Đang tải... (xem toàn văn)
THƯ VIỆN cDNA LÀ GÌ ? Thư viện cDNA (complement DNA) là tập hợp các đoạn DNA bổ sung (cDNA) được tổng hợp từ mARN của một bộ phận trong cơ thể sinh vật. XÂY DỰNG THƯ VIỆN cDNA Gồm 5 bước chính sau : Tinh sạch mRNA từ RNA tổng số của một bộ phận cơ thể sinh vật. Tổng hợp sợi cDNA thứ nhất từ khuôn mẫu mRNA từ enzym phiên mã ngược (reverse transcriptase).
THƯ VIỆN cDNA THƯ VIỆN cDNA Giáo viên hướng dẫn: Giáo viên hướng dẫn: Nguyễn Thị Vân Anh Nguyễn Thị Vân Anh Sinh viên thực hiện : Sinh viên thực hiện : Nguyễn Thị Thanh Hương Nguyễn Thị Thanh Hương Nguyễn Thị Lanh Nguyễn Thị Lanh Trần Vũ Thị Như Lành Trần Vũ Thị Như Lành THƯ VIỆN cDNA LÀ GÌ ? Thư viện cDNA (complement DNA) là tập hợp các đoạn DNA bổ sung (cDNA) được tổng hợp từ mARN của một bộ phận trong cơ thể sinh vật. XÂY DỰNG THƯ VIỆN cDNA Gồm 5 bước chính sau : • Tinh sạch mRNA từ RNA tổng số của một bộ phận cơ thể sinh vật. • Tổng hợp sợi cDNA thứ nhất từ khuôn mẫu mRNA từ enzym phiên mã ngược (reverse transcriptase). • Gây biến tính bằng cách đun sôi thể lai mRNA – cDNA để phá hủy mRNA bằng RWASE H của E.Coli. Tổng hợp sợi cDNA thứ hai từ khuôn mẫu sợi cDNA thứ nhất nhờ enzym DNA polymerase với primer là vòng cặp tóc của nó để thu được phân tử cDNA sợi đôi. • Cắt vòng cặp tóc bằng enzym nuclease S1 và enzym Klenow sửa chữa hai đầu của sợi đôi cDNA để tạo ra đầu bằng. • Gắn các đoạn nối (linker) vào hai đầu của cDNA của sợi đôi trước khi tạo dòng và trong vector thích hợp để xây dựng cDNA. HOẠT ĐỘNG Từ một tế bào của một loài chứa hệ gen mang nhiều đoạn gen quy định nhiều tính trạng rồi được phân cắt thành nhiều đoạn DNA nhỏ hơn mà mỗi đoạn mang mỗi tính trạng tương ứng. ƯU ĐIỂM - Các dòng cDNA chứa trình tự mã hóa liên tục của một gen. Nhiều gen ở eukaryote là gián đoạn, có chứa nhiều đoạn intron. Sau Khi cắt mRNA tiền thân (pre-mRNA) và nối lại,các đoạn intron đã bị loại và mRNA hoàn chỉnh (mature mRNA) có trình tự mã hóa liên tục được tạo thành. Do cDNA được tạo thành từ khuôn mẫu mRNA hoàn chỉnh nên các dòng cDNA có thể tổng hợp protein cần thiết với số lượng lớn như mong muốn. - Nhiều protein được tổng hợp với số lượng lớn do những tế bào chuyên hóa và như vậy trong các tế bào này mRNA của các protein đó sẽ có tỷ lệ cao và thư viện cDNA được tạo ra từ các tế bào này sẽ có nhiều cDNA mã hóa cho các protein tương ứng. Sự dồi dào của cDNA của một vài loài nào đó đã làm giảm nhẹ đáng kể việc xác định đúng dòng mong muốn từ thư viện gen. ỨNG DỤNG Phương pháp tổng hợp gen mRNA ngày càng được phát triển, nó kết hợp các phương pháp khác nhau của sinh học phân tử cho phép ứng dụng trong nhiều lĩnh vực. Ví dụ : Các nhà khoa học thuộc CIAT, Colombia và Nhật Bản vừa hòan thành việc xây dựng thư viện cDNA phục vụ cho việc cải tiến giống khoai mì. Khoai mì là loài cây trồng được biết chống chịu tốt với stress phi sinh học, thí dụ như khô hạn và mặn. Nó là nguồn cung cấp carbohydrate lớn thứ ba cho loài người và là nguồn lương thực chủ lực của nhiều nước ở Châu Phi. Là tiềm năng phục vụ cho các nhà khoa học cải tiến giống khoai mì về năng suất trong điều kiện canh tác bị stress phi sinh học, cung cấp chuỗi trình tự đâỳ đủ của các gen trong genome khoai mì. [...]...• Từ những ứng dụng đầu tiên của phương pháp tạo dòng gen, các phương pháp xây dựng thư viện cDNA được hình thành và phát triển, và hiện nay được xem như là nền tảng cơ sở cho nhiều thí nghiệm hóa sinh và sinh học phân tử • Sàng lọc gen từ thư viện cDNA để phân lập một đoạn DNA trong công nghệ di truyền Ứng dụng trong kỹ thuật tái tổ hợp DNA • Tạo bộ kit phát hiện . Lành THƯ VIỆN cDNA LÀ GÌ ? Thư viện cDNA (complement DNA) là tập hợp các đoạn DNA bổ sung (cDNA) được tổng hợp từ mARN của một bộ phận trong cơ thể sinh vật. XÂY DỰNG THƯ VIỆN cDNA Gồm. THƯ VIỆN cDNA THƯ VIỆN cDNA Giáo viên hướng dẫn: Giáo viên hướng dẫn: Nguyễn Thị Vân Anh Nguyễn Thị Vân. pháp xây dựng thư viện cDNA được hình thành và phát triển, và hiện nay được xem như là nền tảng cơ sở cho nhiều thí nghiệm hóa sinh và sinh học phân tử. • Sàng lọc gen từ thư viện cDNA để phân