Công nghệ enzim

Công nghệ enzim

CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân NgchTrang: 1c lcChng 1: NGUYÊN LIU THU ENZIM VÀ PHÂN B 31.1. Ngun ng vt: 31.2. Ngun gc thc vt: 41.3. Ngun vi sinh vt: 4Chng 2: N XUT CÁC CH PHM ENZIM T VI SINH VT 52.1. u hoà quá trình sinh tng hp enzim trong môi trng nuôi cy vi sinh vt 52.2. Tuyn chn và ci to ging vi sinh vt cho enzim có hot lc cao: .112.3. Phng pháp bo qun ging vi sinh vt : 122.4. Môi trng nuôi cy vi sinh vt sinh tng hp enzim: 132.5. Các phng pháp nuôi cy vi sinh vt: 172.6. Tách và làm sch ch phm enzym : 22Chng 3:  THUT SN XUT CH PHM T HT CC NY MM (MALT) .243.1. Nguyên liu i mch: 243.2. Làm sch và phân loi ht: .253.3. a, sát trùng và ngâm ht: 263.4. y mm: .283.5. y malt: 343.6. Tách mm, r, bo qun malt: .373.7.  thut sn xut mt s loi malt c bit: .38Chng 4: N XUT ENZIM T THC VT 404.1. n xut ureaza tu ra: .404.2. Thu nhn bromelain t da: 40Chng 5: ENZIM CNH .445.1. Gii thiu chung: 445.2. t s phng pháp ch yu ch to enzim cnh : 445.3. t s liên kt trong vic cnh enzim .455.4. nh hng ca s cnh n hottính ca enzim .465.5. Các reactor cha enzim cnh: .485.6. . S dng enzim cnh trong y hc và trong công nghip: .50Chng 6: GII THIU MT S LOI ENZIM CH YU VÀ KH NNG NGNG 556.1. Amylaza 556.2. Proteaza .586.3. Pectinaza 606.4. Xenluloza: .64 CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân NgchTrang: 26.5. Saccaraza và glucooxydaza .66Chng 7: PHNG PHÁP XÁC NH HOT  MT SÔ LOI ENZIM 687.1. n vo hot : .687.2. Các phng pháp xác nh hot  enzim: .697.3. Chun b dch chit enzim  xác nh ho 71 CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân NgchTrang: 3Chng 1: NGUYÊN LIU THU ENZIM VÀ PHÂN B1.1. Ngun ng vt:1.1.1. Tu tng: (Pan creas)ây là ngun enzim sm nht, lâu dài nht, có cha nhiu loi enzim nht nh:tripxin, kimotripxin, cacboxy pectidaza A và B, ribonucleaza, amilaza, lipaza.+ Tripxin y hc phi là loi tinh ch.+ ng dng u tiên ca ch phm tripxin là làm mn da  lt da, kh các vt nttrên da.+ Sn xut sn phm thu phân protein y hc (dch truyn y t) và môi trng nuôi cyvsv.+ Ch phm dch tu y hc  cha bnh v tu (ri lon chc nng, b ct b tu).+ Sn xut ch phm enzim ty ra (vt bn, màu khó tan)  nhit  va phi, khôngthích hp vi nhit  cao và pH thay i.1.1.2. Màng nhy d dày ln:Là ngun enzim pepxin A, B, C, D, gastrisin. Các enzim này c tit ra ngoài t bàocùng vi dch v ( khi tiêu hoá thc n). i vi các typ pepxin có pHopt=1.3÷2.2.1.1.3.  dày bê:Trong ngn th t ca d dày bê có tn ti enzim thuc nhóm Proteaza tên là renin.Enzim này ã t lâu c s dng ph bin trong công ngh phomat. Renin làm bin icazein thành paracazein có kh nng kt ta trong môi trng sa có  nng  Ca2+.ây là quá trình ông t sa rt n hình, c nghiên cu và ng dng y  nht.Trong thc t nu ch phm renin b nhim pepxin (trong trng hp thu ch phm renin bê quá thì. Khi ó, d dày bê ã phát trin y  có kh nng tit ra pepxin) thì khng ông t sa kém i.n ây có nghiên cu sn xut proteaza t vsv có c tính renin nh  các loàiEudothia Parasitica và Mucor Purillus.1.1.4. Các loi ni tng khác:Gan, lá lách, thn, phi, c hoành tim, d con, huyt. Các loi này u có cha enzim,a s tn ti trong t bào. Ch có mt s loi c sn xut di dng ch phm nh: gan,tim ln  tách aspartat-glutamat aminotransferaza, huyt tng (t huyt)  tách ratrombia (Proenzim chng ông máu)Nhìn chung nguyên liu ng vt dùng  tách enzim phi ti tt (ly ngay sau khigit m) hoc gi -200C có thc 1÷12 tháng vn không làm gim hot tính enzim. CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân NgchTrang: 41.2. Ngun gc thc vt:1.2.1. Cây u ra (Canavalin ensifirmis):ây là cây thuc hu Canavalia – có nhiu  châu Phi,  Vit Nam có nòi k trên.Trong tt c các nòi u ra u rt giàu enzim Ureaza, hàm lng có thn 20% chtkhô.1.2.2.  da (Bromalaceae):Bao gm tt c các nòi da trng ly qu, ly si (k c các nòi da di). Trong các bphn khác nhau ca cây da (v, lõi, chi, thân, lá,…) u có cha enzim bromelain.Trong ó nhiu nht là phn lõi u qu da. Hot tính ca enzim bromelain ph thucnhiu vào trng thái và u kin bo qun nguyên liu. Các nghiên cu ã ch ra rngcác nguyên liu sy khô  nhit  400C s gi c hot tính enzim tt hn so vinguyên liu ã c bo qun lnh  nhit  40C.1.2.3. Nha u  (Carica Papaya. L):ây là loi cây n qu ph bin  các nc nhit i. T qu ti hoc thân thu cnha (latex) chính là ch phm papain thô  tó tinh ch thành papain thng phm.Hin nay ngi ta ã to ra c các ging u  có sn lng m và hot tính papaincao  khai thác có hiu qu ngun enzim này (không t vn  ly qu).1.2.4. t s loi nguyên liu thc vt khác:Khi tin hành nghiên cu khoa hc, y sinh hc, nhiu khi cn xem xét (nh tính, nhng, cu trúc phân t,  hot ng enzim, …) ca mt s loi enzim có trong bn thânnguyên liu ó nh lng s dng. áng chú ý hn c là:Ch phm enzim Polyphenoloxydaza (EPPO): n hình nht là eppo ca lá chè, cai nh ht ca cao ti, nc ép qu nho. Ch phm loi này ph bin hn c là loi “btaxeton”.1.2.5. t cc và mt s loi c cha tinh bt:Trong ht cc ny mm (malt) và mt s loi c ny mm (n hình là khoai lang) cót h enzim rt phong phú c ngi ta s dng t rt lâu trong các lnh vc: mt tinht (mch nha), ru và bia (thm chí có mt phng pháp sn xut ru etylic mang tên làphng pháp maltaza hay phng pháp malt)1.3. Ngun vi sinh vt:ây là ngun enzim phong phú nht, có  hu ht các loài vi sinh vt nh: nm mc,vi khun và mt s loài nm men. Có th nói vi sinh vt là ngun nguyên liu thích hpnht  sn xut enzim  qui mô ln dùng trong công ngh và i sng. Dùng ngun visinh vt có nhng li ích chính nh sau:+ Chng v nguyên liu nuôi cy vi sinh vt và ging vi sinh vt.+ Chu k sinh trng ca vi sinh vt ngn: 16÷100 gi nên có th thu hoch nhiu lnquanh nm.+ Có thu khin sinh tng hp enzim d dàng theo hng có li (nh hng sng và tng hiu sut tng thu hi).+ Giá thành tng i thp vì môt trng tng i r, n gin, d t chc sn xut.Tuy nhiên trong mi trng hp cn lu ý kh nng sinh c t (gây c, gây bnh) có bin pháp phòng nga, x lý thích hp. CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân NgchTrang: 5 sn xut ch phm enzim, ngi ta có th phân lp các ging vi sinh vt có trong tnhiên hoc các ging t bin có la chn theo hng có li nht, ch tng hp u tht loi enzim nht nh cn thit nào ó.Chng 2: SN XUT CÁC CH PHM ENZIM T VI SINH VT2.1. u hoà quá trình sinh tng hp enzim trong môi trng nuôi cy visinh vti mc ích nuôi cy thu hi enzim vi hiu sut cao, cn phi nhn r quá trình uhoà sinh tng hp enzim  có các nh hng tác ng thích hp trong công ngh. Tbào vi sinh vt ch tng hp enzim khi cn thit vi s lng thích hp mong mun.2.1.1. u hoà theo hng óng m bi gen operator (gen u khin) _hinng trn áp :+ hin tng trn áp (c ch) (repression): là làm gim quá trình sinh tng hp do snphm cui cùng ca quá trình nuôi cy. Hin tng này thng gp i vi các enzymxúc tác quá trình sinh tng hp mt chiu nh: quá trình sinh tng hp axit amin,nucleotit.Ví d: khi thêm mt axit amin nào ó vào môi trng nuôi cy thì t bào s không cnng hp này na. Do ó cng sình ch quá trình sinh tng hp enzym, xúc tác cho quátrình tng hp nên chính axit amin ó. Enzym này chc tng hp tr li khi có nhuu ngha là khi làm gim nng  axit amin tng ng. i vi h thng phân nhánhngha là quá trình dn n vic to thành nhiu sn phm cui cùng khác nhau t mt ccht chung ban u thì c ch trn áp có thc thc hin theo các cách khác nhau.Ví d: Phn ng u tiên ca quá trình sinh tng hp các axit amin lizin, methionin,treonin u do enzym aspactokinaza xúc tác. Enzym này có 3 izoenzim.Ký hiu: al, am, at. Quá trình sinh tng hp al s b trn áp bi nng  lizin. am camethionin. Riêng i vi at thì treonin va là sn phm cui cùng ca c quá trình va là cht ban u  sinh tng hp izolxin. Do ó quá trình sinh tng hp axitt ch b trnáp khi c treonin và izolexin t nng  cao vt quá nhu cu ca t bào. Có th minhho c ch trn áp này theo s: CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân NgchTrang: 6alamatA B C D MethioninEGLizinTreoninIzoloxinGhi chú: A – C cht Aspartic ban u. B, C, D, G là các sn phm trung gian có tác dng trn áp.Nh vy ây s trn áp ch xy ra khi có s hp ng tác dng ca c 2 sn phm.u trn áp hp ng này cùng xy ra i vi quá trình sinh tng hp enzym ging nhauxúc tác cho các phn ng song song to thành 2 sn phm cui cùng khác nhau. Ví d:quá trình sinh tng hp valin và izolxin do 4 enzym ging nhau xúc tác theo s sau:ValinIzoloxin4321Hin nay ngi ta cho rng ARN mi là yu t trn áp thc s cho quá trình sinh tngp các enzym xúc tác  tng hp các axit amin tng ng.+ Hin tng cm ng (induction): là hin tng ngc li vi hin tng trn áp làmng lng enzym ca t bào(Ghi chú  s trên: 1: -axeto.-oxyaxítintetaza 2: reductoizomeraza (axetolactat mutaza) 3: hydrooxyaxit dehydrataza 4: amino transpheraza4 Phn ng4 Phn ng6 Phn ng-axetolactat-axeto-Oxybutirat-Dioxy metylvalerat-Xeto - metyl-Xetoizovalerat-DioxyizovaleratCH3CHOhot ng CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân NgchTrang: 7Ngha là khi trong môi trng nuôi cy có cht cm ng s kích thích cho vi sinh vtsinh tng hp nên nhiu enzym hn so vi bình thng.Cht cm ng c xem nh là mt cht nn (Cht c s, b khung cácbon)  sinhng hp enzym. Hin nay, ngi ta ch ra rng có th các sn phm trung gian ca quátrình bin i óng vai trò là cht cm ng, thm chí nhiu c cht ca enzym cng cóth là cht cm ng. n hình là các gluxit (monosaccarit và polysaccarit).Trong s các enzim do vi sinh vt tng hp, có nhng enzim bình thng chcng hp rt ít i nhng khi thêm mt s cht nht nh vào môi trng nuôi cy thì hàmng ca chúng có th tng lên rt nhiu ln. Monod và Cohn (1925) gi các enzim nàylà enzim cm ng, cht gây nên hiu qu này là gi là cht cm ng. Các enzim cm ngthng là nhng enzim xúc tác cho quá trình phân gii nh: Proteinaza, amylaza,pectinaza, penixilinaza, _galactosidaza  t bào E. coli. Khi nuôi cy E. coli trong môitrng glucoza và glyxerin, vi khun ch tng hp khong 10 phn t_galactosidaza/tbào. Nu nuôi cy trên môi trng lactoza là ngun các bon duy nht thì hàm lngenzim là 6÷7% tng hp lng protein ca t bào. Trích ra t t bào cha n 6000 phn enzim, ngha là tng lên gn 1000 ln so vi khi nuôi cy trong môi trng c. cm ng thng có tính cht dây chuyn. Trong h thng gm nhiu phn ng, ccht u tiên ca h thng có th cm ng quá trình sinh tng hp tt c các enzim xúctác cho quá trình chuyn hoá ca nó. u này c thc hin theo c ch sau: Trc htcht cm ng làm tng quá trình sinh tng hp enzim tng ng, sau ó sn phm này lim ng tng hp enzim  phá hu nó, tip theo sn phm th 2 này li cm ng tngp nên enzim th 3,…Ví d: Histidin có tác dng cm ng hàng lot các enzim xúc tát cho quá trình chuynhoá nó thành axít glutamic (Chasin và Magasamil (1968)).+ C chu hòa theo kiu trn áp và cm ng:Zocob và Monod ã  ra mô hình gii thích c ch ca 2 hin tng trn áp và cmng trên c s di truyn. Theo mô hình này, s trn áp và cm ng sinh tng hp enzimc thc hin theo cùng mt c ch chung da trên c su hoà hot ng ca cácgene di tác dng ca các cht phân t thp. Nhng cn c chính ca thuyt này nhsau:1) Có s phân hoá chc nng ca các giai n khác nhau trong phân t AND trongnhim sc th, da vào chc phn ca chúng trong qui trình sinh tng hp Protein có thchia thành các loi gene sau:- Gene cu trúc (ký hiu: S1,S2,S3) : mã hoá phân t protein enzim c tng hp, tclà th t các axit amin trong phân t enzim c tng hp là tu thuc vào th t cácnucleotit ca n gene này. Các gene mã hóa các enzim c íp xp lin nhau thànht nhóm trên nhim sc th. Chúng là khuôn  tng hp phân t ARNtt.- Gene Operator (ký hiu: O):  cnh nhóm gene cu trúc, không mã hoá proteinnhng m bo cho quá trình sao chép mã  gene cu trúc theo c ch “óng m” tanh công tc ca mt dây èn. Quá trình sao chép ch có th tin hành khi gene operator trng thái “m” (không kt vi cht nào c) và ngng li khi nó b “óng” (kt hp vit cht c bit gi là cht trn áp represson). Mt gene operator có th “ph trách” mtnhóm gene cu trúc các gene cu trúc này cùng vi gene operator ca chúng hp thành CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân NgchTrang: 8t n v sao chép s cp gi là mt operon. S tng hp ARNttc bt u  mtu ca operon và chuyn qua các gene cu trúc n u kia ca operon.- Gene Promotor (gene hot hoá ký hiu P) ng trc gene operator là n And màARN-polimeraza s kt hp và bt u quá trình sao chép các gene cu trúc.- Gene u hoà regulator (ký hiu R): Gene này mã hoá cho mt protein c bit gilà cht trn áp (repressor). Cht trn áp có vai trò “óng-m” gene operator. Do ó geneu hoà có th kim tra quá trình sao chép gene cu trúc thông qua cht trn áp này.+ Không có repressor (sn phm cui cùng)R P O S1 S2 S3 ADNE3E2E1A BCDARNtt+ Có repressor (sn phm cui cùng):Phiên mã CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân NgchTrang: 9R PO S1 S2 S3ADN: ARN-polymeraza: Repressor: coreressorR: Gene u hoà, P: Gene promotor, O: Gene Operator,S1, S2, S3: Các gene cu trúc.2) Trong trng hp u hoà sinh tng hp enzim theo c ch trn áp, repressor dogene u hoà tng hp còn  dng không hot ng (aporepessor) cha có kh nng ktp vi gene operator nên quá trình sao chép các gene cu trúc tin hành bình thng.Các enzim c tng hp xúc tác cho các phn ng  to thành các sn phm cui cùng,n phm cui cùng này li có kh nng kt hp vi aporepessor và hot hoá nó.Aporepessor ã c hot hoá s kt hp vi operator ngn cn quá trình sao chép cácgene cu trúc, làm ngng vic tng hp ARNtt tng ng do ó ình ch quá trình sinhng hp các enzim tng ng. Trong trng hp này các sn phm mi c coi nh làcht trn áp (repressor).3) i vi trng hp cm ng:+ Không có cht cm ngR P O S1 S2 S3 ADN+ Có cht cm ng: CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân NgchTrang: 10ADNS3S2S1OPRARNttABC DE1E2 E3 minh ho c ch cm ng sinh tng hp enzim : Cht cm ngKhi không có mt cht cm ng, cht trn áp (repressor) c tng hp ã  trng tháihot ng, nó kt hp vi gene u khin operator, quá trình sao chép mã ca gene cutrúc b bao vây nên các enzim tng ng không c tng hp.Khi có mt cht cm ng thì cht trn áp repressor b mt hot ng, tách khi geneu khin operator và quá trình sao chép mã bt u, kt qu làm tng lng enzim cng hp.Nh vy ta thy hin tng trn áp và cm ng sinh tng hp enzim là hai mt i lpa mt quá trình hoá sinh thng nht c thc hin thông qua hot ng “óng-m”gene di tác dng ca các cht phân t thp2.1.2. u hoà tng tác gia ARN-polymeraza vi gene promotor:Nhiu du hiu thc nghim cho thy các gene bo m sinh tng hp mt s enzimm ng xúc tác cho quá trình phân gii không ch chu s kim tra theo c ch cm ngnhã trình bày  trên mà còn chu s kim tra theo mt c ch khác nh tác dng caAMP vòng (AMPv) gi là “trn áp phân gii” (cactabolic repressor) AMPv có tác dngkích thích ca AMPvi vi quá trình sao chép mã ca các operon phân gii. Hin tngnày ã c nghiên cu nhiu i vi operon lactoza. Theo nhiu tác gi, tác dng kíchthích ca AMPvi vi quá trình sao chép mã c thc hin nh mt protein c bitlàm trung gian gi là protein nhn AMPv, hay còn gi là protein hot hoá gene phân giiCAP (catabolite gene activator protein). Khi AMPv kt hp vi CAP to thành phc hpcó tác dng hot hoá gene promotor làm cho ARN-polymeraza d dàng kt hp vi nó t u quá trình sao chép mã. Nh vy AMPv có tác dng làm tng cng quá trình saochép. Cng có ý kin cho rng phc hp AMPv-CAP-ARN-polymeraza cho phép bt uquá trình sao chép mã. [...]...CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân Ngch Trang: 15 (cht trn áp) sinh tng hp enzim pectinaza trên môi trng nuôi cy là pectin và lactoza ơi vi lồi Asp. Niger, Asp. Awamori. - i vi các h vi sinh vt sinh enzim xenluloza. Enzim xenluloza là enzim cm ng vì vy trong mơi trng nuôi cy vi sinh vt sinh enzim này nht thit phi có xenluloza là cht... khâu tách và làm sch enzym. CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân Ngch Trang: 5  sn xut ch phm enzim, ngi ta có th phân lp các ging vi sinh vt có trong t nhiên hoc các ging t bin có la chn theo hng có li nht, ch tng hp u th t loi enzim nht nh cn thit nào ó. Chng 2: SN XUT CÁC CH PHM ENZIM T VI SINH VT 2.1. u hồ q trình sinh tng hp enzim trong môi trng... là phng pháp CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân Ngch Trang: 47 hiu ca enzim cng nh hng s Michoelis. Tt nhiên nhng thay i này ph thuc nhiu vào bn cht ca cht mang, nói chung enzim cnh thng tro nên bn vi các u t gây bin tính hn (vì nó ã c “làm bn” phn nào bi cht mang) nhng  hot ng riêng thng thp hn enzim ban u. 5.4.1. Hot tính ca enzim cnh ph... phm vi môi trng vi mô nm sát cnh enzim. - Kiu th hai c gi là “hiu ng ngn chn” tc là bn thân cht mang polyme ngn cn s khuch tán t do ca các phân t hng ti enzim (trong ó có c cht) cng nhi khi enzim (trong ó có sn phm phn ng). Tó nh hng trc tip hay gián tip n hiu qu xúc tác ca enzim. Ví dn hình là trng hp enzim c cnh bng cht mang polyanion... ht, r dài 1,2÷2 cm. Ch tiêu quan trong ca malt là hot tính enzim. Sau ây là bng ch tiêu hot tính enzim i vi malt dùng cho sn xut ru. t Khá Trung bình Loi malt AC (g/g.h) DC (mg/g.h) AC (g/g.)h DC (mg/g.h) AC (g/g.h) DC (mg/g.h) CƠNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xn Ngch Trang: 46 t khơng thun nghch vi nhiu enzim) . Nhóm enzim thích hp nht cho c cht loi này là lipaza (c cht... nhau. Chng hn nu enzim vi tâm hot ng có nhóm – SH thì cn phi x lý s b bng glutation hay systein và ch tái hot hoá enzim sau khi ã gn nó vào cht mang. Hoc có th che chn tâm hot ng bng cách b sung vào n hp phn ng c cht ã c bão hoà bi enzim (nng  c cht cao nht mà enzim có th thc hin c phn ng xúc tác) - Khi ra thit b phn ng  phc hi enzim, không c... bn nhit, bn gel) nht là khi phn ng trong nhng ct công sut ln. 5.4. nh hng ca s cnh n hottính ca enzim. Khi gn vào cht mang, enzim s b gii hn hot ng trong mt phm vi mơi trng xác nh, lúc ó cu trúc không gian ca phân t enzim (và ca c t hp) có th b thay i do ó có th làm bin i mt s tính cht ca enzim ban u. Ví d có th thay i khong pH hot ng,... hot ng ca các h enzim ng thi nhng quá trình y ra trong quá trình ny mm: t t  chín và khơ (W13%) thì các enzim trong ht  dng liên kt (không hot ng) nm trong t bào ca ht. Trong q trình ny mm chúng c gii phóng ra  ng t do hot ng, ng thi ht cúng có kh nng hình thành nên nhng enzim hot ng mi. - H enzim oxy hoá - kh: Hot ng ca h enzim này là bc... tc phát trin, m còn khong 30%, s bin i do thu phân, do enzim vn tip tc. -Thi kì men (enzim ): Nhit  sy tng dn t 45 - 70 0 C: Các q trình sng b ngng li: khơng hơ hp, mm r khơng cịn phát trin nhng s thu phân và nhng CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân Ngch Trang: 22 + Tn ít nng lng (n, hi nc, công nhân) thit b, dng c ni cy n gin, có th thc hin ... mô xung quanh enzim s khác vi nng  ca chúng trong h. u ó làm cho q trình ng hc ca enzim s rt phc tp, s có s sai khác (nhiu khi là áng k) các thông s liên quan nh: nng  c cht, sn phm phn ng, pH, t 0 t ví d khi kho sát s c nh papain trên màng xenluloza nitrat  thu phân gelatin cho kt qu tn hn so vi khi enzim  dung dch t do (hot  enzim cnh thp . Cohn (1925) gi các enzim nàylà enzim cm ng, cht gây nên hiu qu này là gi là cht cm ng. Các enzim cm ngthng là nhng enzim xúc tác cho quá. sinh tng hp enzim này. ng glucoza có tác dng kìn hãm CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân NgchTrang: 15(cht trn áp) sinh tng hp enzim pectinaza