Thực nghiệm thành phần hóa học của dây cóc Tinospora crispa miers

Thực nghiệm thành phần hóa học của dây cóc Tinospora crispa miers

4 THỰC NGHIÊM 4.1 CÁC THIẾT BI DUNG BE KHAO SAT CAC HOP CHAT: - Đo điểm nóng chảy khối Maquenne va méy ELECTROTHERMAL 9106 Digital - Phổ hỗng ngoại ghi máy quang phé hong ngoai IR-400 Shimadzu - Phổ cộng hưởng từ hạt nhân !H ghi hai máy BRUKER AC 200 (tần số cộng hưởng 200 MHz cho proton, 50 MH¿z cho carbon) va JEOL INM GX 400 (tần số cộng bưởng 400 MIH¿ cho proton, 100 MHz cho carbon) dung m6i CDCh, với chất chuẩn nội TMS - Sắc ký mỏng loại 25DC-Alufolien 20 x 20 cm Kieselgel 60 F254, Merck - Sk dung sic ki cdt véi silica gel 70-270 mesh, Merck - Sắc ký cột nhanh với silica gel 60 H loại dùng cho móng, Merck, 4.2 XỬ LÝ NGUYÊN LIỆU: - Dây Cóc thu hái được, riêng thân, đem chặt mỏng, - Sấy khô 50°C - Xay thành bột nhuyễn Xác định độ ẩm: Để khảo sát độ ẩm thân, dùng mẫu, mẫu 100 gam, sấy nhiệt độ 110 °C trọng lượng không đổi Kết trình bày & bang Bảng 6: Kết xác định độ ẩm thân Dây Cóc: Mẫu Than SốTN 100 32,8 100 31,3 100 31,7 100 18,2 100 17,9 La | Trọng lượng tươi (g) | Trọng lượng khô (8) 100 18,3 | | Luận án Thạc sỹ Khoa hạc Hóa học Thực nghiệm Kết luận: Thân Hàm lượng Ẩm trung bình Trọng lượng chất khơ trung bình 68,1% 31,9% Lá 81,9% 18,1% 4.3 ĐỊNH TÍNH MỘT SỐ CẤU TỬ HỮU CƠ : Để định tính điện hợp chất này, dựa vào phản ứng đặc trưng tạo màu tạo trầm hiện, Sơ đồ †: Qui trình điều chế loại cao Dây Cóc đùng để định tính: Bột khơ - Trích nguội vdi EtOH 95° - Cô cạn ‘ ‘ Cao EtOH Ba - Trộn với ALO; trung tinh - Tận trích với eter dầu hỏa (60-90°C) - Cơ cạn, Cao eter dau hóa Ba - Trích với n-BuOQH - Thu hổi dụng rgơi Cao n-BuOH bea ~ Trích với CHCh - Thu hồi dung môi Cao CHCh Trang 23 Luận án Thạc sỹ Khoa học Hỏa học Thực nghiệm 4.3.1 Định tính dién eda sterol: + Thuốc thử Liebermann ~ Burchard: tính Anhydrid acetic 20ml H;SỐ¿ đậm đặc im Nếu thấy xuất mầu xanh nhạt, luc, hồng, đồ phản ứng dương + Thuốc thử Salkowski: H;SÖ đậm đặc Nếu thấy xuất màu đỏ phản ứng đương tính + Thuốc thử Noler: Clorur tionil Ind Sn viên Nếu thấy dung dịch ngả qua màu vàng, màu cam, màu đồ thẫm phần ứng dương tính Chúng tơi đùng bột khơ (1g) CHC]; (20 m]) lọc lấy địch, 0,1g mẫu cao hòa tan CHC1, (30 mi), lọc lấy dịch làm mẫu thử Dịch lọc dùng để trắc nghiệm với thuốc thử Liebermann ~ Burchard, Salkowski Noller.[18] Kết trình bày bảng Bảng 7: Kết định tính sterol bột khơ loại cao: Dang mau thi Thuốc thứ Liebermann - Burchard Salkowski Noler Bệt khô + + + Cao eter dau héa + + + Cao chloroform - - - - ~ - Cao BuOH Kết luận: Chúng nhận thấy có sterol thân Dây Céc Luận án Thạc sỹ Khoa học Hóa học Thực nghiệm 4.3.2 Định tính alkaloid: Ngâm nguyên liệu (cao chloroform, cao n-BuOh) (0,1g) dung dịch H;SO¿ 3%, đun nhẹ 80°C Lọc lấy dịch lọc để thử với thuốc thử Bouchardat, Mayer, Hager, Dragendorff + Thuốc thử Bouchardat: I, 2,52 KI 5g Nước cất 10ml + Thuốc thử Mayer: HgCh 6,8g KI 2,52 Nước cất 500ml Cho kết tửa vàng nâu với dịch trích alkaloid + Thuốc thử Hager: Dung dich acid picric bão hòa nước Cho kết tủa vàng với dịch chứa alkaloid + Thuốc thử Dragendorff: Bi(NOs3)2 (20 g) hoa tan vao HNO, dam dac (30 ml), loc Hoa tan KI (68 g) nudéc (60 ml) Hoà tan hỗn hợp để yên 24 Lọc thêm nước vừa đủ 250 ml Thuốc thử cho kết tủa có màu vàng cam với dung dịch có Alkaloid Bảng 2: Kết định tính diện alkaloid Thuốc thử Bo phan cay ` Than Dang a Bouchardat | Dragendorff | Hager | Mayer Bột khô + + + Cao CHC]; + Cao eter dauhda Cao n-BuOH - + - + Ket qua Có + - + Khơng + + + Có + Có Trang 25 Luân án Thạc sỹ Khoa học Hóa học Thực nghiệm Chúng tơi nhận thấy thân Cóc có chứa alkaloid, lập chúng từ cao chloroform cao n-BuOH 4.3.3 Định tính glicosid :[18] [19] Để xác định diện giicosid, sử dụng phương pháp SOOS (có sửa đổi) theo sơ đồ Dich etil alcol sau cing dùng để trắc nghiệm với thuốc thử Tollens, Baljet Molish Tận trích ngun liệu 100 gam (bột khơ, cao n-BUOH) với eul alcol 20% 24 Lắc thường xun, lọc, chế hóa địch lọc với acetat chì nước đến khơng cịn trầm Lọc, thêm dung địch Na;SƯa bão hịa đến khơng cịn trầm hiện, Để n 12 Lọc, cạn dung địch Hịa tan phần cặn ctil alcol 95%, dụng dịch đùng làm mẫu thử Với mẫu cao n-BuOH, hòa tan n-BUOH, lọc lấy dịch lọc làm mẫu thử, Các thuốc thử: + Thuốc thử Baljet: Acid picric] % 20ml NaOH 10ml 5% Nếu xuất màu vàng cam hồng sẫm phần ứng dương tính + Thuốc thử Mobsh: Dung địch xanh thymol 2% 1-2 giọt H;SÒ¿ đậm đặc 1ml Nếu thấy xuất mầu đỏ phan ứng đương tính, Cách thử: Lấy hai ống nghiệm, cho vào ống thứ 2ml mẫu thử (làm đối chứng) Cho 2ml dung dịch mẫu thử vào ống nghiệm thứ nhì, cho giọt thuốc thứ vào + Thuốc thứ Tollens: Cho vào ống nghiệm 2-3mg glicosid va giot pyridin Thém vao giot 0,5 ml thuốc thử Tolens pha (hỗn hop 0,5 ml dung dich nitrat bac 10% với NaOH 10% sau cho giọt NH.OH đến tan hết tủa Nếu có Ag khử phần ứng dương tính Trang 26 TA - cày tận án Thạc sỹ Khoa học Hóa học Thực nghiệm Bảng 3: Kết định tính glicosid thân Cóc: es Dang mau thy Thuốc thứ Baliet + + Molish Cao eter đầu hỏa - - - Cao chioroform - - - Cao n- BuOH + + + ¡ Bột khơ Tollens + Sơ đề 2: Định tính giicosid theo phương pháp SOOS (có sửa đổi) Nguyên liệu - Tan trich vdi EtOH 20% soxhlet - Lọc x wr Ỹ Dich EtOH - Dung dich acetat chi 20% - Lọc Tram hién Dich lọc | | - Đung địch Na;SỊ¿ bão hịa - Loc ¥ Dich loc | | - Cô cạn đưới áp suất - Hòa tan can EtOH 95% Dich EtOH Dung dich để thir glicosid Kết luận: bột khô, cao n-BuQOH than Cóc có chứa gHcosid Trang 27 Luận án Thạc sỹ Khoa học Hóa học Thực nghiệm 4.3.4 Định lượng alkaloid theo Stass-Otto: Lấy 2kg Đây Cóc khơ, tẩm với NHOH soxhlet, mẻ 200g trích với li CHCh, nhiều lần với dung địch acid HạSO, 2%, Mayer dé theo đơi, Dịch acid vừa trích đến 10-12, đem lắc lại nhiều lần với CHC]; để loại kiểm dư, lọc, cô cạn thu alkaloid 10%, để yên đêm, cho vào Dịch trích cạn bớt, lắc lần dùng 200ml, có đùng thuốc thử cho thêm NHOH vào để chỉnh pH Dịch trích CHCH rửa với nước toàn phần Trang 28 tuận án Thạc sỹ Khoa học Hóa học Thực nghiệm %ø đề 3: Qui trình dinh hong alkaloid theo Stass- Otto : Hội dây Cóc - Tam với NHẠOH 10% - Để yên đêm - Tan trich bang CHC, ¥ Ba ¥ Dich CHCh ˆ Trích với HaSx 2% nhiễu lẫn Dich acid H.SQ, 2% Dich CHCL - Định tính với thuốc thử alkaloid - Dùng NHẠOH đưa pH 10 -12 - Trích với CHC, ’ a Dich nude kiém Ỹ Dich CHCl, - RỨa với nước - Làm khan - Lọc, cạn Ỷ Alkaloid tồn phần Hiệu suất: 0.073% tính bột thơ Trang 29 Luận án Thạc sỹ Khoa học Hóa học Thực nghiệm 4.4 CÔ LẬP CÁC HỢP CHẤT HỮU CƠ: Để khảo sát số thành phần có Dây Cóc, chọn phương pháp chiết xuất cổ điển [20] Sau trích ly dung mơi với độ phân cực tăng dân, hợp chất từ phân đoạn xử lý cách kết tỉnh lại nhiều lần hệ dung môi khác nhau, 4.4.1 Điều chế phần khơng xà phịng hóa cao eter dầu hổa cao chioroform: Hòa tan 200g KOH rắn vao 100 ml EtOH 95%, cho vào 220 g cao eter dầu hỏa thân Dây Cóc Tất cho vào bình cầu lít đun hồn lưu gid Để nguội, thêm nước cất, cho natri clorur rắn vào hỗn hợp trên, khuấy đêu để dung dịch tách lớp, lọc, tách phần: Phần bị xà phịng hóa hỗn hợp muối kali acid béo không tan lên trén (phan 1) Phần khơng bị xà phịng hóa dung dịch có màu xanh đen (phân 2) Lắc dung dịch phần nhiều lần với eter euil bình lóng (phếu chiết, Chiết lấy phần dich cter eul rửa nhiều lần với nước cất đến nước rửa có pH=7, làm khan Na;SOx khan Cơ cạn dung môi, thu 23 ø cao eter đầu hỏa phần khơng bị xà phịng hóa Cao dùng để sắc ký cột, Sau trích với eter đầu hỏa, thay dung môi soxhlet CHCH, tiếp chloroform tục trích, cạn, thu hổi dung mơi, phần cặn cịn lại cao Phần khơng xà phịng hóa cla cao eter dau héa va cao chloroform dude điểu chế theo sơ đồ Trang 30 kuân án Thạc 3ỹ Khoa học Hóa học Thực nghiệm Sơ đồ 4: Điều chế phần khơng xà phịng hóa cao cter dầu hóa cao chloroform theo sơ đỗ Bột dây Cóc (000g) - Trích nguội với eter đầu hỏa (60-90°C) - Thu hồi dung | | x" ¥ Cao eter dau héa Ba a (40g) - KÔH/EIOH ; Đun hồn bya | - Thêm HạƯ - Trích với eter cHl i „4 ị ¬ ¥ Pha nước — - Thu héi dung môi — Cao CHCL (2g) Pha hữu ; - Trích với CHCI; i | — © - Làm khan với Na;SO, ~ Thu héi dung méi Phần khơng xà phịng hóa cao eter đầu hỏa (8g) | | | 4.4.2 Chuẩn bị: 4.4.2.1 Xử lý cao: dung Sau trích ly soxhlet, dịch trích lọc giấy lọc, cô đuổi môi, thu cao Các không chúng khô loại cao cho vào bình hút ẩm, húi chân 4.4.2.2 XU ly silicagel: Ching t6i su dung silica gel 70-270 mesh (63-200 pm) cho sic ky cét cé điển Cả hai loại silica gel dùng cho sắc ký mông cột sấy nhiệt độ 130-140°C, sau làm nguội bình hút ẩm Trang 31 Tuân áa T = Luan an Thạc sỹ Khoa học Hóa học Thực nghiệm 4.4.2.3 Xử lý dụng mơi: - Eter dầu hóa: chưng cất, lấy phân đoạn 60-80°C, làm khan nati kim loại thời gian từ 2-3 ngày, - Benzen: chưng cất, lấy S0°C, làm khan bing natri kim loại thời gian từ 2-3 ngày, - Chloroform: lắc với nước từ 2-3 lần, chưng cất, làm khan với clorur canxi - Metanol: chưng cất đun hoàn lưu với magie kim loại 3-4 để loại nước, 4.4.3 Cô lập phương pháp sắc ký cột: 4.4.3.1 Sắc ký cột sắc ký mồng: Chúng chọn dung môi theo độ phân cực tăng dẫn để giải ly cột sắc ký, sau: eter đầu hóa, benzen, chioroform, metanol, Chúng tiến hành sắc ký mỏng để theo đõi hệ dung ly dùng cho cội sắc ký có nhận xét tương quan sắc ký mông sắc ký cột sau: + Đối với hợp chất có AR¿ chênh lệch khoảng 0,1 tách tốt cột, nhiên có phân đoạn chênh lệch (AR;< 0,1) cô lập phương pháp kết tĩnh phân đoạn, + Khi sắc ký mỏng có R¿ khoảng O,1 hệ dung ly tách cột hệ dung ly Như chúng tơi tăng nhanh hay chậm độ phân cực dụng môi theo phân đoạn 4.4.3.2 Sản phẩm tách từ cột sắc ký phần không xà phịng hóa cao eter đầu hóa: 8g ~ Trọng lượng cao : - Trọng hiong silica gel 240 g - Chiéu cao cét silica gel: 45 cm - Đường kính cột: 3,5 cm = 0,56; Sắc ký mỏng dung mơi CHC]; cao có vét: Ry = 0,85, Rp Ry = 0,56; tit Rp = 0,30 - 0,45 06 nhiéu vét gan nhau, Ry = 0,22 GO dung ly chất cuối chưa lên hết Sắc ký móng dung mơi CHCI, -MeOH (20:1) cao có vết cuối Rr= 0,05 Trang 32 T*//T~~ flo ff Hn" 2önp ọ2 8uo 32A nọrN ===//~~~ -—=//=== ~==//J~~= sứs Tee 906 Les 9c 91c OOTT 06C OOZIT 000Z OOST 00ST 0001 €-L4£:4- e:L:9-d €:L4:a-@ [-I:q-d %001:8 1-6:0-4 T-T:3-4 :Đ 89 — 1S 6L — 69 §II- 08 OZ - 6II 09£- Itẽ SLT- 19% 06C — 9LZ 00E - lốc t € v Ss L 0I £C đMU1T '2#s Zuou% 0S“0 =J3I 19A 02 (£:8) : 2V-g OLY 0081 OS — orpqrjowoydsoyd proy :yury UsTY J1) 2on11, TỊ9 1£199V coy ‘uozuog : g ‘ BOY NEP Jorg: :]9 IỊO ‘sues quI 125 =) 19A € 0q (€:C6)HO9IW-2 STII te:L:a-d €0 :9/0 ‘ZL°0 %00T ‘yoes Zuoq% SS“0= T3 19A 02 (Z:§8 ): 2V- 0067 ‘TO “SEO *S6°0 ‘Bugsy quI 195 SLIT | ugud uaz uvop mm pu os Oy = tị 12A £ 09(I:66) HO2IN-2 ound | ‘goes Zuoq*J PQS?H :q) 50n[, vers I AL Tete Tow IZ -1 50 kt 199 a (tt) yon adL 0017 (8u) 076 uouI uựq Á3 2£S uỷo 8n] | t£0= ïĐ 19A 92 ([:p) 2-4 '8ug1) dụS wWgIp 9RG :202 Áp eno (38) sọu Zuoqd ex Bugyy ugud “sọ nẹp 1912 o92 uạ1 102 Á3 ORS :£ đưpgj Thực nghiêm Luận án Thạc sỹ Khoa học Hóa học Dung ly dùng để giải ly cột ban đầu eter dầu hỏa Mỗi lọ hứng 100ml, tốc độ chảy từ 60-120 gioUphút Khoảng lít dung mơi (tương ứng với 1Ơ lọ), khơng chất, Đến lọ có trắng bắt đầu đánh số thứ tự, Các lọ có vết giống gom thành phân đoạn, Phân đoạn 1: Từ lọ 1-21 sắc ký lớp mỏng cho thấy có vệt rõ thuốc thử (H5, l¿ bão hịa), có Rr= 0,24 dung ly benzen-chloroform(4:1) Lượng cặn thu 920mg Hòa tan CHC nóng, cho thêm từ từ vài giọt MeOH vào, khuấy Để nguội từ từ cho kết tính, thu 24,8mng chất bột trắng xốp, nhẹ, nhiệt độ nóng chảy §4 — §5°C (hình 3) + Phổ hếng ngoại có mũi hấp thu đặc trưng sau:(phụ lục 1) IR, KBr, V cm? (KBr): 3285 2895 2830 V-OH Vas~ CH; Vs—CH; 1456 Os C-H 1051 715 V-C-O - CH, Từ tín hiệu phể tần số hấp thu trên, ghi nhận hợp chất gồm có nối CH, OH bão hịa nhóm C-OH Phổ !H -NMR (CDCh;), (phụ lục số 2) Ôppm 0,88 (3H, mũi ba, -CH:-CHà) 1,25 (mũi đa, nhóm —CH2-) 1,59 (mũi đa, nhóm -CH2-) 3,64 (2H, ba, -CH;-CH;-QH) 3,64ppm Phổ cho thấy có diện Ì nhóm alcol cấp -CH;-O(2H,Đ dây alkyl mach thẳng Trang 34 Luận án Thạc sỹ Khoa học Hóa học £ 13 Ị Thục nghiệm C - NMR kết hợp với kỹ thuật DBPT (CDCH) (phụ lục 3, 4) có mũi cộng hướng tương ứng với loại carbon sau : Bang 9: Phé °C — NMR cia hop chat thu dude phan doan Vi tri cla carbon Phé °C - NMR C; Cc C3 63,10 32,81 31,92 Mai âm ~ CH;~ - OH Mũi âm - CH¿ạ ~ 29,69 28,43 ~-f/-~-/ L 29,35 ~-// Cg Cr 25,74 22,68 ~=//~« ~-/{ C30 14,11 (ỗ,ppm) | Từ C - đến C - 25 | Phé DEPT Mũi đương — CH, Các kết phổ NMR kết hợp với kỹ thuật DEPT -NMR cho thấy hợp chất alcol béo dây thẳng có dạng CHạ-(CH:),-CH;QH, đo tất carbon -CH;- có nhóm —CH, phân tử, dự đốn số carbon từ 18-30, chúng tơi so sánh điểm nóng chấy mũi cộng hưởng C-NMR cia hợp chất với số alcol béo có cơng bố theo tài liệu [18] trình bầy bảng Đối chiếu số liệu hợp chất với số liệu 1-octacosanol [25], thấy có trùng khớp nên chúng tơi để nghị cấu hợp chất Í-octacosanolL Phân đoạn 2: Từ lọ 22-50 hệ dung ly: eter dầu hỏa- benzen: 7-3, lọ có sắc ký lớp mông với vết R; = 0,72; 0,6; 0,54 khơng kết tính Phân đagn 3: Từ lọ ã1- 68 hệ dung ly: eter hỏa- benzen: 7-3 Trên sắc kỹ lớp móng, etil phân đoạn cho thấy mội vệt rõ Rr = 0,55 hệ dung ly benzen-acetat :8-2, lượng cặn thu 11 15mg Kết tỉnh tương tự phân đoạn 1, thu 20,Smg tinh thể trắng có điểm nóng chảy 141—142°C (hình 2) Trang 35 Luận án Thạc s¥ Khoa hoc Héa hoc Thuc nghiém + Phổ hông ngoại : (phụ lục 5) Phổ hồng ngoại chất nầy có mũi hấp thu đặc trưng sau : IR, KBr Vem’: 3410 V -OH 2925 Vas -CH 1632 VCH 1454 — Ôc=n 1366 dcx 1036 Vec.o C=C Phổ 'H-NMR: (phụ lục 6) Ồ,ppm 3-H 18-H 323 (1H, m) 0.97 (3H,s) 19-H a 0,14 19-H B 039 (1H, d,4 Hz) (1H,d,4Hz) 21-H 0,91 (3H,đ,7Hz) 26-H 101 (3H,d,7H2) 27-H 1,04 (3H,d,7 Hz) 28 -H 4,67; 4,72 30 -H 0,99 (3H,d,7 Hz) 32 -H 0,90 (3H, s) Phổ 'H -NMR (CDC];) (phụ lục 6), cho thay tai Sppm: 4,71 va 4,66 (2x1H, hai mili, H.28a va H.28b); 3,23 (1H, da, H-3); 1,04; 1,01; 0,99; 0,97; 0,91; 0,89 (6x3H, ddn, nhóm CH¡ạ H-27; H-26; H-29; HI8; H-21 H-30) Phé carbon “C - NMR (pbu luc 7a, 7b, 8a, 8b) cho biét hop chat ndy cé 30 carbon, Dựa vào phổ DEPT ta biết có nhóm metil, 12 nhóm metilen, nhóm methin carbon tứ cấp Giá thuyết có mặt nối đơi đầu mạch khẳng định có mũi 105,6 (CH;) 156 ( carbon tứ cấp), có mặt nhóm hydroxy nhị cấp xác nhận mũi 76,5 ppm( bị che khuất mũi dung môi CHCh phổ carbon xuất rõ phố DEPT) Trang 36 Luận án Thạc sỹ Khoa học Hóa học Thực nghiệm Từ thông tin cho thấy chất phải triterpen có khả cycloartan với cơng thức phân tử CzoH;¿O Qua q trình tim hiểu, so sánh tài Hiệu, chúng tơi thấy có chất cycloeucalenol có cấu trúc phù hợp So sánh với đữ liệu phổ °C.NMR ĐEPT, thấy liệu phù hợp Kết so sánh trình bày bảng 7, Khi so sánh phổ TH-NMR; C-NMR DEPT -NMR chất với phố hợp chất cycloeucalenol tài liệu [23], thấy có trùng khớp nên chúng tơi để nghị cycloeucalenol với công thức sau: Cycloeucalenol Phân doan với Ti lo 69-79, dung ly: eter dầu hỏa-benzen: 7-3, có sắc ký lớp móng vết khơng kết tỉnh Phân đoạn 5: rõ, kết Từ lọ §0-118, sắc ký lớp mỏng phân đoạn thấy vệt trắng, trọng tỉnh lại hệ dung môi CHCh- MeOH, thu tỉnh thể hình kim lượng 25,6 mỹ, có điểm nóng chảy Benzen: Acctat etil (8:2) (hinh 3) 136 - 137°C, Rp= 0,5 hệ dụng Trang 37 ly Luận án Thạc sỹ Khoa học Hảa học Thực nghiệm Phổ hồng ngoại chất có mũi hấp thu đặc trưng sau : Vv em! ( KBr) 3400 2910 2820 1650 1460 1340 V -OH Vas ~ CH; Vis - CH; Vv, C=C V-C=C-H 8, -C-H 10619 — V-C-O-H 13827 — 958,8 800,6 Ô, -CHạ 6, -C=C-H Từ liệu trên, nhận thấy hợp chất có số nhóm chức sau: nhóm -OH có liên kết hydro V cm” (3600 - 3200) , nhóm ~CH: (2960 ~ 2850), Vc-o-H (989) + Phổ !H- NMR (phụ lục 10) Phổ 'H-NMR hợp chất có cộng hưởng đặc trưng tương ứng với loại proion đặc trưng sau: Ö,ppm Loại proton 0,69 30,78 Vạch da, H nhóm -CH; 0,84 0,90 0,98 I Vach đa, H nhóm —CH;-, -CH- 2,25 3,53 538 H -CH-OH H - CH=C- Phé proton cia hdp chat cho thấy có mũi đơi proton 5,35 ppm CH, 5,4Hz), mũi đa carbinol proton 3,52 ppm (TH) mũi nhóm rmetil khoảng 0,68 — 1,01 ppm Trang 38 Luận án Thạc sỹ Khoa học Hóa học Thực nghiệm Phổ °C - NMR (phụ lục 11a, 11b) kết hợp với phổ DEPT — NMR (phu lục 12a, 12b), CDCl;, mũi cộng hưởng ỗppm: 140,5; 121,4; 71,6; 56,5; 55,8; 49,9; 45,6; 42,1; 39,5; 37,0; 36,3; 35,9; 33,7; 31,7; 31,7; 31,4; 29,4; 28,0; 25,8; 24,1, 22,8; 20,9; 19,6; 19,2; 18,8; 18,6; 11,8; 11,6 Các liệu hai phổ cho biết hợp chất có 29 carbon, carbon thuộc loại >C=C< mũi cộng hưởng có độ dịch chuyển hóa học 121,4 140,5 ppm va carbon thuộc loại -CH-OH 71,6ppm Phổ DEPT cho biết hợp chất có nhóm CHạ, 11 nhóm CH¿, nhóm CH carbon tứ cấp Từ thông tin cho biết chất B-sitosterol Hợp chất cho trắc nghiệm dương tính với hai thuốc thử đặc trưng sterol thuốc thử Liebermann- Burchard Salkowski Kết so sánh điểm nóng chảy, phổ hồng ngoại, phổ 'H-NMR phổ '3C-NMR phổ DEPT chất trình bày bảng 10, 11 Bảng 10: So sánh phổ hồng ngoại với phổ B-sitosterol.[21] Hợp chất thu B-sitosterol (v cm”) (v em”) 3400 2910 2890 1650 1460 1340 1061 V -OH V, -CH; V -CH; Vv, C=C V-C=C-H 6, -C-H 6, -CH; 989 V -C-O-H 800 6, -C =C-H 3400 2935 2900 1657 1452 1367 1060 960 800 Trang 39 Ludn an Thạc sỹ Khoa học Hóa học Thực nghiệm Bảng 11 : So sánh mũi cộng hưởng ÌC-NMR hợp chất khảo sát với phổ '*C ~NMR B-sitosterol.[21] Số thứ tự B-sitosterol Loaicarbon Carbon (8,ppm) §-sitosterol €C-] 37,1 -CHa~ C-2 31,5 C- 71,5 C-4 42,1 DEPT -NMR Mai am -~CH, - 31,4 Mũi Âm >CH-OH 71,6 Mii dương ~CH, - 42,1 Mai am 140,1 C- C-7 C-8 1211 31,8 31,8 C-10 36,3 carbon af cap C-11 C-12 C-13 21,0 39,6 42,1 C-14 49,9 ` sát (8,ppn) Tin hiệu 37,0 C-5 C.9 | Hợp chất khảo carbon tứ cấp >CH-CH; >CH- >CH- 140,5 Triệt tiêu 121,4 31,7 31,7 Mũi đương Mũi âm Mũi dương 49,9 Mũi đương 36,3 Triệt tiêu -CH;-CH;carbon tứ cấp 20,9 39,5 421 Mũi âm Mũi âm Triệt tiêu 56,5 >CH- 56,5 Mii dương C-15 C-16 C-17 C-18 24,2 28,1 55,8 11,8 -CH;-CH;>CH-CHà 24,1 28,0 55,8 11,6 Mai Mũi Mi Mũi C-20 36,0 >CH- 35,9 Mãi dương C-19 C-21 C-22 C-23 19,3 18,7 33,8 26,0 -CH; -CHy -CH; - -CH; - 19/2 am âm dương dương Mũi đương 18,6 33,7 Mũi đương Mũi âm 25,8 Mũi âm C-24 45,6 >CH- 45,6 Mỗi dương C-25 C-26 29,0 19,0 >CH-CH; 29,4 18,8 Mũi dương Mai dương C-28 23,0 -CH¡ 22,8 Mai âm C-29 11,9 -CH, 11,8 Mãi dương C-27 19,7 -CH; 19,6 Mũi dương Trane 40 ... cạn Ỷ Alkaloid tồn phần Hiệu suất: 0.073% tính bột thơ Trang 29 Luận án Thạc sỹ Khoa học Hóa học Thực nghiệm 4.4 CÔ LẬP CÁC HỢP CHẤT HỮU CƠ: Để khảo sát số thành phần có Dây Cóc, chọn phương pháp... mơi, phần cặn cịn lại cao Phần khơng xà phịng hóa cla cao eter dau héa va cao chloroform dude điểu chế theo sơ đồ Trang 30 kuân án Thạc 3ỹ Khoa học Hóa học Thực nghiệm Sơ đồ 4: Điều chế phần. .. Dịch trích CHCH rửa với nước toàn phần Trang 28 tuận án Thạc sỹ Khoa học Hóa học Thực nghiệm %ø đề 3: Qui trình dinh hong alkaloid theo Stass- Otto : Hội dây Cóc - Tam với NHẠOH 10% - Để yên đêm