Khóa luận tốt nghiệp Bệnh học thủy sản: Khảo sát ảnh hưởng của việc bổ sung enzyme phytase và xylanase trong thức ăn lên tăng trưởng, hiệu quả sử dụng thức ăn và thành phần sinh hóa của cá tra (Pangasianodon hypophthalmus, Sauvage, 1878)

TÓM TATĐề tài “Khảo sát ảnh hưởng của việc bỗ sung enzyme phytase và xylanasetrong thức ăn lên tăng trưởng, hiéu quả sử dụng thức ăn và thành phan sinh hóacủa cá tra Pangasianodon hypoph

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NONG LAM THÀNH PHO HO CHÍ MINH

KHOA THỦY SẢN

KHẢO SAT ANH HUONG CUA VIỆC BO SUNG ENZYME PHYTASE

VA XYLANASE TRONG THUC AN LEN TANG TRUONG, HIEU QUA

SU DUNG THUC AN VA THANH PHAN SINH HOA CUA CA TRA

(Pangasianodon hypophthalmus, Sauvage, 1878)

Giảng viên hướng dẫn: TS Võ Văn Tuan

Sinh viên Mssv Chuyên ngành Niên khóa

: Huỳnh Bảo Học : 18116028

: Bénh hoc thuy san : 2018-2022

Thành Phố Hồ Chí Minh, tháng 8/2022

LỜI CẢM ƠN

Sau khoảng thời gian học tập, nay em đã hoàn thành chương trình học với Khóaluận tốt nghiệp bậc Đại học, ngành Nuôi trồng thủy sản Vì thế, em xin được phép gửi

lời cảm ơn sâu sắc ạ

Em xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu, Phòng Đào tạo và quý thầy côtrong Khoa Thủy sản đã tận tình giảng dạy, truyền đạt những kiến thức quý báu cho

em trong thời gian học tập tại trường.

Đặc biệt, em xin chân thành cảm ơn Thay PGS TS Lê Thanh Hùng, Thay TS

Võ Văn Tuấn và Cô ThS Võ Thị Thanh Bình trong suốt khoảng thời gian qua đã hỗtrợ, giúp đỡ, truyền đạt cho em những kinh nghiệm, kiến thức hữu ích và tạo điều kiệncho em hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này

Con xin cảm ơn ba mẹ trong suốt khoảng thời gian qua đã vat va dé lo cho con

ăn học và là chỗ dựa tinh thần lẫn vật chat dé con vững bước trên con đường học tập

TÓM TAT

Đề tài “Khảo sát ảnh hưởng của việc bỗ sung enzyme phytase và xylanasetrong thức ăn lên tăng trưởng, hiéu quả sử dụng thức ăn và thành phan sinh hóacủa cá tra (Pangasianodon hypophthalmus, Sauvage, 1878)” được thực hiện nhằmxác định hoạt lực của enzymes được bé sung vào thức ăn có nguồn gốc protein thựcvật lên khả năng tiêu hóa, kích thích sự tăng trưởng, khả năng bắt mdi của cá tra cũngnhư giảm hàm lượng bột cá, giảm chi phí đầu vao trong quá trình sản xuất thức ăn

Đề tài được bồ trí theo kiểu khối hoàn toàn ngẫu nhiên, bao gồm 4 nghiệm thức(NT), mỗi NT được lặp lại 4 lần và mật độ cá bố trí là 60 con/giai Các nghiệm thức thi

nghiệm như sau:

e HI: CT1 - có bố sung DCP, không bồ sung enzyme

e H2: CT2 - không bồ sung DCP và không bồ sung enzyme

e H3: CT3 — là CT2 và bé sung enzyme với liều lượng 150g sản phẩm/1 tanthức ăn.

e H4: CT4 - là CT2 và bổ sung enzyme với liều lượng 200g sản phẩm/1 tan

thức ăn.

Kết quả thí nghiệm cho thấy, tăng trọng (WG) và tốc độ tăng trưởng đặc biệt(SGR) giữa các nghiệm thức không có sự khác biệt có ý nghĩa về mặt thống kê (p >

0,05) Hệ số biến đồi thức ăn (FCR) của cá tra thí nghiệm ở NT HI là thấp nhất (1,34)

và khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) so với NT H2 (1,52) Tuy nhiên, FCR ởhai nghiệm thức có bố sung enzyme là H3 và H4 thì không có sự khác biệt về mặtthống kê (p > 0,05) so NT H2 Kết quả phân tích thành phan sinh hóa cho thay, hamlượng lipid phân tích trong cả nguyên con cá ở NT H4 là 39,82% thấp hơn có ý nghĩa

thống kê (p < 0,05) so với NT H2 (45,12%)

Qua đó có thê kết luận rằng, cá tra thí nghiệm ăn thức ăn ở nghiệm thức H1 cho

hệ số biến đổi thức ăn thấp hơn so với các nghiệm thức còn lại và thấp hơn có ý nghĩathống kê so với NT H2 (p < 0,05) Ở nghiệm thức H4 cho thay, cá ăn thức ăn có bốsung 200g sản pham/1tan thức ăn thì đã làm gia tăng khả năng tiêu hóa lipid ở cá tra

thí nghiệm.

Từ khóa: Pangasianodon hypophthalmus, phytase, xylanase, NSP (non- starch polysaccharide), protein thực vat

il

DANH SÁCH TU VIET TAT

ACD: Apparent digestibility coefficient

ATP: Adenosine triphosphate

CT: Công thức

DCP: Dicalcium phosphate

DBSCL: Đồng bằng Sông Cửu Long

FAO: Food and Agriculture Organization

NRC: National Research Council

NSP: Non — starch polysaccharide

NT: Nghiệm thức

NN&PTNT: Nông nghiệp và Phát triển Nông thôn

IUPAC-IUB: International Union of Pure and Applied Chemistry - International Union of Biochemistry

11

MỤC LỤC

OE, Ea nrrr 6 reereooardoogosesrorroariarrraoopisarbrswrsesyoineotesoskadgi i[eS | ae iiDANH SÁCH TU VIET TAT o ccccsscssessessessessessessessessessessessessessessessessessesstssesanssesseesees iii

MỤC LUC oo ess ccsesseessessesssessesssessessssssssnsssssssssussisssnssussssssusssessnssasssessusssessesssessessaeesessueeees iv

Ib.1uJ2N- 9:0* 9S DIỚỚỚNỚNợổ.GC viDANH SE ƠI CAC TÍN ke knneecsonetiennidinsyenirntorgigttrtG00i090109196005000005 0010000060/2029108% vii

MO ĐẦU - 2-2222 2222122122121121121121121121121121111112111111111121111111 211212 ereg |

1 ĐẶT VAN ĐẺ 22 52222252212212212212112112112121121211111211212112121212121221 re |

2 MỤC TIÊU DE TÀI - 2 2 ©22EE+EE2EE2EE2EE12EE27122212712112717112112712211211 21.2 xe 2Chương 1 TONG QUAN TÀI LIBU :::scc-<ós<5s<5s2c2c66Sx622212160663052112235021033163116536 350038 530 31L St net VŨ ÍÍNHbssssendsssinoecctettoierbeievksregitossEngftiuoTrbidieuzfpg0sefiusfntenitsdfuistoffiosngtopssoil

1.1.2 Đặc điểm hình thai cece cccccceccscsessecsesscecssecscsscseseseesesnsecseseeseseseeseseeeseees 31.1.3 Đặc điểm phân bố và nguồn gốc 2-22 2+2E+2E22EE+EE22EE22E22E222222222xee 41.1.4 Đặc điểm đinh đưỡng - Ă- 25222 22226222022022101211011100201 10021610 0 xe 4

11 BH HH BỆNH ăcreeseseianiuoihstisrhlfbdtSBA000083140k8QidutrlinlisialrdoEhinitSeZiargtZrsEnE 51.2 Tình hình sản xuất và tiêu thụ cá tra ở Việt Name ccccccececececeeseeseeecsesseeteseeseeees 5

I2 100) 7

1.4 Ung dụng của enzyme phytase trong thức ăn cá -. -2©2252222++2x+zz++zzzex 81.4.1 Tác động của phytase đến khả năng sinh kha dung của Phospho (P) §1.4.2 Tác động của phytase đối với sự tăng trưởng của cá -2 -2z5czz-: 91.4.3 Tác động của phytase đối với việc tiêu hóa protein và acid amin 101.4.4 Tác động của phytase đến hiệu qua sinh kha dụng của các chất dinh dưỡng khác

mg ' 11

1.5 Nhu cau phospho trong khẩu phan ăn của cá -2 2¿©22222+22+22++2zzz++zxe2 lãi

| SỐ a git melt ti roel ir ito sro ae tonto 13 DoF on OS VATA SS a ceercsncoreeapamannsionne serene cece seats stra amn Las mse Ne cn eae ae cre te GI 15

Chương 2 VAT LIEU VA PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU - 22252554 178,1, Thôi han si địu điểm nghiÊn gNouseeseceesaetekegittstrdolgioi6gypSEckitgiN6:0i30G0000154031806050E 17

1V

2:1 l„ TROL S14 HBHIỆH GỮU sásgna tong nánngn gềno tà g2 13g83 xg 0313058088564 S083k00530014364580 4484448858 17

2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 2+2 2s+S2+E2SE+EE2EE2E9212121221211212112112111211211121 21 xe, 17

5; Vat MEW We WICN OU Usersssce sas 15116153561 9ã8 61 24GXQSi1ðNGđ681302ã380304084G2SSERSSSS-EXASSE2S0458US2SEEES1S088918 17

2.2.1 Dụng cụ va hóa chat cccccceccccccsessecsssessessssessessesessessesessessesssessesesessesnesesseesees 17CORB aL en 17

2.2.3 00/0000 10001)0112.08nn-aảả4 ẢẢ 182.2.4 Thite an thi nghi€m oe 18

2:3: nữơng: Phap Ws WEN GỨỮU ao ssxscssss6i snp S6 S5 1612535 001038912S03E8SSB-RSE88N69138503Q3SHSA5.0381208 40581 19

2.3.1 Bồ trí thí nghiỆH:.e-eeesesnirikidiiEDiES051011101055213000101181013018700776000008000785 19

2.3.2 Các chỉ tiêu môi trường theo đÕI - + + +2 *++<E*EE*E£rEErrEerkerrrrkrreerrxre 21

2.3.3 Thu thap $6 QU 8.3 21

2.3.4 Các chi tiêu theo dõi cá thi nghiệm 5 2 222222233322 S2EE+sEEerrerrreerrrerrre 22

2.4 Phuong phap xir LY 0 1n ẻ 22CHƯƠNG 3 KET QUA VÀ THẢO LUẬN -2 52 +2+E2£E22EEErErrErrrrrerree 24

| en 24

2ulsl¿ CAC CHITEW THÔI TONS DUE OG nan dagahhhi4E11038G884G0NG3B2AG.211G138S838GSSS4800050330/389800058/36005e 24

3.1.2 Thanh phan sinh hóa của thức ăn thi nghiệm 2-22 2 2222z+2x+2zz22xz£- 263.1.3 Tỷ lệ sống của cá thí nghiệm - 2-22 ©22222222222E22E22212732221221221221 22.2 xe 26

3.1.4 Tăng trưởng của cá thí nghiỆm - 5 2252 **** + EEvrrrrkrrkrrrrrrrrrkerkrrkre De

3.1.5 Hiệu quả sử dụng thức ăn của cá - +2 +x 2 HT HH HH rệt 28

3.1.6 Hệ số gan — thé trong (HIS) và mỡ — thể trọng (AIS) của cá 303.17 Thônh phẩn ginh rên cổ sam HT nÌLÏỆNsseeiniaekinGkogianiugugiL000680000100580606 s0 ng 5 Ì

3.2 Thao 0 33

Chương 4 KET LUẬN VÀ DE NGHỊ, - 2-22 +S+2E£2E2E£2E£2E22E22E22E22E22222222222Xe2 35

SV Kt 1 35

ee 35TÀI LIEU THAM KHAO 0 oi.occcccccsssessesssessesssessessvessesssssessesssssseesessesseensessessssssessensees 37

PHU LỤC -2-©2¿2222222E2221221122122112112211211221221121121112112111112111121121111211 1c 43

Bảng 1.1:

DANH SÁCH CÁC BANG

Thành phần thức ăn trong ruột cá tra phân bố ngoài tự nhiên (Phạm Văn

IHánH.vÐIÏ)‹:x.ezseseeesseenbbsstiEkbsotgrBtrrrsipoigttleuuiettgiirioorpirdietistrgcirrdtgt910g a rd tt rr lS 5

Bang 1.2: Nhu cau phospho ở các loài cá khác nhau (V Kumar ef al., 2011) 12

Bảng 2.1: Công thức thức ăn của các nghiệm thức trong thí nghiệm 19Bảng 3.1: Các yếu tố môi trường trong quá trình thí nghiệm - 22252522 24

Bảng 3.2: Giá trị dao động trong ngay của nhiệt độ nước thí nghiệm 25

Bảng 3.3: Thanh phan sinh hóa phân tích trong thức ăn thi nghiệm 26

Bang 3.4: Tăng trưởng Ca thi H8 HIỆP sccnnss21Lầ H15 6011013 k35643010181100516L360/11038935./08 27 Bảng 3.5: Hiệu quả sử dụng thức ăn của cá thí nghiệm 2 255552 s+cscxssce2 29Bảng 3.6: Hệ số gan/thé trong va mỡ/(thể trọng của cá sau thí nghiệm (%) 30

Bang 3.7: Thanh phan sinh hóa nguyên con cá sau thí nghiệm -2-5- 31Bảng 3.8: Thanh phần chat khoáng phân tích trong xương CA - 32

VI

Hình 1.1:

Hình 1.2:

DANH SÁCH CÁC HÌNH

Hình thái bên ngoài của cá ffa c5 2221221223 1221 12211211511 521 1111221 112k 3

Sản lượng và kim ngạch xuất khẩu cá tra của ĐBSCL giai đoạn 1997-2014(Nguyễn Thanh Phương và ctv., 20 15) 2-2 5252222 222SE2E22E2EE2EE2E2E2EE2E 2222222 rrerree 6

Hình 1.3: Cơ chế tác động của enzyme phytase (Baruah và ctv., 2004) 8

Hình 1.4: Cấu trúc hóa học của xylan trong gỗ cứng -2 2¿©225s522222zz2s22 13

Hình 1.5: Thành phần của vách tế bao thực vật 2-2 +s+2s+2E+£EzEz£zzzezzzzsez 14Hình 1.f::Uầu felts Asatte 0 s‹ «-ee.«ecsec-ssecsiLciELnucgEELLHE.E05180130 0,006 5E0L30020221400 26/2 15

Hình 1.7: Vị trí cắt của các loại enzyme trên xylan 2 + s+2z+z+2£2zzzzzzxzzxzea 16

Hình 2.1: Thuần dưỡng cá trước khi bố trí -2- 2 ©22222++22++2E++EE++2E++zzzzrzrr 17Hình 2.2: Sơ đỗ bố trí thí nghiệm 22 2222 22S-2222215121222110221721221220 Le 20Hình 2.3: Các thiết bị, dung cu đo chỉ tiêu môi trường -5- 252 522S22£z2zz£zzz2 21Hình 3.1: Biéu đồ thé hiện sự biến động của nhiệt độ nước trong thời gian thi nghiệm

acne et com terete en are uae 25

Hình 3.2: Biểu đồ thé hiện ty lệ sống (%) của các nghiệm thức thí nghiệm 20Hình 3.3: Cân và đếm số lượng cá cuối thí nghiệm 2-22 22 222222222222z22+2 28Hình 3.4: M6 và cân khối lượng gan, mỡ cá thí nghiệm 2 2c5z55-5-s + 80

VI

MỞ ĐẦU

1 ĐẶT VAN DE

Cá tra Pangasianodon hypophthalmus là loài cá da trơn có giá trị kinh té đượcnuôi phô biến ở nước ta nói chung và ở Đồng bằng sông Cửu Long nói riêng (Phan vàctv., 2009) Cá tra nuôi thâm canh sử dụng một tỷ lệ bột cá và một sé lượng lớn proteinthực vật (Lê Thanh Hùng, 2008) Trong sản xuất thức ăn thủy sản, bột cá là nguồn

cung cấp protein tốt nhất (Trần Thị Thanh Hiền và crv., 2010), tuy nhiên, do nhu cầu

sử dụng ngày càng nhiều nên sản lượng bột cá ngày càng khan hiếm, giá thành tăngcao dẫn đến giá thành sản xuất thức ăn cũng tăng, từ đó ảnh hưởng đến hiệu quả kinh

tế cho người nuôi (New và Wikstrém, 2002; Baruah và ctv., 2004) Đã có nhiềunghiên cứu sử dụng protein thực vật như bột đậu nành, bột hướng dương, bột hạt cải,

đậu Hà Lan và ngô dé thay thế bột cá vì chúng rẻ, sẵn có, dé tiếp cận hơn (V Kumar

và ctv., 2011) Tuy nhiên, các nguyên liệu có nguồn gốc từ thực vật thường chứa cácchất kháng dinh dưỡng như phytate, xylan và một số chất thuộc nhóm NSP (Non —starch polysaccharide), làm cho cơ thé vật nuôi không thể hap thụ được dưỡng chat,mat cân bằng các chất dinh dưỡng, đặc biệt là phophorus, một chất khoáng cần thiết

cho sự sinh trưởng và phát triển bình thường của các động vật thủy sản Phytate là một

trong số các chat kháng dinh dưỡng, là một dang tự do của inositol hexakisphosphate(IP6) và một phân tử polyanionic với 6 nhóm phosphate có thể chelate hóa với các

cation Ca, Mg, Zn, Cu, Fe và K tạo thành muối không tan, ảnh hưởng đến khả năng

tiêu hóa và hap thu khoáng chất ở cá (Papatryphon vd ctv., 1999)

Trong thức ăn thủy sản, các nguyên liệu có nguồn gốc thực vật thường có độtiêu hóa thấp, nguyên nhân 1a do sự hiện diện của những hợp chất thuộc nhóm NSPnhư arabinoxylan, cellulose, hemicellulose, pectin, Những NSP này thường cấuthành màng tế bào thực vật, ngăn cản sự tiêu hóa vật chất dinh dưỡng trong tế bào(Nguyễn Thanh Tú, 2017) Hầu hết các enzyme nội sinh không có khả năng phân giải

các chất thuộc nhóm NSP (Vũ Duy Giảng, 2009)

Dựa vào những van đề nêu trên, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài nghiên cứu

“Khảo sát ảnh hưởng của việc bố sung enzyme phytase và xylanase lên tăngtrưởng, hiệu quả sử dụng thức ăn và thành phần sinh hóa của cá tra

(Pangasianodon hypophthalmus, Sauvage, 1878)”.

2 MỤC TIỂU DE TÀI

Đề tài được thực hiện với mục tiêu là khảo sát sự tăng trưởng, hiệu quả sử dụng

thức ăn và thành phan sinh hóa của cá tra Pangasianodon hypophthalmus khi ăn thức

ăn có bô sung enzyme phytase và xylanase.

Chương 1

TONG QUAN TAI LIEU

1.1 Sơ lược về cá tra

1.1.1 Phân loại

Hệ thống phân loại của cá tra được xác định như sau:

Ngành: Animalia Linnaeus, 1758 Lớp: Actinoptery gi Huxley, 1880 — Ray — finned fishes

Bộ: Siluriformes Họ: Pangasidae Bleeker, 1858Giống: Pangasius Valenciennes in Cuvier andValenciennes, 1840

Loai: Pangasianodon hypophthalmus (Sauvage, 1878)

Các đồng danh của loài cá tra:

° Helicophagus hypophthalmus Sauvage, 1878

° Pangasius hypophthalmus (Sauvage, 1878)

Nguồn: hitp://www.itis.gov, 20081.1.2 Đặc điểm hình thai

Theo mô tả của Trương Thủ Khoa và Trần Thị Thu Hương (1993) thì loài cá tra

có thân thon dai, phan sau hẹp bên, lưng có màu xám đen va bụng mau trắng bạc Cơ

quan đường bên hoàn toàn va phân nhánh, bat đầu từ mép trên của lỗ mang đến điểmgiữa của gốc vi đuôi Mặt sau của vi lưng, vi ngực có răng cưa hướng xuống gốc vi Vi

bụng của cá kéo dài chạm tới khởi điểm của gốc vi hậu môn Đầu cá rộng, hẹp bang,

mom ngắn, khi nhìn từ trên xuống chót mdm tròn Khi quan sát, thấy miệng cá rộngngang, có hình vòng cung nằm trên mặt phẳng ngang Cá tra có răng nhỏ, mịn, răngvòm miệng chia thành 4 đám nhỏ, mỏng nằm trên đường vòng cung Lỗ mũi sau của

cá gần lỗ mũi trước hơn mắt và nằm trên đường thắng kẻ từ lỗ mũi trước đến cạnh trêncủa mắt Cá tra có hai đôi râu, râu mép kéo dài chưa chạm đến gốc vi ngực, râu cẦmngắn hơn

1.1.3 Đặc điểm phân bố và nguồn gốc

Cá tra Pangasianodon hypophthalmus có nguồn gốc từ lưu vực sông Mekong,bao gồm các nước Campuchia, Lào, Thái Lan và Việt Nam (Nguyễn Văn Thường,2000) Tuy nhiên, cá tra cũng đã được du nhập vào các quốc gia khác như Indonesia,Malaysia, Bangladesh, Trung Quốc, An Độ, Myanmar (FAO, 2010-2011) với mụcđích phát triển ngành nuôi trồng thủy sản ở các quốc gia này Ở Việt Nam, cá tra là

loài cá nuôi truyền thống trong ao ở các tỉnh thuộc ĐBSCL và chúng được tìm thấy ở

các vùng lưu vực sông Mekong, nhiều nhất là ở các sông rach, ao đầm của sông Tiên,sông Hậu hay cả sông Hong và các sông ở miền Trung Việt Nam

Ngoài ra, do cá tra có cơ quan hô hấp phụ bằng bóng khí và da nên chúng cókhả năng sống tốt trong điều kiện ao tù nước đọng, nhiều min bã hữu cơ, oxy hòa tanthấp và cá có thé được nuôi với mật độ rất cao Theo Bộ NN&PTNT năm 2014 thì cácthông số chất lượng nước thích hợp cho sự phát triển của cá tra như sau: hàm lượng

oxy hòa tan (DO) > 2 mg/L, pH dao động từ 7-9, NH3 < 0,3 mg/L và nhiệt độ dao

động từ 25 — 32 °C.

1.1.4 Đặc điểm dinh dưỡng

Cá tra sau khi nở tiêu hết noãn hoàng thì chúng sẽ bắt đầu ăn thức ăn tươi sống,

di động bên ngoài môi trường, nếu không được cung cấp thức ăn day đủ thì chúng sẽ

ăn thịt lẫn nhau ngay cả trong bề ấp Cau trúc dạ dày của cá tra phình to, hình chữ U,

co giãn được, ruột cá ngắn, không gấp khúc lên nhau mà dính vào màng treo ruột ngaydưới bóng khí và tuyến sinh dục Cá tra là loài cá ăn tạp thiên về động vật (Rainboth,

1996) Trong tự nhiên cá tra ăn mùn bã hữu cơ, rễ cây thủy sinh, rau quả, tôm tép, cua,

côn trùng, Ốc và cá Cá tra nuôi trong ao sử dụng các loại thức ăn khác nhau như cátạp, thức ăn viên, cám, Thức ăn có nguồn gốc từ động vật hoặc hàm lượng đạm cao

sẽ giúp cá lớn nhanh (Dương Nhựt Long và c?., 2004) Nghiên cứu của Lê Thanh

Hùng, 2000 thì cá tra bột khi ăn trùn chỉ cho tỉ lệ sống cao và sinh trưởng của cá tốtnhất Phân tích thành phần thức ăn trong ruột cá tra ngoài tự nhiên gồm có nhuyễn thẻ,

côn trùng, giáp xác (Phạm Văn Khánh, 2000).

Bảng 1.1: Thành phan thức ăn trong ruột cá tra phân bé ngoài tự nhiên (Phạm Văn

tinh tự nhiên, do trứng cá có tính dính nên sau khi thụ tinh, trứng cá sẽ dính vào các

cây cỏ thủy sinh xung quanh đó Sau khi trứng nở, cá bột sẽ theo dòng nước lũ về hạlưu đến các vùng gặp nước ở Campuchia và Việt Nam Trong sinh sản nhân tạo, cá tra

có thể thành thục và đẻ sớm hơn (từ tháng 3 dương lịch hàng năm) và có thê tái phátdục 1 — 3 lần trong năm Hệ số thành thục của cá tra có thé đạt 12% (Vương Học Vinh,

2007).

1.2 Tình hình sản xuất và tiêu thụ cá tra ở Việt Nam

Cá tra là loài cá da trơn được nuôi phố biến ở nước ta, đặc biệt là ở vùng

ĐBSCL Theo báo cáo của Phan va ctv (2009) thì cá tra đạt sản lượng ky lục 683

nghìn tan với giá trị xuất khẩu hơn 645 triệu đô la vào năm 2007, đến năm 2010 thì sảnlượng cá tra đạt 1.141.000 tấn và dat kim ngạch xuất khâu khoảng 1,4 tỷ đô la (De

Silva và Phuong, 2011) Trong 10 năm, từ năm 1997 đến 2007 được xem là giai đoạn

hoàng kim của nghề nuôi cá tra với diện tích nuôi tăng 8 lần (từ 1.250 ha lên hơn9.000 ha), sản lượng cá tra thương pham tăng 45 lần (từ 22.500 tan lên hơn 1.200.000tan) và giá trị xuất khâu tăng 50 lần (từ 19,7 triệu đô la Mỹ lên đến 979.036 triệu đô laMỹ) (Phuong và Oanh, 2010) Báo cáo của Thủy sản Việt Nam (2013), năng suất nuôi

cá tra sau thu hoạch dat giá tri cao mặc dù diện tích nuôi chỉ khoảng 6.000 ha, bằng

1% diện tích nuôi tôm, trong đó tập trung chủ yếu ở vùng ĐBSCL và nhiều nhất ở cáctỉnh Đồng Tháp, An Giang, Cần Thơ Sản lượng cá tra phi lê xuất khẩu đạt hơn 640nghìn tấn năm 2012, xuất khâu hơn 140 quốc gia trên thế giới (VASEP, 2013)

Nguyên nhân làm diện tích và sản lượng cá tra nuôi ở ĐBSCL tăng cao là do khả năng

thích nghỉ tốt với điều kiện môi trường, thời tiết khắc nghiệt và chúng là loài cá rất

thích hợp tăng trưởng ở vùng này (Đỗ Thị Thanh Hương và cứ., 2015) Hiện tại, cá tra

đã được nuôi thâm canh ở hầu hết các tỉnh ĐBSCL, trong đó An Giang, Cần Thơ vàĐồng Tháp là các tỉnh có diện tích và sản lượng cá nuôi lớn nhất vùng (Phan ef ai,2009) Theo báo cáo của De Silva và Phuong (2011) thì phần lớn cá tra nuôi ở nước ta

4000

=®>= Tông sản lượng thủy sản nuôi (ngàn tan)

3500 —@—San lượng cá tra (ngàn tan)

3000 ~®—=Kim ngạch xuất khẩu cá tra (triệu USD)

bênh nên sản lượng và diện tích nuôi cá tra ở những năm gần đây đã suy giảm

Hình 1.2: Sản lượng và kim ngạch xuất khẩu cá tra của ĐBSCL giai đoạn 1997-2014

(Nguyễn Thanh Phương và ctv., 2015)

1.3 Enzyme phytase

Phytase hay còn được biết đến về mặt hóa hoc là myo-inositol (1,2,3,4,5,6) —

hexakisphosphate phosphohydrolase, xúc tác quá trình thủy phân phytate để giải

phóng ra Phospho (P) hữu dụng giúp cơ thé vật nuôi dé dang hap thu

Enzyme phytase có thể được tìm thấy ở các loài động vật, thực vật, nam và vi

sinh vat (Ling Cao và ctv., 2007) Tuy nhiên, hoạt lực của enzyme phytase từ động vat

không được hiệu quả so với các phytase từ thực vật và vi sinh vật Theo Weimin Wang

và ctv (2007), hầu hết các nghiên cứu khoa học chủ yếu sử dụng phytase từ vi sinh

vật, chăng hạn như Aspergillus ficuum, Mucor piriformis, Báo cáo của Greiner và

Konietzny (2006), phytase có nguồn gốc từ nam, vi sinh vật thì có hoạt tính tốt hơn sovới phytase có nguồn sốc từ thực vật do khả năng chịu đựng được nhiệt độ cao vakhoảng pH hoạt động rộng, nhưng tốt nhất vẫn là phytase có nguồn gốc từ nấm Một

số loài thực vật như lúa mì, lúa mạch chứa rất nhiều phytase nội sinh, do phổ hoạt

động của pH hẹp nên hoạt lực phytase từ thực vật kém hiệu quả hơn so với phytase từ

vi sinh vật Hoạt lực cua phytase từ thực vật không én định va giam khi pH trén 7,5 vadưới 4, trong khi đó phan lớn các phytase từ vi sinh vật tương đối 6n định ở các giá tri

pH trên 8 và dưới 3 Phytase thực vật không bền với nhiệt, hoạt lực của chúng có thể

bị giảm hoặc mất hoạt tính trong quá trình ép viên thức ăn Hiệu quả sinh học củaphytase thực vật chi bằng 40% so với phytase từ vi sinh vật (Weimin Wang và ctv.,2007) Do độ pH rộng và có tính ôn định với nhiệt cũng như hoạt tinh sinh học cao nên

các phytase từ vi sinh vật được ứng dụng rộng rãi trong thức ăn cho cá (Cao va ctv., 2007).

Hoạt lực của enzyme phytase được dién ta bằng các đơn vi phytase (được biểuthị dưới dạng FYT, FTU, PU hoặc U), tùy vào công ty sản xuất mà hoạt lực củaphytase được biểu thị bằng các đơn vị khác nhau Một đơn vi phytase được định nghĩa

là số lượng enzyme giải phóng 1 micromol Phospho vô cơ mỗi phút từ 0,0015 mol/ 1

natri phytase ở pH 5,5 và nhiệt độ 37°C (Simons và ctv., 1990).

Theo Liên minh Hóa học Ứng dụng va Tinh khiết Quốc tế và Liên minh Hóasinh Quốc tế (UPAC-IUB), enzyme phytase sử dụng trong thức ăn được chia thành 2

loại tùy thuộc vào vi trí thủy phan phytate của phytase: 3-Phytase (EC 3.1.3.8) giải

phóng P ở vị trí C3 và 6-Phytase (EC 3.1.3.26) bắt đầu giải phóng P ở vị trí C6 của

vòng myo-inositol hexaphosphate Enzyme phytase cũng có thể được phân loại theo

độ pH tối ưu phân giải phytate: phytase acid phân giải phytate ở khoảng pH bằng 5,con phytase base phân giải phytate ở khoảng pH tối ưu là 8 (Baruah và ctv., 2007b), đaphần enzyme phytase phân giải phytate từ vi sinh vật đều thuộc loại acid, trừ nhóm

Bacillus spp (Selle và ctv., 2007) Các phytase từ các vi sinh vật khác nhau cho hiệu quả sinh học khác nhau phụ thuộc vao pH của chúng (Onyango va ctv., 2005).

Cơ chế hoạt động của enzyme phytase: phytase sẽ phân cắt các phức hệphytate phá vỡ các liên kết phospho tạo ra các phân tử myo-inositol Mặt khác, phytasecũng sẽ phân cắt các liên kết chelate của phytate với tinh bột, protein, khoáng chất,amino acid và giải phóng các phân tử này, làm cho co thé dé dàng tiêu hóa và hap thu

Việc giải phóng P phụ thuộc vào pH của đường ruột cá (Baruah và ctv., 2004).

Hình 1.3: Cơ chế tác động của enzyme phytase (Baruah và ctv., 2004)

1.4 Ứng dụng của enzyme phytase trong thức ăn cá

1.4.1 Tác động của phytase đến khả năng sinh khả dụng của Phospho (P)

Phospho là thành phần quan trọng cấu tạo nên acid nucleic và màng tế bào, làthành phan chính cấu tạo nên cau trúc của mô xương và tham gia trực tiếp vào tất cảcác phản ứng sinh năng lượng của tế bảo, vì thế P là chất đinh đưỡng không thể thiếucho sự sinh trưởng, sinh sản ở cá va phát triển bộ xương (Cao và c#., 2007) Hàmlượng P trong nước là không đủ đề cá hấp thu và thức ăn là nguồn cung cấp P chủ yếu

để cá hấp thu dẫn đến tích tụ lượng P trong xương cá Trong báo cáo của Sugiura vàctv (2001) trên cá hồi vân cho thấy, khẩu phan ăn với hàm lượng tro thấp, sự hấp thu

P tăng lên rõ rệt tương ứng với mức phytase được bổ sung vào chế độ ăn, từ 27%(không bé sung phytase) tăng lên 90-93% (bổ sung phytase 4000 U/kg) Kết quả cũngtương tự ở các nghiên cứu trên cá rô phi, cá hồi vân và cá chép, khi bổ sung phytase

vào khẩu phần ăn có sử dụng protein thực vật đã giúp cải thiện việc sử dụng phytate-P

từ 25% lên 55% và giảm tổng lượng P vào môi trường từ 30% lên 50% (Wang và ctv.,

2007).

Đã có rất nhiều nghiên cứu báo cáo rằng, việc bổ sung phytase có thé giảiphóng phospho từ phức hệ phytate, cải thiện sự hấp thu và sử dụng phospho trên cá hồi

vân (Verlhac vd ctv., 2014), cá hồi Dai Tay Dương (Sajjadi và Carter, 2004), cá nheo

My (Li va Robinson, 1997) va ca tra (Lê Thanh Hùng và cfv., 2012) Nghiên cứu của

Schafer và Koppe (1995) đã kết luận rằng trong khẩu phan ăn của cá chép có bố sungprotein thực vật, việc b6 sung phytase ở mức 500 hoặc 1000 U/kg có thé thay thế 1,9g

P từ Dicalciphosphate (DCP) Bên cạnh đó, việc thay thế DCP bằng phytase cũng cóthé giảm nguy cơ nhiễm độc tố flourin do lượng P vô co đem lại, từ đó tăng cường tinh

an toàn của thức ăn.

1.4.2 Tác động của phytase đối với sự tăng trưởng của cá

Đã có nhiều thử nghiệm về ảnh hưởng của việc bố sung phytase vi sinh vậtkhác nhau lên hiệu suất tăng trưởng của những loài cá khác nhau (Wang va ctv., 2007).Tuy nhiên, các kết quả của nhiều nghiên cứu về hiệu suất tăng trưởng đối với việc bổsung phytase không tương đồng (Cao và ctv., 2007)

Theo báo cáo của Li M.H va Robinson E.H (1996), cá được cho ăn thức ăn có

bồ sung phytase với liều lượng 250 U/kg tiêu thụ nhiều thức ăn hơn, tăng trọng caohơn và hệ số chuyên đổi thức ăn (FCR) thấp hơn so với cá ăn với khẩu phần ăn không

bổ sung phytase Kết quả của Yu va Wang (2000) cho thấy, việc bổ sung phytase 1000

U/kg đã giúp cải thiện mức tang trọng trung bình lên 25% Nghiên cứu của Debnath va

ctv (2005b) cho thấy, khi bổ sung enzyme phytase đã gia tăng khả năng duy trì nănglượng ở vật nuôi Forster va ctv (1999) đã báo cáo rằng việc bố sung phytase vào chế

độ ăn đã giúp tăng cường khả năng tiêu hóa năng lượng rõ rệt từ protein hạt cải ở cá

nuôi Tỷ lệ sống của vật nuôi không có sự khác biệt khi bố sung enzyme phytase, điều

này chứng tỏ phytase không có tác dụng phụ khi bổ sung vào thức ăn (Robinson vàctv., 2002).

Tuy nhiên, đã có nhiều nghiên cứu công bố rằng không có sự khác biệt vềlượng thức ăn và hiệu quả tăng trưởng Cao và ctv (2007) đã báo cáo rằng không có sự

cải thiện về tăng trưởng giữa khau phan ăn có và không có bồ sung enzyme phytase ở

cá nheo Mỹ nuôi trong ao Điều này có thể do sự sai khác trong công thức thức ăn,

kích cỡ cá, loài cá nuôi và các yếu tố như pH, nhiệt độ cũng có thể ảnh hưởng đến hoạt

động của enzyme phytase.

1.4.3 Tác động của phytase đối với việc tiêu hóa protein và acid amin

Một số nghiên cứu đã công bố việc bổ sung phytase vào thức ăn có bổ sungprotein thực vat đã làm tăng kha năng tiêu hóa protein của vật nuôi Nhờ bổ sung

enzyme phytase ngoại sinh đã làm tăng khả năng sử dung protein ở cá chép (Schafe va

ctv., 1995), cá hồi Đại Tay Dương (Stokebakken và ctv., 1998; Sugiura và ctv., 1998a),

cá chẽm Châu Âu (Oliva-Teles và ctv., 1998), cá rô phi sông Nile (Heindl, 2002) bang

cách thủy phân phức hệ phytate-protein Theo Lie và ctv (1999), việc b6 sung phytase

500 FTU/kg vào khẩu phần ăn của cá chép đã giúp cải thiện tỷ lệ tiêu hóa protein thôlên 6,6% Việc bố sung phytase từ đậu nành vào khẩu phần ăn của cá hồi Đại TâyDương đã giúp cải thiện hiệu qua sử dụng protein, ADC va khả năng hap thu Ca, Mg,

Zn, P (Storebakken va ctv., 1998; Vielma va ctv., 1998,2000) Tương tự, nghiên cứu

của Bransden và Carter (1999) bổ sung phytase đậu nành vào chế độ ăn của cá vẹt, cáRhombosolea tapirina làm tăng khả năng tiêu hóa nitơ và khoáng chat Tỷ lệ tiêu hóa

ở cá hồi vân tăng lên đáng ké khi cho ăn với khâu phan ăn có bô sung phytase 2000

FTU/kg (Vielma và ctv., 2001).

Tuy nhiên, một số nghiên cứu cho thay không có sự cải thiện tiêu hóa proteinkhi sử dung phytase trong thức ăn Kết quả nghiên cứu của Prendergast và crv (1994)

và Teskeredzic và ctv (1995) cho thấy, việc bé sung enzyme phytase vào khẩu phần

thức ăn có chứa protein thô từ hạt cải không cải thiệu hiệu quả sử dụng protein ở cá

hồi vân Kết quả này cũng tương tự ở nhiều nghiên cứu trên cá hồi vân (Lanari vẻ ctv.,1998), cá hồi Đại Tây Dương (Storebakken vd ctv., 1998) và cá vược sọc (Papatryphon

và ctv., 1999) Báo cáo của Riche và ctv (2001) cho thấy rằng cá rô phi sông Nileđược cho ăn thức ăn có bé sung và không có phytase đều không có sự khác biệt về

việc sử dụng protein, song hàm lượng methionine va lysine có sẵn giảm.

10

1.4.4 Tác động của phytase đến hiệu quả sinh khả dụng của các chất dinh dưỡng

khác

Việc bồ sung phytase có thể thủy phân phytate và gia tăng hàm lượng khoáng

chat trong huyết tương, xương va cơ thể (Jackson và ctv., 1996; VanWeerd và ctv.,

1999; Papatryphon va Soares, 2001; Debnath và ctv., 2005b; Liebert và Portz, 2005).

Nghiên cứu của Yan và Reigh (2002) về việc bổ sung phytase ở mức 1000 FTU/kgvào khẩu phần ăn của cá nheo Mỹ đã làm tăng đáng kể hàm lượng Ca, Mg, Mn trongxương cá, tương tu, bổ sung phytase ở mức 8000 FTU/kg thức ăn đã làm tăng đáng kểkhả năng sinh khả dụng của Zn trong tự nhiên Thử nghiệm trên cá hồi vân cho thấyviệc bố sung phytase làm tăng hiệu quả hap thu Ca, Mg, Cu, Sr và Zn trong thức ăn sử

dụng bột đậu nành có lượng tro thấp (Sugiura và ctv., 2001)

Baruah và ctv (2005) đã tiến hành thí nghiệm trên cá rô-hu giống bằng việc bổ

sung enzyme phytase ở mức 0; 250; 500; 750; 1000 FTU/kg thức ăn Kết quả ghi nhận

ở các nhóm bồ sung phytase cho tỷ lệ tro/xương và Ca/P trong xương cao hơn so vớinhóm đối chứng Schäfer va crv (1995) quan sát thay rằng khi cho cá ăn thức ăn có bốsung enzyme phytase sẽ làm giảm 30% lượng P bai tiết ra môi trường so với chế độ ăn

bổ sung monocalcium phosphate Theo báo cáo của Nwanna và ctv (2005) cho thayviệc bồ sung phytase vào chế độ ăn sử dụng đậu tương thô trên cá trê phi ở mức 8000FTU/kg thức ăn không anh hưởng đến tăng trưởng, Mg va Zn nhưng cải thiện hệ sốchuyên đôi thức ăn (FCR) và P, Ca, Mn trong cơ thé cân bằng

1.5 Nhu cầu phospho trong khẩu phần ăn của cá

Phospho (P) là một khoáng chất quan trọng đối với các loài động vật thủy sản,đặc biệt là cá P là thành phần chính của mô xương và tham gia vào một loạt các quátrình trao đôi chất bao gồm biến đổi năng lượng, tính thấm của màng tế bào và mã hóa

di truyền (Lovell, 1989) Theo V Kumar và ctv (2011), phospho là thành phần khôngthé thiếu của ATP, acid nucleic, nucleotide, phospholipid, protein và là thành phan cautạo chính của nhiều co-enzyme Cac hợp chat này khi phan ứng sẽ giải phóng nănglượng của tế bào, sự phân chia và tăng trưởng của tế bao, có vai trò trong việc vậnchuyền và chuyền hóa chất béo, cũng như trong việc hấp thụ và sử dụng carbohydrate,axit béo và protein Vì vậy P là một chất dinh dưỡng cần thiết cho sự tăng trưởng, pháttriển bộ xương và sinh sản ở cá (Asgard và Shearer, 1997) Cá có thể hấp thu các

khoáng chất qua mang, qua đường tiêu hóa Tuy nhiên, hàm lượng phospho trong

11

nước khá thấp, nên cá cần bé sung P từ nguồn thức ăn dé phục vụ cho nhu cau tăngtrưởng (NRC, 1993) Trong báo cáo của NRC (1993) và Kaushik (2005) nhu cầu Ptrong khâu phần ăn của hầu hết các loài cá thay đổi từ 0,4% đến 0,9%, tùy thuộc vào

từng loài cá Các nguyên liệu có nguồn gốc protein thực vật chứa hàm lượng P ít hơn

bột cá, vì vậy việc thay thế bột cá bằng protein thực vật sẽ giúp giảm thải lượng

phospho ra ngoài môi trường.

Theo Lall va Lewis-McCrea (2007) thì sự thiếu hụt P gây ra các triệu chứng vềxương như gai cong, xương mềm trên cá hồi Đại Tây Dương, cong vẹo cột sống ở cátuyết và cá bơn Hàm lượng P trong cơ thể tăng theo kích cỡ cá đã được báo cáo trên

cá hồi Đại Tây Duong (Shearer va ctv., 1994) và ca hồi vân (Shearer, 1984) Báo cáo

của Lovell (1979), khoảng 85 — 90% tổng số phospho trong cơ thé cá được tích tụ

trong xương và vảy, trong khi 10 — 15% lượng phospho còn lại cấu thành máu và mô,

hiện diện ở dang phospho hữu cơ, tức là ATP, phospholipid, axit deoxyribonucleic và

coenzyme Lê Thanh Hùng (2008) đã báo cáo rằng thức ăn thiếu canxi thường khônggây ảnh hưởng đến sinh trưởng của các loài cá, nhưng nếu thức ăn thiếu phospho sẽdẫn đến cá chậm tăng trưởng, hiệu quả sử dụng thức ăn thấp và ánh hưởng đến sự tạo

thành bộ xương của cá.

Bang 1.2: Nhu cau phospho ở các loài cá khác nhau (V Kumar và ctv., 2011)

Khoi Hiệu quả Nhu cau P

Các loài cá lượng cá sửdụng (g/kgthức NguồnP Tham khảo

khối lượng phân tử Trong tự nhiên, chúng được thay thế một phần bằng acetyl

4-O-methyl-D-glucuronosyl và arabinofuranosyl tạo thành cấu trúc polymer không đồngnhất Ở cây gỗ rắn, xylan có công thức O-acetyl-4-O-methylglucuron-oxylan Arabino-4-O-methylglucuroxylan được tìm thấy trong cây gỗ mềm, arabinoxylan rất điển hìnhtrong cây cỏ và thực vật bình thường khác Tác động của xylan về mặt cấu trúc vẫncòn chưa rõ ràng bởi những khó khăn trong việc tách chiết xylan từ nguyên liệu trong

tự nhiên mà không bị biến đổi hay mắt đi một số cau trúc ban đầu của xylan cũng như

sự liên kết của nó với các thành phần khác (Collins, 2005)

và là một trong số hợp chất polysaccharide quan trọng nhất trong tự nhiên (Biely,1993) Xylan chủ yếu tìm thấy trong cấu trúc thứ cấp của thành tế bào thực vật và tạothành pha giữa lignin và các hợp chất polysaccharide khác (Ohgren và ctv., 2007).Xylan cũng là một trong những polysaccharide phổ biến nhất trong các loài thực vậtthông thường, chiếm 30% tổng trọng lượng khô trong sinh khối thực vật nhiệt đới Với

13

cây gỗ mềm ở vùng ôn đới, xylan ít phổ biến hon và chiếm khoảng 8% tổng trọnglượng khô (Coughlan, 1993) Như vậy, xylan đã trở thành một những thành phần có

trong thức ăn chăn nuôi.

Tế bào thực vật Cấu tạo

Middle lamella

Secondary wall

Cytoplasm | Storage carbohydrates,

(Fincher và Stone, 1986; trích dẫn bởi Sinha ef a/., 2011).

Cấu trúc phân tử của arabinoxylan gồm một mach chính xylan với arabinofuranose (L-arabinose có 5 nguyên tử dạng vòng) được gắn ngẫu nhiên với cácđơn vi xylose bằng liên kết ơi hay ơi „3 trong suốt chiều dai chuỗi (trích

L-http://www.scientificpsychic.com).

14

Arabinoxylan dé dang hòa tan trong nước nóng có nhiệt độ khoảng 80°C, dễ

dang tách chiết và kết tủa trong dung dich ethanol (Cleemput và ctv., 1993; trích bởi

Vũ Thị Ngọc Nhung, 2012) Những đơn vi arabinose kết hợp với nước tạo thành hỗnhợp có độ nhớt cao như khối bột nhào (Durham, 1925; trích bởi Vũ Thị Ngọc Nhung,

2012).

1.7 Xylanase

Xylanase là một loại enzyme có tác dụng phân giải các polysaccharide mach

thang và phá vỡ các hemicelluloses — thanh phan chính của thành tế bào thực vật

(Ganguly và ctv., 2013) Enzyme xylanase có tên hóa học là endo-1,4-B-xylanase tham

gia thủy phân xylan cắt đứt liên kết f-1,4-glycoside giải phóng oligoxylose Tuynhiên, do cấu trúc của xylan rất phức tạp nên đề phân cắt nó hoản toàn cần một lượng

lớn enzyme xylanase (Polizeli và ctv., 2005).

Xylanase có nguồn gốc từ nhiều loài nam men, vi khuẩn, xạ khuân (Goswami

và Pathak, 2003) Trong đó, xylanase từ xạ khuẩn đã được Vũ Văn Lợi và ctv (2013)công bồ là có khả năng chịu nhiệt, chịu kiềm và không có hoạt tính cellulase

Cơ chế tác động của xylanase: Theo Collins (2005), sự phân hủy sinh học bộkhung cấu tạo nên xylan phụ thuộc chủ yếu vào hai lớp enzyme: enzyme endo-1,4-B-xylanase (EC 3.2.1.8), lớp enzyme này thủy phân liên kết 1,4-P-glucoside nối các

xylose Enzyme B-xylosidase (EC 3.2.1.37) — lớp enzyme nay thủy phân xylobiose va

xylooligosaccharide ngắn nhờ hoạt động của enzyme endo-xylanase Cac enzyme loại

mạch nhánh chang hạn như a — glucuronidase va a — L— arabinifuranosidase; va

15

enzyme esterase chang hạn như acetylxylan esterase và ferulyl và p — coumaroyl

esterase sẽ loại bỏ mạch nhánh acetyl và mạch nhánh phenol.

Hoạt lực của enzyme xylanase được diễn tả bằng đơn vị xylanase (U, XU,

AXU, FXU) Một đơn vị FXU được định nghĩa là lượng enzyme giải phóng 7,8

micromol đường xylose từ arabinoxylan của lúa mì trong một phút tại giá trị pH bằng

6 và nhiệt độ 50°C (Sulhattin Yasar, 2009).

16

Chương 2

VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu

2.1.1 Thời gian nghiên cứu

Thời gian thực hiện nghiên cứu từ ngày 10/11/2021 đến ngày 21/01/2022

2.1.2 Địa điểm nghiên cứu

Đề tài nghiên cứu được thực hiện tại Trại thực nghiệm Thủy sản, Khoa Thủysản, Trường Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chi Minh

2.2 Vật liệu nghiên cứu

2.2.1 Dụng cụ và hóa chất

- Giai 2x1,5x1,5 (dai x rộng x cao)

- Keo đựng và vợt vớt thức ăn thừa

Cá giống sau khi vận chuyên về được thả vào giai trong ao và dưỡng cá khoảng

2 tuần dé cá thích nghi với điều kiện môi trường và 6n định sức khỏe Sau đó, chonnhững cá khỏe mạnh, đồng đều, bội lội linh hoạt, không bị di hình, di tật để bồ trí thí

- Chỉ tiêu vi sinh: EF coli < 10 CFU/g; Salmonella không phat hiện trong 25g.

San phẩm được bao quản noi thoáng mát, tránh tiếp xúc trực tiếp với ánh sáng

mặt trời.

Liều lượng sử dung sản phẩm trong thí nghiệm (đơn vi enzyme):

- Liều 150g sản pham/1 tan thức ăn, chứa:

+ Phytase: > 750 FTU/kg thức ăn.

+ Endo-1,4-B-xylanase: > 840 TXU/kg thức ăn.

- Liều 200g san phâm/1 tan thức ăn, chứa:

+ Phytase: > 1000 FTU/kg thức ăn.

+ Endo-1,4-B-xylanase: > 1120 TXU/kg thức ăn.

2.2.4 Thire an thi nghiém

Thức ăn sử dung trong thi nghiệm có ham lượng protein thô là 27% va lipid là 5% Các công thức thức ăn trong thí nghiệm được trình bày trong Bảng 2.1 Thức ăn

được gia công bởi nhà máy chế biến thức ăn thủy sản thuộc Công ty Cé phan Go Dang

—GODACO Seafood, Vĩnh Long.

Thức ăn sử dung trong thi nghiệm ở dạng viên nổi (kích cỡ 2 mm), phù hợp vớikích thước miệng cá thí nghiệm Thức ăn sau khi gia công được vận chuyên về lưu trữ

trong kho thức ăn tại Trại thực nghiệm Thủy sản, Khoa Thủy sản, Trường Đại học

Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh Sau đó, thức ăn sẽ được phun bồ sung sản phamNatuphos E 5000 Combi L và dầu nành phù hợp với từng nghiệm thức thí nghiệm

18

Thức ăn được trộn với sản phẩm thí nghiệm theo định kỳ, cụ thé thí nghiệm tiếnhành với 4 nghiệm thức (NT), thì sẽ cân 10kg thức ăn/NT/lần Ở NT không bổ sung

sản pham thí nghiệm sẽ được phun trộn hoàn toàn với 2% nước, các NT bổ sung sản

phẩm thí nghiệm, trước khi trộn với thức ăn thì sản phẩm thí nghiệm sẽ được hòa tanvới 2% nước, lắc đều (nhằm đảm bảo thức ăn được bao phủ đều sản phẩm thí nghiệm),

dé khô 30 phút và áo với 0,5% dầu nành Sau khi trộn, thức ăn sẽ được bảo quản ở nơithoáng mát, khô ráo, tránh nắng nóng và nhiệt độ cao

Bảng 2.1: Công thức thức ăn của các nghiệm thức trong thí nghiệm

Nguyên liệu

HI H2 H3 H4(%)

Đề tài thí nghiệm được bồ trí trong ao có diện tích 600 m’, với độ sâu mực nước

khoảng 1,2 m tại Trại thực nghiệm Thủy sản, Khoa Thủy sản, Trường Đại học Nông

Lâm Thành phố Hồ Chí Minh

19

4 > 12 13 H3 H3 HI H2

3 6 11 14H4 H2 H4 H4

2 7 10 15

HI HI H2 HI

1 8 9 16H2 H4 H3 H3

Hình 2.2: Sơ đồ bồ trí thí nghiệm

Thí nghiệm tiến hành trong thời gian 10 tuần và được bố trí theo kiểu hoàn toànngẫu nhiên với 4 NT, mỗi NT được lặp lại 4 lần Trước khi tiễn hành thí nghiệm,chúng tôi tiến hành tháo cạn nước trong ao, sau đó bón vôi dé diệt tạp và mầm bệnh,phơi ao và cấp nước vảo Nguồn nước được lấy vào từ hồ đất cạnh Trại Thực nghiệmThủy sản qua lưới lọc, sau đó tiến hành xử lý nước trước khi bồ trí thí nghiệm

Thí nghiệm được bố trí với 16 giai (kích thước: 2 x 1,5 x 1,5 m) với mật độ cá

là 60 con/giai Thức ăn trong thí nghiệm được ký hiệu như sau:

e HI: Đối chứng dương - có bồ sung DCP, không bổ sung enzyme Mục dich

là cung cấp P vô cơ vào thức ăn

e H2: Đối chứng âm - không bồ sung DCP và không bồ sung enzyme

e H3: bồ sung enzyme với liều lượng 150g san pham/1 tan thức ăn

e H4: bé sung enzyme với liều lượng 200g sản pham/1 tan thức ăn

Sau khi bố trí, ngưng cho cá ăn khoảng 3 ngày rồi bắt đầu cho ăn Thức ăntrong thí nghiệm sẽ được đong vào các hủ riêng biệt có đánh số thứ tự các giai đượcphân bó theo từng NT dé dé dàng cho việc cho ăn và ghi chép số liệu Cá được cho ăn

2 cử/ngày vào lúc 8 giờ và 16 giờ, cho ăn lượng tối đa Mỗi cử cho cá ăn khoảng 1

tiếng 15 phút, sau đó tiến hành thu lượng thức ăn thừa vào các hủ chứa, cân và ghichép lại số liệu Trong quá trình thí nghiệm, nếu phát hiện cá chết thì vớt cá ra và cânlại trọng lượng, ghi lại số cá chết ở mỗi giai

20

2.3.2 Các chỉ tiêu môi trường theo dõi

Trong quá trình thí nghiệm, các chỉ tiêu như pH, nhiệt độ, hàm lượng oxy hòa

tan (DO) được do 2 lần/ngày bằng thiết bị chuyên dụng và hàm lượng NH: được dovào ngày thứ 3 và thứ 6 trong tuần (mục đích dé kiểm soát được sự biến động của NH3

và hạn chế tối đa việc nhầm lẫn ngày đo) bang test sera Đức

Trong thời gian thí nghiệm, định kỳ diệt khuẩn và ký sinh trùng trong ao 1lần/tuần, nhằm hạn chế sự phát triển của mầm bệnh, ảnh hưởng đến sức sinh trưởng

cá để mô lay gan và mỡ, mục đích là so sánh hệ số gan/thé trong (hepato — somaticindex), mỡ/thê trong (adipose — somatic index) của cá giữa các nghiệm thức Sau khi

mô gan, mỡ thì chúng tôi sử dụng 10 con cá đó hap chín bỏ thịt lay xương cá dé phân

tích Ca, P và hàm lượng tro tại phòng phân tích dinh dưỡng Viện Nghiên cứu Nuôi

trồng Thủy sản 2, Thành phố Hồ Chí Minh Bắt thêm 5 con cá, dem đi sấy khô dé phân

21

tích thành phần sinh hóa nguyên con với mục đích so sánh sự khác nhau giữa các

nghiệm thức.

2.3.4 Các chỉ tiêu theo dõi cá thí nghiệm

- Tăng trọng trung bình (Weight gain):

- Hệ số chuyển đối thức ăn (Feed Coversion Ratio):

FCR = Lượng thức ăn sử dụng / (W2 — Wi + Wa)

- Lượng ăn tuyệt đối (Feed Intake):

FI = Tổng lượng thức ăn sử dụng / (Tổng số cá x số ngày thí nghiệm)

- Hệ số gan — thé trọng (Hepato — somatic index):

HIS = (Khối lượng gan/ Khối lượng cá)x100 (%)

- Hệ số mỡ - thé trong (Adipose — somatic index):

ASI = (Khối lượng mỡ / Khối lượng cá)x100 (%)

Trong đó:

W¡: Khối lượng ban dau thí nghiệm

W2: Khối lượng cuối thí nghiệm

Ws: Khối lượng cá chết

T: Thời gian thí nghiệm

Phương pháp phân tích thành phần sinh hóa:

- Dam thô (crude protein): sử dụng phương pháp Kjeldahhl.

- Béo thôi (crude lipid): sử dụng phương pháp Soxxhlet.

- Tro thô (ash): mẫu được nung ở 500-550°C trong 3-4 giờ.

- Xơ thô (cude fiber): sử dụng phương pháp Henneberg và Stoman.

2.4 Phương pháp xử lý số liệu

Số liệu được tính toán và xử lý trên phần mềm Excel 2010 Xử lý thống kê phântích phương sai một yếu tổ (one - way ANOVA) và so sánh đối chiếu sự khác biệt giữa

22