Sinh trưởng, phát triển của vi khuẩn trong điều kiện nuối cấy tĩnh. Đường cong sinh trưởng: 68 Nuôi cấy tĩnh là phương pháp nuôi cấy mà trong suốt thời gian đó không thêm vào chất dinh dưỡng và cũng không loại đi các sản phẩm cuối cùng của trao đổi chất. Đường cong sinh trưởng là đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc logarit của số lượng tế bào theo thời gian. Đường cong sing trưởng có 4 pha chủ yếu: LogN t - Pha lag (pha mở đầu/ pha tiềm tàng): pha này tính từ lúc bắt đầu cấy đến khi vi khuẩn đạt tốc độ sinh trưởng cực đại. Độ dài của pha này phụ thuộc vào tuổi của ống giống và thành phần môi trường. - Pha log (pha luỹ thừa); Trong pha này vi khuẩn sinh trưởng và phát triển theo luỹ thừa, nghĩa là sinh khối và số lượng tế bào tăng theo phương trình: X = X0 . e µt hay N = N0 . 2 Ct. Trong pha này, kích thước của tế bào, thành phần hoá học, hoạt tính sinh lý nói chung không thay đổi theo thời gian. Tế bào ở trạng thái động học và được coi như là “những tế bào tiêu chuẩn”. - Pha ổn định: trong pha này quần thể vi khuẩn ở trạng thái cân bằng động học, số tế bào mới sinh ra bằng số tế bào cũ chết đi. Nguyên nhân hình thành pha này là do sự tích luỹ các sản phẩm độc của trao đổi chất (các loại rượu, axit hữu cơ) và việc cạn chất dinh dưỡng. - Pha tử vong: trong pha này số lượng tế bào có khả năng sống giảm theo luỹ thừa mặc dù số lượng tế bào tổng cộng có thể không giảm. Nguyên nhân của pha này rất phức tạp, một số nguyên nhân thường gặp là: điều kiện ngoại cảnh bất lợi, do sự tự phân của tế bào. Nghiên cứu sinh trưởng phát triển của vi khuẩn giúp chúng ta có cơ sở lý luận để vận dụngvào thực tiễn. 3. Các phương pháp xác định sinh trưởng, phát triển của vi khuẩn: a. Phương pháp xác định số lượng tế bào: - Để xác định số lượng tế bào tổng cộng (tế bào sống và tế bào chết) người ta thường dùng phương pháp đếm tế bào trực tiếp dưới kính hiển vi nhờ các “phòng đếm”. - Để xác định số lượng tế bào sống, người ta thường đếm số khuẩn lạc tạo thành khi nuôi cấy trên môi trường đặc. 69 b. Phương pháp xác định sinh khối tế bào: * Phương pháp trực tiếp: - Xác định sinh khối tươi hay khô sau khi ly tâm tế bào (phương pháp này kém chính xác). - Xác định hàm lượng nitơ tổng số (phương pháp micro – Kjeldahl và phương pháp xác định NH3) hay hàm lượng cacbon tổng số. Các phương pháp này cho độ chính xác cao. - Xác định hàm lượng protein bằng phương pháp biure cải tiến hoặc các phương pháp so mầu khác. * Phương pháp gián tiếp: - Đo độ đục của dịch treo tế bào bằng cách đo mật độ quang học. - Đo các chỉ số cường độ trao đổi chất như hấp thụ Oxy, tạo thành CO2 hay các axit. BÀI 5. DI TRUYỀN HỌC VI SINH VẬT Vi sinh vật cũng như các đại diện khác của thế giới sống đều mang 2 đặc điểm cơ bản của cơ thể sống là tính di truyền và biến dị. Tính di truyền và biến dị của vi sinh vật cũng tuân theo các quy luật di truyền như ở tất cả các sinh vật bậc cao. I. Di truyền của vi sinh vật: . Sinh trưởng, phát triển của vi khuẩn trong điều kiện nuối cấy tĩnh. Đường cong sinh trưởng: 68 Nuôi cấy tĩnh là phương pháp nuôi cấy mà trong suốt thời gian đó không. đầu cấy đến khi vi khuẩn đạt tốc độ sinh trưởng cực đại. Độ dài của pha này phụ thuộc vào tuổi của ống giống và thành phần môi trường. - Pha log (pha luỹ thừa); Trong pha này vi khuẩn sinh. rất phức tạp, một số nguyên nhân thường gặp là: điều kiện ngoại cảnh bất lợi, do sự tự phân của tế bào. Nghiên cứu sinh trưởng phát triển của vi khuẩn giúp chúng ta có cơ sở lý luận để vận