Thụ tinh nhân tạo ở động vật

KHÁI NIỆM CHUNG Thụ tinh nhân tạo là một chuỗi bao gồm việc lấy tinh dịch ra ngoài con đực, đánh giá chất lượng tinh dịch rồi đưa tinh dịch ấy vào đường sinh dục của con cái để thu được

BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC DÂN LẬP VĂN LANG

KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC

LỚP K13S2

GVHD: ThS Trần Thị Minh

Đề tài:

NỘI DUNG

I. Khái niệm chung về thụ tinh nhân tạo.

II. Các phương pháp thụ tinh nhân tạo 1.Thụ tinh ống nghiệm.

2.Bơm tinh trùng vào tử cung.

III Cấy truyền phôi.

KHÁI NIỆM CHUNG

Thụ tinh nhân tạo là một chuỗi bao gồm việc lấy tinh dịch

ra ngoài con đực, đánh giá chất lượng tinh dịch rồi đưa tinh dịch ấy vào đường sinh dục của con cái để thu được hậu thế.

Phát hiện động dục ở con cái và dẫn tinh cho con cái ấy.

Bảo tồn tinh dịch trong nito lỏng.

Đánh giá chất lượng và pha loãng tinh dịch

Lấy tinh dịch bằng kĩ thuật âm đạo giả.

Đối tượng

Gia cầm

Gia súc

Con người

Thụ tinh ống

KHAI THÁC VÀ THU THậP Tế BÀO

Phương pháp

cắt nghiền buồng trứng

Trứng rụng từ

chu kỳ trước S óng nang 1 Sóng nang 2 Rụng trứng

Động dục Động dục Ngày của chu kỳ

PHÂN LOạI Tế BÀO TRứNG

 Loại A: tế bào trứng hoàn hảo, trứng có lớp tế bào cumulus chắc, dày đặc bao quanh vòng trong suốt tròn rõ, chất nguyên sinh hoàn hảo.

 Loại B: tế bào trứng có các tế bào cumulus bao bọc một phần quanh trứng.

 Loại B’: tế bào trứng gần như trần trụi với một lớp màng hoặc chỉ còn dấu vết của tế bào cumulus.

 Loại C: không có tế bào cumulus bao quanh tế bào trứng mà chỉ có các sợi huyết (fibrin).

 Thông thường chỉ dùng tế bào trứng loại A và B để nuôi tới chín sau đó thụ tinh thành hợp tử để phát triển thành phôi.

NUÔI CHÍN Tế BÀO TRứNG

 Đối với tế bào trứng khai thác từ nang trứng non để có thể thụ tinh được phải nuôi lớn và đạt đến kích thước cuối cùng Trứng bò có kích thước từ 120-125µm.

 Ở quá trình này tế bào trứng phải nhận được những thông tin và vật liệu cần thiết chính trong quần thể các tế bào nang trứng, môi trường nuôi để tiến hành chín trong nhân và trong tế bào chất.

t o d ch nuôi c y ạ ị ấ

Nuôi c y d i l p d u khoáng ấ ướ ớ ầ

nuôi trong invitro

THU NHậN VÀ HOạT HOÁ TINH

TRÙNG

 Kĩ thuật thu tinh trùng:

 Lấy tinh trùng bằng cách đặt miếng xốp hoặc ống cao su vào đường sinh dục của con cái, sau đó cho phối giống rồi lấy ống cao su hoặc miếng xốp ra.

 Lấy tinh trùng bằng cách xoa bóp tuyến sinh dục của con đực

 tinh dịch dễ bị nhiễm bẩn và nồng độ tinh dịch thu được thấp.

 Lấy tinh bằng cách sử dụng âm đạo giả (âm đạo giả phải được sát khuẩn để ngăn ngừa sự lan truyền của mầm bệnh) Người ta

sử dụng những giá nhảy để bò đực nhảy lên, những giá nhảy này làm bằng hình nộm bò cái Bò đực sau khi được dắt đến giá nhảy nhờ phản xạ có điều kiện bò đực nhảy giá và xuất tinh vào

âm đạo giả thu nhận tinh trùng từ âm đạo giả.

 Đánh giá chất lượng tinh dịch:

 Xác định nồng độ của tinh trùng.

 Kiểm tra tỷ lệ sống sót, hình dạng của tinh trùng.

 Đánh giá khả năng hoạt động của tinh trùng: tinh trùng khỏe bơi thẳng.

 pH tinh dịch: 6,2-6,8.

 Tinh đông lạnh thì phải qua quá trình hoạt hóa trước khi cho thụ tinh Ở bò tinh trùng được cho vào trong dung dịch có nồng độ ion cao đó là HIS, có áp suất thẩm thấu khoảng 380mOsm (millosmole)/kg trong 5 phút rồi rửa và nuôi tiếp trong 45’-5h, bổ sung vào môi trường nuôi cấy tổng hợp cafein và Ca++ giúp cho tinh trùng tăng cường phản ứng acrosome hoặc heparin có điều chỉnh độ pH đạt 7,4.

THụ TINH VÀ Sự PHÁT TRIểN SAU

 Sau khi thụ tinh tế bào trứng được chuyển sang môi trường nuôi để hợp tử tiếp tục phát triển Môi trường nuôi hiện nay là TCM-199

bổ sung huyết thang bê và lọc vô trùng bằng màng lọc có kích thước 20-22µm, trong điều kiện nhiệt độ thích hợp của tủ ấm,

CO2… Hợp tử được nuôi đến giai đoạn phôi dâu , phôi nang sẽ được cấy truyền phôi.

Thụ tinh Chuẩn bị tinh trùng

Kích thích buồng trứng

Bơm tinh

trùng vào

tử cung

động

dục

Rụng trứng

Phát hiện động

dục, thời điểm

phối giống thích

hợp

THụ TINH GIÁN TIếP

Súng bắn tinh

CấY TRUYềN PHÔI

 Trạng thái sinh lý sinh sản bình thường

 Bò được chọn làm bò nhận phôi có thể là bò tơ hoặc bò đã sinh sản nhưng không quá già và hung dữ

 Bò nhận phôi sau khi được cấy phôi phải được chú ý hơn để chăm sóc, nuôi dưỡng và sử dụng, đặc biệt ở 2-3 tháng đầu và những tháng về sau từ tháng 7 trở đi người chăn nuôi phải: theo dõi chặt chẽ quá trình mang thai của bò, cử cán bộ kĩ thuật trực vào ngày bò đẻ

 Gây động dục đồng pha cho bò nhận phôi.

Mục đích là tạo ra được nhiều bò nhận phôi có thời gian động dục đồng thời với bó cho phôi hoặc phù hợp với tuổi phôi Các hormne và phương pháp dùng dể gây động dục đồng pha

ở bò:

+ Dùng PGF2α tiêm cho bò trong pha thể vàng

+ Dùng dụng cụ Prid, CIDR đặt vào âm đạo của con vật ở bất cứ giai đoạn nào cua chu kỳ khoảng 1-12 ngày

+ Dùng SMB dưới dạng viên cấy dưới tai 9-10 ngày

THU HOạCH PHÔI

 Dung dịch dội rửa, thu phôi ngoài cơ thể mẹ.

• Dung dịch đệm có ion Phosphate hoặc Bicarbonate

• Khử trùng: lọc môi trường qua hệ thống màng lọc có kích thước 0,2µm, vô khuẩn, vô trùng bằng bổ sung các chất kháng sinh

• Chất phân tử lớn: thêm vào môi trường huyết thanh thai bê hoặc Albumin huyết thanh bò Tất cả đã được khử trùng

tử cung

Dung dịch dội rửa được đưa vào chóp sừng tử cung, lấy ra

ở gốc sừng

tử cung

Thu hoạch phôi bằng phương pháp không phẫu thuật.

 Nguyên tắc là đưa foley catheter qua âm đạo, cổ tử cung vào sừng tử cung, cố định foley catheter tại một vị trí nhất định bằng một bóng khí Sau đó, dung dịch dội rửa được đưa vào lấy ra theo hệ thống khép kín hoặc trực tiếp bằng xơ-ranh qua foley catheter Dung dịch nước được bơm vào à hút ra như vậy đã giội rửa bên trong tử cung, kéo theo cả trứng và phôi.

 Chuẩn bị:

 Kiểm tra lại tất cả các dụng cụ cần thiết cho qua trình giội rửa

 Đưa bò vào giá cố định tại điểm đã chuẩn bị sẵn

 Khám và xác định lại vị trí, hình dạng, kích thước của tử cung trong cơ thể Xác định số lượng thể vàng, nang trứng trên

buồng trứng

 Dung dịch giội rửa 1000ml/bò chuẩn bị sẵn, được ngâm hoặc sưởi ấm lên 370C Nối các hệ thống dung dịch nước vào, dung dịch nước ra với các bình đựng hoặc bình đựng dung dịch giội rửa ở đầu vào và phễu ở đầu ra

 Vệ sinh cho bò, dặc biệt phần âm hộ, hậu môn, đuôi

 Kĩ thuật đưa foley catheter vào cố dịnh nó trong tử cung.

 Lau khô, sạch âm hộ bò, sau đó lau lại bằng bông cồn 700

 Một người mở âm hộ Kỹ thuật viên đưa foley catheter vào qua âm đạo, cổ tử cung đến sừng tử cung Hệ thống foley catheter trước khi sử dụng cũng đã được hấp khử trùng Vị trí bóng khí của foley catheter khi cố định tối thiểu cách ngã 3 (thân và 2 sừng tử cung) ≥3,5 cm

 Khi xác định đúng vị trí cần cố định foley catheter, bơm 10-15

ml khí

 Quá trình giội rửa.

 Sau khi đã cố định foley catheter, nối foley catheter với hệ thống ống cho dung dịch nước vào và ra Khi nối xong, đóng khoá dung dịch chảy ra, mở khoá vào, dung dịch chảy tới sừng tử cung

 Mát xa nhẹ nhàng sừng tử cung sau đó mới mở khoá ra, dung dịch sẽ được chảy ra vào bình đựng hoặc phễu lọc phôi

Folley catherter

Phân loại

phôi

Loại C(trung bình)

Loại A(rất tốt)

Loại B(tốt)

Loại D(kém)

Phôi dâu Phôi nang

Phương pháp không qua phẫu

 Đưa phôi vào cọng rạ.

• Phôi sau khi được đánh giá phân loại nếu đạt tiêu chuẩn cấy được hút vào cọng rạ để đi cấy chuyển Phôi được hút vào cọng rạ thông qua micropipet hoặc bằng cách lắp trực tiếp cọng rạ phía nút cotton với 1 xơ ranh 1 ml

 Lắp cọng rạ vào súng

 Chuẩn bị bò nhận phôi

• Bò nhận phôi đã được phát hiện động dục trước Và phù hợp với trạng thái sinh lý sinh dục của con bò cho phôi hoặc tuổi phôi

• Khám xác định và đánh dấu vị trí của thể vàng

• Tiêm thuốc gây tê vùng khum đuôi

• Giội nước ấm vệ sinh âm hộ, hậu môn và vùng xung quanh, sau đó dùng cồn vệ sinh lại

 Thao tác cấy chuyển phôi.

• Để đảm bảo vô trùng, khi súng cấy phôi đến lỗ cổ tử cung, áo nilon ngoài cùng mới được chọc thủng để súng qua lỗ thủng của túi đi vào trong tử cung

• Đưa súng cấy phôi qua cổ tử cung, vào sừng tử cung phía buông trứng có thể vàng Khoảng cách từ sừng tử cung đến đỉnh của súng thường 5-10 cm

• Khi đầu súng đã vào đùng vị trí thì bơm phôi vào Thao tác phải nhanh nhẹn, nhẹ nhàng

 Khám thai định kỳ cho bò nhận phôi

TÀI LIệU THAM KHảO

 Giáo trình công nghệ sinh học động vật- Ths.Trần Thị Minh.

 Sinhhocvietnam.net

 Vienchannuoimiennam.com.vn