tóm tắt luận án tiến sĩ nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loại khố sâm mềm (brucea mollis wall. ex kurz) và cơm rượu trái hẹp (glycosmis stenocarpa (drake) guilaum) ở việt

27 817 0
tóm tắt luận án tiến sĩ nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loại khố sâm mềm (brucea mollis wall. ex kurz) và cơm rượu trái hẹp (glycosmis stenocarpa (drake) guilaum) ở việt

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN HĨA HỌC MAI HÙNG THANH TÙNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA HAI LOÀI KHỔ SÂM MỀM (BRUCEA MOLLIS WALL EX KURZ) VÀ CƠM RƯỢU TRÁI HẸP (GLYCOSMIS STENOCARPA (DRAKE) GUILLAUM) Ở VIỆT NAM Chuyên ngành: Hóa Hữu Mã số: 62.44.27.01 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC Hà Nội - 2012 Cơng trình hồn thành tại: Viện Hóa học – Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Mạnh Cường GS.TS Young Ho Kim Phản biện 1: GS.TSKH Phan Tống Sơn Phản biện 2: GS.TSKH Trần Văn Sung Phản biện 3: PGS.TS Hoàng Thanh Hương Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp Viện họp tại: Hội trường (tầng 3), nhà A18 – Viện Hóa học, Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam, 18 – Hoàng Quốc Việt, Cầu Giấy, Hà Nội Vào hồi: ngày tháng năm 2012 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Quốc gia Hà Nội - Thư viện Viện Hóa học, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam DANH MỤC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC ĐÃ CƠNG BỐ TRONG KHN KHỔ LUẬN ÁN Nguyễn Mạnh Cường, Trần Thu Hường, Trần Quốc Toàn, Huỳnh Minh Hùng, Mai Hùng Thanh Tùng, Nguyễn Quyết Chiến, (2010), Đóng góp nghiên cứu thành phần hóa học Cơm rượu trái hẹp Glycosmis stenocarpa, Tạp chí Hóa học, 48 (4B), 516-520 Mai Hùng Thanh Tùng, Trần Thu Hường, Trần Thế Bách, Nguyễn Quốc Bình, Bá Thị Châm, Nguyễn Mạnh Cường, (2011), Tác dụng gây độc tế bào ung thư Khổ sâm mềm (Brucea mollis), Tạp chí Dược liệu 16 (6), 356-360 Mai Hùng Thanh Tùng, Nguyễn Thành Dương, Trần Thu Hường, Nguyễn Mạnh Cường, (2011), Các amít flavonoit từ Khổ sâm mềm - Brucea mollis, Tạp chí Hóa học 49 (6A), 389-392 Mai Hùng Thanh Tùng, Hồ Việt Đức, Bùi Hữu Tài, Nguyễn Mạnh Cường, (2011), Các tecpenoit phenolic glucoside từ Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall ex Kurz), Tạp chí Hóa học 49 (6), 765-768 Mai Hùng Thanh Tùng, Hồ Việt Đức,Young Ho Kim, Nguyễn Mạnh Cường, Đóng góp nghiên cứu thành phần hóa học Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall ex Kurz), Tạp chí Khoa học Công nghệ (2012) (đã nhận đăng) Mai Hùng Thanh Tùng, Hồ Việt Đức,Trần Thị Ngọc Diệp, Young Ho Kim, Nguyễn Mạnh Cường, Một số hợp chất béo sterol phân lập từ Khổ sâm mềm (Brucea mollis), Tạp chí Khoa học Cơng nghệ (2012) (đã nhận đăng) Mai Hùng Thanh Tùng, Hồ Việt Đức,Trần Thu Hường, Nguyễn Mạnh Cường, Các isoprenoit coumarin từ Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall ex Kurz), Tạp chí Khoa học Công nghệ (2012) (đã nhận đăng) I GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Đặt vấn đề Cho đến ngày dân số giới đạt bảy tỷ người, số lớn nhu cầu khám chữa bệnh tăng theo Trong tình trạng sử dụng thuốc bừa bãi không theo hướng dẫn bác sĩ dẫn đến kháng thuốc, đặc biệt nước phát triển vơ tình tạo áp lực lớn ngành y tế giới phải cố gắng tìm loại thuốc Thiên nhiên kho thuốc khổng lồ, mà giới chưa khám phá hết Việt Nam có khí hậu nhiệt đới gió mùa, nóng ẩm, có hệ động thực vật đa dạng phong phú Đây tiềm to lớn mà cần phải tận dụng Hiện nay, tình trạng đốt phá rừng ngày gia tăng khơng thể kiểm sốt, đồng thời khí hậu thay đổi theo chiều hướng khắc nghiệt hơn, làm cho số lượng lớn loài suy thối dần Nếu khơng nhanh chóng nghiên cứu bảo vệ nguồn gien mát to lớn loài người Trong y học dân gian Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall ex Kurz) sử dụng để trị sốt rét, đau bụng, u nhọt, amíp, ghẻ lở Ngồi ra, chương trình hợp tác Việt Nam Hàn Quốc nhằm tìm kiếm lồi thực vật có hoạt tính kháng lại dịng ung thư phổi người A549, nhóm tác giả Nguyễn Mạnh Cường phát B mollis có hoạt tính mạnh, dịch chiết MeOH từ ức chế tới 96% tế bào ung thư Bên cạnh đó, phân đoạn tách từ Khổ sâm mềm thử dòng ung thư khác LU-1 (ung thư phổi người), Hep-G2 (ung thư gan người), MCF7 (ung thư vú người) Kết cho thấy cặn chiết MeOH cho hoạt tính gây độc tế bào mạnh dịng tế bào ung thư gan người (Hep-G2) với giá trị IC50 (μg/ml) 14,49 Đặc biệt có phân đoạn n-hexan cho hoạt tính gây độc tế bào mạnh ba dịng tế bào ung thư LU-1, Hep-G2, MCF-7 với giá trị IC50 (μg/ml) 3,5; 1,03 5,8 Cây Cơm rượu trái hẹp (Glycosmis stenocarpa (Drake) Guillaum) thu hái Việt Nam nghiên cứu Từ Cơm rượu trái hẹp, nhóm tác giả Nguyễn Mạnh Cường phân lập số ancaloit murrayanin, bisisomahanin murrayafoline A Trong đó, murrayafoline A có hoạt tính ức chế mạnh phát triển tế bào ung thư đại tràng thơng qua đường Wnt/bcatenin có tác dụng đến tim mạch Nhằm mục đích sâu nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng dược lý hai này, lựa chọn đề tài: "Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học hai lồi Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall ex Kurz) Cơm rượu trái hẹp (Glycosmis stenocarpa (Drake) Guillaum) Việt Nam'' 2 Mục tiêu luận án Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học hai lồi theo định hướng tìm kiếm hợp chất có hoạt tính kháng ung thư Nội dung nghiên cứu luận án o Thu hái mẫu thực vật xử lý mẫu; o Điều chế cặn chiết từ mẫu thực vật thu hái được; o Phân lập hợp chất từ cặn chiết; o Xác định cấu trúc hợp chất phân lập được; o Thử hoạt tính sinh học hợp chất phân lập Ý nghĩa khoa học luận án Luận án đóng góp hiểu biết thành phần hóa học hoạt tính sinh học hai lồi Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall ex Kurz) loài Cơm rượu trái hẹp (Glycosmis stenocarpa (Drake) Guillaum) Việt Nam Các kết luận án tạo tiền đề cho nghiên cứu chi Brucea chi Glycosmis nhằm khai thác ứng dụng có hiệu hoạt tính quý báu chúng lĩnh vực y dược Những đóng góp luận án - Đây nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học Brucea mollis (Wall ex Kurz) Việt Nam giới - Từ lá, thân rễ Brucea mollis phân lập 23 hợp chất, có 16 hợp chất lần phân lập từ chi Brucea gồm: octatriacontan-1-ol (BM.01), tritriacontan-1-ol (BM.02), bombiprenone (BM.04), α-tocopherol (BM.05), vomifoliol 9-O-β-D-glucopyranoside (BM.09), soulameanone (BM.10), cytosine (BM.11), thymine (BM.12), axít tricosanoic (BM.14), cleomiscosin A (BM.16), 9-methoxycanthin-6-one (BM.17), 1β,6α-dihydroxy-4(14)eudesmene (BM.18), niloticin (BM.19), dimethyl crenatin (BM.20), inosine (BM.21), leonuriside A (BM.23) - Từ rễ Cơm rượu trái hẹp (Glycosmis stenocarpa (Drake) Guillaum) phân lập hợp chất gồm: N-methylpyrrolidine-2-cacboxamit (GP.24), đường sucrose (GP.25), (±) p-synephrine (GP.26), 4-{1-[α-L-arabinofuranosyl-(1''→4')b-D-glucopyranosyl]-2-methylamino)ethyl}phenol (GP.27) Trong có chất GP.27 - Đã đánh giá độc tính tế bào ung thư dịch chiết MeOH tổng cặn chiết n-hexan, điclometan, dịch nước từ Khổ sâm mềm chủng tế bào ung thư phổi người (LU-1), ung thư gan người (Hep-G2) ung thư vú (MCF-7) Dịch chiết MeOH cho tác dụng gây độc tế bào mạnh dòng tế bào ung thư gan người Hep-G2 (IC50 =14,49 µg/ml) Cặn chiết n-hexan ức chế mạnh ba dòng tế bào ung thư Lu, Hep-G2 MCF-7 với giá trị IC50 (µg/ml) 3,5; 1,03 5,8 - Đã nghiên cứu đánh giá hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập bốn dòng ung thư KB (ung thư biểu mô), LU-1 (ung thư phổi người), LNCaP (ung thư tiền liệt tuyến) HL-60 (ung thư máu cấp tính) Phát hợp chất isobrucein B (BM.15), 9-methoxycanthin-6-one (BM.17) niloticin (BM.19) cho hoạt tính mạnh với giá trị IC50 (µg/ml) khoảng 0,23 3,73 (μg/ml) Trong hợp chất isobrucein B (BM.15) có hoạt tính mạnh cao chất đối chứng dương ellipticine Bố cục luận án Luận án gồm 167 trang, có 126 hình, 31 bảng Bố cục luận án: Mở đầu (2 trang); Chương 1: Tổng quan tài liệu (27 trang); Chương 2: Thực nghiệm (20 trang); Chương 3: Kết thảo luận (86 trang); Kết luận kiến nghị (2 trang); Danh mục cơng trình khoa học công bố khuôn khổ luận án (1 trang); Tài liệu tham khảo (14 trang) với 141 tài liệu cập nhật đến năm 2011 Ngồi cịn có phần Phụ lục với hình phổ II NỘI DUNG CỦA LUẬN ÁN MỞ ĐẦU Phần Mở đầu đề cập đến ý nghĩa khoa học, tính thực tiễn, mục tiêu nhiệm vụ nghiên cứu luận án Chương – TỔNG QUAN TÀI LIỆU Phần Tổng quan tài liệu tập hợp nghiên cứu nước quốc tế vấn đề: 1.1 Đặc điểm thực vật tình hình nghiên cứu chi Sầu đâu (Brucea), họ Simaroubaceae (Thanh Thất) 1.2 Sơ lược lớp chất quassinoit, lớp chất chi Brucea 1.3 Đặc điểm thực vật tình hình nghiên cứu chi Cơm rượu (Glycosmis), họ Cam quýt (Rutaceae) Chương – THỰC NGHIỆM Phần Thực nghiệm trình bày nguyên liệu, phương pháp nghiên cứu, trình chiết tách, đặc điểm hóa lý số liệu phổ chất phân lập từ hai loài Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall ex Kurz) loài Cơm rượu trái hẹp (Glycosmis stenocarpa (Drake) Guillaum) Nguyên liệu: Cây Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall ex Kurz) thu hái vào tháng 3/2009, Mai Châu, tỉnh Hồ Bình Tên khoa học TS Trần Thế Bách (Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật) xác định Mẫu tiêu lưu trữ phòng tiêu thực vật HN thuộc Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật, kí hiệu mẫu VK 2211 (HN) Cây cơm rượu trái hẹp (Glycosmis stenocarpa - (Drake) Guillaum) thu hái xã Hồng Hoa Thám, huyện Chí Linh, tỉnh Hải Dương, Việt Nam vào tháng 2/2009 , tên khoa học xác định nhà thực vật học Ngơ Văn Trại -Viện Dược liệu Quy trình chiết: Mẫu thực vật sau thu hái rửa sạch, loại bỏ phần hư hỏng, phơi khô sấy nhiệt độ 50-60oC khơ Sau mẫu xay nhỏ ngâm chiết kiệt nhiều lần MeOH nhiệt độ phòng Sau cất loại dung môi, cặn cô chiết phân đoạn với dung mơi có độ phân cực tăng dần như: n-hexan, cloroform điclometan, etyl axetat, BuOH MeOH Phân lập chất: Tinh chế cặn chiết thu phương pháp sắc ký cột với chất hấp phụ khác như: silica gel, RP-18, sephadex LH-20 hệ dung mơi thích hợp Xác định cấu trúc hóa học: Cấu trúc hợp chất xác định kết hợp phương pháp phổ đại phổ hồng ngoại (FT-IR), phổ khối (ESI-, HR-MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều hai chiều (COSY, HSQC, HMBC…) Phương pháp thử hoạt tính sinh học: Hoạt tính gây độc tế bào: Các dịng tế bào ung thư người gồm có: ung thư biểu mô (KB), ung thư gan (Hep-G2), ung thư phổi (LU-1), ung thư vú (MCF7), LNCaP (ung thư tiền liệt tuyến) HL-60 (ung thư máu cấp tính) cung cấp GS.TS J M Pezzuto, Trường Đại học Hawaii GS Jeanette Maier, trường Đại học Milan, Italia Chương – KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Cấu trúc hợp chất phân lập Phần trình bày chi tiết kết phân tích phổ cách xác định cấu trúc 27 hợp chất phân lập từ hai Khổ sâm mềm Cơm rượu trái hẹp Dưới bảng tổng hợp cấu trúc hợp chất phân lập khuôn khổ luận án BM.02 BM.01 Tritriacontan-1-ol Octatriacontan-1-ol (lần phân lập từ chi Bruea) (lần phân lập từ chi Brucea) BM.03 Stigmast-5,22-dien-3-b-ol BM.05 α-tocopherol (lần phân lập từ chi Brucea) BM.07 Luteolin-7-O-β-D-glucopyranoside BM.04 Bombiprenone (lần phân lập từ chi Brucea) BM.06 Apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside BM.08 Blumenol A BM.09 Vomifoliol 9-O-β-Dglucopyranoside (lần phân lập từ chi Brucea) BM.11 Cytosine (lần phân lập từ chi Brucea) BM.13 Daucosterol BM.10 Soulameanone (lần phân lập từ chi Brucea) BM.12 Thymine (lần phân lập từ chi Brucea) BM.14 Axít tricosanoic (lần phân lập từ chi Brucea) BM.15 Isobrucein B H H H 12 H3CO 3N 14 10 17 11 H 13 BM.16 Cleomiscosin A (lần phân lập từ chi Brucea) 16 15 N H H BM.18 1β,6α-dihydroxy-4(14)-eudesmene (lần phân lập từ chi Brucea) H O BM.17 9-methoxycanthin-6-one (lần phân lập từ chi Brucea) O 21 18 12 19 11 10 O 20 23 24 OH 17 13 22 26 25 27 16 14 15 30 29 28 BM.19 Niloticin (lần phân lập từ chi Brucea) BM.20 Dimethyl crenatin (lần phân lập từ chi Brucea) 10 Cấu trúc lập thể BM.15 xác định dựa vào phổ NOESY Các tín hiệu cộng hưởng phổ NOESY BM.15 cho thấy có tương tác proton H-1/H-5, H3-18/H-6α, H-9/H-1;H-5, H19/H-7;H-14, điều chứng tỏ H-5 có cấu hình trans so với H3-18 H-9 có cấu hình trans so với H2-19 Bên cạnh đó, phổ NOESY cịn có tương tác H-19/H-7;H-14, H-7/H12;H-14, tương tác H-7, H-14 có cấu hình cis so với H2-19 cầu nối metylenoxy C-8 C-13 có cấu hình b Phổ khối ESI-MS BM.15 có peak ion giả phân tử m/z 463,0 [M-H2O+H]+ Từ phân tích trên, so sánh với tài liệu tham khảo, ta khẳng định hợp chất BM.15 isobrucein B, CTPT C23H28O11 Hình 3.40 Các tương tác phổ HMBC, COSY NOESY hợp chất BM.15 Từ Khổ sâm mềm phân lập hai quassinoit soulameanone BM.10 isobrucein B BM.15 Hai hợp chất thử hoạt tính kháng bốn dịng ung thư KB (ung thư biểu mô), LU-1 (ung thư phổi người), LNCaP (ung thư tiền liệt tuyến) HL-60 (ung thư máu cấp tính) Kết thể hợp chất BM.15 có hoạt tính mạnh, chí mạnh chất đối chứng dương ellipticine, hợp chất BM.10 lại khơng có hoạt tính Khi so sánh mặt cấu trúc hai hợp chất ta thấy hợp chất BM.15 có đặc điểm có hệ vịng picrasane với nhóm keton vị trí C16; hệ liên hợp α,b-keton khơng no vịng A; cầu epoxymethanon nối C8 C13 có mạch nhánh este C13 C15 Như vậy, đặc điểm cấu trúc cần thiết cho tác dụng kháng ung thư quassinoit 11 Bảng 3.9 Số liệu phổ NMR hợp chất BM.15 Vị trí δH (ppm) (CDCl3, 500 MHz) δC (ppm) (CDCl3, 125 MHz) HMBC (H®C) 4,17 (s) 81,1 (d) C18; C9 H5; H9; H11 C1; C5; C17 H17 6,11 (m) 2,92 (d, J=12,5Hz) 1,86 (dt, J=13,0; 2,5 Hz) 2,41(dt,J = 14,5; 3,0 Hz) 4,74 (d, J = 3,0 Hz) 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19α 19b 1' 2' 1'' 2'' NOESY (H®H) 196,9 (s) 6α 6b COSY (H®H) 124,3 (d) 162,9 (s) 43,5 (d) 28,5 (t) 83,0 (d) C3; C18 C4; C8; C10 C5; C19 H6α H1; H9 H7, H5 H17, H18 H6 H12;H14; H19 45,6 (s) 2,33 (d, J = 3,5 Hz) 4,75 (d, J = 3,0 Hz) 4,28 (d, J = 1,0 Hz) 3,04 (d, J = 12,5 Hz) 6,31 (br s) 1,95 (s, 3H) 1,18 (s, 3H) 3,75 (dd,J = 8,0; 1,5 Hz) 4,81 (d, J = 7,5 Hz) 3,83 (s) 2,11 (s) 42,8 (d) 47,5 (s) 72,4 (d) 75,8 (d) 80,5 (s) 51,5 (d) 67,0 (d) 166,8 (s) 22,5 (q) 11,5 (q) 73,3 (t) 172,6 (s) 53,0 (q) 169,0 (s) 20,3 (q) C18; C19 H1; H18; H19 C8 C14 H1; H19 H7 H7; H19 C1; C5 C9; C13; C14 H3; H5 H6; H9 H7; H9; H14 C1' H2'' H2' 12 Bảng 3.10 Số liệu phổ NMR hợp chất BM.15 chất tham khảo Vị trí Hợp chất BM.15 (CDCl3) δH (ppm) (500 MHz) Isobrucein B (CDCl3) δC δH (ppm) (500 MHz) δC (ppm) (125 MHz) 4,17 (s) 6,11 (s) 81,1 (d) 4,31 (s) 124,3 (d) 2,92 (d, J = 12,5 Hz) 1,86 (dt, J=13,0; 2,5 Hz) 2,41(dt, J = 14,5; 3,0 Hz) 4,74 (d, J = 3,0 Hz) 43,5 (d) 28,5 (t) 83,0 (d) 6,14 (s) 10 42,8 (d) 125,2 162,9 3,04 (br d, J = 2,0 Hz) 1,77 (ddd, J = 12,0; 2,0; 2,0 Hz) 2,36 (dd, J = 12,0; 2,0 Hz) 5,04 (d, J = Hz) 45,6 (s) 2,33 (d, J = 3,5 Hz) 82,9 198,4 162,9 (s) (125 MHz) 196,9 (s) (ppm) 43,7 28,4 83,6 48,4 2,88 (d, J = Hz) 47,5 (s) 42,8 46,5 11 4,75 (d, J = 3,0 Hz) 72,4 (d) 5,51 (br d, J = Hz) 75,4 12 4,28 (d, J = 1,0 Hz) 75,8 (d) 5,11 (d, J = Hz) 75,9 13 80,5 (s) 82,7 14 3,04 (d, J = 12,5 Hz) 51,5 (d) 3,93 (br d) 50,5 15 6,31 (br s) 67,0 (d) 6,72 (br d) 69 16 166,8 (s) 168,1 17 1,95 (s, 3H) 22,5 (q) 1,74 (s) 22,2 18 1,18 (s, 3H) 11,5 (q) 1,44 (s) 11,4 19 3,75 (dd, J = 8,0; 1,5 Hz) 4,81 (d, J = 7,5 Hz) 1' 2' 3,90 (d, J = Hz) 5,13 (d, J = Hz) 172,6 (s) 3,83 (s) 1'' 2'' 73,3 (t) 53,0 (q) 171,4 3,77 (s) 169,0 (s) 2,11 (s) 20,3 (q) 73,5 52,4 179 2,11 (s) 20,7 13 Hình 3.41 Phổ 1H-NMR hợp chất BM.15 Hình 3.42 Phổ DEPT hợp chất BM.15 Hình 3.43 Phổ HSQC hợp chất BM.15 14 Hình 3.44 Phổ HMBC hợp chất BM.15 Hình 3.45 Phổ COSY hợp chất BM.15 Hình 3.46 Phổ NOESY hợp chất BM.15 15 Hình 3.47 Phổ ESI-MS hợp chất BM.15 Hợp chất GP.27: 4-{1-[α-L-arabinofuranosyl-(1''→4')-b-D-glucopyranosyl]-2(methylamino)ethyl}phenol (chất mới) Hợp chất GP.27 thu dạng chất rắn màu vàng nâu, tan tốt metanol Các tín hiệu phổ 1H 13C-NMR GP.27 giống với hợp chất GP.26 (p-synephrine), ngoại trừ tín hiệu hai nhóm đường δ 62,8, 64,8, 72,0, 72,4, 73,0, 73,8, 74,9, 76,3, 78,0, 94,0 98,2 Ta dự đoán dạng dẫn xuất diglycoside p-synephrine Trên phổ 1H-NMR cho thấy có hai proton anome δ 4,50 (1H, d, J = 8,0 Hz, H1') 5,12 (1H, d, J = 3,5 Hz, H-1") tương ứng với cacbon δ 98,2 (C-1') 94,0 (C-1") Từ liệu phổ HMBC COSY xác định hai nhóm đường Dglucopyranosyl L-arabinofuranosyl Proton anome (δ 4,5, J = 8,0 Hz) cho thấy nhóm đường D-glucopyranosyl có cấu hình b ; proton anome (δ 5,12, J = 3,5 Hz) nhóm đường L-arabinofuranosyl chứng tỏ nhóm đường có cấu hình α Trên phổ HMBC xuất tương tác mạnh proton H-2' (δ 3,16) phần đường glucopyranosyl với cacbon C-7 (δ 69,8) phần aglycon proton H-7 (δ 4,89) phần aglycon với cacbon C-2' (δ 76,3) phần đường glucopyranosyl, điều chứng tỏ nhóm đường b-O-D-glucopyranosyl gắn vào vị trí C-7 phần aglycon, ngồi cịn có tương tác proton H-1'' (δ 16 5,12) phần đường arabinofuranosyl với cacbon C-4' (δ 74,9) phần đường glucopyranosyl cho thấy hai nhóm đường gắn với qua cầu C1''-OC4' Bảng 3.24 Số liệu phổ NMR hợp chất GP.27 Vị trí δH (ppm) δC (ppm) HMBC (H→C) COSY (H→H) NOESY (H→H) C1, C4, C6 C1, C2, C5, C6, C7 H3 H2 H2, H7 C1, C3, C6, C7 H6 C1, C2, C4 C3, C4, C5, C8, C2' C7, C9 C8 H5 H8 H2' H1', H3' H2'' H1'', H3'' H2'', H4'' H3'', H5'' H4'' 7,27 (d, J = 8,0 Hz) 158,7 (s) 116,4 (d) 128,3 (d) 132,8 (s) 128,3 (d) 6,82 (d, J = 8,0 Hz) 4,89 (m) 116,4 (d) 69,8 (d) 3,14 (m) 2,75 (s) b-O-D-glc 4,5 (d, J = 8,0 Hz) 3,16 (m) 56,8 (t) 33,8 (q) 78,0 (d) 74,9 (d) 72,4 (d) 64,8 (t) 1'' 2'' 3,37(d, J = 9,5 Hz) 3,7 (t, J = 9,5 Hz) 3,80 (d, J = 9,5 Hz) 3,67 (m), 3,82 (m) α-L-ara 5,12 (d, J = 3,5 Hz) 3,38 (m) C2', C3' C4 (yếu), C7(mạnh), C1', C3' C4' C3', C5' C6' C5' 94,0 (d) 73,8 (d) C4'', C4' C3'' 3'' 3,31 (m) 72,0 (d) C4'', C5'' 4'' 3,71 (d, J = 6,5 Hz) 73,0 (d) C1'', C2'', C3'' 5'' 3,73 (m), 3,87 (m) 62,8 (t) 1' 2' 3' 4' 5' 6' 6,82 (d, J = 8,0 Hz) 7,27 (d, J = 8,0 Hz) 98,2 (d) 76,3 (d) C3'' 13 H6, H7, H8 H8, H2' H7 H8 H2', H4' H3', H5' H4', H6' H5' H3', H2" H3" H-NMR đo CD3OD, 500 MHz; C-NMR đo CD3OD, 125MHz 17 Phổ ESI-MS GP.27 cho peak ion giả phân tử m/z 506,2 [M+2NaH] , mảnh 356,3 [M+2Na-H- aglycon]+; 194,2 [M+2Na-H-150-162]+; 150,1 [Mara]+ (với 150: aglycon; 162: glc) Từ phân tích ta đưa cấu trúc sơ đồ phân mảnh GP.27 + CTPT C20H31NO11 (M = 461) Hình 3.104 Sơ đồ phân mảnh hợp chất GP.27 phổ ESI-MS Kiểm tra tư liệu công bố, chưa thấy glycoside p-synephrine phát Do đó, khẳng định hợp chất chất mới, dạng dẫn xuất diglycoside p-synephrine (GP.26) xác định 4-{1-[α-L-arabinofuranosyl-(1''→4')-b-D-glucopyranosyl]-2(ethylamino)ethyl}phenol HO HO H 5'' 4'' O HO H HOH 2C 1'' H 5' HO O 5'' 2' H 3'' H 6' 4' O 1' O OH HO OH H N HO H HOH 2C 3' 2'' 4'' O 1'' 5' H HO 3'' 3' 2'' H H OH COSY CH3 O 2' H NOESY H N H 1' OH O H 6' 4' O CH3 H HO H Hình 3.105 Các tương tác HMBC, COSY NOESY hợp chất GP.27 18 Hình 3.106 Phổ 1H-NMR hợp chất GP.27 Hình 3.107 Phổ DEPT hợp chất GP.27 Hình 3.108 Phổ HSQC hợp chất GP.27 19 Hình 3.109 Phổ HMBC hợp chất GP.27 Hình 3.110 Phổ COSY hợp chất GP.27 20 Hình 3.111 Phổ NOESY hợp chất GP.27 Hình 3.112 Phổ ESI-MS hợp chất GP.27 3.2 Hoạt tính sinh học hợp chất phân lập Các hợp chất BM.02¸07, BM.10, BM.15, BM.17, BM.19, BM.21, BM.22 thử hoạt tính gây độc tế bào bốn dịng ung thư KB (ung thư biểu 21 mô), LU-1 (ung thư phổi người), LNCaP (ung thư tiền liệt tuyến) HL-60 (ung thư máu cấp tính) Thí nghiệm lặp lại ba lần để đảm bảo tính xác thí nghiệm liệu Sau q trình xử lí số liệu phần mềm Table Curve, giá trị IC50 tính tốn cho thấy độ tin cậy cao (r2 ≥ 0,99 tương ứng sai số < 0,01) Kết thu sau: Bảng 2.1 Kết thử hoạt tính hợp chất tách bốn dòng ung thư Hợp chất BM.02 BM.03 BM.04 BM.05 BM.06 BM.07 BM.10 BM.15 BM.17 BM.19 BM.21 BM.22 Ellipticine Giá trị IC50 (mg/ml) bốn dòng tế bào ung thư khác HL-60 LU-1 KB LNCaP > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 0,23 0,40 0,39 0,34 0,91 1,61 3,73 1,01 0,99 1,22 2,22 1,10 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 > 20 0,66 0,72 0,89 0,69 Kết Bảng 2.1 cho thấy số hợp chất thử hoạt tính kháng ung thư có ba hợp chất isobrucein B (BM.15), 9-methoxycanthin6-one (BM.17) niloticin (BM.19) cho hoạt tính mạnh với bốn dịng ung thư KB (ung thư biểu mô), LU-1 (ung thư phổi người), LNCaP (ung thư tiền liệt tuyến) HL-60 (ung thư máu cấp tính) với giá trị IC50 khoảng 0,23-3,73 (μg/ml) Đặc biệt hợp chất isobrucein B cho hoạt tính mạnh chất đối chứng dương ellipticine Hợp chất isobrucein B cho hoạt tính kháng mạnh bốn dòng ung thư điều dự đốn trước Sở dĩ hợp chất isobruceine B có đặc điểm cấu trúc tương tự hợp chất quassinoit có hoạt tính phân lập trước đây, bao gồm hệ vịng picrasane với nhóm keton vị trí C16; hệ liên hợp α,b-keton khơng no vịng A; cầu epoxymethanon nối C8 C13 có mạch nhánh este C13 C15 22 Nhận định thấy rõ qua số hợp chất như: Bruceanol D tách từ B antidysenterica cho hoạt tính gây độc tế bào mạnh kháng lại năm dòng ung thư gây u bướu người gồm: u ác tính (RPMI-7951, malignant melanoma), ung thư phổi người (A-549, lung carcinoma), u vòm họng (HCT-8, ileocecal adenocarcinoma), ung thư biểu mô (KB, epidermoid carcinoma of the nasopharynx), u nguyên tủy bào (TE-671, medulloblastoma), với giá trị ED50 (μg/ml) 0,09; 0,55; 0,09; 0,08 0,08 Hoặc brusatol gây độc tế bào mạnh dòng ung thư bạch cầu P-388, IC50 (μg/ml) 0,0061 Trong bốn dòng ung thư mà isobrucein B kháng hoạt tính kháng dịng ung thư KB, LU-1 LNCaP Lớp chất ancaloit khung canthin-6-one lớp chất có phổ hoạt tính rộng mạnh, đặc biệt hoạt tính kháng ung thư ung thư bạch cầu A-388, ung thư phổi người A549, ung thư vú MCF-7, ung thư gan Bel-7402 Chúng tìm thấy nhiều số lồi Eurycoma longifolia Picrasma quassioides Hợp chất 9-methoxycanthin-6-one có hoạt tính kháng mạnh bốn dòng ung thư KB, LU-1, LNCaP HL-60 Đây hoạt tính hợp chất Niloticin tritecpenoit với khung tirucall-7-ene mạch nhánh có vịng epoxy Nó cho hoạt tính kháng mạnh bốn dịng ung thư KB, LU-1, LNCaP HL-60 Đây hoạt tính hợp chất Một điều thú vị ba hợp chất thuộc ba lớp chất khác quassinoit, ancaloit, tritecpenoit tách từ Khổ sâm mềm KẾT LUẬN Đã nghiên cứu thành phần hóa học lá, thân rễ Brucea mollis (Wall ex Kurz) Từ phân lập xác định cấu trúc 12 hợp chất bao gồm: octatriacontan-1-ol (BM.01), tritriacontan-1-ol (BM.02), stigmast-5,22-dien-3-bol (BM.03), bombiprenone (BM.04), α-tocopherol (BM.05), apigenin-7-O-β-Dglucopyranoside (BM.06), luteolin-7-O-β-D-glucopyranoside (BM.07), 23 blumenol A (BM.08), vomifoliol 9-O-β-D-glucopyranoside (BM.09), soulameanone (BM.10), cytosine (BM.11), thymine (BM.12) Trong đó, hợp chất octatriacontan-1-ol (BM.01), tritriacontan-1-ol (BM.02), bombiprenone (BM.04), α-tocopherol (BM.05), vomifoliol 9-O-β-D-glucopyranoside (BM.09), soulameanone (BM.10), cytosine (BM.11), thymine (BM.12) lần phân lập từ chi Brucea Từ thân rễ phân lập 11 hợp chất bao gồm: daucosterol (BM.13), axít tricosanoic (BM.14), isobrucein B (BM.15), cleomiscosin A (BM.16), 9-methoxycanthin-6-one (BM.17), 1β,6α-dihydroxy-4(14)eudesmene (BM.18), niloticin (BM.19), dimethyl crenatin (BM.20), inosine (BM.21), bruceolline F (BM.22), leonuriside A (BM.23) Trong đó, hợp chất axít tricosanoic (BM.14), cleomiscosin A (BM.16), 9-methoxycanthin6-one (BM.17), 1β,6α-dihydroxy-4(14)-eudesmene (BM.18), niloticin (BM.19), dimethyl crenatin (BM.20), inosine (BM.21) leonuriside A (BM.23) lần phân lập từ chi Brucea Đã phân lập xác định cấu trúc hợp chất từ rễ Cơm rượu trái hẹp (Glycosmis stenocarpa (Drake) Guillaum) bao gồm: N-methylpyrrolidine-2cacboxamit (GP.24), đường sucrose (GP.25), (±) p-synephrine (GP.26) chất có tên khoa học 4-{1-[α-L-arabinofuranosyl-(1''→4')-b-Dglucopyranosyl]-2-methylamino)ethyl}phenol (GP.27) Đã đánh giá độc tính tế bào dịch chiết MeOH tổng cặn chiết nhexan, điclometan, dịch nước từ Khổ sâm mềm chủng tế bào ung thư phổi người (LU-1), ung thư gan người (Hep-G2) ung thư vú (MCF-7) Dịch chiết MeOH cho tác dụng gây độc tế bào mạnh dòng tế bào ung thư gan người Hep-G2 (IC50 =14,49 µg/ml) Cặn chiết n-hexan ức chế mạnh ba dòng tế bào ung thư LU-1, Hep-G2 MCF-7 với giá trị IC50 (µg/ml) 3,5; 1,03 5,8 Đã nghiên cứu đánh giá hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập bốn dịng ung thư KB (ung thư biểu mơ), LU-1 (ung thư phổi người), LNCaP (ung thư tiền liệt tuyến) HL-60 (ung thư máu cấp tính) Phát hợp chất isobrucein B (BM.15), 9-methoxycanthin-6-one (BM.17) niloticin (BM.19) có tác dụng gây độc tế bào mạnh với giá trị IC50 (µg/ml) khoảng 0,23-3,73 (μg/ml) Trong hợp chất isobrucein B (BM.15) có hoạt tính mạnh cao chất đối chứng dương ellipticine ... nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng dược lý hai này, lựa chọn đề tài: "Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học hai lồi Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall ex Kurz) Cơm rượu trái hẹp (Glycosmis. .. sinh học hợp chất phân lập Ý nghĩa khoa học luận án Luận án đóng góp hiểu biết thành phần hóa học hoạt tính sinh học hai loài Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall ex Kurz) loài Cơm rượu trái hẹp (Glycosmis. .. từ hai loài Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall ex Kurz) loài Cơm rượu trái hẹp (Glycosmis stenocarpa (Drake) Guillaum) 4 Nguyên liệu: Cây Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall ex Kurz) thu hái vào tháng

Ngày đăng: 25/07/2014, 08:50

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan