Giới thiệu các phương pháp đo hoạt độ enzyme.
[...]... t*m*v Với: Hđ Protease : hoạt độ enzyme protease ( UI/g) V : tổng thể tích hỗn hợp trong ống thử thật hoặc ống thử không (ml) v : thể tích dịch lọc đem phân tích (ml) t : thời gian thủy phân (phút) m : khối lượng mẫu enzyme đem đi xác định hoạt tính (g) L: độ pha loãng enzyme µM tyrosine: lượng µM tyrosine trong v (ml) suy ra từ đường chuẩn Bài 5 XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH PHYTASE (PHƯƠNG PHÁP FISE VÀ SUBBAROW)... nồng độ theo bảng sau: Ống nghiệm 0 1 2 3 4 5 Dung dịch phospho 500nmol/ml Nước cất (ml) Nồng độ phospho (nmol/ml) Thuốc thử phosphat (ml) 0 5 0 5 1 4 100 5 2 3 200 5 3 2 300 5 4 1 400 5 5 0 500 5 Lắc đều, để yên ở nhiệt độ phòng (30 oC), đem đo mật độ quang ở bước sóng 700nm Dựng đồ thị biễu diễn sự biến thiên của mật độ quang (ΔOD) theo nồng độ phospho (nmol/ml) Phản ứng enzyme: Cân m(g) chế phẩm enzyme. .. để yên 5 phút đo mật độ quang ở bước sóng 700 nm 4 Cách tính: Một đơn vị hoạt tính (đvht) phytase được định nghĩa là lượng enzyme giải phóng 1nm phospho vô cơ trong 1 phút từ sodium phytat ở 39oC, pH5 a*V*L Hđ Phytase = (UI/g) 0,5 * m * t Với: a: nồng độ phospho suy ra từ đường chuẩn (nmol) V: thể tích dung dịch phospho trước khi cho thuốc thử (5ml) L: độ pha loãng enzyme 0,5: thể tích enzyme cho vào... lắc 45 phút để enzyme hòa tan hoàn toàn vào nước, lọc qua giấy lọc ta thu được dịch enzyme thô Xác định hoạt tính phytase trong dịch enzyme này Thực hiện phản ứng enzyme và phản ứng màu như sau: Ống nghiệm Dung dịch cơ Thử thật chất 2 Thử không 2 phytate (ml) Dung dịch TCA 5% (ml) 0 2,5 Dung dịch enzyme 0,5 0 o Lắc đều để yên ở 39 C, trong 30 phút Dung dịch TCA 5% (ml) 2,5 0 Dung dịch enzyme (ml) 0... của mẫu Hàm lượng protein có trong 1g mẫu được tính theo công thức: mg protein/g = a * 10 -3 * n m Với: a*10-3 : nồng độ protein suy ra từ đường chuẩn (mg/ml) n : độ pha loãng mẫu m : khối lượng mẫu sử dụng (g) Bài 7 XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG PROTEIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP BRADFORD Nguyên tắc: Phương pháp này dựa vào sự thay đổi màu xảy ra khi cho Coomassie Brilliant Blue liên kết với protein trong dung dịch acid... độ protein như sau: Ống nghiệm Dung dịch Albumin 0,1% 0 0,0 1 0,5 2 1,0 3 1,5 4 2,0 5 2,5 (ml) Nước cất (ml) Nồng độ Protein (µg/ml) 10,0 0 9,5 50 9,0 100 8,5 150 8,0 200 7,5 250 Hút 0,4ml dung dịch protein có nồng độ khác nhau từ các ống nghiệm vừa pha ở trên theo thứ tự từ 0 đến 5 vào các ống nghiệm khác Thêm vào 0,2 ml thuốc thử Folin, lắc đều trong 5 phút, thêm nước cất cho đủ 5 ml Đem đo mật độ. .. ứng m: khối lượng chế phẩm enzyme phân tích T: thời gian phản ứng ( phút) Bài 6 XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG PROTEIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP LOWRY Nguyên tắc Hầu hết protein đều chứa tyrosine và tryptophan Khi cho protein tác dụng với thuốc thử Folin sẽ tạo thành một phức chất có màu, màu này tỉ lệ với hàm lượng tyrosine và tryptophan ( hàm lượng protein ) Vì thế ta có thể dùng phương pháp so màu để xác định hàm... Nồng độ 0 10 protein 40 60 80 100 1 protein (µg/ml) Dung dịch 0 20 2 4 6 8 10 9 8 6 4 2 0 chuẩn (ml) Nước cất ( ml) 10 Hút 0,1 ml dung dịch protein vừa pha lõang theo bảng trên, thêm vào 5 ml thuốc nhuộm, trộn đều, để yên ở nhiệt độ phòng trong 10 phút Đem đo OD tại bước sóng 595 nm Tương tự, hút 0,1 ml protein cần phân tích, thêm 5 ml thuốc nhuộm, trộn đều, để yên ở nhiệt độ phòng trong 10 phút Đem đo. .. thể tích lớp nền chảy qua cột lúc điều khiển tốc độ chảy - Đóng đầu ra của cột và điều chỉnh flow adaptor xuống đến lớp nền gel Nạp mẫu vào trên bề mặt lớp nền bằng cách bơm hoặc tiêm mẫu vào trên lớp nền gel qua flow adaptor Nếu tiêm mẫu thì tốc độ dòng tiêm không nên vượt quá tốc độ dòng tách đề nghị o Chuẩn bị mẫu - Cân khoảng 0,5 mL mẫu có nồng độ 10 mg/mL Thu mẫu: Hòa tan hoàn toàn protein trong... acetic, lắc đều, giữ trong chai màu tối Dung dịch giải nhuộm: 30ml methanol: 10ml acid acetic: 60ml nước cất Phương pháp 1 Đổ gel Chú ý: Polyacrylamide là chất độc cho thần kinh Vì vậy không được hít và uống khi dính vào nên rữa tay ngay Chuẩn bị đổ một gel có kích thước 100*100*0.75mm có nồng độ acrylamide là 10% a Gel tách Cho các thành phần sau theo thứ tự vào becher 50ml sạch : o Acrylamide 2 ml . của phương pháp Phương pháp này áp dụng để xác định hoạt độ enzyme trong thực phẩm, thức ăn chăn nuôi, chế phẩm sinh học. 3. Dụng cụ và hoá chất 3.1 Dụng cụ, thiết bị - Máy lắc - Máy đo mật độ. khối lượng mẫu enzyme đem đi xác định hoạt tính (g) L: độ pha loãng enzyme µM tyrosine: lượng µM tyrosine trong v (ml) suy ra từ đường chuẩn Bài 5. XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH PHYTASE (PHƯƠNG PHÁP FISE. nhiệt độ phòng (30 o C), đem đo mật độ quang ở bước sóng 700nm. Dựng đồ thị biễu diễn sự biến thiên của mật độ quang (ΔOD) theo nồng độ phospho (nmol/ml). Phản ứng enzyme: Cân m(g) chế phẩm enzyme