NGHIÊN cứu đặc điểm THỰC vật và THÀNH PHẦN hóa học của lá XOÀI TRÒN yên CHÂU, sơn LA

Xoài tròn (Mangifera indica L.) là một đặc sản của tỉnh Sơn La, nổi tiếng trên cả nước. Tuy nhiên, cho đến nay mới chỉ khai thác quả xoài tròn, còn cành, lá cây xoài tròn thông qua việc tỉa cành hàng năm đều không được sử dụng. Để có thể làm tăng giá trị sử dụng nguồn nguyên liệu lớn, lá xoài tròn (Mangifera indica L.) của huyện Yên Châu, tỉnh Sơn La, góp phần xóa đói, giảm nghèo ở các tỉnh vùng sâu, vùng xa, chúng tôi thực hiện đề tài “Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học của lá Xoài tròn Yên Châu, Sơn La” với 2 mục tiêu chính: một là giám định được tên khoa học của cây Xoài tròn Yên Châu dựa trên các nghiên cứu về đặc điểm hình thái và vi học; hai là xác định được sự có mặt và hàm lượng của mangiferin trong lá xoài. Sau một thời gian nghiên cứu chúng tôi đã thu được các kết quả sau:  Về thực vật Đã mô tả đặc điểm hình thái và giám định tên khoa học cho cây xoài tròn thu hái tại huyện Yên Châu, Sơn La là loài Mangifera indica L., họ Anacardiaceae. Mô tả chi tiết đặc điểm vi phẫu gân lá, cuống lá và đặc điểm bột lá của cây xoài tròn Yên Châu, Sơn La góp phần làm cơ sở cho việc kiểm nghiệm và tiêu chuẩn hóa dược liệu sau này.  Về hóa học Bằng phản ứng hóa học đã xác định được trong lá xoài tròn Yên Châu có các thành phần: flavonoid, tanin, carotenoid, steroidtriterpen, đường khử. Kết quả định tính bằng sắc kí lớp mỏng có so sánh với mangiferin chuẩn, khai triển hệ dung môi EtOAcHCOOHH2O 10:1,5:1 cho thấy trong lá xoài tròn Yên Châu, Sơn La có mangiferin. Đã khảo sát khả năng chiết xuất mangiferin của hỗn hợp dung môi EtOHH2O bằng SKLM và HPLC, nhận thấy EtOH 70o là dung môi có khả năng chiết mangiferin tốt nhất. Bằng phương pháp HPLC, đã khảo sát hàm lượng mangiferin trong lá xoài tròn Yên Châu, Sơn La: lá bánh tẻ có hàm lượng mangiferin cao nhất (7,39%), tiếp đến là lá xoài non (6,78%) và lá xoài già (6,47%). Đã tiến hành chiết xuất, tinh chế và xác định được cấu trúc của mangiferin từ lá xoài tròn Yên Châu, Sơn La.

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ NGẦN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT & THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA LÁ XOÀI TRÒN YÊN CHÂU, SƠN LA KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI-2013 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ NGẦN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT & THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA LÁ XOÀI TRÒN YÊN CHÂU, SƠN LA KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS. Đỗ Quyên Nơi thựchiện: Bộ môn Dược Liệu HÀ NỘI-2013 LỜI CẢM ƠN Trong quá trình hoàn thiện khóa luận này, tôi đã nhận được sự ủng hộ và tạo điều kiện của ban giám hiệu Trường Đại học dược Hà Nội và bộ môn Dược liệu cùng rất nhiêu bộ môn khác trong trường. Dầu tiên, tôi xin bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc của mình đến TS. Đỗ Quyên là người thầy đã trực tiếp hướng dẫn tôi hoàn thành khóa luận này. Cũng nhân dịp này, tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Nguyễn Quốc Huy đã hướng dẫn tôi nghiên cứu về các đặc điểm hình thái cây xoài tròn Yên Châu, Sơn La. Tôi cũng xin bày tỏ lòng biết ơn đến các thầy cô giáo cùng các anh chị kĩ thuật viên khác tại Bộ môn Dược Liệu, Bộ môn Thực Vật và các bộ môn khác trong trường đã nhiệt tình giúp đỡ và tạo điều kiện cho tôi trong suốt qúa trình học tập và nghiên cứu để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp. Một lần nữa tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng 5 năm 2013 Sinh viên Nguyễn Thị Ngần MỤC LỤC DANH MỤC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC ĐỒ THỊ VÀ HÌNH VẼ PHỤ LỤC Phụ lục 1: Phiếu giám định tên khoa học và phiếu chứng nhận mã số tiêu bản của cây xoài tròn Yên Châu, Sơn La. Phụ lục 2: Pic sắc kí của và phổ hấp thụ tử ngoại của dung dịch mangiferin chuẩn 1ppm Phụ lục 3: Pic sắc kí của các dung dịch M 1, M 2 , M 3 , M 4 , M 5 . Phụ lục 4: Phổ 1 H-NMR và 13 C-NMR của chất M. DANH MỤC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT DM: dung môi. DMPM: dung môi pha mẫu. HPLC: High Performance Liquid Chromatography (Sắc kí lỏng hiệu năng cao). SKLM: Sắc kí lớp mỏng. TT: Thuốc thử. DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 : Một số loài thuộc chi Mangifera L. và phân bố tại Việt Nam. Bảng 3.1: Các vết (R f , màu sắc) trên sắc kí đồ của dịch chiết lá xoài tròn khai triển với hệ dung môi EtOAc-HCOOH-H 2 O [10:1,5:1]. Bảng 3.2: Diện tích pic của dãy dung dịch chuẩn ở các nồng độ khác nhau. Bảng 3.3: Kết quả định lượng mangiferin trong lá xoài tròn khi chiết bằng dung môi EtOH 90 o , 70 o và 50 o . Bảng 3.4: Kết quả định lượng mangiferin trong các mẫu M 4 , M 5. Bảng 3.5: Giá trị R f và màu sắc các vết trên sắc kí đồ của chất M và mangiferin chuẩn khai triển hệ dung môi ở các điều kiện khác nhau. Bảng 3.6: Kết quả định tính chất M bẳng phản ứng hóa học. Bảng 3.7: Phổ 1 H, 13 C-NMR của M và mangiferin. DANH MỤC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ Hình 1.1: Acid Gallic và các dẫn chất của nó phân lập từ chi Mangifera L. Hình 1.2: Công thức cấu tạo của acid ellagic (I) và mangcoumarin (II). Hình 1.3: Một số hơp chất nhóm flavonoid phân lập từ chi Mangifera L. Hình1.4: Các hợp chất nhóm xanthon phân phân lập từ chi Mangifera L. Hình 1.5: Một số hợp chất monoterpen có trong chi Mangifera L. Hình 1.6: Một số hợp chất sesquiterpen có trong Mangifera L. Hình 1.7: Cấu trúc một số dẫn chất cycloartan phân lập từ chi Mangifera L. Hình 1.8: Các hợp chất triterpenoid tetracyclic nhóm damaran được phân lập từ chi Mangifera L. Hình 1.9: Khung pregnan, pregnenolon, progesterol. Hình 1.10: Khung stigmastan và một số dẫn chất stigmastan trong xoài. Hình 1.11: Công thức của mangiferin. Hình 3.1:. Hình ảnh cây và hoa xoài tròn Yên Châu-Sơn La. Hình 3.2: Ảnh chụp các bộ phận của hoa, quả, lá xoài tròn. Hình 3.3: Vi phẫu gân chính và phiến lá xoài tròn. Hình 3.4: Một góc của vi phẫu gân chính lá xoài tròn. Hình 3.5: Vi phẫu phiến lá xoài tròn. Hình 3.6: Vi phẫu cuống lá xoài tròn. Hình 3.7: Một góc của vi phẫu cuống lá xoài tròn. Hình 3.8: Các đặc điểm của bột lá xoài tròn. Hình 3.9: Hình ảnh sắc kí đồ của dịch chiết dược liệu bằng dung môi ethanol ở ba nồng độ 50 o ,70 o , 90 o , khai triển hệ dung môi EtOAc-HCOOH-H 2 O [10:1,5:1]. Hình 3.10: Đồ thị đường chuẩn mangiferin. Hình 3.11: Hình ảnh sắc kí đồ chất M so sánh với mangiferin chuẩn, khai triển hệ dung môi EtOAc-HCOOH-H 2 O [2:0,3:0,2]. Hình 3.12: Tinh thể chất M. 10 ĐẶT VẤN ĐỀ Ngày nay cùng với sự phát triển của khoa học kỹ thuật, thuốc phòng và điều trị bệnh ngày càng phong phú, bao gồm thuốc có nguồn gốc tự nhiên và tổng hợp. Trong đó nguồn nguyên liệu tự nhiên là nguồn quan trọng để nghiên cứu phát triển thuốc mới và sản xuất trong công nghiệp dược đối với thuốc có nguồn gốc thảo dược. Việt Nam là một nước nhiệt đới gió mùa, nóng ẩm, mưa nhiều, địa hình đa dạng rất thuận lợi cho sự sinh trưởng và phát triển nhiều loại cây thuốc quý. Cùng với kinh nghiệm dân gian sử dụng cây thuốc để phòng và chữa bệnh, rất nhiều cây thuốc quý được sử dụng trong công nghiệp dược làm thuốc. Một trong những tỉnh miền núi phía Bắc nước ta có sự đa dạng sinh học cao đó là tỉnh Sơn La. Sơn La là tỉnh miền núi cao nằm ở phía tây bắc Việt Nam, có khí hậu nhiệt đới gió mùa, mùa đông lạnh khô, mùa hè nóng ẩm, mưa nhiều. Do địa hình bị chia cắt sâu và mạnh nên hình thành nhiều tiểu vùng khí hậu, cho phép phát triển một nền sản xuất nông - lâm nghiệp phong phú. Vùng cao nguyên Mộc Châu phù hợp với cây trồng và vật nuôi vùng ôn đới. Vùng dọc sông Đà phù hợp với cây rừng nhiệt đới xanh quanh năm. Trong tổng số diện tích đất sản xuất nông nghiệp (247.684 ha), diện tích trồng cây ăn quả chiếm gần 10% (24.016 ha). Trong đó, xoài tròn (Mangifera indica L.) là một đặc sản của tỉnh Sơn La, nổi tiếng trên cả nước. Tuy nhiên, cho đến nay mới chỉ khai thác quả xoài tròn, còn cành, lá cây xoài tròn thông qua việc tỉa cành hàng năm đều không được sử dụng. Để có thể làm tăng giá trị sử dụng nguồn nguyên liệu lớn, lá xoài tròn (Mangifera indica L.) của huyện Yên Châu, tỉnh Sơn La, góp phần xóa đói, giảm nghèo ở các tỉnh vùng sâu, vùng xa, chúng tôi thực hiện đề tài “Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học của lá Xoài tròn Yên Châu, Sơn La” với 2 mục tiêu chính: một là giám định được tên khoa học của cây Xoài tròn Yên Châu dựa trên các nghiên cứu về đặc điểm hình thái và vi học; hai là xác định được sự có mặt và hàm lượng của mangiferin trong lá xoài. [...]... hạt nhân 1HNMR và phổ 13C-NMR BRUKER AVANCE AM500 FT-NMR - Viện Hóa học 2.3 Nội dung nghiên cứu 2.3.1 Nghiên cứu về thực vật − Mô tả đặc điểm hình thái và xác định tên khoa học của cây xoài tròn thu hái ở huyện Yên Châu, tỉnh Sơn La − Mô tả đặc điểm vi phẫu cuống lá và gân lá xoài tròn Yên Châu, Sơn La − Mô tả đặc điểm bột lá xoài tròn Yên Châu, Sơn La 2.3.2 Nghiên cứu về thành phần hóa học − Định tính... Pằn, huyện Yên Châu, tỉnh Sơn La Thời gian thu mẫu: tháng 3 năm 2012 và tháng 1 năm 2013 Mẫu nghiên cứu gồm có lá già, lá bánh tẻ và lá non 2.2 Nguyên vật liệu, hóa chất, thiết bị nghiên cứu 2.2.1 Nguyên vật liệu Mẫu nghiên cứu thực vật:  Lá tươi sau khi thu hái được ngâm trong cồn 50 o để nghiên cứu đặc điểm vi phẫu  Lá sau khi thu hái được sấy khô, tán thành bột mịn để nghiên cứu đặc điểm bột ... và lưu mẫu tiêu bản tại Phòng tiêu bản thực vật, bộ môn thực vật trường Đại học Dược Hà Nội Dựa trên cơ sở các kết quả phân tích đặc điểm thực vật kết hợp với các tài liệu để xác định tên khoa học của cây xoài tròn Yên Châu, Sơn La - Nghiên cứu đặc điểm vi phẫu lá xoài tròn: Tiêu bản vi phẫu lá và cuống lá được làm theo phương pháp cắt tẩy và nhuộm kép Tiêu bản được chụp trên kính hiển vi Các đặc điểm. .. chất chính trong lá xoài tròn Yên Châu, Sơn La bằng phản ứng hóa học và sắc ký lớp mỏng − Xây dựng đường chuẩn mangiferin bằng phương pháp HPLC − Khảo sát hàm lượng mangiferin trong lá xoài tròn bằng phương pháp HPLC − Chiết xuất, phân lập và nhận dạng mangiferin từ lá xoài tròn 2.4 Phương pháp nghiên cứu 2.4.1 Nghiên cứu thực vật - Nghiên cứu đặc điểm hình thái: Mô tả phân tích đặc điểm hình thái theo... huyện Yên Châu, tỉnh Sơn La; căn cứ vào các tài liệu phân loại và khóa phân loại hiện có như Danh lục các loài thực vật Việt Nam, Thực vật chí Trung Quốc, Thực vật chí Đông Dương, Thực vật chí Campuchia-Lào-Việt Nam, dưới sự hướng dẫn của TS Nguyễn Quốc Huy, chúng tôi đã giám định mẫu xoài tròn Yên Châu, Sơn La (HNIP/1782/13) là loài: Mangifera indica L, họ Anacardiaceae 3.1.2 Đặc điểm vi phẫu lá và cuống... điểm giải phẫu lá và cuống lá được phân tích theo nguyên tắc nghiên cứu tiêu bản vi phẫu [5] - Nghiên cứu đặc điểm bột lá xoài tròn: Dược liệu sau khi làm sạch, cắt nhỏ, sấy khô được đem tán nhỏ, làm tiêu bản soi bột [4] Các đặc điểm được mô tả theo phương pháp môt tả bột dược liệu [3] 28 2.4.2 Nghiên cứu về hóa học - Định tính các nhóm chất hữu cơ bằng phản ứng hóa học: Các phản ứng hóa học được tiến... cứu đặc điểm bột  Cành mang hoa tươi và lá sau khi thu hái một phần được ngâm với EtOH 50 o, một phần được ép tiêu bản khô để nghiên cứu đặc điểm hình thái Mẫu nghiên cứu hóa học: các mẫu lá cây xoài tròn huyện Yên Châu, tỉnh Sơn La sau khi thu hái được sấy khô trong tủ sấy ở nhiệt độ 50 oC, nghiền thành bột thô, bảo quản trong túi nilon kín, ở nơi khô ráo 2.2.2 Hóa chất Dung môi: Acetonitril, CH3COOH... nghiên cứu về thành phần hóa học của các loài thuộc chi Mangifera L Trong đó loài M indica L là loài phổ biến và được nghiên cứu nhiều nhất Thành phần hóa học đáng chú ý gồm có: Các hợp chất phenol và acid benzoic, coumarin, flavonoid, xanthonoid, tinh dầu (monoterpen, sesquiterpen), steroid, triterpen và vitamin Đặc biệt mangiferin, một xanthon glycoside được nghiên cứu nhiều nhất và là thành phần có nhiều... dịch 1 thành dung dịch 2 h3: độ pha loãng từ dung dịch 2 thành dung dịch 3 Hàm lượng Mangiferin được tính theo công thức: mMangiferin 100.10−6 m Dl (1 − HA) 100 M Dl: khối lượng dược liệu (g) HA: hàm ẩm của dược liệu Chương 3: KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM 3.1 Kết quả nghiên cứu về thực vật 3.1.1 Đặc điểm hình thái của cây xoài tròn huyện Yên Châu, tỉnh Sơn La Cây thân gỗ, cao, sống lâu năm Lá đơn, nguyên, mọc... L và phân bố tại Việt Nam STT Loài 1 2 3 M indica L M odorata Griff M cochinchinensis Engel Xoài Xoài thơm Xoài nụt 4 M camptosperma Pierre Xoài bùi 5 M dongnaiense Pierre Xoài Đồng Nai 6 M duperreana Pierre Quéo 7 M reba Pierre 8 M foetida Lour 9 M flava Evr 10 Ma longipes Griff 11 M minutifolia Evr Tên thường gọi Quéo Xoài hôi, muỗm, xoài cà lăm Xoài vàng Xoài núi, Xoài cọng dài Xoài rừng, xoài lá . điểm thực vật và thành phần hóa học của lá Xoài tròn Yên Châu, Sơn La với 2 mục tiêu chính: một là giám định được tên khoa học của cây Xoài tròn Yên Châu dựa trên các nghiên cứu về đặc điểm. NỘI NGUYỄN THỊ NGẦN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT & THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA LÁ XOÀI TRÒN YÊN CHÂU, SƠN LA KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS. Đỗ Quyên Nơi thựchiện: Bộ môn Dược. ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ NGẦN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT & THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA LÁ XOÀI TRÒN YÊN CHÂU, SƠN LA KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI-2013 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC