Bộ giáo dục v đo tạo Trờng đại học nông nghiÖp Hμ néi - Phạm Hồng Thái Nghiên cứu đặc điểm hình thái, sinh học phân tử (ADN ty thể) quần thể ong mật Apis cerana Fabricius phân bố ë ViƯt Nam vμ ®Ị xt h−íng sư dơng ngn gen vo công tác chọn tạo giống ong mật nớc ta Chuyên ngành: Bảo vệ thực vật Mà số: 62 62 10 01 tóm tắt Luận án tiến sĩ nông nghiệp Hà Nội - 2008 công trình đà công bố liên quan đến luận án Công trình đợc hoàn thành tại: Trờng Đại học Nông nghiệp Hà Néi Ng−êi h−íng dÉn khoa häc: GS TS Hµ Quang Hùng TS Phùng Hữu Chính Phản biện 1: PGS TS Trịnh Đình Đạt Trờng Đại học Khoa học Tự nhiên Đại học Quốc gia Hà Nội Phản biƯn 2: PGS TS Mai Phó Q ViƯn Sinh th¸i Tài nguyên Sinh vật Phản biện 3: PGS TS Trần Huy Thọ Hội Bảo vệ Thực vật Luận án đà đợc bảo vệ trớc Hội đồng chấm luận án cấp Nhà nớc họp Trờng Đại học Nông nghiệp Hà Nội vào hồi 30 ngày 03 tháng năm 2008 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Trờng Đại học Nông nghiệp Hà Nội - Th viên Quốc gia - Trung tâm nghiên cứu Phát triển Ong Nguyễn Văn Niệm, Lê Quang Trung, Phạm Hồng Thái (2002), Nghiên cứu bảo tồn loài ong nội (Apis cerana Fabr.) Việt Nam, Báo cáo khoa học Hội nghị Côn trùng học toàn quốc, (lần thứ 4), 11-12/04/2002, Nhà xuất nông nghiệp Hà néi, trang 349-355 Pham Hong Thai (2003), "Investigation for indigenous honeybee in Vietnam", Proceeding of the third Vietnamese - Hungarian Conference on domestic animal production and aquaculture – quality and rural development, NIAH and KATKI-HAKI, Hanoi 18-19/10/2003, pp 16-19 Radloff S E., H Randall Hepburn, C Hepburn, Stefan Fuchs, Gard W Otis, M M Sein, H L Aung, H T Pham, D Q Tam, A M Nuru, Tan Ken (2005), “Multivariate morphometric analysis of Apis cerana of southern mainland Asia”, Apidologie 36 (2005), INRA/DIB - AGIB/EDP Science, pp 127-139 Ph¹m Hồng Thái Hà Quang Hùng (2005), Nghiên cứu đa dạng hình thái ong nội đảo vùng biển Đông Bắc Quảng Ninh, Báo cáo khoa học Hội nghị Côn trùng học toàn quốc, (lần thứ 5), 11-12/04/2005, Nhà xuất nông nghiệp Hà nội, trang 688-691 Smith D R., Natapot Warrit, Gard W Otis, P H Thai and D Q Tam (2005), “A scientific note on high variation in the noncoding mitochondrial sequences of Apis cerana from South East Asia”, Journal of Apicultural Research, 44 (4): 00-00 (2005), IBRA, UK, pp 157-158 Phạm Hồng Thái, Hà Quang Hùng, Trần Văn Toàn (2005), Sự đa dạng hình th¸i cđa ong néi Apis cerana Fab ë mét sè vùng phía Bắc Việt Nam, Tạp chí Bảo vệ thực vËt, (sè 5/2005), XÝ nghiƯp in Thđy lỵi, trang 31-44 24 Mở đầu Hớng sử dụng kết nghiên cứu công tác giống bảo tồn ong nội Việt Nam: Quần thể ong Đồng Văn (Hà Giang) cã tÝnh tơ TÝnh cÊp thiÕt cđa ®Ị tài đàn suất mật cao, nh có triĨn väng thùc tÕ s¶n Ong néi Apis cerana Fabricius 1793 loài ong mật địa có xuất, chọn lọc nhân giống chỗ để phuc vụ cho sản xuất ong mật; Cần tạo tổ hợp lai từ nguồn: ong nội ngòi đốt Việt Nam quản lý, hoá đem lại giá trị kinh tế Đồng Văn (Hà Giang) với ong nội đảo Trà Bản (Quảng Ninh), cao từ sản phẩm chúng nh: mật ong, phấn hoa, sữa ong chúa, Minh Hoá (Quảng Bình), Buôn Đôn (Đắk Lắk), Giồng Trôm (Bến sáp ong keo ong Tuy nhiên, giá trị kinh tế từ hoạt động thụ phấn Tre), Tịnh Biên (An Giang) Côn Đảo (Bà Rịa - Vũng Tàu) để tạo ong cho trồng cao nhiều lần so (trên 143 lần) với giá trị kinh giống ong nội thích ứng cao; Quần thể ong nội Đồng Văn (Hà tế từ sản phẩm mà chúng mang lại (Crane E and Walker P., 1983[42]; Giang) lµ nguån gen quý cần đợc bảo tồn nghiêm ngặt (cấm đa ong Free J B., 1998[51][52]; Sivaram V., 2004[102]) Nu«i ong néi phù từ nơi khác đến điểm bảo tồn) Đồng thời địa điểm khác nh Sapa hợp với hình thức phát triển kinh tế hộ gia đình có ý nghĩa quan trọng (Lào Cai), đảo Trà Bản (Quảng Ninh), Minh Hoá (Quảng Bình), Buôn chơng trình xoá đói giảm nghèo cho đồng bào vùng núi, dân tộc Đôn (Đắk Lắk), Giồng Trôm (Bến Tre), Tịnh Biên (An Giang) Côn ngời Đảo (Bà Rịa - Vũng Tàu) phải đợc bảo tồn để trì tính đa dạng sinh học làm nguồn vật liệu di truyền cho chọn giống ong nội chất lợng cao Việt Nam Đề nghị ứng dụng phân loại ong nội (Apis cerana F.) Việt nam dựa hình thái học đà nghiên cứu vào việc phân loại loài ong khác Việt Nam xác định đa dạng sinh học loài ong mật Hoàn thiện phạm vi nghiên cứu ứng dụng sinh học phân tử phân Mặc dầu số lợng đàn ngời nuôi ong nội nớc đà tăng mạnh năm gần (250.000 đàn năm 2003), nhng lại cha có chơng trình giống ong nội mang tính chiến lợc lâu dài phục vụ cho sản xuất (Chinh P H and Tam D Q., 2004)[35] Nguyên nhân thiếu đánh giá định loại cách xác nguồn gen ong nội để ®−a vµo lµm vËt liƯu di trun (gièng gèc) cho chơng trình chọn lọc lai tạo Hơn nữa, việc phân loại mức dới loài loại ong nội (Apis cerana F.) Việt Nam thông qua đặc điểm đoạn ong nội Việt Nam tác giả trớc dựa phân Noncoding ADN ty thể quần thể ong nội phía Bắc chọn tích sơ Ruttner F (1988)[97] mà cha có đánh giá tổng thể giống ong mật Việt Nam mặt hình thái lẫn di truyền Nhân nuôi đại trà quần thể ong nội Đồng Văn (Hà Giang) (nguồn gen quý) sản xuất Việc điều tra, đánh giá phát nguồn gen ong nội (dựa vào 41 tiêu hình thái ADN ty thể) nớc quan trọng cho công tác giống ong nội chất lợng cao, bảo tồn nguồn vật liệu di 23 truyền trì phát triển bền vững ngành ong Việt Nam lại Giang) phân loài A cerana indica phân bố khu vực lại cha đợc nghiên cứu cách đầy đủ nớc Hai phân loài có vùng ranh giới giao thoa di truyền khu vực bao gồm Đình Lập, Văn LÃng (Lạng Sơn); Nguyên Bình Ong nội cần phải đợc bảo tồn Vì chúng phải đối mặt với (Cao Bằng), Ba Bể (Bắc Kạn), Phú Lơng (Thái Nguyên), Sapa (Lào số nguy nh dịch bệnh, lẫn tạp, thoái hoá, nguồn thức ăn bị chanh Cai) Móng Cái, đảo Cái Chiên, Cô Tô (Quảng Ninh) thuộc khu chấp bị thu hẹp (do ngày nhiều ngời thích nuôi ong mật nhập nội Apis mellifera hơn) Những nguy làm giống địa vực Về đặc điểm hình thái: Quần thể ong nội Đồng Văn (Hà Giang) phơng quý có tính chống chịu thích nghi cao mà trình tiến vừa có kích thớc thể lớn nhất, vừa có màu sẫm so với địa hoá đà phải trải qua hàng triệu năm để lại điểm khác khu vực 1; Qua phân tích sai khác phân biệt theo Vì vậy, để giải vấn đề cấp thiết tiến khoảng cách liên kết, nh phân tích sai khác phân biệt hình Elíp hành thực đề tài: Nghiên cứu đặc điểm hình thái, sinh học phân tử quần thể ong nội đa dạng hình thái có dạng hình thái (ADN ty thể) quần thể ong nội Apis cerana Fabricius phân bố riêng biệt là: quần thể Đồng Văn (Hà Giang), Văn LÃng (Lạng Sơn), Sapa (Lào Cai)(khu vực 1); đảo Trà Bản (Quảng Ninh)(Khu Vực Việt Nam đề xuất hớng sử dụng nguồn gen vào công tác chọn 2); Minh Hoá (Quảng Bình), Buôn Đôn (Đắk Lắk), Tịnh Biên (An tạo giống ong mật nớc ta Giang)(khu vực 3); Giồng Trôm (Bến Tre) Côn Đảo (Bà Rịa - Vũng Tàu)(khu vực 4); Các yếu tố khí tợng địa hình khu vực nghiên cứu Mục đích yêu cầu đề tài 2.1 Mục đích Trên sở hiểu biết tình hình phân bố cđa qn thĨ ong néi A cerana F ë ViƯt Nam, phân tích đặc điểm hình thái, sinh học phân tử (ADN ty thể) để phân loại xác mức dới loài từ làm sở đề xuất cho công tác giống bảo tồn loài ong mật nớc ta 2.2 Yêu cầu - Điều tra tình hình phân bố quần thể ong nội A cerana F phân bố khu vực khác Việt Nam - Nghiên cứu hệ thống đặc điểm hình thái sinh học phân tử (ADN ty thể) quần thể ong nội ảnh hởng không đáng kể đến kích thớc thể ong nội Về đặc điểm sinh học phân tử (ADN ty thể): qn thĨ ong néi (Apis cerana F.) ë ViƯt Nam đa dạng di truyền so với số quần thể ong nội Châu Trong số 13 giải trình tự ADN ty thể đoạn gen COI có haplotype tạo thành dòng di truyền khác quần thể ong nội phía Bắc Việt Nam Haplotype quần thể ong nội Đồng Văn (Hà Giang) khác biệt với haplotype quần thể ong nội khác vị trí nucleotit thứ 160 Cytosin đoạn gen COI; Thông qua đặc điểm trình tự đoạn Noncoding ADN ty thể quần thể ong néi phÝa Nam ViƯt Nam cịng cã haplotype có haplotype lần đợc ghi nhận haplotype Vietnam1, Vietnam2 Vietnam3 22 (Quảng Ninh), Minh Hoá (Quảng Bình), Buôn Đôn (Đắk Lắk), Tịnh Biên - Xác định vị trí phân loài ong nội ranh giới phân bố chúng (An Giang), Giồng Trôm (Bến Tre) Côn Đảo (Bà Rịa - Vũng Tàu) Phơng thức bảo tồn giống ong nội chất lợng cao là: - Việt Nam dựa đặc điểm hình thái sinh học phân tử (ADN ty thể) - Đề xuất hớng sử dụng kết nghiên cứu hình thái sinh học phơng pháp chọn lọc quần thể khép kín chọn lọc đại phân tử (ADN ty thể) vào công tác giống bảo tồn ong nội Việt trà để nâng cao trì chất lợng giống, - Quần thể ong nội tiến hành chọn lọc điểm bảo tồn Nam Đồng thời tiến hành bảo tồn nghiêm ngặt nguồn gen làm nguyên liệu cho công tác giống (ngăn cấm triệt để du nhập nguồn gen khác vào khu vực bảo tồn, tránh lai tạp, ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 3.1 ý nghĩa khoa học nguồn gen quý) Quần thể ong nội điểm bảo tồn đợc coi nguồn giống gốc cho chơng trình chọn tạo giống ong nội (ADN ty thể) áp dụng phơng pháp tiên tiến (phân tích đa biến Việt Nam - - Lần ứng dụng kỹ thuật PCR để phân tích sinh học phân tử với 41 tiêu hình thái) nghiên cứu quần thể ong nội phân Quản lý dịch bệnh không cho bùng phát nguồn gen bố Việt Nam điểm bảo tồn Tóm lại phân loài ong nội (Apis cerana cerana) Đồng Văn (Hà Giang) nguồn giống tốt đáng đợc quan tâm cho công tác giống ong nội nguồn gen quý cần phải đợc bảo tồn Việt Nam Kết luận đề nghị Kết luận Tình hình phân bố nguồn gen loài ong nội (Apis cerana Fabricius) 63 địa điểm điều tra thuộc khu vùc ë ViƯt Nam: Ch−a ph¸t hiƯn thÊy ong nội tồn đảo Lý Sơn (Quảng NgÃi), đảo Phú Quý (Bình Thuận), bán đảo Cà Mau (Cà Mau) Ong néi cã rÊt Ýt t¹i vïng ngËp n−íc Mộc Hoá (Long An); Có 36 địa điểm điều tra với nguồn gen ong nội nguyên vẹn chủ yếu hình thức nuôi ong cổ truyền (chiếm 82,61%) Các quần thể ong nội Việt Nam thuộc phân loài Apis - Quần thĨ ong néi A cerana F ë ViƯt nam lµ đa dạng di truyền so với số quần thể ong nội vùng phân bố tự nhiên chúng Châu - Xác định đợc quần thể ong nội phân bố Đồng Văn (Hà Giang) phân loài Apis cerana cerana Fabricius 1793 quần thể lại phân loài Apis cerana indica Fabricius 1798 - Bổ sung tài liệu điều tra xác định phân bố ong nội cách hệ thống khắp nớc 3.2 ý nghĩa thực tiễn - Phân loài ong nội Apis cerana cerana Đồng Văn (Hà Giang) có tính tụ đàn lớn, suất mật cao có triển vọng đa sản xuất Đối tợng phạm vi nghiên cứu đề tài - Đối tợng nghiên cứu đề tài loài ong néi Apis cerana Fabricius 1793 cerana cerana Fabricius 1793 Apis cerana indica Fabricius 1798 - Phạm vi nghiên cứu đề tài: Nghiên cứu đặc điểm hình thái, sinh Phân loài A cerana cerana phân bố cao nguyên Đồng Văn (Hà học phân tử (ADN ty thể) ong nội địa điểm nghiên cứu làm 21 sở tảng đa nguồn ong nội tốt cho suất, phẩm Ngoài ra, cuối năm 2006, tiến hành thu thập ong chúa chất chống chịu với dịch hại quần thể ong nội A cerana F Đồng Văn (Hà Giang) giới thiệu Những đóng góp luận án vào trại nuôi ong Mỹ Đức (Hà Tây) để theo dõi khả xuất mật - Lần Việt Nam kết hợp phân tích 41 tiêu hình thái với phân tích ADN ty thể cung cÊp dÉn liƯu chÝnh x¸c vỊ ngn gen ong nội A cerana F Việt Nam Trên sở đà phát đợc 36 địa chúng vụ mật hoa nhÃn (2007) Kết suất mật đợc ghi bảng 3.17 Bảng 3.17 Năng suất mật ong Đồng Văn (Hà Giang) đợc nuôi Mỹ Đức (Hà Tây) điểm có nguồn gen ong nội nguyên vẹn cha bị lai tạp, đợc nuôi theo phơng pháp cổ truyền - Đà xác định phân bố phân loài ong mật: Apis cerana cerana Apis cerana indica Việt Nam - Đà xác định đợc haplotype đoạn COI có dòng di truyền ong mật miền Bắc ong nội A cerana có haplotype đoạn Noncoding ë ong miỊn Nam, ®ã cã haplotype míi đợc ghi nhận - Đà phát đợc phân loài Apis cerana cerana F Đồng Văn (Hà Giang) quý hiếm, cha bị lai tạp, có phẩm chất cao cần đề xuất bảo tồn phát triển bền vững Cấu trúc luận án Luận án toàn văn đợc trình bày 127 trang giấy khổ A4 Ngoài TT Ký hiệu đàn ong CB1 CB2 CB3 ĐP Tính tụ đàn (cầu ong/đàn) 5 3-4 Năng suất mật trung bình (Kg/đàn) 11,3 9.5 10,7 5kg Ghi chú: CB1, CB2 CB3: đàn có ong chúa thu Đồng Văn; ĐP: đàn địa phơng có ong chúa Hà Tây Từ bảng 3.17 cho thấy, đàn ong nội có chúa thu Đồng Văn đa nuôi Hà Tây có suất mật cao đàn ong nội địa phơng (Hà Tây) Từ đó, khẳng định phân loài ong nội Đồng Văn (Hà Giang) nguồn giống tốt đáng đợc quan tâm cho công tác giống ong nội Việt Nam 3.5.2 Công tác bảo tồn phần mở đầu, kết luận đề nghị, phần nội dung gồm chơng: chơng Để thực chơng trình giống ong nội chất lợng cao dựa 1: Tổng quan tài liệu; chơng 2: Địa điểm, thời gian, vật liệu, nội dung kết nghiên cứu đặc điểm hình thái, ADN ty thể số đặc điểm phơng pháp nghiên cứu; chơng 3: kết nghiên cứu thảo luận với sinh học đề xuất xây dựng số điểm bảo tồn ong nội nhằm 17 bảng 23 hình Một danh mục 124 tài liệu tham khảo (29 tài liệu lu giữ nguồn gen, bảo tồn trì đa dạng nguồn gen ong nội đảm tiếng Việt, 95 tài liệu tiếng Anh) Phần phụ lục dẫn số liệu chi tiết bảo cho ngành ong nớc ta phát triển bền vững Các điểm là: Đồng phần mở đầu, chơng 1, Văn (Hà Giang), Văn LÃng (Lạng Sơn), Sapa (Lào Cai), đảo Trà Bản 20 lâu dài bền vững cần phải tiến hành bảo tồn, lu giữ nguồn gen Chơng 1: Tổng quan tài liệu 1.1 Đa dạng loài ong mật thuộc chi Apis Nh việc điều tra, đánh giá phát nguồn gen quý hiến quần thể ong nội bớc quan trọng cho việc định hớng công tác giống chiến lợc bảo tồn nguồn gen cho công tác giống lâu dài Bảng 3.16 Một số đặc điểm sinh häc cđa qn thĨ ong néi A cerana ë Việt Nam Địa điểm điều tra Đồng Văn (Hà Giang) Nguyên Bình (Cao Bằng) Tủa Chùa (Điện Biên) Đảo Trà Bản (Quảng Ninh) Côn Đảo (Bà Rịa - Vũng Tàu) 1.1.1 Nghiên cứu thành phần loài ong mật thuộc chi Apis giới Ong mật thuộc cánh màng (Hymenoptera) thuộc họ Apidae Trong họ có hä phơ Apinae vµ chØ cã mét téc (tribe) Apini gåm loµi lµ: Apis mellifera Linnaeus, Apis cerana Fabricius, Apis dorsata Sức đẻ trứng Năng suất mật Tính tụ đàn Tình hình ong chúa (Kg/đàn/năm) (số cầu/đàn) dịch bƯnh (sè trøng/24h) Fabricius vµ Apis florea Fabricius (Ruttner F., 1988 [97]; Maa T C (1953)[71]) lại chia thành 34 loài Tính đến thành phần loài ong mật đà lên tới loài châu á: Apis laboriosa Smith 1871, A dorsata 1032 16,735* 8-10 Ýt - 3,660 5-6 Cã & Koeniger 1996, A koschevnikovi Enderlein 1906, A nigrocincta 765 4,556 5-6 Cã Smith 1861, A florea Fabricius 1787, A andreniformis Smith 1858 vµ 826 11,375 5-7 Cã 656 - 4-5 Không loài ong châu Âu nhập néi A mellifera Linnaeus 1758 (Oldroyd B Ghi chó: * vụ mật đàn Bảng 3.16 sơ cho thấy suất mật quần thể ong qua điều tra ban đầu Đồng Văn (Hà Giang) đảo Trà Bản (Quảng Ninh) có suất mật cao sức đẻ lớn Trong ong nội Đồng Văn (Hà Giang) có suất mật cao, riêng vụ mật hoa bạc hà dại (Elsholtzia cypriani Chow 1974) suất đà đạt tới 16 kg/đàn/năm Trong với suất mật trung bình dòng chọn lọc ong nội theo quần thể khép kín tác giả Phùng Hữu Chính (1996)[5] đạt 15.54 kg/đàn/năm, tính tụ đàn 3-5 cầu/đàn sức đẻ trứng ong chúa 403,05 trứng/24 Fabricius 1793, A cerana Fabricius 1793, A nuluensis Tingek, Koeniger P and Wongsiri S., 2004)[82] 1.1.2 Nghiªn cøu n−íc vỊ thành phần loài ong mật thuộc chi Apis Từ 1975 cho tíi nay, mét sè nhµ khoa häc ngµnh ong đà xác định thêm đợc loài ong mật lµ Apis laboriosa (Trung L Q et al., 1996)[119] vµ Apis andreniformis (Phạm Hồng Thái cộng sự, 1997)[22] Về thành phần chủng ong nội hay dạng sinh thái ong nội cha rõ ràng gi¶ thiÕt r»ng ong néi cđa ViƯt nam cã phân loài Apis cerana cerana Apis cerana indica, có tới dạng sinh thái (Chinh X T., 2004[36]; Thai P H., 2003[116]) 1.1.3 Giá trị kinh tế loài ong mật thuộc chi Apis ë ViƯt Nam Ong mËt ngoµi viƯc cung cÊp cho ngời sản phẩm quý nh mật ong, phấn hoa, sữa chúa, chúng có vai trò to lớn việc thụ phấn trồng thông qua hoạt động kiếm ăn hoa 6 19 1.1.4 Nguyên nhân ảnh hởng đến quần thể loài ong mËt Nh−ng chØ cã mét mÉu sè mÉu thu thËp t¹i Cao B»ng l¹i thc vỊ ë ViƯt Nam phân loài Apis cerana cerana nh hình 3.23 Có số nguyên nhân nh nơi sinh sống (habitat) chúng bị tàn phá, hoạt động săn bắt mật ong mức ô nhiễm môi trờng ảnh hởng đến quần thể loài ong mật 1.2 Đa d¹ng di trun cđa ong néi Apis cerana F 1.2.1 Nghiên cứu hình thái ong nội giới nớc Da đặc điểm hình thái phân bố địa lý, loài ong nội đợc chia thành phân loài: Apis cerana indica Fabricius 1798, A cerana cerana Fabricius 1793, A cerana himalaya Maa 1944 vµ A cerana japonica Radoszkowski 1877 (Chinh X T et al., 2005[37]; Ruttner F., 1988 [97]) Mét sè nhµ khoa häc ngµnh ong nớc đà công nhận có hai phân loài ong nội Việt Nam: phân loài thứ miền Bắc A c Hình 3.23 So sánh 12 trình tự gen 16s Riboxom cerana phân loài thứ hai miền Nam A c indica (Phïng H÷u Ghi chó: AC2, thc vỊ Tủa Chùa; AC 4, 5, thuộc Nguyên Bình; AC 7, thuộc Chính, 1996[5]; Nguyễn Văn Niệm, 1991[14]; Nguyễn Văn Niệm, Bảo Lộc; AC 10,11,12 thuộc Cát Bà; AC 13, 14 thuộc Côn Đảo; A cer = A cerana 2001[15]) indica; A flor = A florea; A dor = A dorsata; A melf = A mellifera 1.2.2 Nghiªn cứu sinh học phân tử ong nội Tóm lại: ong nội nớc ta có phân loài Apis cerana cerana Đến nghiên cứu nớc sinh học phân tử đối Apis cerana indica Phân loài Apis cerana cerana phân bố cao với ong nói chung ong nội Apis cerana nói riêng Và có số nguyên Đồng Văn (Hà Giang) phân loài Apis cerana indica phân bố công trình enzyme (Nguyễn Văn Niệm, 2001[15], Niem N V et al., khu vực lại nớc, vớ dạng hình thái riêng biệt Hai 2001[78]) phân loài có phần ranh giới di truyền giao thoa đồ Việt 1.3 Công tác giống bảo tồn ong nội Apis cerana F nam vùng phía Bắc 1.3.1 Công tác giống ong nội A cerana F giới Việt Nam 3.5 Hớng sử dụng kết nghiên cứu hình thái sinh học phân tử Các nhà chọn giống ong đa tiêu chí chọn lọc tạo giống là: suất mật cao, sức đẻ trứng ong chúa mạnh tụ đàn (ADN ty thể) vào công tác giống bảo tồn ong nội 3.5.1 Công tác giống cao, (Crane E., 1990)[40] Trong tiêu chí tiêu suất Để có chơng trình giống tốt cần phải có nguồn vật liệu di mật tính trạng di truyền nhiều gen quy định (Crane E., 1990[40]; truyền tốt, đa dạng, phong phú nhằm đáp ứng đợc lợi ích cho ngời 18 Lơng (Thái Nguyên) đến Đình Lập (Lạng Sơn) trở lên phía Bắc Laidlaw H H and Page R E., 1997[69]) Chọn lọc lai tạo giống đối dạng di truyền thứ ong nội ®¶o cđa Qu¶ng Ninh bao gåm víi ong néi Apis cerana đà đợc thực từ năm 50 kỷ Móng Cái dạng di truyền thứ hai phân loài Apis cerana trớc (Verma L R., 1990)[121] Tại Việt Nam, nuôi ong nội Apis cerana cerana Ong nội Tủa Chùa (Điện Biên), Mù Căng Chải (Yên Bái) có từ kỷ thứ (Phùng Hữu Chính, 1996[5]; Phùng Hữu Chính Vũ dạng di truyền thứ ong nội Bình Liêu, Đầm Hà (Quảng Ninh) Văn Luyện, 1999[6]) dạng di truyền thứ hai phân loài Apis cerana indica 1.3.2 Công tác bảo tồn ong nội A cerana F giới Việt Nam Ong mật đóng vai trò quan trọng việc trì cân sinh thái trở thành vật thị để đánh giá môi tr−êng (Fabunmi M., 2004)[49] ] Khi mét loµi ong nµo bị khu rừng nhiệt đới loài thực vật thu phấn nhờ ong bị biến tơng lai gần (do đồng tiến hoá) nh chuỗi thức ăn hệ sinh thái có nguy bị phá (Thai H P., 2001)[115] Do ®ã Fabunmi M., 2004[49] đa cần thiết phải thực chiến lợc bảo tồn ong mật Đối với ong nội A cerana, việc điều tra tổng thể khắp cá nớc nhằm phát nguồn gen đồng thời xây dựng khu vực bảo tồn lu giữ chỗ làm vật liệu di truyền cho chơng trình chọn tạo Hình 22 Bản đồ ranh giới giao thoa di truyền phân loài ong phía Bắc Ghi chó: : A c indica : A c cerana, c¸c gièng ong néi A cerana ë n−íc ta cã chÊt lợng cao đảm bảo cho ngành ong Việt Nam phát triển bền vững cần thiết : giao thoa di truyền phân loài Sự giao thoa phân loài đà đợc Phạm Hồng Thái (2003)[24] nghiên cứu trình tự ADN ty thĨ theo tiĨu phÇn 16s ARN riboxom cđa quần thể ong nội Nguyên Bình (Cao bằng), Chơng 2: Địa điểm, thời gian, vật liệu, nội dung phơng pháp nghiên cứu 2.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu Tủa Chùa (Điện Biên), Cát Bà (Hải Phòng), Bảo Lộc (Lâm Đồng) Côn - Địa điểm điều tra thực địa gồm khu vực Đảo (Bà Rịa - Vũng Tàu) Cụ thể tất mẫu phân tích thuộc - Phòng thí nghiệm: Phòng thí nghiƯm Sinh häc ph©n tư cđa Trung t©m vỊ ong nội Apis cerana indica (so sanh với trình tự genebank) nghiên cứu Ong Viện Sinh thái - Tài nguyên sinh vật - Đề tài đợc tiến hành nghiên cứu từ năm 2002 đến năm 2007 2.2 Vật liệu nghiên cứu 17 Chúng tiến hành phân tích so sánh đặc điểm hình thái đàn - Vật liệu nghiên cứu: Các mẫu ong thợ quần thể ong nội ong nội thuộc phân loài A cerana cerana (mÉu chn cđa ViƯn nghiªn Apis cerana F thu thập khu vc nghiên cứu Việt Nam cứu ong mật Phơng Đông, trờng Đại học Nông nghiệp Vân Nam, - Dụng cụ nghiên cứu: thực địa (bản đồ địa hình tỷ lệ 1: 1.000.000, Trung Quốc) Kết trình bày hình 3.21 máy định vị cầm tay GPS, thớc palmer, ); phòng thí nghiệm (bộ giải phẫu côn trùng Lasec-Italia, kính hiển vi soi nổi, hệ thống thiết bị đo hình thái Cias - Mỹ, máy PCR, máy đọc trình tự ADN tự động, ) hoá chất (bộ hoá chất tách triết ADN, hoá chất điện di, hoá chất đọc trình tự ADN, ) 2.3 Nội dung phơng pháp nghiên cứu 2.3.1 Điều tra tình hình phân bố quần thĨ ong mËt Apis cerana F ë ViƯt Nam - Điều tra, thu thập: ngẫu nhiên - đàn ong khác hộ gia đình nuôi ong khác (nh nuôi ong cổ truyền; nuôi ong đại) tự nhiên địa điểm Thí nghiệm nghiên cứu đặc điểm hình thái: đàn thu thập 50 ong thợ cho phân tích hình thái Để đảm bảo tính đồng mặt hình thái, ong thợ đợc thu cầu ong Thí nghiệm nghiên cứu di truyền: đàn lại thu thêm 20 ong thợ đàn - Bảo quản mẫu: Mẫu đợc thu thập đợc lu giữ dung dịch cồn (ethanol) có nồng độ 90o cho mục đích nghiên cứu (phân tích hình thái phân tích di truyền) 2.3.2 Nghiên cứu đặc điểm hình thái, sinh học phân tử (ADN ty thể) quần thể ong nội A cerana F Việt Nam - Phơng pháp đo đếm hình thái: Tại phòng thí nghiệm Trung tâm ong: lấy ngẫu nhiên 20 mẫu ong thợ đàn (3 - đàn cho Hình 3.21 So sánh hình thái ong nội phân loài A cerana cerana (mẫu chuẩn cđa Trung Qc) víi ong néi t¹i ViƯt Nam Tõ hình 3.21 cho thấy ong nội Đồng Văn (Hà Giang) thuộc nhánh quan hệ hình thái gần gũi với qn thĨ ong néi (mÉu chn) cđa Trung Qc KÕt hoàn toàn có giá trị (p