protein tái tổ hợp HA và M2 của virus cúm gia cầm H5N1 trong vi khuẩn E.coli ppsx

protein tái tổ hợp HA và M2 của virus cúm gia cầm H5N1 trong vi khuẩn E.coli Bư ớc đầu thu nhận một số kết quả biểu hiện protein tái tổ hợp HA và M2 của virus cúm gia cầm H5N1 trong vi khuẩn E.coli Kể từ cuối năm 2003 đến nay, dịch cúm gia cầm H5N1 đã gây thiệt hại về tài sản và con người ở nhiều nơi trên thế giới. Hàng trăm triệu gia c ầm, động vật bị chết do virus H5N1 hoặc bị tiêu hủy để ngăn chặn sự lan rộng của dịch cúm. Theo Tổ chức Y t ế thế giới (WHO), trong tổng số 328 ca được ghi nhận bị nhiễm cúm là đ ã có 200 ca bị tử vong, trong đó Việt Nam đứng thứ hai trên thế giới, sau Indonesia, có số người tử vong do cúm H5N1 là 46 ca (theo ghi nhận của WHOđến ngày10/09/2007). Hi ện nay, chúng ta đang phải đối phó với một thử thách rất lớn do dịch cúm gia cầm H5N1 gây ra. Một đại dịch cúm do H5N1 có thể xảy ra do con người không có kháng th ể tồn tại đối với virus H5N1 này và do độc lực cao của chúng mà hiện nay vẫn chưa sẵn có vaccine phòng bệnh cúm H5N1. Trước tình hình cấp thiết đó, chúng tôi tiế n hành nghiên cứu “Tạo kháng nguyên tái tổ hợp HA, NA, M2 và NS1 của virus cúm gia cầm H5N1 và thử nghiệm đáp ứng miễn dịch”. Mục tiêu của chúng tôi là tạo 4 protein biến đổi (ký hiệu là HAP, NAP, M2 và NS1) của virus cúm H5N1 làm kháng nguyên. Bốn protein này đư ợc nhân dòng và biểu hiện trong E.coli BL21 thông qua plasmid biểu hiện pGEX 4T-3. Bước đầu đã có một số kết quả khả quan. Chúng tôi đã biểu hiện th ành công 2 protein tái tổ hợp HAP và M2 (có trọng lượng tương ứng 46 kDa và 37 kDa) trong E.coli BL21. K ết quả biểu hiện đã được kiểm tra bằng điện di SDS- PAGE và Western blot. Hàm lượng protein biểu hiện khá cao. Hình: Kết quả cảm ứng biểu hiện protein HAP và M2 Giếng 1: BL21 sau 6 giờ cảm ứng IPTG 0.5mM (ph ần không tan) Giếng 2: BL21 sau 6 giờ cảm ứng IPTG 0.5mM (ph ần tan) Giếng 3: BL21-pGEX 4T-3 sau 6 gi ờ cảm ứng IPTG 0.5mM (phần không tan) Giếng 4: BL21-pGEX 4T-3 sau 6 gi ờ cảm ứng IPTG 0.5mM (phần tan) Giếng 5: BL21-HAP sau 6 giờ cảm ứng IPTG 0.5mM (phần không tan) Giếng 6: BL21-HAP sau 6 giờ cảm ứng IPTG 0.5mM (phần tan) Giếng 7: BL21-M2 sau 6 giờ cảm ứng IPTG 0.5mM (phần không tan) Giếng 8: BL21-M2 sau 6 giờ cảm ứng IPTG 0.5mM (phần tan) Giếng 9: BL21-HAP sau 6 giờ cảm ứng IPTG 0.5mM (trước khi phá vở tế bào) M: thang protein (2-212 kDa, NEB) Khi chúng tôi so sánh kết quả giải trình tự của protein tái tổ hợp HAP, M2 với dữ liệu của GeneBank cho thấy đoạn protein mà chúng tôi thiết kế có độ tương đồng rất cao (100%) so với các chủng thuộc clade 1 (ở Việt Nam, Thái Lan, Campuchia, Lào) và một số chủng thuộc clade 2 (ở Hàn Quốc, Trung Quốc). Với kết quả ghi nhận được cho chúng tôi hy vọng là sử dụng các protein này làm kháng nguyên thì tiềm năng rất lớn tạo được đáp ứng miễn dịch của các kháng nguyên là trên phổ rộng, kháng lại nhiều chủng cúm H5N1 gây độc cao. Đây là một kết quả thật có ý nghĩa, mở ra triển vọng rất lớn trong nghiên cứu vaccine phòng bệnh cúm gia cầm H5N1. Nếu việc nghiên cứu sản xuất vaccine protein tái tổ hợp này phòng được bệnh cúm H5N1 là thành công, sẽ góp phần rất lớn trong việc giảm bớt thiệt hại về tài sản và con người do virus H5N1 gây ra. . protein tái tổ hợp HA và M2 của virus cúm gia cầm H5N1 trong vi khuẩn E. coli Bư ớc đầu thu nhận một số kết quả biểu hiện protein tái tổ hợp HA và M2 của virus cúm gia cầm H5N1 trong. sẵn có vaccine phòng bệnh cúm H5N1. Trước tình hình cấp thiết đó, chúng tôi tiế n hành nghiên cứu “Tạo kháng nguyên tái tổ hợp HA, NA, M2 và NS1 của virus cúm gia cầm H5N1 và thử nghiệm. dịch”. Mục tiêu của chúng tôi là tạo 4 protein biến đổi (ký hiệu là HAP, NAP, M2 và NS1) của virus cúm H5N1 làm kháng nguyên. Bốn protein này đư ợc nhân dòng và biểu hiện trong E. coli BL21 thông