Tiểu luận BACILLUS CEREUS

Tiểu luận BACILLUS CEREUS

Nhóm:1 GVHD:Cô Trần Thị Mai Anh

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP TP.HỒ CHÍ MINH

VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ THỰC PHẨM

Bộ môn Vệ sinh an toàn thực phẩm

Tiểu luận:

BACILLUS CEREUS

Nhóm thực hiện: 1 Lớp học phần:2105016

GVHD: Cô Trần Thị Mai Anh

 Thành phố Hồ Chí Minh – 10 / 2011 

Nhóm:1 GVHD:Cô Trần Thị Mai Anh

I.Giới thiệu chung về BACILLUS CEREUS

1.Đặc điểm cấu tạo

2.Đặc điểm nuôi cấy

II.Tác hại khi nhiễm BACILLUS CEREUS

1.Cơ chế sản sinh độc tố và các loại độc tố

2.Cơ chế gây bệnh

2.1.Triệu chứng nôn mửa

2.2.Triệu chứng tiêu chảy

III.Các phương pháp phát hiện BACILLUS CEREUS trong thực phẩm

1.Đặc điểm và nguyên tắc

2.Môi trường và hóa chất

3.Quy trình phân tích

Nhóm:1 GVHD:Cô Trần Thị Mai Anh

Định lượng BACILLUS CEREUS bằng phương pháp đếm lạc khuẩn

3.1.Phát hiện bằng môi trường chọn lọc

3.2.Các phản ứng khẳng định

3.3.Các thử nghiệm phân biệt các loài trong BACILLUS CEREUS nhóm 1

3.4.Cách tính kết quả

4.Giới thiệu chung các phương pháp phân tích nhanh

4.1 Phương pháp miễn dịch

4.2 Kĩ thuật latex agglutination (LA)

4.3 Kĩ thuật lai phân tử( DNA- hybridization)

4.4 Kỹ thuật Microarray, Macroarray

4.5 Phương pháp phát hiện vi sinh vật bằng kỹ thuật Real Time PCR

PHẦN 3:KẾT LUẬN

PHỤ LỤC.

NHẬN XÉT CỦA GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN.

…Chân thành nhận lời góp ý của giáo viên hướng dẫn :

………

………

………

………

………

………

………

ĐIỂM CHO TỪNG SINH VIÊN

1 10264641 Trần Đông Phương Phần 1

2 10259831 Đặng Trần Thị Trúc

Tiên

Phần 2/I/1,2,3,4

3 10067621 Nguyễn Nhân Tín Phần 2/I/5,6

4 10217411 Nguyễn Thị Kim

5 10283711 Phạm Thị Nguyệt Nhi Phần 2/II

Nhóm:1 GVHD:Cô Trần Thị Mai Anh

6 10078591 Nguyễn Tuấn Huy Phần 2/III/1,2

7 10205111 Lê Xuân Thanh Loan Phần 2/III/3+

Powerpoint+presentation

8 10274011 Trần Minh Thuận Phần 2/III/4

9 10249121 Trần Thị Ý Yên Phần 3+Phụ lục

n

CAC BAN TIM HIEU VE NHUNG VAN DE SAU DE TRA LOI CAU HOI CUA LOP

1.VK KHONG TAO GIAP MO

2.VK DE MOC3.MOI TRUONG NA, TSA, BA, MYP, MOSSEL, NB, TSB

4.PHAN UNG VP (+)5.PHOSPHOLIPID LA GI

6.AP XE7.TRYPSIN, PEPSIN8.PHUONG PHAP MIEN DICH,

KI THUAT LATEX AGGLUTINATION

KI THUAT LAI PHAN TU

KI THUAT MICROARRAY

KI THUAT REAL TIME PCR

BCET - RPLAREAL TIME - PCR9.PHUONG PHAP DEM KHUAN LAC

PHUONG PHAP MNP10.PEPTONE DEM11.KHANG NGUYEN KHANG THECHAY DIEN DI

PHẦN 1:MỞ ĐẦU

Ngay cả khi có Pháp lệnh về Thực phẩm, hàng năm nước ta vẫn ghi nhận được hàng vạn ca mắc bệnh truyền qua đường thực phẩm Đó là một vấn đề cấp thiết của xã hội cần được quan tâm nhiều hơn nữa.Nguyên nhân chính của việc ngộ độc thực phẩm là

do ý thứccủa con người còn quá kém và thực phẩm được sử dụng không an toàn.Vi khuẩn là nguồn gây bệnh chính qua con đường thực phẩm (các vi sinh vật gây bệnh)

mà cơ quan thuốc và thực phẩm Mỹ khuyến cáo dân chúng về tác hại, cách phát hiện,

cơ chế lây nhiễm và cách đề phòng Một trong số những loại vi khuẩn gây ngộ độc

thực phẩm đó là Bacillus cereus Là một vi khuẩn gram dương, hìnhque, kị khí, sinh bào tử Bacillus cereus có thể làm người bị ngộ độc ói mửa tiêu chảy và trường hợp nặng hơn có thể gây tử vong.Bất cứ ai cũng có nguy cơ lây nhiễm Bacillus cereus

Nhóm:1 GVHD:Cô Trần Thị Mai Anh

Thực phẩm nhiễm Bacillus cereus là rất phổ biến Người ăn phải thực phẩm này

thường mắc hai bệnh điển hình là tiêu chảy và nôn mửa.Dạng ngộ độc gây tiêu chảy

bị gây ra bởi loại vi khuẩn Bacillus cereus có cấu trúc phân tử protein lớn Loại vi

khuẩn này rất dễ dính lên các nhóm thực phẩm như thịt, sữa, rau và cá Triệu chứng chính củaloại ngộ độc này là đại tiện ra nước và cơ bụng bị chuột rút khoảng sau 6-

15 tiếng kể từ lúc ăn phải Triệu chứng này kéo dài khoảng 24tiếng Nôn mửa cũng có

thể đi kèm nhưng thường hiếm gặp đối với loại ngộ độc gây tiêu chảy bởi Bacillus

cereus trọng lượng phân tử lớn.

Các bác sỹ đã ghi nhận được các biểu hiện lâm sàng đáng chú ý khác với những người bị ngộ độc bởi loại vi khuẩn Bacillus cereus một khi không được chữa trị kịp thời và triệt để Đó là biểu hiện viêm vú, chứng viêm nhiễm nặng, hoại tử, viêm màngnão, nhiễmtrùng, viêm mô tế bào, viêm toàn mắt, áp xe phổi, viêm màng trong tim Đối với trẻ sơ sinh, thậm chí có nguy cơ gây tử vong

Cách phòng cơ bản để khỏi nhiễm loại vi khuẩn Bacillus cereus là cần thận trọng khâu

chế biến thực phẩm và nấu nướng

Về khả năng kiểm tra vi sinh vật Bacillus cereus ở Việt Nam, theo Cục An toàn thực

phẩm (Bộ Y tế), cả nước chỉ có 38 trung tâm y tế dự phòng tỉnh, chiếm 60% tỉnh thành, có năng lực kiểm nghiệm Viện ở 4 vùng miền đều đủ năng lực xét nghiệm loại

vi khuẩn này

Từ 2001-2006, cả nước ghi nhận được hơn 5.600.000 ca tiêu chảy do nhiễm trùng qua thực phẩm, trong đó có 84 ca tử vong Riêng 9 tháng đầu năm ngoái ghi nhận được hơn 750.000 ca tiêu chảy trong đó có 12 ca tử vong Thựctế, theo các chuyên gia, phải gấp ít nhất 10 lần con số được công bố

Vì vậy, việc nghiên cứu các đặc điểm, cấu trúc của Bacillus cereus mang ý nghĩa đặc

biệt quan trọng trong việc phòng chống và chữa trị những trường hợp bị ngộ độc do

nhiễm Bacillus cereus.

Với phạm vi là một đề tài tiểu luận, nhóm chúng em chỉ đề cập đến Bacillus cereus trong Bacillus nhóm 1.

PHẦN 2:NỘI DUNG

I Giới thiệu chung về BACILLUS CEREUS.

Nhóm:1 GVHD:Cô Trần Thị Mai Anh

Bacillius cereus là vi khuẩn Gram dương khi chưa trưởng thành nhưng có thể thành

Gram âm khi chúng già, hình que, sinh bào tử, kị khí, có khắp nơi trong tự nhiên Một

số chuẩn vi khuẩn Bacillus cereus gây ngộ độc thực phẩm, trong khi một số chuẩn lại

có lợi cho hệ vi sinh vật đường ruột của động vật, theo phân loại quốc tế thuộc giới

Bacteria, ngành (phylum) firmicutes, lớp (Class) Bacilli, bộ (Order) Bacillales, họ (Family) Bacillaceaem,chi (Genius) Bacillus, loài (Species) Cereus.

Trong chi Bacillus này ngoài loài Cereus còn có một số loài như:

• Bacillus subtilis • Bacillus coagulans

• Bacillus cereus là loài vi khuẩn hiếu khí, bào tử dạng hình ovan, có khả năng

sinh nha bào, được phát hiện đầu tiên trong một ca nhiễm độc thực phẩm vàonăm 1955 Từ những năm1972 đến 1986 có tới 52 trường hợp trúng độc thực

phẩm do Bacillus cereus được phát hiện và báo cáo chiếm khoảng 2% số ca

bệnh thực phẩm, trên thực tế con số này lớn hơn rất nhiều

• 1 Đặc điểm cấu tạo BACILLUS CEREUS.

• Trực khuẩn, gram dương, tạo nội bào tử Kích thước 0,5–1,5 x 2-4 µ Vi khuẩn không tạo giáp mô, không có khả năng di động

• Hình 1: Bacillus cereus trên kính hiển vi

• Hình 2: Khuẩn lạc Bacillus cereus trên môi trường BA

• 2 Đặc điểm nuôi cấy.

• Là loại vi khuẩn dễ mộc

• Hiếu khí và kị khí tùy nghi

• Nhiệt độ 5-50oC, tối ưu 35-40oC

• pH 4,5-9,3, thích hợp 7-7,2

• Trên môi trường NA hay TSA sau 24 giờ tạo khóm lớn, nhăn nheo, xù xì

• Trên môi trường BA tạo dung huyết rộng

• Trên môi trường MYP (Mannitol Egg Yolk Polymixin): khóm hồng chung quanh có vòng sáng

• Trên môi trường Mossel (thạch cereus selective agar): khóm to hồng chung quanh

• có vòng sáng

• Trên môi trường canh NB, TSB: đục tạo váng, sau cặn lợn cợn

•

•

• Khuẩn lạc B.cereus trên

Khuẩn lạc B.cereus trên môi trường MYP

• môi trường Mossel

•

• 3 Tính chất sinh hóa.

• Trên môi trường đường: lên men

glucose trong điều kiện hiếu khí và kị

• Mọc trên NB + 0,001% lyzozym

•

• 4.Nguồn lây nhiễm.

•

các mẫu bụi, bẩn, cây ngũ cốc, nước, vv, vì vậy nó là một chất gây ô nhiễm phổ biến các mặt

Các loại thực phẩm giàu tinh bột, chẳng hạn như gạo hoặc khoai tây, thường

đi kèm với nôn B cereus (nôn) bùng phát độc tố Do quá trình chuẩn bị, một trong những chiếc xe thực phẩm phổ biến nhất để truyền bệnh nôn B cereus

là cơm chiên, và đã có nhiều đợt bùng phát báo cáo Các bào tử của B cereus được kích hoạt trong việc chuẩn bị ban đầu của lúa gạo, mà nếu bảo quản ở nhiệt độ lạm dụng (khoảng 59 đến 104 ° F hoặc 15 đến 40 ° C) cho một thời

gian dài, sẽ phát triển nhanh và sản xuất một loạiđộc tố là nhiệt ổn định và sẽ không được bất hoạt trong quá trình nấu ăn tiếp theo Các chủng gây tiêu chảy đã được tìm thấy trong một lựa chọn thực phẩm hơn Các

thịt và rau, súp và các sản phẩm sữa Không giống như các chất độc nôn, chất độc tiêu chảy

bị phá hủy trong nấu ăn Nếu các bào tử kinh

nghiệm điều kiện cho phép tăng trưởng, họ có thể phát triển đến mức độ

chất độc được sản xuất.

• 5.Tính chất gây bệnh.

• Vi khuẩn Bacillus cereus phân bố nhiều trong tự nhiên, nhiễm vào các loại thức

ăn qua đêm hay trữ lạnh lâu, thường gây ngộ độc thực phẩm

• 5.1 Độc tố.

• Độc tố: vi khuẩn sản sinh 2 loại độc tố

• Độc tố gây tiêu chảy (Type 1): Diarrhoed toxin Vi khuẩn sản sinh độc tố trênthịt, rau quả, gia vị Bản chất là một loại protein gây hủy hoại biểu bì và niêmmạc ruột, gây tiêu chảy có thể nguy hiểm đến tính mạng

• Độc tố gây nôn mửa (Type 2): Emetic toxin Vi khuẩn nhiễm trong gạo, cơmnguội, đậu các loại Bản chất độc tố là phospholipid có tính ổn định cao không

bị phân hủy ở nhiệt độ cao và dịch dạ dày

• Ngoài ra vi khuẩn còn có enzyme hemolyzin là một protein gây độc mạnh cóthể gây chết người Độc tố này có thể trung hòa bởi cholesterol trong huyếtthanh nhưng nó đã góp phần cho sự phát triển của vi khuẩn

• Bacillus cereus có thể gây ra sự nhiễm trùng và nhiễm độc khác nhau như:

nhiễm trùng máu, viêm màng não và nhiễm trùng mắt

• 5.2 Triệu chứng trúng độc.

• Thức ăn chứa mật độ vi khuẩn 105 vi khuẩn/g thực phẩm đủ gây ngộ độc

• Biểu hiện: đau bụng, buồn nôn và nôn sau 1-5 giờ ăn phải thực phẩm nhiễm vikhuẩn Bệnh có thể kéo dài 24 giờ Nếu ngộ độc do độc tố vi khuẩn, dấu hiệungộ độc rõ hơn: nôn, mệt mỏi, nhức đầu, mạch nhanh…nếu không điều trị kịp

thời bệnh sẽ tiến triển nặng Có 2 triệu chứng lâm sàng ngộ độc do Bacillus

cereus gây ra:

• Trường hợp nhiễm type 1 có triệu chứng đau bụng tiêu chảy nhưng

không sốt Bắt đầu sau 4-16 giờ sau khi ăn thực phẩm nhiễm khuẩn và kéo dài12-24 giờ Tiêu chảy có thể là một khối lượng nhỏ hoặc dồi dào và chảy

nước Loại này được gọi là "ủ bệnh dài" hay hình thức của bệnh tiêu chảy, và

nó tương tự như ngộ độc thực phẩm gây ra bởi Clostridium perfringens

• Trường hợp nhiễm type 2: Loại này được đặc trưng bởi buồn nôn và

nôn mửa và đau bụng và có một khoảng thời gian ủ bệnh là từ 1 đến 6 giờ, thời gian

kéo dài bệnh là 8 đến 10 giờ và trung bình là 9 giờ Nó giống như Staphylococcus

aureus (tụ cầu khuẩn) gây ngộ độc thực phẩm trong các biểu hiện triệu chứng của nó

và thời gian ủ bệnh Đây là "hình thức ủ bệnh ngắn" hoặc hình thức nôn của bệnh

protease và trypsin trypsin

•

• 6 Cách phòng ngừa

• Thực phẩm có nguồn gốc gây bệnh là sản phẩm ngũ cốc, nước sôt, hoa quả,xôi, cơm dĩa Ở Mỹ cơm chiên được xem là một trong những nguyên nhân

hàng đầu của nhiễm vi khuẩn Bacillus cereus Chính vì thế mà có người còn

gọi là hội chứng cơm chiên Những loại thực phẩm dễ nhiễm này bào tử

Bacillus cereus thường có mặt và có thể sống sót nếu đun nấu không kỹ Trực

khuẩn còn sống sót phát triển sẽ sinh độc tố Sau khi nấu đối với thực phẩmướt, nếu ướp lạnh không đủ độ cũng làm vi khuẩn tăng nhanh Cần thực hiệncác biện pháp kiểm soát đề phòng bệnh như đảm bảo vệ sinh khi chế biến, nấu

ăn thích hợp và lưu trữ thực phẩm, đặc biệt là gạo đã nấu chín để sử dụng saunày, bảo quản lạnh ở nhiệt độ thích hợp với thực phẩm chưa ăn ngay và khôngnên chế biến thực phẩm quá lâu trước khi ăn

• II.Tác hại khi nhiễm BACILLUS CEREUS.

• 1.Cơ chế sản sinh độc tố và các loại độc tố.

• Vì ngộ độc thực phẩm do Bacillus cereus không phải là loại bệnh được nói đến

nhiều, sự thật là phạm vi ảnh hưởng của loại bệnh này ít được biết đến, đượcbáo cáo là nguyên nhân gây ngộ độc thực phẩm và chiếm khoảng 33% trongtổng số các nguyên nhân gây ngộ độc thực phẩm (đa số các nguyên nhân là do

vi rút) ở Norway (1988-1993), 47% ở Iceland (1985-1992) Tỷ lệ thấp hơnnhiều được báo cáo ở các quốc gia khác bao gồm U.S (1.3%) và Canada(2.2%) Ở Anh và xứ Wales, có đến 468 trường hợp từ 1990 đến 1995 Bacillus

cereus là một thực vật hoại sinh trong đất rất phổ biến Nó được phân lập từ

nhiều nguồn thực phẩm đa dạng, đặc biệt là thực phẩm có nguồn gốc từ thựcvật, từ thịt, các và các sản phẩm từ thịt cá cũng vậy Phát hiện đầu tiên các vềcác mầm bệnh gây ngộ độc thực phẩm là từ năm 1949 khi Hauge đã phân lậpmẫu từ xốt vani sau khi có một ca ngộ độc thực phẩm gây tiêu chảy tại bệnhviện ở Oslo, Norway Xốt vani được nấu trước khi tiêu thụ và bảo quản ở nhiệt

độ phòng cho đến khi sử dụng Để khẳng định Bacillus cerus là nguyên nhân

gây ngộ độc, Hauge đã phát triển mẫu phân lập đến nồng độ khoảng 4x106ml-1

và uống 200ml cocktail Sau 13h, ông cảm thấy đau bụng và đi tiêu ra nhiềunước, triệu chứng này dai dẳng khoảng 8h Hơn 20 năm sau, một triệu chứng

gây ngộ độc thực phẩm khác do chủng Bacillus cereus gây ra lại xuất hiện ở

các công nhân người Anh Triệu chứng này nặng hơn triệu chứng nôn mửa vàkéo dài một thời gian ngắn (chưa đến 5h), điều này cho thấy rằng đây là một sựnhiễm độc Ngày nay, bệnh này liên quan đến triệu chứng gây nôn mửa doBacillus cereus

• Bacillus cereus có thể gây ra sự nhiễm trùng và nhiễm độc khác nhau, thêm

vào đó, những ngộ độc khác do Bacillus cereus gây ra là sự nhiễm trùng máu,

viêm màng não, và nhiễm trùng mắt Hai loại ngộ độc thực phẩm là nguyên nhân bởi rất nhiều nhấn tố gây độc hại khác nhau

• 2 Cơ chế gây bệnh

• 2.1 Triệu chứng nôn mửa

• Đặc điểm của bệnh nôn mửa và tính chất của độc tố gây nôn mửa được thể hiện

ở bảng 1-1 Sự giải thích về cấu trúc của độc tố emetic đã đưa đến những hiểu

biết sâu sắc hơn về triệu chứng này Độc tố emetic có tên là cereulide và là mộtchuỗi polypeptide ba lần lặp lại của bốn amino và/hoặc oxy-acid (bảng 1-1)

•

• Cereulide (polypeptide) là tên của một độc tố quan trọng gây ra triệu chứng nôn mửa do Bacillus cereus sản sinh ra Bài báo này giải quyết được nghiên cứu về quá trình sinh tổng hợp độc tố này dựa trên sự bất thường của độc tố depsipeptide từ Cacbon số 13 (13C) liệt kê ra trên 3 loại tiền L- amino acid (Valin, Alanin, Leuzin) trên môi trường tổng hợp trung gian Sự phân tích này được thực hiện dựa vào mức cấu tạo phân tử của amino hay oxy acid qua NMR

và ESI – MS của phương pháp kính quang phổ trên cereulide và sản phẩm thủyphân là các dipeptide của nó Sự hợp nhất của nguyên tử cacbon số 13 (13C) là chiếm đến 95% trong O-Val, O-Leu và L-Val, trong khi đó chỉ có 40%13C là kết hợp trong D-Ala của Cereulide

• Bacillus cereus được biết là nguyên nhân gây ra hai loại ngộ độc thực phẩm, đó

là triệu chứng nôn mửa và triệu chứng tiêu chảy Phần lớn những ngộ độc do

Bacillus cereus gây ra chỉ mới phát hiện sau này Cereulide được biết đến với

cấu trúc bậc 1, với 1 dodecadepsipeptide tuần hoàn, với 12 góc lập thể trung tâm Hóa học lập thể được chỉ ra từ sản phẩm thủy phân là các dipeptide kiềm tính, D-O-Leu, D-Ala, L-O-Val và L-Val Đó là 1 ion Kali mạnh, nó liên kết yếu với các ion Li+, ion Na+, ion Cs+, nhưng với ion Rb+ nó lại liên kết mạnh nhất, hơn bất kỳ ion kim loại kiềm nào Cereulide tạo cấu trúc bậc 2 từ NMR

Emetic Syndrome

Bảng 1-1 Đặc điểm của bệnh nôn mửa và tính chất của triệu chứng gây nôn mửa do B

Cereus

 Tên của độc tố Cereulide

 Liều nhiễm độc Số lương B.C 105-108tb/g thực phẩm

 Khối lượng độc tố 12-32 μg/kg

 Cấu trúc của độ Chuỗi polypeptide [D-O-Leu-D-Ala-L-O-Val-L-Val]

 Khối lượng phân tử 1.2 kDa

 Thời kỳ ủ bệnh ½ - 5h

 Khoảng thời gian mang bệnh 6-24h

 Sinh kháng thể Không (none)

 Hoạt động sinh học trên người Gây nôn

 Cơ quan nhận cảm 5-HT3

 Cytotoxic No

 Hoạt động trên tế bào HEp-2 Hoạt động không bào

 Khả năng chịu nhiệt 90 phút ở 1210C

 Ảnh hưởng của sự phân giải protein Không

 Việc sản sinh ra độc tố như thế nào (not known, but probably enzymatically)

và sự tính toán cơ học các phân tử được biểu thị ở hình 1 Độc tố này là nguyênnhân dẫn đến sự hình thành các ty lạp thể có chứa ATP và các enzyme lien quan đến hoạt động chuyển hóa tế bào trong các mô khác nhau Chúng ta bắt đầu quan tâm đến con đường sinh tổng hợp của độc tố này cho các chương trình phòng chống ngộ độc thực phẩm trong tương lai Nghiên cứu quá trình sinh tổng hợp tương tự như dodecadepsipeptide, valinomycin Agata – một trong nhiều tác giả đã nghiên cứu quá trình phát triển và sinh độc tố của

Bacillus cereus trong quá trình tổng hợp trung gian một cách đầy đủ từ CADM

(hỗn hợp các amino acid) và đường sucrose (đường mía) Người ta nhận thấy

rằng, Bacillus cereus cho phép (chấp nhận) việc sản sinh ra cereulide cấu trúc

bậc 1 và 3 amino acid Val, Leu và Thr là cần thiết Những nghiên cứu khác về quá trình sinh tổng hợp cereulide có lẻ là cần thiết để thúc đẩy việc nghiên cứu tìm ra phương pháp ngăn chặn những ngộ độc từ thực phẩm Xét đoán từ cấu trúc của 1, tiền thân của D-Ala, L-O-Val và D-O-Leu sẽ lien quan đến các amino acid như L-Ala, L-Val, và L-Leu

•

• Trong thí nghiệm này chú trọng đến sinh tổng hợp trung gian của 3 amino acid

là L-Val, L-Leu, và L-Ala (0.1g/L có đến 99% nguyên tử cacbon ở dạng13C trong cacboxylic, tất cả 15 amino acid còn lại (0.1g/L), K2HPO4 (5g/L) và MgSO4.7H2O (0.05g/L), được tiến hành ở nhiệt độ 300C và thời gian là 24h, giữ ở tốc độ lắc là 200 rpm thu được 2mg cereulide có cùng độc tính ở điều kiện này đã được đánh dấu để phục vụ cho phân tích các nghiên cứu tiếp theo.1H NMR của mẫu này là đồng nhất với quang phổ đáng tin cậy ngoại trừ chất đồng vị của cacbon13C ESI mass (interpreting Electrospray Mass

Spectra) của nó xuất hiện ở 7 đỉnh trung tâm với m/z là 1201.48 khá hơn mức bình thường M + K với m/z là 1191.55 (thể hiện ở hình 2), vì vậy cứ trung bình

10 đơn vị mass thì cao hơn bởi vì sự kết hợp cao của13Cs Chính vì sự liên hợpcao của13Cs vào phân tử cereulide đã thúc đẩy chúng ta trong việc đo lường mức quang phổ NMR13C của ion K+ trong phức hợp CDCl3 để đạt được mức quang phổ như ở hình 3, với số liệu đáng kể 171.4 (L-O-Val), 172.2 (D-O-

Leu), 175.7 (L-Val) và 176.2 (D-Ala) đã được chuyển sang mối tương quan giữa C-H của nó Tương ứng với cường độ của 3 cacbon (C6, C9, C12) của L-O-Val, D-O-Leu và L-Val là nhiều hơn hai lần C6 D-Ala

•

• Tương tự với việc làm riêng các thí nghiệm đã đạt được với bức xạ β proton của 4 hợp phần amino hay oxy – acid Loại bỏ các kết quả đạt được với α proton của O-Val ở 4.61 ppm với bức xạ β-H của nó ở 2.30 ppm để thay đổi từ

bộ ba sang bộ kép (J=3.8 Hz cặp với13C của O- Val) Bức xạ β-H của L-Val ở 2.24 ppm đã làm thay đổi α proton của Val ở 3.82 ppm từ bộ năm thành bộ ba (J=5 Hz) Cả hai kết quả trên đều chỉ ra được sự kết hợp cao cacbonyl cacbon của13C tiền thân của các amino acid đối với L-O-Val và cả L-Val Chưa có kếtquả chính xác nào về sự kết hợp của13C, tuy nhiên trường hợp này lại đúng đốivới Ala và O- Leu Sự chiếu xạ gốc metyl của Ala ở 1.47 ppm gây ra α-H của

nó (4.27 ppm) giống như sự pha trộn của bộ ba và bộ kép biểu kiến với J=4 và

5 Hz, theo thứ tự định sẵn (tách biệt ra) có nghĩa là tỷ lệ sát nhập lại để tạo thành cacbonyl cacbon là không quá cao (không đạt đến 100%) Sự chiếu xạ của β-Hs của O-Leu trong khoảng 1.84 ppm là không đạt kết quả bởi vì dải sóng tự nhiên của nó quá rộng Tuy nhiên, quang phổ NMR của13C và những thí nghiệm riêng lẻ là những minh chứng gần như 100% của sự kết hợp13C tiềnamino acid với 3 hợp phần (O-Leu, Val và O-Val) của cereulide

• Ngày nay, L-Leu và L-Ala đã được chứng minh để xác định rõ là có được từ quá trình sinh tổng hợp cereulide, vì hai acid amin này là cần thiêt cho B cereus Một trong những khả năng có thể được nghiên cứu là cả ba L-amino acid sẽ ít nhất một lần được biến đổi thành các α- keto acid và sau đó biến đổi thành D-O-Leu và L-O-Val hoặc là sự chuyển hóa amin để tạo thành D-Ala Trong trường hợp này chỉ có acid pyruvic sẽ bị pha loãng bởi vì số gốc cao vì L- Ala là không cần thiết cho B cereus Nghiên cứu này có thể giải thích đến 95% sự kết hợp để tạo thành D-O-Leu, L-O-Val, và L-Val khoảng (40%) sự kếthợp để tạo thành D-Ala

• 2.1 Triệu chứng tiêu chảy.

• Triệu chứng tiêu chảy do ít nhất hai loại độc tố đường ruột sản sinh ra trong suốt quá

• trình sinh trưởng của Bacillus cereus trong ruột non Sự hình thành độc tố

đường ruột đầy đủ trong thực phẩm để dẫn đến ngộ độc thực phẩm về lý thuyết

mà nói là có thể, nhưng đối với thực phẩm phục vụ cho con người thì đây là