tìm hiểu máy hplc

Trường Đại học Sài Gòn Trường Đại học Sài Gòn Khoa Khoa học môi trường Khoa Khoa học môi trường Tiểu luận môn học: PHÂN TÍCH MÔI TRƯỜNG Đề tài: TÌM HIỂU MÁY HPLC • Nhóm: 2 Lớp: DKM1091 Thành viên thực hiện: Mã sinh viên: Đỗ Hồng Vân 3109340144 Nguyễn Thị Như Mai 3109340073 Huỳnh Trần Chiến Công 3109340015 Trương Thị Tâm Tâm 3109340 GV Hướng dẫn: GS.TS. Phạm Nguyễn Kim Tuyến HPLC HPLC 1 TỔNG QUAN 2 CẤU TẠO 3 NGUYÊN TẮC HOẠT ĐỘNG ỨNG DỤNG CỦA MÁY HPLC 4 HPLC HPLC 1 TỔNG QUAN 2 HPLC HPLC 1 TỔNG QUAN HPLC ( High Performance Liquid Chromatography) là phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao. Trước kia gọi là phương pháp sắc ký lỏng cao áp (High Pressure Liquid Chromatography). Phương pháp này ra đời từ năm 1967-1968 trên cơ sở phát triển và cải tiến từ phương pháp sắc ký cột cổ điển. Hiện nay nó áp dụng rất lớn trong nhiều ngành kiểm nghiệm đặc biệt là ứng dụng cho nghành kiểm nghiệm thuốc . Và nó hiện là công cụ đắc lực trong phân tích các thuốc đa thành phần cho phép định tính và định lượng . I. TỔNG QUAN Phương pháp sắc ký (Được phát minh bởi nhà sinh vật học người Nga – Mikhail Tswest ) :  Kỹ thuật tách (seperation) các cấu tử trong một hệ đồng thể (khí hoặc lỏng)  Cân bằng nồng độ của các cấu tử trong hai pha tiếp xúc nhau: pha tĩnh (stationary phase) và pha động (mobile phase)  Sự phân tách dựa trên tốc độ kéo theo (elution) khác nhau của các cấu tử trong cột (column)  Một đầu dò (detector) ở đầu ra của cột cho phép định lượng liên tục các cấu tử trong hỗn hợp đầu T=0 T=10’ T=20’ Injector Injector Detector Detector Most Most Interaction with Stationary Phase Interaction with Stationary Phase Least Least Flow of Mobile Phase Flow of Mobile Phase T=0 T=10’ T=20’ Injector Injector Detector Detector Most Most Interaction with Stationary Phase Interaction with Stationary Phase Least Least Flow of Mobile Phase Flow of Mobile Phase Sắc ký phân tách Sắc ký phân tách (Elution chromatography) (Elution chromatography) Phân tách sắc ký: Các chất tan bị rửa qua một pha tĩnh nhờ sự chuyển động của pha động qua nó Mẫu Pha động Detector t 0 t 1 t 2 t 3 t 4 t 0 t 1 t 2 t 3 t 4 T í n h i ệ u d e t e c t o r Thời gian Sắc ký đồ Sắc ký đồ (Chromatogrames) (Chromatogrames) Điều kiện để thu được sắc ký đồ: - Đầu dò (Detector) được lắp đặt ở điểm cuối của cột - Đầu dò tương thích với các chất cần phát hiện Sắc ký đồ: Biểu diễn sự biến thiên của tín hiệu ra theo thời gian hoặc theo thể tích tiêu hao của pha động Ưu điểm của phương pháp sắc ký - Có thể phân tích đồng thời nhiều hợp chất - Không cần làm bay hơi mẫu - Độ phân giải cao nhờ quá trình tách trên cột - Độ nhạy cao (ppm-ppb) nhờ đầu dò - Thể tích mẫu phân tích nhỏ (1-100µ L) Mobile phase (Pha động) Stationary phase (Pha tĩnh) Khái niệm về kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu năng cao Sắc ký lỏng hiệu năng cao là một phương pháp chia tách trong đó pha động là chất lỏng và pha tĩnh chứa trong cột là chất rắn đã được phân chia dưới dạng tiểu phân hoặc một chất lỏng phủ lên một chất mang rắn, hay một chất mang đã được biến đổi bằng liên kết hoá học với các nhóm chức hữu cơ . - Quá trình tách dựa vào tính chất hóa học, vật lý và hóa lý của các chất. Quá trình tách dựa vào tính chất hóa học, vật lý và hóa lý của các chất. - Dựa trên 2 quá trình: Dựa trên 2 quá trình: Hấp phụ Hấp phụ Giải hấp phụ Giải hấp phụ - Xảy ra liên tục giữa 2 pha: Xảy ra liên tục giữa 2 pha: Pha tĩnh: chất rắn hoặc lỏng, giữ chất phân tích Pha tĩnh: chất rắn hoặc lỏng, giữ chất phân tích Pha động: chất lỏng (1 chất hoặc hỗn hợp nhiều chất), hòa tan và di chuyển Pha động: chất lỏng (1 chất hoặc hỗn hợp nhiều chất), hòa tan và di chuyển chất phân tích chất phân tích - Sắc ký lỏng chia thành 2 nhóm - Sắc ký lỏng chia thành 2 nhóm Sắc ký lỏng áp suất thường (sắc ký cổ điển) Sắc ký lỏng áp suất thường (sắc ký cổ điển) Sắc ký lỏng áp suất cao (Sắc ký lỏng hiệu năng cao: HPLC) Sắc ký lỏng áp suất cao (Sắc ký lỏng hiệu năng cao: HPLC) Dựa vào bản chất của quá trình sắc ký, HPLC chia thành: HPLC SK ghép cặp ion SK phân bố SK pha thường SK pha đảo Sk trao đổi ion [...]... với đầu do (detector), HPLC cho phép: - Định tính: dựa vào thời gian lưu - Định lượng: dựa vào chiều cao hoặc diện tích peak II.CẤU TẠO MÁY HPLC Trong đó : 1- Bình chứa dung mơi pha động 2- Bộ phận khử khí 3- Bơm cao áp 4- Bộ phận tiêm mẫu ( bằng tay hay Autosample) 5- Cột sắc ký ( Pha tĩnh ) ( để ngòai mơi trường hay trong bộ điều nhiệt ) 6- Detector ( nhận tín hiệu ) 7- Hệ thống máy tính gắn phần mềm... tĩnh ) ( để ngòai mơi trường hay trong bộ điều nhiệt ) 6- Detector ( nhận tín hiệu ) 7- Hệ thống máy tính gắn phần mềm nhận,tín hiệu và sử lý dữ liệu và điều khiển hệ thống HPLC 8- In dữ liệu 1 - Bình đựng dung mơi - Hiện tại máy HPLC thường có 04 đường dung mơi vào đầu bơm cao áp Cho phép chúng ta sử dụng 04 bình chứa dung mơi cùng 1 lần để rửa giải theo tỷ lệ mong muốn và tổng tỷ lệ dung mơi của 4... hợp bọt q nhiều bộ khử khí khơng thể loại trừ hết được thì có thể Pump sẽ khơng hút được dung mơi khi đó áp suất khơng lên và máy sắc ký sẽ ngừng hoạt động 3- Bơm cao áp (hệ thống cung cấp dung mơi): - Bơm pha động vào cột tách - Điểu khiển tốc độ dòng, áp suất của pha động - Máy sắc ký lỏng của chúng ta hiện nay thường có áp suất tối đa 412 Bar (1at = 0.98Bar) Tốc độ dòng 0.1-9.999 ml/phút HỆ THỐNG... CHẤT VÀ ĐỊNH LƯNG : UV-VIS, HUỲNH QUANG, ĐỘ DẪN, ĐIỆN HÓA, KHỐI PHỔ … 7 HỆ THỐNG GHI NHẬN VÀ XỬ LÝ TÍN HIỆU (INTERFACE, SOFTWARE, PC) : DÙNG ĐỂ THU THẬP VÀ TÍNH TOÁN CÁC KẾT QUẢ III NGUN TẮC HOẠT ĐỘNG MÁY HPLC - Mẫu chất lỏng được đưa vào buồng bơm mẫu sau đó được bơm tự động vào cột tách - Dựa trên sự phân bố liên tục các cấu tử chất phân tích lên hai pha: một pha thường đứng n, có khả năng hấp thu chất... ổn định - Hiện 04 đường dung mơi phục vụ chủ yếu cho việc rửa giải Gradial dung mơi theo thời gian và cơng tác xây dựng NGUỒN CUNG CẤP PHA ĐỘNG (MOBILE PHASE): LÀ BÌNH ĐỰNG DUNG MƠI HOẶC DUNG MƠI CHẠY MÁY 2 Bộ khử khí Degasse : Mục đích của bộ khử khí nhằm loại trừ các bọt nhỏ còn sót lại trong dung mơi pha động Nếu như trong q trình phân tích mà dung mơi pha động còn sót các bọt khí thì một số hiện... khơng chập nhau • Chất nào bị lưu giữ mạnh sẽ được rửa giải ra sau cùng, chất lưu giữ kém sẽ ra trước • Tuỳ từng chất cần nghiên cứu và các điều kiện phân tích để chọn các detector khác nhau Ứng dụng của HPLC - Chủ yếu xác định các hợp chất hữu cơ khó bay hơi trong nhiều đối tượng khác nhau: + Amino acid + Acid hữu cơ + Thuốc trừ sâu + … . dẫn: GS.TS. Phạm Nguyễn Kim Tuyến HPLC HPLC 1 TỔNG QUAN 2 CẤU TẠO 3 NGUYÊN TẮC HOẠT ĐỘNG ỨNG DỤNG CỦA MÁY HPLC 4 HPLC HPLC 1 TỔNG QUAN 2 HPLC HPLC 1 TỔNG QUAN HPLC ( High Performance Liquid Chromatography). Khoa học môi trường Khoa Khoa học môi trường Tiểu luận môn học: PHÂN TÍCH MÔI TRƯỜNG Đề tài: TÌM HIỂU MÁY HPLC • Nhóm: 2 Lớp: DKM1091 Thành viên thực hiện: Mã sinh viên: Đỗ Hồng Vân 3109340144 Nguyễn. suất cao (Sắc ký lỏng hiệu năng cao: HPLC) Sắc ký lỏng áp suất cao (Sắc ký lỏng hiệu năng cao: HPLC) Dựa vào bản chất của quá trình sắc ký, HPLC chia thành: HPLC SK ghép cặp ion SK phân bố SK