38 4.2. Phƣơng pháp bố trí thí nghiệm Thí nghiệm đƣợc bố trí theo kiểu khối hoàn toàn ngẫu nhiên một yếu tố (số lần tiêm). Thí nghiệm đƣợc lặp lại 2 lần. Mỗi thí nghiệm gồm 3 lô: Lô đối chứng (tiêm chất bổ trợ): 2 bầy heo con. Lô 1(tiêm vaccine 1 lần): 3 bầy heo con. Lô 2 (tiêm vaccine 2 lần): 3 bầy heo con. Trong đó, các bầy heo đƣợc lựa chọn ngẫu nhiên, từ 14 – 20 ngày tuổi, khỏe mạnh, không bị tiêu chảy, chƣa đƣợc tiêm vaccine phòng tiêu chảy do E. coli kể cả đối với heo mẹ. Với phƣơng pháp bố trí thí nghiệm nhƣ trên thì chúng tôi nhận thấy có những ƣu điểm của phƣơng pháp này: Số heo trong mỗi lô rất lớn (trung bình là 30 con) nên thí nghiệm đƣợc đảm bảo tính đồng đều trong cùng một lô. Heo con và heo mẹ đƣợc chọn không bị tiêu chảy và chƣa đƣợc tiêm vaccine ngừa E. coli nên không ảnh hƣởng đến kết quả tạo hiệu giá sau khi tiêm vaccine. Vì đƣợc lựa chọn nguyên bầy nên sự phát triển khác nhau của mỗi cá thể heo con giúp thí nghiệm có tính ngẫu nhiên cao, tránh đƣợc các yếu tố khách quan và chủ quan tác động đến kết quả thí nghiệm. Tuy nhiên trong lúc tiến hành thí nghiệm, chúng tôi cũng còn nhận thấy những khuyết điểm của thí nghiệm: Vì không có một lƣợng lớn heo cùng tuổi mà tuổi heo từ 14 – 20 ngày tuổi nên tuổi heo giữa các lô và trong cùng một lô khác nhau. Sự không đồng đều này chắc hẳn sẽ tác động một phần làm sai lệch kết quả thí nghiệm. 39 Heo thí nghiệm mặc dù đƣợc nuôi nhốt ở các ô riêng, tuy nhiên các ô này vẫn trong cùng một nhà với heo không đƣợc thí nghiệm. Vì vậy kết quả thí nghiệm sẽ bị tác động sai lệch. Chƣa loại trừ đƣợc các yếu tố khách quan tác động đến đáp ứng miễn dịch và gây tiêu chảy ở heo thí nghiệm. 4.3. Hiệu giá kháng thể Việc xác định hiệu giá kháng thể nhƣ đã đƣợc trình bày ở chƣơng 3: tại độ pha loãng của huyết thanh còn phản ứng ngƣng kết tạo mạng lƣới ở đáy ống nghiệm thì đó là hiệu giá kháng thể của mẫu huyết thanh. Chỉ số pha loãng của huyết thanh là một phân số, ta đảo ngƣợc phân số này đƣợc một số thập phân là chỉ số hiệu giá kháng thể. 4.3.1. Thí nghiệm 1 Thí nghiệm 1 Lô đối chứng Lô 1 Lô 2 P Lần rút máu thứ nhất 40 80 80 80 80 80 40 40 160 0,906 Trung bình: 66,7 Trung bình: 80 Trung bình: 80 Lần rút máu thứ hai 320 80 40 1280 640 1280 1280 1280 640 0,017 Trung bình: 146,7 Trung bình: 1066,7 Trung bình: 1066,7 Lần rút máu thứ ba 1280 320 1280 1280 1280 1280 640 1280 640 0,422 Trung bình: 960 Trung bình: 1280 Trung bình: 853,3 Bảng 4.1. Hiệu giá kháng thể của 3 lô qua 3 lần rút máu (thí nghiệm 1) 40 4.3.1.1. Lần rút máu thứ nhất Dựa vào biểu đồ 4.1 và bảng kết quả thống kê 4.1, chúng tôi nhận thấy hiệu giá kháng thể của 3 lô ở lần rút máu thứ nhất (lúc bắt đầu thí nghiệm) không có sự khác biệt có ý nghĩa về phƣơng diện thống kê học. Điều này chứng tỏ heo thí nghiệm có sự đồng đều về đáp ứng miễn dịch ở cả 3 lô trƣớc khi tiến hành thí nghiệm. 4.3.1.2. Lần rút máu thứ hai Biểu đồ 4.2. Hiệu giá kháng thể trung bình của 3 lô ở lần rút máu thứ hai (thí nghiệm 1) Biểu đồ 4.1. Hiệu giá kháng thể trung bình của 3 lô ở lần rút máu thứ nhất (thí nghiệm 1) 41 Dựa vào biểu đồ 4.2 và bảng kết quả thống kê 4.1, chúng tôi nhận thấy hiệu giá kháng thể của lô 1 và 2 bằng nhau và cao hơn lô đối chứng. Bằng xử lý thống kê thì chúng tôi thấy sự khác biệt này rất có ý nghĩa. Nhƣ vậy auto-vaccine đã gây đáp ứng miễn dịch rất rõ ràng sau khi tiêm auto-vaccine lần 1. 4.3.1.3. Lần rút máu thứ 3 Dựa vào biểu đồ 4.3 và bảng kết quả thống kê 4.1, chúng tôi nhận thấy hiệu giá kháng thể lô 1 là cao nhất và hiệu giá kháng thể của lô 2 là thấp nhất. Nhƣng về phƣơng diện thống kê học thì sự khác biệt này không có ý nghĩa nên hiệu giá kháng thể của lô 1 cao hơn không đáng kể đối với lô 2 và lô đối chứng. Tuy lô 2 đƣợc tiêm vaccine 2 lần nhƣng đáp ứng miễn lại thấp hơn lô 1 (tiêm 1 lần), nguyên nhân có thể là do auto-vaccine không làm tăng đáp ứng miễn dịch khi tiêm lần 2, hoặc do tình trạng sức khỏe của heo không tốt để sinh miễn dịch đáp ứng với auto-vaccine. Và cũng trong lần rút máu này, hiệu giá kháng thể của lô đối chứng (không tiêm auto-vaccine) lại cao hơn cả lô 2 và gần bằng với lô 1. Nguyên nhân dẫn đến điều này có thể heo ở lô đối chứng đã nhiễm type E. coli trùng với type trong auto- Biểu đồ 4.3. Hiệu giá kháng thể trung bình của 3 lô ở lần rút máu thứ 3 (thí nghiệm 1) 42 vaccine. Khả năng này rất cao vì điều kiện nuôi thí nghiệm hoàn toàn không loại trừ sự nhiễm E. coli cho heo con. Tổng kết thí nghiệm 1: Ở lô đối chứng (tiêm chất bổ trợ): hiệu giá kháng thể của lần rút máu thứ nhất và hai là gần bằng nhau, nhƣng ở lần rút máu thứ ba thì hiệu giá kháng thể lại tăng rất đáng kể và gần bằng với lô 1 và 2. Qua đó chứng tỏ heo ở lô đối chứng đã bị nhiễm type E. coli giống với type trong auto-vaccine thực nghiệm. Điều này dẫn đến sự khác nhau không có ý nghĩa của hiệu giá kháng thể ở 3 lô trong lần rút máu thứ ba. Qua lần rút máu thứ 2, auto-vaccine có tạo đáp ứng miễn dịch rõ ràng giữa lô đối chứng (không tiêm auto-vaccine) với lô 1 và 2. Auto-vaccine có tạo đáp ứng miễn dịch và kéo dài, điều này thể hiện ở lô 1 (tiêm auto-vaccine 1 lần). Chƣa thấy đƣợc auto-vaccine thực nghiệm có làm tăng đáp ứng miễn dịch sau 2 lần tiêm hay không, điều này thể hiện ở lô 2 (tiêm auto-vaccine 2 lần). Biểu đồ 4.4. Hiệu giá kháng thể trung bình của 3 lô qua 3 lần rút máu (thí nghiệm 1) 43 4.3.2. Thí nghiệm 2 Thí nghiệm 2 Lô đối chứng Lô 1 Lô 2 Chỉ số P Lần rút máu thứ nhất 40 80 80 320 40 1280 80 640 320 0,409 Trung bình: 66,7 Trung bình: 546,7 Trung bình: 346,7 Lần rút máu thứ hai 1280 320 320 5120 2560 2560 5120 2560 2560 0,054 Trung bình: 640 Trung bình: 3413,3 Trung bình: 3413,3 Lần rút máu thứ ba 80 1280 640 1280 2560 640 5120 5120 2560 0,015 Trung bình: 666,7 Trung bình: 1493,3 Trung bình: 4266,7 4.3.2.1. Lần rút máu thứ nhất Dựa vào biểu đồ 4.5 và bảng kết quả thống kê 4.2 , chúng tôi nhận thấy hiệu giá kháng thể lúc bắt đầu thí nghiệm của lô 1 là cao nhất và của lô đối chứng là thấp nhất. Tuy nhiên trên phƣơng diện thống kê học thì sự khác nhau này không có ý nghĩa nên có thể coi hiệu giá của 3 lô là nhƣ nhau. Điều đó chứng tỏ heo bắt đầu thí nghiệm có sự tƣơng đồng về đáp ứng miễn dịch ở cả 3 lô trƣớc khi tiến hành thí nghiệm. Bảng 4.2. Hiệu giá kháng thể của 3 lô qua 3 lần rút máu (thí nghiệm 2) Biểu đồ 4.5. Hiệu giá kháng thể trung bình của 3 lô ở lần rút máu thứ nhất (thí nghiệm 2) 44 4.3.2.2. Lần rút máu thứ hai Dựa vào biểu đồ 4.6 và bảng kết quả thống kê 4.2 , chúng tôi nhận thấy hiệu giá kháng thể của lô 1 và 2 cao hơn rất nhiều so với lô đối chứng. Tuy nhiên sự khác biệt này chƣa có ý nghĩa về phƣơng diện thống kê học (P = 0,054), điều này chứng tỏ auto-vaccine thử nghiệm gây đáp ứng miễn dịch chƣa hoàn toàn rõ ràng so với lô đối chứng. Và sau lần tiêm thứ nhất thì đáp ứng miễn dịch của lô 1 và 2 là nhƣ nhau. 4.3.2.3. Lần rút máu thứ ba Biểu đồ 4.7. Hiệu giá kháng thể trung bình của 3 lô ở lần rút máu thứ ba (thí nghiệm 2) Biểu đồ 4.6. Hiệu giá kháng thể trung bình của 3 lô ở lần rút máu thứ hai (thí nghiệm 2) 45 Dựa vào biểu đồ 4.7 và bảng kết quả thống kê 4.2 , chúng tôi nhận thấy hiệu giá kháng thể của lô 2 là cao nhất, của lô đối chứng là thấp nhất. Và sự khác biệt này rất có ý nghĩa về phƣơng diện thống kê học. Nhƣ vậy, sau khi tiêm 2 lần thì auto-vaccine đã tạo đáp ứng miễn dịch cao hơn tiêm 1 lần. Tổng kết thí nghiệm 2: Hiệu giá kháng thể của lô đối chứng ở lần rút máu thứ 2 và 3 hầu nhƣ không thay đổi. Điều đó chứng tỏ heo ở lô đối chứng của thí nghiệm 2 không bị nhiễm type E. coli trong quá trình thí nghiệm nên chúng ta có thể đánh giá đƣợc hiệu quả đáp ứng miễn dịch của auto-vaccine. Auto-vaccine có tạo đáp ứng miễn dịch kéo dài, điều này thể hiện ở lô 1 (tiêm vaccine 1 lần). Auto-vaccine tạo đáp ứng miễn dịch cao hơn sau hai lần tiêm, điều này thể hiện ở lô 2 (tiêm vaccine 2 lần). Biểu đồ 4.8. Hiệu giá kháng thể trung bình của 3 lô qua 3 lần rút máu (thí nghiệm 2) 46 4.3.3. Kết quả tổng kết hiệu giá kháng thể Lô ĐC Lô 1 Lô 2 Lần rút máu thứ nhất 66,7 313,4 213,4 Lần rút máu thứ hai 393,4 2240 2240 Lần rút máu thứ ba 813,4 1386 2560 Ở lần rút máu thứ nhất, chúng ta nhận thấy hiệu giá kháng thể của lô 1 và 2 cao hơn hiệu giá kháng thể của lô đối chứng, điều đó chứng tỏ trƣớc khi thí nghiệm heo con ở 2 lô này có kháng thể type E. coli nhƣ trong auto-vaccine. Nguyên nhân dẫn đến điều này có thể là do heo con bị nhiễm E. coli hoặc heo con nhận đƣợc kháng thể từ sữa mẹ (có thể heo mẹ bị nhiễm sẳn E. coli). Cũng nhƣ vậy ở lô đối chứng, hiệu giá kháng thể tăng dần qua lần rút máu thứ hai và thứ ba, điều đó chắc chắn là heo con ở lô đối chứng bị nhiễm type E. coli giống trong auto-vaccine. Từ hai thảo luận trên, chúng ta nhận thấy hiệu giá kháng thể của lô 1 và 2 chắc chắn đã bị tác động làm tăng cao hơn. Nhƣng vì cả 3 lô thí nghiệm đều chịu tác động nhƣ nhau bởi các yếu tố trên mà hiệu giá kháng thể của lô 1 và 2 vẫn cao hơn rất rõ ràng so với lô đối chứng (P < 0,05) nên có thể kết luận rằng auto-vaccine đã gây đáp ứng miễn dịch tốt cho heo con. Nhƣ vậy, auto-vaccine thực nghiệm đã gây đáp ứng miễn dịch tốt, kéo dài và cao hơn nếu đƣợc tiêm 2 lần. Bảng 4.3. Tổng kết hiệu giá kháng thể của 2 thí nghiệm . chứng, điều đó chứng tỏ trƣớc khi thí nghiệm heo con ở 2 lô này có kháng thể type E. coli nhƣ trong auto-vaccine. Nguyên nhân dẫn đến điều này có thể là do heo con bị nhiễm E. coli hoặc heo con. bầy heo con. Lô 1(tiêm vaccine 1 lần ): 3 bầy heo con. Lô 2 (tiêm vaccine 2 lần ): 3 bầy heo con. Trong đó, các bầy heo đƣợc lựa chọn ngẫu nhiên, từ 14 – 20 ngày tuổi, kh e mạnh, không bị tiêu. Số heo trong mỗi lô rất lớn (trung bình là 30 con) nên thí nghiệm đƣợc đảm bảo tính đồng đều trong cùng một lô. Heo con và heo mẹ đƣợc chọn không bị tiêu chảy và chƣa đƣợc tiêm vaccine ngừa