Hoạt độ enzyme doc

Chủ đề thảo luận Ho ạ t độ enzyme Khá Khá i i quá quá t t vê vê   Enzim Enzim   Enzim Enzim là là m m ộ ộ t t h h ợ ợ p p ch ch ấ ấ t t xú xú c c tá tá c c sinh sinh họ họ c c có có bả bả n n ch ch ấ ấ t t là là PROTEIN PROTEIN   Có Có c c ườ ườ ng ng l l ự ự c c xú xú c c tá tá c c mạ mạ nh nh , , tí tí nh nh đ đ ặ ặ c c hi hi ệ ệ u u cao cao , , không không đ đ ộ ộ c c   Enzim Enzim đ đ ượ ượ c c sả sả n n xu xu ấ ấ t t b b ở ở i i cá cá c c tê tê   bà bà o o s s ố ố ng ng ( ( đ đ ộ ộ ng ng v v ậ ậ t t ) ) Ví dụ Ví dụ : : Độ Độ ng ng v v ậ ậ t t : : da da   dà dà y y l l ợ ợ n n , , tụ tụ y y tạ tạ ng ng , , tim tim Th Th ự ự c c v v ậ ậ t t : : đu đu đu đu   , , d d ứ ứ a a , , thó thó c c m m ầ ầ m m , sung, , sung, va va   , , Vi Vi sinh sinh v v ậ ậ t t : : n n ấ ấ m m men, men, n n ấ ấ m m m m ố ố c c , , Kh Kh á á i i ni ni ệ ệ m m Kh Kh á á c c v v ớ ớ i i trong trong h h ó ó a a h h ọ ọ c c phân phân t t í í ch ch b b ì ì nh nh thư thư ờ ờ ng ng , , trong trong enzyme enzyme h h ọ ọ c c , , ngư ngư ờ ờ i i ta ta không không đ đ ị ị nh nh lư lư ợ ợ ng ng enzyme enzyme m m ộ ộ t t c c á á ch ch tr tr ự ự c c ti ti ế ế p p m m à à thư thư ờ ờ ng ng x x á á c c đ đ ị ị nh nh gi gi á á n n ti ti ế ế p p thông thông qua qua x x á á c c đ đ ị ị nh nh đ đ ộ ộ ho ho ạ ạ t t đ đ ộ ộ ng ng ( ( còn còn g g ọ ọ i i l l à à ho ho ạ ạ t t đ đ ộ ộ ) ) c c ủ ủ a a enzyme. enzyme. Trong Trong ph ph á á n n ứ ứ ng ng c c ó ó enzyme enzyme x x ú ú c c t t á á c c , , s s ự ự ho ho ạ ạ t t đ đ ộ ộ ng ng c c ủ ủ a a enzyme enzyme đư đư ợ ợ c c bi bi ể ể u u hi hi ệ ệ n n b b ằ ằ ng ng c c á á ch ch l l à à m m thay thay đ đ ổ ổ i i c c á á c c t t í í nh nh ch ch ấ ấ t t v v ậ ậ t t lý lý , , h h ó ó a a lý lý c c ũ ũ ng ng như như t t í í nh nh ch ch ấ ấ t t h h ó ó a a h h ọ ọ c c c c ủ ủ a a h h ỗ ỗ n n h h ợ ợ p p ph ph ả ả n n ứ ứ ng ng . Theo . Theo dõi dõi nh nh ữ ữ ng ng bi bi ế ế n n đ đ ổ ổ i i đ đ ó ó c c ó ó th th ể ể bi bi ế ế t t đư đư ợ ợ c c ch ch í í nh nh x x á á c c m m ứ ứ c c đ đ ộ ộ ho ho ạ ạ t t đ đ ộ ộ ng ng c c ủ ủ a a enzyme enzyme thông thông qua qua x x á á c c đ đ ị ị nh nh cơ cơ ch ch ấ ấ t t b b ị ị m m ấ ấ t t đi đi hay hay lư lư ợ ợ ng ng s s ả ả n n ph ph ẩ ẩ m m đư đư ợ ợ c c t t ạ ạ o o th th à à nh nh trong trong ph ph ả ả n n ứ ứ ng ng . . Xá Xá c c đ đ ị ị nh nh hoạ hoạ t t đô đô   Enzim Enzim M M ứ ứ c c đô đô   hoạ hoạ t t đ đ ộ ộ ng ng ( ( hoạ hoạ t t đô đô   ) ) củ củ a a Enzim Enzim dù dù ng ng đê đê   : : + + Đ Đ á á nh nh gia gia   m m ứ ứ c c đô đô   mạ mạ nh nh hay hay y y ế ế u u ( ( c c ườ ườ ng ng đô đô   xú xú c c tá tá c c ) ) củ củ a a Enzim Enzim - - Là Là l l ượ ượ ng ng Enzim Enzim có có kha kha   năng năng xú xú c c tá tá c c chuy chuy ể ể n n hó hó a a m m ộ ộ t t l l ượ ượ ng ng cơ cơ ch ch ấ ấ t t nh nh ấ ấ t t đ đ ị ị nh nh trong trong th th ờ ờ i i gian gian nh nh ấ ấ t t đ đ ị ị nh nh ở ở đktc đktc ( ( nhi nhi ệ ệ t t đô đô   , , á á p p su su ấ ấ t t t t ố ố i i ưu ưu ) ) - - Xá Xá c c đ đ ị ị nh nh hoạ hoạ t t đô đô   củ củ a a Enzim Enzim thông thông qua qua xá xá c c đ đ ị ị nh nh l l ượ ượ ng ng cơ cơ ch ch ấ ấ t t m m ấ ấ t t đi đi hay hay l l ượ ượ ng ng sả sả n n ph ph ẩ ẩ m m đ đ ượ ượ c c tạ tạ o o thà thà nh nh tr tr ướ ướ c c phả phả n n ứ ứ ng ng + + Đ Đ á á nh nh gia gia   m m ứ ứ c c đô đô   tinh tinh khi khi ế ế t t củ củ a a Enzim Enzim Đê Đê   tá tá ch ch enzim enzim th th ườ ườ ng ng có có 3 3 nhó nhó m m phương phương phá phá p p - - Nhó Nhó m m phương phương phá phá p p k k ế ế t t tủ tủ a a ( ( k k ế ế t t tủ tủ a a b b ằ ằ ng ng dung dung môi môi h h ữ ữ u u cơ cơ , , mu mu ố ố i i trung trung tí tí nh nh ) ) - - Nhó Nhó m m phương phương phá phá p p lỏ lỏ ng ng - - lỏ lỏ ng ng - - Nhó Nhó m m phương phương phá phá p p s s ắ ắ c c ki ki   ( ( s s ắ ắ c c ki ki   trao trao đ đ ổ ổ i i ion, ion, lọ lọ c c gel) gel) Phương Phương ph ph á á p p x x á á c c đ đ ị ị nh nh ho ho ạ ạ t t đ đ ộ ộ enzyme enzyme Đ Đ ể ể x x á á c c đ đ ị ị nh nh ho ho ạ ạ t t đ đ ộ ộ c c ủ ủ a a enzyme enzyme ở ở c c á á c c d d ị ị ch ch chi chi ế ế t t ho ho ặ ặ c c ở ở ch ch ế ế ph ph ẩ ẩ m m ng ư ng ư ờ ờ i i ta ta th ư th ư ờ ờ ng ng d d ù ù ng ng c c á á c c ph ươ ng ph ươ ng ph ph á á p p v v ậ ậ t t lý lý ho ho ặ ặ c c h h ó ó a a h h ọ ọ c c . . C C á á c c ph ươ ng ph ươ ng ph ph á á p p , so , so m m à à u u , , đ o đ o kh kh í í , , đ o đ o đ đ ộ ộ phân phân c c ự ự c c , , đ o đ o đ đ ộ ộ nh nh ớ ớ t t , , chu chu ẩ ẩ n n đ đ ộ ộ đư đư ợ ợ c c d d ù ù ng ng ph ph ổ ổ bi bi ế ế n n trong trong nghiên nghiên c c ứ ứ u u đ đ ị ị nh nh l ư l ư ợ ợ ng ng c c á á c c ph ph ả ả n n ứ ứ ng ng enzyme. enzyme. M M ộ ộ t t s s ố ố phương phương ph ph á á p p x x á á c c đ đ ị ị nh nh ho ho ạ ạ t t đ đ ộ ộ enzyme enzyme V V ề ề nguyên nguyên t t ắ ắ c c c c ó ó th th ể ể chia chia ra ra ba ba nh nh ó ó m m ph ươ ng ph ươ ng ph ph á á p p sau sau : :   1. 1. Đ o Đ o l l ượ ượ ng ng c ơ c ơ ch ch ấ ấ t t bị bị m m ấ ấ t t đ i đ i hay hay l l ượ ượ ng ng sả sả n n ph ph ẩ ẩ m m đ đ ượ ượ c c tạ tạ o o thà thà nh nh trong trong m m ộ ộ t t th th ờ ờ i i gian gian nh nh ấ ấ t t đ đ ị ị nh nh ứ ứ ng ng v v ớ ớ i i m m ộ ộ t t n n ồ ồ ng ng đ ô đ ô   Enzim Enzim nh nh ấ ấ t t đ đ ị ị nh nh   2. 2. Đ o Đ o th th ờ ờ i i gian gian c c ầ ầ n n thi thi ế ế t t đ ê đ ê   thu thu đ đ ượ ượ c c m m ộ ộ t t l l ượ ượ ng ng bi bi ế ế n n thiên thiên nh nh ấ ấ t t đ đ ị ị nh nh củ củ a a c ơ c ơ ch ch ấ ấ t t hay hay sả sả n n ph ph ẩ ẩ m m ứ ứ ng ng v v ớ ớ i i m m ộ ộ t t n n ồ ồ ng ng đ ô đ ô   Enzim Enzim nh nh ấ ấ t t đ đ ị ị nh nh   3. 3. Chọ Chọ n n n n ồ ồ ng ng đ ô đ ô   Enzim Enzim nh ư nh ư thê thê   nà nà o o đ ê đ ê   trong trong m m ộ ộ t t th th ờ ờ i i gian gian nh nh ấ ấ t t đ đ ị ị nh nh thu thu đ đ ượ ượ c c s ư s ư   bi bi ế ế n n thiên thiên nh nh ấ ấ t t đ đ ị ị nh nh vê vê   c ơ c ơ ch ch ấ ấ t t hay hay sả sả n n ph ph ẩ ẩ m m Đơn Đơn v v ị ị c c ủ ủ a a ho ho ạ ạ t t đ đ ộ ộ enzyme enzyme a, a, Đơn Đơn vị vị Enzim Enzim qu qu ố ố c c t t ế ế ( ( UI) UI) là là l l ượ ượ ng ng Enzim Enzim có có kha kha   năng năng xú xú c c tá tá c c là là m m chuy chuy ể ể n n hó hó a a đ đ ượ ượ c c m m ộ ộ t t micromol micromol cơ cơ ch ch ấ ấ t t sau sau m m ộ ộ t t phú phú t t ở ở đi đi ề ề u u ki ki ệ ệ n n tiêu tiêu chu chu ẩ ẩ n n 1 UI = 1 mol 1 UI = 1 mol cơ cơ ch ch ấ ấ t/giây t/giây b, b, Katal Katal ( ( kat kat ) l ) l à à l l ượ ượ ng ng Enzim Enzim có có kha kha   năng năng xú xú c c tá tá c c là là m m chuy chuy ể ể n n hó hó a a đ đ ượ ượ c c 1 mol 1 mol cơ cơ ch ch ấ ấ t t sau sau m m ộ ộ t t giây giây ở ở đi đi ề ề u u ki ki ệ ệ n n tiêu tiêu chu chu ẩ ẩ n n . . 1 Kat = 1 mol 1 Kat = 1 mol cơ cơ ch ch ấ ấ t/giây t/giây 1 UI = * 10 1 UI = * 10 - - 6 6 Kat = 16,67 Kat = 16,67 nKat nKat ( ( nanoKatal nanoKatal ) )   Đ Đ ố ố i i v v ớ ớ i i ch ch ế ế ph ph ẩ ẩ m m enzyme, enzyme, ngo ngo à à i i vi vi ệ ệ c c x x á á c c đ đ ị ị nh nh m m ứ ứ c c đ đ ộ ộ ho ho ạ ạ t t đ đ ộ ộ ngcòn ngcòn c c ầ ầ n n ph ph ả ả i i đ đ á á nh nh gi gi á á đ đ ộ ộ s s ạ ạ ch ch c c ủ ủ a a n n ó ó . . Đ Đ ạ ạ i i lư lư ợ ợ ng ng đ đ ặ ặ c c trưng trưng cho cho đ đ ộ ộ s s ạ ạ ch ch c c ủ ủ a a ch ch ế ế ph ph ẩ ẩ m m enzyme enzyme l l à à ho ho ạ ạ t t đ đ ộ ộ riêng riêng . . - - Ho Ho ạ ạ t t đ đ ộ ộ riêng riêng c c ủ ủ a a m m ộ ộ t t ch ch ế ế ph ph ẩ ẩ m m enzyme enzyme l l à à s s ố ố đơn đơn v v ị ị enzyme/ 1mg protein (U/mg) enzyme/ 1mg protein (U/mg) c c ũ ũ ng ng c c ó ó th th ể ể 1g 1g ch ch ế ế ph ph ẩ ẩ m m ho ho ặ ặ c c 1 ml dung 1 ml dung d d ị ị ch ch enzyme. enzyme. Thông Thông thư thư ờ ờ ng ng h h à à m m lư lư ợ ợ ng ng protein protein đư đư ợ ợ c c x x á á c c đ đ ị ị nh nh b b ằ ằ ng ng phương phương ph ph á á p p Lowry. Lowry. Khi Khi đã đã bi bi ế ế t t kh kh ố ố i i lư lư ợ ợ ng ng phân phân t t ử ử c c ủ ủ a a enzyme enzyme th th ì ì c c ó ó th th ể ể t t í í nh nh ho ho ạ ạ t t đ đ ộ ộ phân phân t t ử ử . . - - Ho Ho ạ ạ t t đ đ ộ ộ phân phân t t ử ử l l à à s s ố ố phân phân t t ử ử cơ cơ ch ch ấ ấ t t đư đư ợ ợ c c chuy chuy ể ể n n h h ó ó a a b b ở ở i i m m ộ ộ t t phân phân t t ử ử enzyme enzyme trong trong m m ộ ộ t t đơn đơn v v ị ị th th ờ ờ i i gian gian . . Đơn Đơn v v ị ị c c ủ ủ a a ho ho ạ ạ t t đ đ ộ ộ enzyme enzyme Ch Ch ú ú ý: ý: C C ũ ũ ng ng c c ầ ầ n n ch ch ú ú ý ý r r ằ ằ ng ng trong trong m m ộ ộ t t s s ố ố trư trư ờ ờ ng ng h h ợ ợ p p đ đ ị ị nh nh ngh ngh ĩ ĩ a a v v ề ề đơn đơn v v ị ị ho ho ạ ạ t t đ đ ộ ộ enzyme enzyme ở ở trên trên không không th th ể ể á á p p d d ụ ụ ng ng đư đư ợ ợ c c . . N N ế ế u u c c ầ ầ n n thi thi ế ế t t ch ch ú ú ng ng ta ta s s ẽ ẽ đưa đưa ra ra c c á á c c đi đi ề ề u u ki ki ệ ệ n n th th í í nghi nghi ệ ệ m m tương tương đ đ ố ố i i ho ho ặ ặ c c đ đ ị ị nh nh ngh ngh ĩ ĩ a a c c ủ ủ a a c c á á c c đơn đơn v v ị ị kh kh á á c c . . Ở Ở nơi nơi c c ó ó nhi nhi ề ề u u hơn hơn m m ộ ộ t t m m ố ố i i liên liên k k ế ế t t c c ủ ủ a a phân phân t t ử ử cơ cơ ch ch ấ ấ t t b b ị ị t t ấ ấ n n công công th th ì ì m m ộ ộ t t đơn đơn v v ị ị ho ho ạ ạ t t đ đ ộ ộ enzyme enzyme l l à à lư lư ợ ợ ng ng enzyme enzyme c c ó ó kh kh ả ả năng năng x x ú ú c c t t á á c c l l à à m m chuy chuy ể ể n n h h ó ó a a m m ộ ộ t t micro micro - - đương đương lư lư ợ ợ ng ng c c ủ ủ a a nh nh ó ó m m liên liên quan quan sau sau 1 1 ph ph ú ú t t ở ở đi đi ề ề u u ki ki ệ ệ n n x x á á c c đ đ ị ị nh nh . . Ở Ở nơi nơi c c ó ó hai hai phân phân t t ử ử gi gi ố ố ng ng nhau nhau ph ph ả ả n n ứ ứ ng ng v v ớ ớ i i nhau nhau th th ì ì 1 1 đơn đơn v v ị ị ho ho ạ ạ t t đ đ ộ ộ l l à à lư lư ợ ợ ng ng enzyme enzyme x x ú ú c c t t á á c c cho cho s s ự ự chuy chuy ể ể n n h h ó ó a a c c ủ ủ a a 2 2 µ µ mol mol cơ cơ ch ch ấ ấ t t sau sau 1 1 ph ph ú ú t t . . V V í í d d ụ ụ : : X X á á c c đ đ ị ị nh nh ho ho ạ ạ t t đ đ ộ ộ enzyme enzyme eperoxidase eperoxidase Enzyme Enzyme eperoxidase eperoxidase đư đư ợ ợ c c t t á á ch ch chi chi ế ế t t t t ừ ừ c c ủ ủ c c ả ả i i tr tr ắ ắ ng ng . . S S ử ử d d ụ ụ ng ng dung dung dich dich enzyme enzyme t t á á ch ch đư đư ợ ợ c c t t ạ ạ i i n n ồ ồ ng ng đ đ ộ ộ (NH4) (NH4) 2 2 so so 4 4 th th í í ch ch h h ợ ợ p p đ đ ể ể x x á á c c đ đ ị ị nh nh ho ho ạ ạ t t đ đ ộ ộ c c ủ ủ a a enzyme. enzyme. L L ấ ấ y y 2 2 dãy dãy b b ì ì nh nh tam tam gi gi á á c c 100ml, 100ml, dãy dãy đ đ ố ố i i ch ch ứ ứ ng ng v v à à dãy dãy th th í í nghi nghi ệ ệ m m 2ml 2ml n ư n ư ớ ớ c c c c ấ ấ t t , 2ml , 2ml đ đ ệ ệ m m photphat photphat (pH = 6,0), (pH = 6,0), thêm thêm 3ml dung 3ml dung d d ị ị ch ch enzyme, 1ml enzyme, 1ml thu thu ố ố c c th th ử ử Indigocamin Indigocamin 0,1%, 0,1%, l l ắ ắ c c đ đ ề ề u u . . Sau Sau đ đ ó ó cho cho 2ml H 2ml H 2 2 o o 2 2 3% 3% v v à à theo theo dõi dõi qu qu á á tr tr ì ì nh nh m m ấ ấ t t m m à à u u c c ủ ủ a a Indigocamin Indigocamin t t í í nh nh theo theo th th ờ ờ i i gian gian t t ừ ừ khi khi b b ắ ắ t t đ đ ầ ầ u u cho cho H H 2 2 o o 2 2 đ đ ế ế n n khi khi dung dung d d ị ị ch ch chuy chuy ể ể n n sang sang m m à à u u v v à à ng ng h ơ i h ơ i xanh xanh . . [...]...Ý nghĩa ho t enzyme Ho t enzyme (còn g i là con s chuy n hóa ho c con s vòng: turnover number) có nghĩa là ph n ng ư c xúc tác x y ra r t nhanh Như v y, ho t phân t chính là kh năng xúc tác: ho t phân t càng cao thì kh năng xúc tác càng l n Ví d ngư i ta ã xác nh ư c ho t phân t cao c a m t s enzyme tinh khi t như catalase (5,6 x 106) acetyl - cholinesterase . c c ủ ủ a a enzyme. enzyme. Trong Trong ph ph á á n n ứ ứ ng ng c c ó ó enzyme enzyme x x ú ú c c t t á á c c , , s s ự ự ho ho ạ ạ t t đ đ ộ ộ ng ng c c ủ ủ a a enzyme enzyme đư đư ợ ợ c c bi bi ể ể u u hi hi ệ ệ n n b b ằ ằ ng ng c c á á ch ch l l à à m m thay thay đ đ ổ ổ i i c c á á c c t t í í nh nh ch ch ấ ấ t t v v ậ ậ t t lý lý ,. Kh Kh á á i i ni ni ệ ệ m m Kh Kh á á c c v v ớ ớ i i trong trong h h ó ó a a h h ọ ọ c c phân phân t t í í ch ch b b ì ì nh nh thư thư ờ ờ ng ng , , trong trong enzyme enzyme h h ọ ọ c c , , ngư ngư ờ ờ i i ta ta không không đ đ ị ị nh nh lư lư ợ ợ ng ng enzyme enzyme m m ộ ộ t t c c á á ch ch tr tr ự ự c c ti ti ế ế p p m m à à thư thư ờ ờ ng ng x x á á c c đ đ ị ị nh nh gi gi á á n n ti ti ế ế p p thông thông qua. lọ lọ c c gel) gel) Phương Phương ph ph á á p p x x á á c c đ đ ị ị nh nh ho ho ạ ạ t t đ đ ộ ộ enzyme enzyme Đ Đ ể ể x x á á c c đ đ ị ị nh nh ho ho ạ ạ t t đ đ ộ ộ c c ủ ủ a a enzyme enzyme ở ở c c á á c c d d ị ị ch ch chi chi ế ế t t ho ho ặ ặ c c ở ở ch ch ế ế ph ph ẩ ẩ m m ng ư ng ư ờ ờ i i ta ta th ư th ư ờ ờ ng ng d d ù ù ng ng c c á á c c ph ươ ng ph ươ ng ph ph á á p p v v ậ ậ t t lý lý ho ho ặ ặ c c h h ó ó a a h h ọ ọ c c .