Y HC THC HNH (874) - S 6/2013 34 So sánh độ nhạy và độ đặc hiệu của One - Step Chlamydia với phơng pháp PCR Ninh Văn Minh, Nguyễn Thị Tuyết Trng i hc Y Thỏi Bỡnh T VN Nhim khun lõy truyn qua ng tỡnh dc (NKLYQTD) l bnh lý ph bin trờn ton th gii, gõy hu qu xu n phỏt trin kinh t v xó hi. Tỏc nhõn ca NKLTQTD rt a dng bao gm virus, vi khun, nm, ký sinh trựng, trong ú nhim Chlamydia trachomatis (C.trachomatis) l tỏc nhõn nguy hi thng gp v ang cú chiu hng gia tng. Viờm c t cung do C.trachomatis khụng c iu tr khong 40% s gõy viờm sinh dc trờn vi nhiu bin chng nh viờm vựng chu, vụ sinh do tc vũi t cung, thai ngoi t cung, au vựng chu mn tớnh. Chi phớ cho vic iu tr cỏc bin chng ny rt ln, khi mi nhim viờm c t cung do C.trachomatis iu tr n gin. Chn oỏn nhim C.trachomatis ch yu da vo xột nghim cn lõm sng. Tựy theo phng phỏp xột nghim v v trớ ly bnh phm ( c t cung hoc nc tiu u dũng) m tớnh giỏ tr ca chn oỏn khỏc nhau. Xột nghim nhanh min dch men (One- Step Chlamydia) vi giỏ thnh thp, d thc hin, cho kt qu nhanh. Do ú, chỳng tụi thc hin nghiờn cu ny vi mc tiờu: 1.Xỏc nh nhy v c hiu ca One-Step Chlamydia 2. Phỏt hin Chlamydia bng k thut PCR. I TNG V PHNG PHP NGHIấN CU 1. i tng: 150 Ph n tiờu chun tuyn chn vo nhúm nghiờn cu 2. Phng phỏp: Th nghim lõm sng. Cỏc bin s nghiờn cu. - nhy, c hiu, giỏ tr tiờn oỏn dng, giỏ tr tiờn oỏn õm ca One-Step Chlamydia. - Kt qu PCR - Cỏc ch s v nhõn khu hc: tui, ngh nghip, trỡnh hc vn, hụn nhõn, tỡnh trng kinh t. - Cỏc ch s v tin s sn ph khoa: tui quan h tỡnh dc, bin phỏp trỏnh thai ó v ang s dng, tin s viờm sinh dc. - Cỏc ch s v lõm sng v xột nghim: tỡnh trng c t cung, kt qu nhum soi khớ h. KT QU Bng 1: T l nhim C.trachomatis theo cỏc tn thng c t cung Tn thng CTC n S nhim T l Hng lỏng 25 7 28,0 Viờm cú m 52 44 84,6 L tuyn 56 11 19,6 Viờm loột 11 0 0,0 Tn thng khỏc 6 0 0,0 Tng s 150 62 41,3 Bng 1: cho thy 84,6% s bnh nhõn b viờm m c t cung cú nhim C.trachomatis Khụng cú trng hp no trong nhúm c t cung viờm loột hoc cú tn thng khỏc b nhim C.trachomatis. Bng 2: T l nhim C.trachomatis theo tỡnh trng vụ sinh Tỡnh trng vụ sinh n S nhim T l Khụng vụ sinh 111 35 31,5 VS nguyờn phỏt 5 1 20,0 VS th phỏt 34 26 76,5 Tng s 150 62 41,3 Bng 2 cho thy t l nhim C.trachomatis nhng ph n vụ sinh nguyờn phỏt l 20%, vụ sinh th phỏt l 76,5% v nhúm khụng vụ sinh l 31,5%. Bng 3: Phõn b t l nhim C.trachomatis theo kt qu nhum soi. Kt qu nhum soi S iu tra S nhim T l % Vi khun 86 54 62,8 Trichomonas 7 3 42,9 Nm 34 4 11,8 Gardnerella 15 1 6,7 Bỡnh thng 8 0 0,0 Tng s 150 62 41,3 Bng 3: Khi nhum soi cho thy cú 62,8% ph n b nhim C.trachomatis cú tp khun kốm theo, 42,9% kốm theo nhim Trichomonastrong nhúm nhng ph n b nhim vi khun theo soi nhum khớ h, l 11,8% v 6,7%. c bit, trong s 8 ngi cú kt qu nhum soi khớ h bỡnh thng thỡ khụng ai b nhim C.trachomatis. Bng 4: So sỏnh t l nhim C.trachomatis bng test nhanh v PCR. Phng phỏp Dng tớnh m tớnh n T l n T l One-Step Chlamydia. 50 33,3 100 66,7 PCR. 62 41,3 88 58,7 Qua bng 4: cho thy 150 i tng c lm c 2 loi xột nghim phỏt hin tỡnh trng nhim C.trachomatis thỡ phng phỏp PCR phỏt hin c 41,3%, test nhanh phỏt hin c 33,3%. Bng 5: Chn oỏn viờm c t cung bng test nhanh v PCR Kt qu PCR Tng s Dng tớnh m tớnh Kt qu test nhanh Dng tớnh 40 (dng tht) 10 (dng gi) 50 m tớnh 22 (õm gi) 78 (õm tht) 100 Tng 62 88 150 Y HỌC THỰC HÀNH (874) - SỐ 6/2013 35 Bảng 6: Giá trị của test nhanh trong chẩn đoán viêm cổ tử cung do C.trachomatis: Thông số Giá trị Độ nhậy 40/62 = 64.5% Độ đặc hiệu 78/88 = 88.6% Giá trị tiên đoán dương tính 40/50 = 80% Giá trị tiên đoán âm tính 78/100 = 78% KẾT LUẬN So với phương pháp PCR, giá trị của xét nghiệm nhanh miễn dịch men có: Độ nhậy: 64,5% Độ đặc hiệu: 88,6% Giá trị tiên đoán dương tính: 80%. Giá trị tiên đoán âm tính: 78%. SUMMARY Objectives: Determine the specifisity and sensitivity of one step C.chlamydia. PCR in the C.chlamydia diagnostic. Study Design: Randomized clinical control trial Research Subjects: 150 womans ages 15-49. Results: True negative: 78, false negative: 22, true positive: 40, false positive: 10. Sensitivity: 40/62 = 64.5%, speccifisity: 78/88 = 88.6% Positive predictive value: 40/50 = 80%, negative predictive value: 78/100 = 78% TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. Lê Hồng Cẩm (2002. "Nghiên cứu tỷ lệ viêm cổ tử cung do Chlamydia trachomatis và một số yếu tố kết hợp ở phụ nữ trong lứa tuổi sinh đẻ tại huyện Hóc Môn", Luận án tiến sĩ y học, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh: trang 77-99. 2. Phạm Văn Đức (2007). "Giá trị của xét nghiệm nhanh trong chẩn đoán viêm cổ tử cung do Chlamydia trachomatis ở phụ nữ nạo phá thai tại bệnh viện Từ Dũ” Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh, tập 1(12): trang 180-186. 3. Trần Thị Lợi (2000). "Sơ bộ khảo sát tình hình nhiễm Chlamydia trachomatis trong viêm sinh dục" Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh. Tập 4(1): trang 14-18. 4. Đặng Chi Mai (2003). "Chlamydiae." Vi khuẩn học. Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh: trang 176-179. 5. Nguyễn Năng Hải (2004). “Nghiên cứu tình trạng viêm cổ tử cung do Chlamydia trachomatis ở thai phụ 28-37 tuần” Luận văn chuyên khoa cấp II. Đại học Y Hà Nội: trang 30-50. 6. Clavel C et al. Br J Cancer (2004); 90:1803-1808. 7. Ho GYF, Bierman R, Beardsley NP, et al: Natural history of cervicovaginal papilomavirus infection as rick factor forpersistent cervical dysplasia. Journal of the national cancer institus 87(18): 1365-1371 (september 1995). 8. Sherris J, Herdman Cand malloy C (2000). HPV DNA testing: Technical and programmatic issues for cervical cancer prevention in low-resource settings. Preparation of this was supported by the alliance for cervical cancer prevention. BIÓU HIÖN KH¸NG THÓ scFv KH¸NG CD20 Ph¹m Thu Thïy, TrÇn Minh §¹o - Bệnh viện 19.8, Lª Quang HuÊn - Viện Công Nghệ Sinh Học, VAST TÓM TẮT Mục tiêu: Nghiên cứu tạo ra lượng lớn kháng thể scFv kháng CD20 tinh sạch, có hoạt tính và có thể sử dụng cho các nghiên cứu sâu hơn như chẩn đoán và điều trị bệnh ung thư máu có xuất hiện chỉ thị phân tử CD20. Phương pháp nghiên cứu: Gen mã hóa kháng thể kháng CD20 được biểu hiện trong tế bào E.coli (BL21). Protein tái tổ hợp đã biểu hiện được tinh sạch bằng cột sắc ký ái lực Ni-NTA (Invitrogen) theo hướng dẫn của hãng sản xuất và được kiểm tra bằng điện di trên gel polyacrylamide theo phương pháp của Laemmli (1970). Hoạt tính của kháng thể scFv kháng CD20 được xác định bằng kĩ thuật Western blot. Kết quả: Kháng thể scFv kháng CD20 biểu hiện thành công ở E. coli BL21 và tinh sạch được trên cột sắc ký ái lực Ni-NTA. Xác định được hoạt tính liên kết của kháng thể scFv kháng CD20 với kháng thể cộng hợp đuôi 6xHis chuẩn. Từ khóa: CD20, kháng thể kháng CD20, western blot, imidazol. SUMMARY EXPRESSION OF ANTI-CD20 scFv ANTIBODY Objective: To produce a large number of pure and active scFv antibodies specific to CD20 which can be used for further studies such as diagnosis and treatment of blood cancer based on CD20 maker. Methods: The gene coding for anti-CD20 antibody was expressed in E.coli (BL21). Expressed recombinant protein was purified by affinity chromatography using Ni-NTA column (Invitrogen) following the manufacturer’s instruction and checked by polyacrylamide gel electrophoresis (Laemmli 1970) [4]. The activation of scFv antibody was determined by Western blot. Results: anti-CD20 scFv antibody was successfully expressed and purified by affinity chromatography. Determine the active alignment of the anti-CD20 scFv antibody with antibody conjugate 6 His tag standard. Keywords: CD20, anti-CD20 antibody, western blot. ĐẶT VẤN ĐỀ U lympho không Hodgkin (NHL) là ung thư phổ biến thứ 7 ở nước Mĩ và các nước khác trên thế giới [1]. CD20 là chỉ thị phân tử biểu hiện chủ yếu trên tế bào B và xuất hiện khoảng 85 – 90% ở bệnh nhân NHL [5], [2], [6]. CD20 là phân tử đích tiềm năng . Y HC THC HNH (874) - S 6/2013 34 So sánh độ nhạy và độ đặc hiệu của One - Step Chlamydia với phơng pháp PCR Ninh Văn Minh, Nguyễn Thị Tuyết Trng i hc. trị tiên đoán âm tính 78/100 = 78% KẾT LUẬN So với phương pháp PCR, giá trị của xét nghiệm nhanh miễn dịch men có: Độ nhậy: 64,5% Độ đặc hiệu: 88,6% Giá trị tiên đoán dương tính: 80% dch men (One- Step Chlamydia) vi giỏ thnh thp, d thc hin, cho kt qu nhanh. Do ú, chỳng tụi thc hin nghiờn cu ny vi mc tiờu: 1.Xỏc nh nhy v c hiu ca One- Step Chlamydia 2. Phỏt hin Chlamydia