CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC PHẨM
ĐỀ TÀI : THỰC VẬT CHUYỂN
GENE CHỐNG ĐỘC TỐ
Trang 2III TV chuyển gen
kháng độc tố
IV Kết luận
Trang 3I Giới thiệu chung
Ngày nay,trên thế giới sự phát triển của công nghệ sinh học đã trạo ra nhiều loại cây trồng vật nuôi mang nhiều đặc tính vượt trội hơn các giống truyền thống cả về về năng suất và chất lượng
Kể từ năm 1984, bắt đầu tạo cây trồng chuyển gen và đến nay có những bước tiến lớn Nhiều cây trồng quan trọng chuyển gen ra đời như lúa, ngô, lúa mì, đậu tương, bông, …
Trang 4I Giới thiệu chung
2 Ưu nhược điểm
Ưu
điểm
- Tăng sản lượng
- Giảm chi phí sản xuất
- Tăng lợi nhuận nông nghiệp
- Cải thiện môi trường
Trang 5I Giới thiệu chung
3 Tình hình trồng cây chuyển gen
Trang 6I Giới thiệu chung
Diện tích các loại cây trồng chuyển gen trên thế giới
Trang 7II Đôi nét về thực vật chuyển gen
1 Nguyên tắc trong công nghệ chuyển gen ở thực vật
Không phải toàn bộ tế bào đều thể hiện tính toàn năng (totipotency)
Các cây khác nhau có phản ứng không giống nhau với sự xâm nhập của một gen ngoại lai
Cây biến nạp chỉ có thể tái sinh từ các tế bào có khả năng tái sinh và khả năng thu nhận gene biến nạp vào genome
Mô thực vật là hỗn hợp các quần thể tế bào có khả năng khác nhau
Thành phần của các quần thể tế bào được xác định bởi loài, kiểu gene, từng cơ quan, từng giai đoạn phát triển của mô và cơ quan
Trang 8Thành tế bào ngăn cản sự xâm nhập của ADN ngoại lai Vì thế, cho đến nay chỉ có thể chuyển gen vào tế bào có thành cellulose thông qua
Agrobacterium, virus và bắn gene hoặc phải phá bỏ thành tế bào để chuyển gene bằng phương pháp xung điện, siêu âm và vi tiêm
Khả năng xâm nhập ổn định của gene vào genome không tỷ lệ với sự
biểu hiện tạm thời của gene
Các ADN (trừ virus) khi xâm nhập vào genome của tế bào vật chủ chưa đảm bảo là đã liên kết ổn định với genome
Các ADN (trừ virus) không chuyển từ tế bào này sang tế bào kia, nó chỉ
ở nơi mà nó được đưa vào
II Đôi nét về thực vật chuyển gen
1 Nguyên tắc trong công nghệ chuyển gen ở thực vật
(tiếp)
Trang 9II Đôi nét về thực vật chuyển gen
nhờ Agrobacterium tumefaciensChuyển gen gián tiếp nhờ virus
Chuyển gene bằng súng bắn geneChuyển gene bằng xung điệnChuyển gene bằng vi tiêm Chuyển gene phương pháp siêu âm Chuyển gene bằng phương pháp hóa học Chuyển gene trực tiếp qua ống phấn
Trang 10II Đôi nét về thực vật chuyển gen
1 Chọn lựa đoạn ADN cần thiết
4 Bổ sung enzyme nối ligase
6 Theo dõi và chọn lọc
Trang 11II Đôi nét về thực vật chuyển gen
4 Các hướng nghiên cứu
Kháng
vi khuẩn gây bệnh
Làm chín chậm nông sản
Làm chín chậm nông sản
Kháng côn trùng phá hoại
Kháng côn trùng phá hoại
Cải tiến protein, sinh pr mới
Cải tiến protein, sinh pr mới
Kháng chất diệt cỏ
Trang 12III Thực vật chuyển gen kháng độc tố
1 Các loại thuốc diệt cỏ
Thuốc diệt cỏ chọn lọc:
Atrazin: Làm ngừng sự vận
chuyển điện tử trong hệ thống
quang hóa II ở lục lạp Ngô không
mẫn cảm với atrazin
Bromoxinil: Đình chỉ sự vận
chuyển điện tử trong hệ thống
quang hóa II của Lạp Thể Làm
chết cây hai lá mầm
2,4-D: Auxin tổng hợp này gây
hại cho sự phát triển của cây 2 lá
mầm, phần lớn cây một lá mầm
không mãn cảm
Thuốc diệt cỏ không chọn lọc :
Glyphosate ( Round upR): Làm ngừng hoạt động enzyme EPSPsynthase và qua đó kìm hãm sự tổng hợp các amino acid thơm
Phosphinothricin (PPT): Còn gọi là basta
là đồng phân dạng L của tổng hợp glufosinate, gây độc do tích lũy NH3.
Trang 13III Thực vật chuyển gen kháng độc tố
2 Cơ chế tác động của thuốc diệt cỏ
Nhóm thuốc diệt cỏ Glyphosate : Thuốc trừ cỏ nhóm này thuộc nhóm thuốc có phổ rộng, có tên thương mại là Round Up Nó trừ cỏ bằng cách vô hiệu hóa enzyme EPSPS và tổng hợp diệp lục tố trong lục nạp EPSPS là loại enzyme giúp cây tổng hợp các amino acid vòng như tyrosine, phenylalanine và tryptophan Cỏ dại bị chết vì thiếu các amino acid thiết yếu
Nhóm thuốc diệt cỏ Phosphinotricin: Nhóm thuốc diệt cỏ này có tên thương mại là Bialaphos và Basta trong đó co chất L-PPT ngăn cản men Glutamine syntherase tổng hợp glutamine dẫn đến tích lũy ammonia quá nhiều gây ngộ độc cho cây , cây sẽ bị chết
Thuốc diệt cỏ nhóm Imidazolinone: Nó có tên thương mại hiện đang lưu hành tại Việt Nam là Imazapic,Imasapyr và Imazathapyr Nhóm này chuyên trừ cỏ Lúa Nhóm chất diệt cỏ này ức chế sự hoạt động của men acetohydroxyacid synthase (AHAS) tham gia vào quá trình sinh tổng hợp amino acid như valine , leucine, isoleucine Do đó khi phun thuốc lên thực vật quá trình tạo protein bị xáo trộn dẫn đến sự hình thành không bình thường của DNA cũng như sự phát triển của
tế bào nên cỏ không thể phát triển
Trang 14Có nhiều loại gene kháng khác nhau cho mỗi nhóm thuốc diệt cỏ, ở đây ta chỉ
đề cập đến 3 loại gene phổ biến để tạo cây kháng thuốc diệt hiện nay
Với nhóm thuốc diệt cỏ Glyphosate : enzyme kháng của nhóm này có tên
là Roundup ready, gene này sản xuất ra enzyme EPSPS đột biến, nó vẫn
có khả năng tổng hợp các amino acid vòng nhưng kháng lại thuốc diệt cỏ Round Up Gene này thường được phân lập từ vi khuẩn Agrobacterium
chủng CP4
Với nhóm thuốc diệt cỏ Phosphinotricin: Một trong những gen kháng
thuốc diệt cỏ Phosphinotricin là gen Bar Gene Bar mã hóa cho enzyme
N-acetyltransferase (PAT) được phân lập từ chủng Streptomyces
hygroscopicus HP632 Ngoài ra còn có gene kháng PPT, gene này vô hiệu hóa men chất L-PPT có trong thuốc diệt cỏ giúp cây trồng vẫn sống sau
khi phun thuốc diệt cỏ Phosphinotricin
Với nhóm Thuốc diệt cỏ nhóm Imidazolinone: enzyme kháng
Imidazolinone có tên là axetolactat synthetaza
3 Một số gen kháng thuốc diệt cỏ
III Thực vật chuyển gen kháng độc tố
Trang 15Tìm hiểu về quá trình chuyển gene tạo cây ngô kháng thuốc
diệt cỏ (GA21).
•
4 Quá trình chuyển gen tạo cây kháng thuốc diệt cỏ
Ngô GA21 là ngô biến đổi gene biểu thị enzyme mEPSPS, EPSPS là một enzyme quan trọng trong con đường acid
Shikimic Cây ngô được biến nạp với gene biến đổi mepsps (GA21) có khả năng tổng hợp protein mEPSPS để chống chịu sự gây hại của thuốc diệt cỏ chứa glyphosate.Đột biến gene này được đưa vào cây tạo khả năng chống chịu chế phẩm thuốc diệt cỏ chứa hoạt chất glyphosate
Trang 16• Phương pháp chuyển gene: ngô GA21 được tạo ra bằng phương pháp bắn
gene, sử dụng các tế bào huyền phù làm mô đích bắn
• Vecto sử dụng: Plasmid pDPG434 được sử dụng để tạo dòng ngô GA21
qua biến nạp bằng súng bắn gene
• Gene dùng trong DNA tái tổ hợp: là gene epsps cải biến (mepsps), có kích thước 1,3 kb Gene mepsps mã hóa cho protein EPSPS ở cây ngô biến đổi
gene, chống chịu glyphosate.Gene này được lấy từ ngô dạng dại chứa các
trình tự đột biến tại vị tri acid amin thứ 102 ( threonine tới isoleucine) và
106 (proline tới serine)
III Thực vật chuyển gen kháng độc tố
Trang 17• Người ta thực hiện các kỹ thuật chuyển gene để đưa gene mepsps vào
plasmid pDPG434 tạo DNA tái tổ hợp.
Các bước tạo DNA tái tổ hợp
III Thực vật chuyển gen kháng độc tố
Trang 18• Tiếp theo người ta dùng súng bắn gene đưa DNA tái tổ hợp này vào tế bào
• Sau đó tách các mô, tế bào và nuôi cấy
invitro để tái sinh cây
III Thực vật chuyển gen kháng độc tố
Trang 19III Thực vật chuyển gen kháng độc tố
Ruộng ngô bình thường khu phun thuốc trừ cỏ
bị héo rũ còn ngô chuyển gen vẫn tốt
Trang 20III Thực vật chuyển gen kháng độc tố Thống kê cây chuyển gen kháng thuốc diệt cỏ đươc đăng kí tại EU
Chiếm đa số trong các loại cây GM được đăng ký EU là các loại cây GM chịu
thuốc diệt cỏ: 34 loại cây GM
kháng được thuốc diệt cỏ glyphosate, 24 loại kháng được thuốc diệt cỏ glufosinate
Trang 215 Một số thực vật chuyển gen kháng thuốc diệt cỏ
III Thực vật chuyển gen kháng độc tố
Cải
thầu
dầu
Đậu tương
Trang 22IV Kết luận
• Cây trồng biến đổi gen có khả năng chống chịu với thuốc trừ cỏ không chỉ làm giảm việc dùng thuốc diệt cỏ mà còn làm cho đất và nước sạch hơn, thúc đẩy việc áp dụng phương pháp canh tác không làm đất để giảm thiểu
sự xói mòn đất và hiện tượng thải ra carbon làm biến đổi khí hậu vào khí quyển
• Hiện nay, có những bằng chứng tốt cho thấy chẳng những không tăng sử
dụng của các chất diệt cỏ, mà sự điều chỉnh các cây trồng chuyển gen
kháng chất diệt cỏ được cung cấp cho nông dân đã cho kết quả giảm sử dụng glyphosate tới 33% trên các giống đậu tương Roundup Ready, và
giảm sử dụng glufosinate khoảng 20% đối với giống canola Liberty Link