinh vật bằng cách cho 1 giọt sinh khối vi sinh vật trải đều trên phiến kính sạch, hơ trên ngọn lửa đèn cồn cho đến khi khô (không còn ướt, nhưng không được cháy). • Cho 1 giọt (lớn) phẩm nhuộm đơn (methylene blue 0.1% hoặc Carbofuchsin 0.1%) lên vết vi sinh vật đã cố định để trong 5 phút. • Rửa nước bằng đầu xịt của bình tia cho đến khi sạch màu và làm khô bằng ngọn lửa đèn cồn (có thể dùng giấy mềm để thấm nhẹ nước, nhưng không dùng giấy mềm để lau). • Nhỏ 1 giọt dầu cefdre lên vết nhuộm, đưa lên bàn mẫu. • Nâng tụ quang, mở chắn sáng nhìn từ ngoài, hạ vật kính 100X xuống chìm vào giọt dầu cefdre. • Nhìn vào thị kính, điều chỉnh ốc chỉnh thô từ từ cho đến khi thoáng thấy vật thì điều chỉnh ốc chỉnh tinh để trông rõ vật. 2. Sau khi thao tác với vi sinh vật, người ta thường dùng cồn 70 độ để tiệt khuẩn tay và nơi làm việc mà không dùng cồn 90 độ hay 60 độ, giải thích? - Vì cồn 90 độ đậm đặc nên bay hơi nhanh so với cồn 70 độ. Và chính vì cồn 90 độ đậm đặc nên sẽ làm thành tế bào của vi khuẩn, vi sinh vật đông lại, tạo thành một lớp àng cứng bảo vệ nên sẽ mất tác dụng. - Còn cồn 60 độ thì hơi loãng nên không hiệu quả. - Do đó người ta sẽ dùng cồn 70 độ để tiệt khuẩn tay và nơi làm việc. (o(o( BÀI 2: KỸ THUẬT PHA CHẾ MÔI TRƯỜNG Mục tiêu: - Phân biệt được môi trường nuôi cấy và phân tích. - Pha chế được các loại môi trường cơ bản. - Áp dụng các phương pháp tiệt trùng môi trường, dụng cụ. I – C s lý thuy tơ ở ế 1. Dinh dưỡng vi sinh vật Môi trường dinh dưỡng vi sinh vật bao gồm nhiều thành phần dinh dưỡng cần thiết khác nhau.thành phần dinh dưỡng này tùy thuộc vào nhu cầu của từng loại vi sinh vật. Mọi cơ thể sống đều cấu tạo từ những hợp chất hữu cơ, có cấu tạo từ các nguyên tố là C, H, O và N. Ngoài ra các nguyên tố thiết yếu,trong các cơ thể vi sinh vật còn có các nguyên tố đa lượng: S, P; các nguyên tố vi lượng như : Fe, Cu, Mg, Zn, K, Ca, Cl, Bo vì thế trong thành phần dinh dưỡng không thể cung cấp đơn thuần một số chất nào đó hoặc một nhóm nguyên tố nào đó mà trong tự nhiên, vi sinh vật sử dụng các nguồn dưỡng chất từ cơ thể thực vật, động vật hoặc vi sinh vật. Nồng độ đường phù hợp để nuôi cấy vi khuẩn và xạ khuẩn khoảng 0.05-0.2%, nấm mốc và nấm men khoảng 3-15%. Ngoài ra còn có nồng độ phù hợp của các gốc kiềm purin, pirimidin hoặc các vitamin,… 2. Các loại môi trường nuôi cấy vi sinh vật Môi trường nơi cung cấp đầy đủ các thành phần về dinh dưỡng (nguồn nitơ, nguồn carbon, khoáng đa-vi lượng, chất sinh trưởng…) cho sự phát triển của vi sinh vật. Tùy theo mục đích mà thành phần, hàm lượng các chất trong môi trường là khác nhau. Môi trường có thể được phân loại theo: a) Theo cấu trúc: lỏng, rắn, bán rắn b) Theo thành phần: tổng hợp, tự nhiên, bán tổng hợp c) Theo công dụng: tiền tăng sinh, tang sinh, chọn lọc, phân biệt, chọn lọc-phân biệt, thử nghiệm sinh hóa, đông khô thương phẩm [...]... cho vi sinh ngoài không khí xâm nhập vào làm hỏng môi trường (o(o( BÀI 3: KỸ THUẬT GIEO CẤY VÀ PHÂN LẬP VI SINH VẬT Mục tiêu: - Thực hiện các kỹ thuật gieo cấy vi sinh vật - Thực hiện các kỹ thuật phân lập vi sinh vật I – Cơ sở lý thuyết 1 Kỹ thuật gieo cấy vi sinh vật Mục đích của vi c gieo cấy vi sinh vật để nhân giống vi sinh vật; phát hiện sự có mặt của vi sinh vật trong các mẫu (thực phẩm, bệnh phẩm, ... Đưa ống nghiệm có vi sinh vật đâm sâu vào dọc theo ống thạch cho đến gần đáy ống nghiệm 2 Phân lập vi sinh vật Vi sinh vật tồn tại trong tự nhiên ở dạng quần xã gồm nhiều quần thể các loài vi sinh vật Vi c phân lập loài nhất định trong quần xã vi sinh vật dựa vào khả năng phân tách các tế bào ra thành riêng lẻ trên môi trường chọn lọc Hầu hết các phương pháp phân lập và thuần chủng vi sinh vật đều dựa... trang gạt đều giọt vi sinh vật trên bề mặt thạch Dùng que trang gạt xoay đều trên bề mặt thạch Trong khi gạt, xoay đĩa Petri tới lui 3 – 4 lần, mỗi lần ½ chu vi cho vi sinh vật được trải đều khắp trên bề mặt môi trường Bước 4: Rút que trang ra khỏi đĩa, đậy đĩa, gói giấy và ủ ở nhiệt độ và thời gian thích hợp theo từng đối tượng vi sinh vật mục tiêu BÀI 5: LÊN MEN ETHANOL Mục tiêu: - Thực hiện quá trình... ethanol là một loại sản phẩm lên men đường phổ biến của nhiều nhóm vi sinh vật Song tác nhân lên men chủ yếu là nấm men, đặc biệt là loài Saccharomyces cervisiae Nhiều loài vi khuẩn kỵ khí và hiếu khí tùy tiện cũng có khả năng tạo thành rượu như là một sản phẩm chủ yếu hay một sản phẩm phụ của quá trình lên men hexose và pentose Quá trình lên men ethanol nhờ nấm men là cơ sở của vi c sản xuất các loại... dàng 3 Nếu thay đổi nhiệt độ lên men thì chất lượng sản phẩm có thay đổi không và thông số nào sẽ thay đổi theo? Nhiệt độ lên men không ổn định sẽ làm thay đổi tỷ lệ chủng vi sinh v ật ( ảnh hưởng tới chất lượng sản phẩm Nhiệt độ lên men phụ thuộc vào tỷ lệ chủng Trong phạm vi nhiệt độ thấp, khi nhiệt độ tang lên sẽ tăng tốc độ sinh trưởng của vi sinh vật vì các phản ứng trong tế bào đều tăng cho nên... dịch giống lên bề mặt thạch Trong khi trải, thực hiện xoay đĩa 1 vài lần, mỗi lần khoảng ½ chi vi đĩa tạo điều kiện cho thanh gạt trải dịch giống đều khắp bề mặt môi trường  Rút thanh gạt khỏi đĩa, gói và ủ ở nhiệt độ và thời gian thích hợp trong tủ ấm (o(o( BÀI 4: KỸ THUẬT PHÂN TÍCH VI SINH VẬT Mục tiêu: - Thực hiện được thí nghiệm lấy mẫu phân tích - Thực hiện được kỹ thuật hộp trải và hộp đổ I... cung cấp năng lượng chủ yếu cho đa phần các loại vi sinh vật Cacbohydrat trong tự nhiên thường tồn tại dưới dạng đường đơn , đường đôi, oligo hay đường đa có phân tử lượng lớn không phải mọi vi sinh vật đều có thể sử dụng được đường đa, loài nào có thể tổng hợp được enzyme ngoại bào đặc hiệu của loại đường đa đó thì mới có thể sử dụng được chúng Dù vi sinh vật có sử dụng được đường đa, chúng phải phân... Mục đích của vi c gieo cấy vi sinh vật để nhân giống vi sinh vật; phát hiện sự có mặt của vi sinh vật trong các mẫu (thực phẩm, bệnh phẩm, dược phẩm, mỹ phẩm, nước, đất ) cần phân tích; nghiên cứu các đặc tính hình thái, sinh lí, sinh hóa của đối tượng vi sinh vật mục tiêu  Cấy giống từ môi trường lỏng sang ống nghiệm chứa môi trường lỏng Dùng que cấy vòng và làm theo trình tự các bước sau: - Ống... Trình bày phương pháp phân lập vi sinh vật bằng kỹ thuật cấy ria và kỹ thuật pha loãng kết hợp với cấy trải?  Kỹ thuật cấy ria trên đĩa petri:  Dùng que cấy vòng thao tác vô trùng nhúng vào dịch mẫu để có được vi sinh vật cần phân lập  Ria các đường trên đĩa petri chứa môi trường thạch thích hợp sau mỗi đường ria liên tục, đốt khử trùng que cấy và làm nguội trước khi thực hiện đường ria tiếp theo... vật vì các phản ứng trong tế bào đều tăng cho nên toàn bộ hoạt động trao đổi chất sẽ tăng lên khi nhiệt độ cao hơn, và vi sinh v ật s ẽ tăng trưởng nhanh hơn Lúc nhiệt độ tăng đến một lúc nhất định thì nhiệt độ càng tăng, tốc độ sinh trưởng càng giảm Khi nhiệt độ tăng quá cao, thì vi sinh vật sẽ chết hoặc gây ra sự biến tính của enzyme (o(o( . lập vi sinh vật I – Cơ sở lý thuyết 1. Kỹ thuật gieo cấy vi sinh vật Mục đích của vi c gieo cấy vi sinh vật để nhân giống vi sinh vật; phát hiện sự có mặt của vi sinh vật trong các mẫu (thực phẩm, . nghiệm vi sinh vật • Hiểu đúng nguyên tắc, phương pháp làm vi c với vi sinh vật. • Thao tác an toàn trên đối tượng vi sinh vật ở mật độ cao. • Không ăn uốn, hút thuốc trong phòng thí nghiệm vi sinh. trường cho vi sinh ngoài không khí xâm nhập vào làm hỏng môi trường. (o(o( BÀI 3: KỸ THUẬT GIEO CẤY VÀ PHÂN LẬP VI SINH VẬT Mục tiêu: - Thực hiện các kỹ thuật gieo cấy vi sinh vật - Thực hiện