Nghiên cứu gen ty thể ứng dụng vào giám định hài cốt và huyết thống

Vật chất di truyền ở ty thể:  Ứng dụng nghiên cứu giải trình tự gen ty thể trong giám định hài cốt và huyết thống: 1..  mtDNA là sợi xoắn kép, có cấu trúc vòng, dài khoảng 5μm hoặc c

Nghiên c u gen ty th ng d ng vào ứu gen ty thể ứng dụng vào ể ứng dụng vào ứu gen ty thể ứng dụng vào ụng vào Giám đ nh hài c t và huy t th ng ịnh hài cốt và huyết thống ốt và huyết thống ết thống ốt và huyết thống.

Nội dung bài:

 Di truyền ty thể:

1 Khái niệm ty thể:

2 Vật chất di truyền ở ty thể:

 Ứng dụng nghiên cứu giải trình tự gen ty

thể trong giám định hài cốt và huyết

thống:

1 Quy trình giám định hài cốt:

2 Quy trình giám định mẫu đối chứng

3 Đọc kết quả:

Tên thành viên nhóm thực hiện:

1 Nguyễn Thị Trang

2 Ngô Thị Nhung

3 Đỗ Thị Li Na

4 Trần Thị Vĩnh Trang

 Trong cơ thể con người tồn tại song song 2 hệ gen: hệ gen

trong nhân và hệ gen ty thể (di truyền theo dòng mẹ).

1. Khái niệm ty thể:

hết các tế bào hô hấp hiếu khí

ion kim loại, chất màu…

truyền là DNA, có ribosome,

RNA để tự tổng hợp vật chất di

truyền

Di truy n ty th : ền ty thể: ể:

2. Vật chất di truyền ty thể:

 mtDNA là sợi xoắn kép, có cấu trúc vòng, dài khoảng 5μm hoặc có thể tồn tại ở dạng mạch thẳng μm hoặc có thể tồn tại ở dạng mạch thẳng m hoặc có thể tồn tại ở dạng mạch thẳng

 mtDNA chiếm từ 1->5μm hoặc có thể tồn tại ở dạng mạch thẳng % DNA của tế bào

không có intron và hầu như không có khoảng trống

giữa các gen

Các gen có thể phân bố ở vị trí khác nhau mặc dù có cùng chức năng

pol có trong chất nền ty thể và xảy ra ở Interphase của chu kì tế bào

giống với DNA vi khuẩn

 Ty thể tự tổng hợp protein cho riêng mình

 Ty thể không tự tổng hợp tất cả protein của ty thể vì nó chỉ chứa gen mã hóa cho khoảng 5μm hoặc có thể tồn tại ở dạng mạch thẳng 000aa

 Hầu hết được tổng hợp từ mạng lưới nội chất hạt theo mã của các gen trong NST và được vận

chuyển vào ty thể

 Chỉ cần một lượng mẫu rất ít thậm chí hầu hết đã bị biến

tính, hư hỏng do điều kiện môi trường vẫn có thể tách chiết

được ADN ty thể và nhân bội đạt kết quả phục vụ giám định

 Trong tất cả TB của các mô và

tổ chức cơ thể đều có chứa

ADN ty thể với cấu trúc như ADN ty thể của mẹ

Quy trình giám định hài cốt:

Quy trình giám định mẫu đối chứng:

Lấy mẫu máu đối chứng

Bổ sung PBS tương

đương với thể tích máu

Mix đều và ly tâm ở

nhiệt độ phòng

(6600v/p) trong 3p

Bỏ dịch nổi, lấy cặn Thêm dung dịch Lysis và ủ ở 5μm hoặc có thể tồn tại ở dạng mạch thẳng 6o C trong 3h

Chiết bằng phenol và

chloroform

Tủa DNA bằng cồn 96 o C

và bảo quản ở -20 o C

Nhân vùng D-loop với cặp

mồi đặc hiệu Giải trình tự vùng

D-loop

Đối chứng với mẫu xương giám định

Chúng tôi lấy một lượng nhỏ xương hài cốt để tách chiết ADN ty thể Phòng thí

nghiệm để tách ADN ty thể phải có môi trường rất sạch vì ADN ty thể có khả năng nhiễm cao

H th ng t c y vô trùng Class II đ m b o cho quá trình tách ADN ty th t x ốt và huyết thống ảm bảo cho quá trình tách ADN ty thể từ xương không bị lây ảm bảo cho quá trình tách ADN ty thể từ xương không bị lây ể ứng dụng vào ừ xương không bị lây ương không bị lây ng không b lây ịnh hài cốt và huyết thống.

nhi m ễm

Chu kỳ nhân bội vùng D-loop:

35μm hoặc có thể tồn tại ở dạng mạch thẳng X 94

0C/1p 5μm hoặc có thể tồn tại ở dạng mạch thẳng 60C/1p

Sử dụng máy PCR9700 với mỗi chu kỳ thực hiện như sau:

H thốt và huyết thống.ng máy PCR9700 dùng để ứng dụng vào nhân bội ADN ty thể ứng dụng vào

Sử dụng máy giải trình tự có công nghệ hiện đại Miseq của hãng Illumina- Mỹ để

giải trình tự ADN vùng D-loop

 Giải trình tự theo nguyên tắc của Sanger:

 Gi i trình t trên máy t đ ng theo nguyên t c Sanger: ảm bảo cho quá trình tách ADN ty thể từ xương không bị lây ự trên máy tự động theo nguyên tắc Sanger: ự trên máy tự động theo nguyên tắc Sanger: ộ ắc Sanger:

S đ h th ng máy gi i trình t t đ ng ơng không bị lây ồ hệ thống máy giải trình tự tự động ốt và huyết thống ảm bảo cho quá trình tách ADN ty thể từ xương không bị lây ự trên máy tự động theo nguyên tắc Sanger: ự trên máy tự động theo nguyên tắc Sanger: ộ

 Trình tự gene sau khi điện di mao quản

 Sau khi giải được trình tự ADN ty thể của các mẫu cần giám định, các trình tự này được so sánh với nhau bằng phần mềm SeqScape2.5μm hoặc có thể tồn tại ở dạng mạch thẳng , sự so sánh này đều

thông qua trình tự chuẩn Anderson để tìm ra mối quan hệ huyết thống giữa chúng với nhau

Đọc kết quả: