Xây dựng một số bài thực hành trong học phần thực hành phân tích công cụ cho sinh viên ngành sư phạm hoá học nhằm Đáp Ứng chương trình giáo dục phổ thông 2018

trong chương trình giáo dục phổ thông 2018 + Mộtbài áp dụng phố khối lượng, + Một bài áp dụng phố hồng ngoại, - Điều chỉnh, bổ sung ti liệu Thực hành phân tích công cụ bao gồm 2 bài thự

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐẢO TAO

TRUONG DAI HQC SU PHAM THANH PHO HO CHi MINH

DE TAI KHOA HQC VA CONG NGHỆ CAP TRUONG XÂY DỰNG MỘT SỐ BÀI THỰC HÀNH TRONG HQC PHAN

*THỰC HÀNH PHÂN TÍCH CÔNG CỤ” CHO SINH VIÊN NGANH SU PHAM HOA HQC NHAM DAP UNG

MA SO:

Cơ quan chủ trì: Khoa Hoá học ~ Trưởng Dại học Sư phạm Tp, HCM

Chủ nhiệm để tài: Nguyễn Ngọc Hưng

THANH PHO HO Cli MINH — 12/2023

- BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRUONG DAI HQC SU PHAM THÀNH PHO HÒ CHÍ MINH

ĐÈ TÀI KHOA HỌC VA CONG NGHE CAP TRUOD

XÂY DỰNG MOT SO BAI THUC HANH TRONG HOC PHAN

“THYC HANH PHAN TiCH CONG CY)” CHO SINH VIEN NGANH SU PHAM HOA HQC NHAM DAP UNG CHUONG TRINH GIAO DUC PHO THONG 2018,

'NHỮNG NGƯỜI THAM GIA THỰC HIỆN ĐÈ TÀI

Đơn vị công tác và lĩnh vục — Nội dung nghiên cứu

1 Nguyễn Xuọc Hụng | K9? Hoioe— Tường “Chủ nhiệm để ải Shyện Ngục HE | D hiếp, TpHCM, và thực hiện để tải 2.Huỳnh Thị Nhân — | tình Haá heo” Trưởng ut 'ĐHSP, TPHCM “Thực hiện đề tài ve

3 Nguyén Minh Thai | Kho# Hos hee Trưởng ĐHSP, TPHCM “Thục hiện đề tải

4 Nguyễn Phan Khoa Hoa học = Trường “Thục hiện đề li

MỤC LỤC

MỤC LỤC

DANH MỤC VIẾT TÁT,

DANH MỤC HÌNH ẢNH

DANH MUC BANG BIEU

THONG TIN KẾT QUÁ NGHIÊN CỨU

SUMMARY

MO DAU

Chương Ì TÔNG QUAN

1 Giới thiệu chung

3 Định lượng ibuprofen trên thiết bị nHPLC,

Chương 2 THỰC NGHIỆM

2 1.Hoá chất Thiếtbị

.22: Quy trình xúc định phổ hồng ngoại trên thiết bị ET-IR của hãng Jasco 2.3, Khio sat quy tinh định lượng trên thiết bị ufIPL.C-MS

2.4, Khao sát quy trình định lượng trên thiết bị uHPLC-PDA

24,1 Khảo sát điều kiện định lượng

2.4.2 Thim định quy trình định lượng ibuprofen trong viên nén

`5 Thực nghiệm sư phạm,

'2.6 Xử lí thông kê số liệu thực nghiệm

Chương 3 KÉT QUÁ THẢO LUẬN

3.1 Kết quả tối ưu guy trình thực hành đo phổ ET-IR,

3.2 Kết quả khảo sát quy trình định lượng ibuprofen trên uHPLC-MS

3 3 Kết quả khảo sắt quy trình định lượng ibuprofen rong viên nền

3.3.1 Kết quả khảo sát điều kiện định lượng ibuprofen trên uHPLC-PDA

3.32 Thim định quy trình định lượng ibuprofen trong viên nén 3.4 Thực nghị

“Chương 4 KẾT LUẬN VÀ KIÊN NGHỊ

TÀI LIỆU THAM KHẢO

Trang?

DANH MYC VIET TAT

Fourier Transformation InfraRed spectrum Acetonitile

Thuprofen

AU Đơn vị độ hp thụ

(Absorbance Unit)

Sic ki long higu nang cao

HPLC (High Performance Liquid Chromatography) : uipLc | Si Kilong higu ning si

(Ultra High Performance Liquid Chromatography) Lop “Giới hạn phát hiện

"Độ lệch chuan wong đổi

BSP (Relative Standard Deviation)

số tín hiệu trên nhiễu

SN Tỷ số tín hiệu tr

(Signal to Noise ratio)

usp Dược điền Hoa Kỳ

(United States Pharmacopeia)

Trang 3

Sơ đồ cầu tạo khối hệ thống uHPLC

Sơ đồ cấu tạo đầu đò PDA

Sắc kí đồ 3 chiều

SQ Detector 2 MS

Công thức cầu go eta IBU

Phổ khối lượng của IBU

Quy trinh Khảo sát hiệu quả chiết IBU từ bột thuốc Phổ FT-IR của mẫu dược phẩm chứa hoạt chất aspiin Sắc kí đỗ của mẫu trắng và các dưng dịch chuỗn IBU Phương trình hồi quy

Sắc kí để của dụng dịch IBU ở các tốc độ đồng khác nhau Sắc kí đồ của dung dịch dịch IBU ở các thể

"Phổ hấp thụ UV của IBU 10 mg:mL ' ở 0,43 phút và 0,40 phút Sắc kí đỗ chuẩn của dung dịch IBU chuẩn 10 mg:mL

“Quy tình chuẩn bị mẫu phân ích

Đường chuẩn của IBU,

hiêm khác nhau,

Hình 3.10 Sắc kí đồ của mẫu trắng và chudn IBU 0,001 mạ-mL

Trang 4

DANH MỤC BẰNG BIÊU

Bang 1.1 So sinh điều kiện sắc kí theo USP 40 va Thermo Scientific: Bảng 2.1 Danh mye hoa chit cho bai thực hành sắc Bảng 22 Danh mục các đại lượng thông kế được sử dụng Bảng 3.1 Kết quả quy kết các nhóm chức chính eva phd FT-IR Bảng 32 Kết quả khảo sát th tích iêm mẫu

Bang 3.3, Kết quả Khảo sát tốc độ dòng

Bang 34 Kết quả khảo sát ính tương thích của hệ thông

Bảng 3.5 Kết

tết quả khảo sắt hiệu quả chiết mẫu

Bảng 3.10 Kết quả khảo sát tính tương thích hệ thông

Bảng 3.1 Kết quả khảo sắt tính đặc hiệu

Bảng 3.13 Giá trị ín hiệu trên nhiễu của IBU ở các nồng độ khác nhan Bảng 3.14 Kết quả xác định độ lp lại

THONG TIN KÉT QUÁ NGHIÊN CỨU

bE TAI KHOA HQC VÀ CÔNG NGHỆ CAP TRUONG

‘Ten đề tài: Xây dựng một số bài thực hành trong học phần “Thực hành phân tích

sông cụ” cho sinh viên ngành Sư phạm Hoá học nhằm đáp ứng chương trình giáo dục phổ thông 2018

~ Xây đựng hai bi thực hành đáp ứng yê cầu của một bãi thí nghiệm: an toàn, lặp lạ

t, phù hợp thời lượng bài thực hành, minh hoạ tốt lí thuyết và đáp ứng nội dung

trong chương trình giáo dục phổ thông 2018

+ Mộtbài áp dụng phố khối lượng,

+ Một bài áp dụng phố hồng ngoại,

- Điều chỉnh, bổ sung ti liệu Thực hành phân tích công cụ bao gồm 2 bài thực

hành ở trên (bài 6, bài 9) va bai phân tích dựa trên thiết bị phổ hắp thụ nguyên từ

(bi 7, bài 8)

1 Nội dụng chính

~ Tối ưu hoá quy tình xác định phổ khối lượng của một chất hữu cơ quen thuộc

~ Tối ưu hoá quy trình xá định phổ ET-IR của một hợp chất quen thuộc

- Thử nghiệm quy trình trên các đối tượng sinh viên khác nhau,

~ Áp dụng các phương pháp xử li thông kê hiện đại để khảo sát độ chính xác và đội tải lặp của các quy trình phân tích

~ Điều chính, bộ sung tài liệu Thực hành phân tích công cụ

- Viết báo cáo,

3 Kết quả chính đạt được (khoa học, ứng dụng, đảo tạo, kính tế~xã hội):

~ Báo cáo tổng kết đề

~ 01 bài báo khoa học được chấp nhận đăng trên Tạp chí khoa học của trường Đại

học Sư phạm Thành phố Hỗ Chí Minh

~ Bồ sung ủi liệu Thực hành phản ích công cụ

~ Hướng dẫn 01 luận văn tốt nghiệp ia sinh viên và 01 để ti sinh viên NCKH

Trang 6

SUMMARY

Project Title: Build some practice exercises in the course “Laboratory experiments in instrumental analysis” for students of pedagogy chemistry to response the 2018 general education program

Code number: CS.2021.19.31

Coordinator: Nguyen Ngoc Hung

Implementing Institution: Department of Chemistry, Ho Chi Minh City University

2018 general education curriculum Two practice are:

+A practice that applies mass spectrometry,

+A practice that applies infrared spectrum,

= Adjusting, supplementing the Laboratory experiments in instrumental analysis, textbook including the two practice exercises above and one lesson based on atomic absorption spectrometry

4, Main contents:

= Optimize the mass spectrum determination process of organic substance,

- Optimize the IR spectrum determination process of basic compound

~ Test he process on undergraduate different students

= Apply statistical processing methods to investigate the accuracy and

reproducibility of analytical proc

= Adjust, supplement the practice textbooks

- The practice textbook has been supplemented,

= Guide 01 graduation essay and 01 project of scientific research student

Trang?

MO DAU

Phổ khối lượng là phương pháp phân tích công cụ được ứng dụng rộng rãi nhất

do né cung cấp cho chúng ta nhiều thông tin về thành phần các nguyên tổ có trong

của các phân tử vô cơ, hữu cơ, sinh học, tỉ lệ đồng vị của các nguyên tử trong mẫu

Đối với nước tụ khi chưa có chương tình giáo đục phổ thông 2018, nh trường, đại học có đào tạo ngành Sư phạm Hoá bọc không đưa các học phần liên quan đến

đặc biệt là không có trường nào có học phần thực hành liên quan đến việc sử đụng

cả 2 thiết bị trên Điều này có thể giải thích một phần do chương trình phổ thông đại học nào cũng có thể đầu tư được Do đó đa số sinh viên ngành Sư phạm Hoá học

điều kiện thực nghiệm trên 2 thiết bị tiên tiến này

Tuy nhiên, trong chương trình giáo dục phổ thông 2018, môn Hoá học

thì kiến thức về phố khối lượng vả phổ hồng ngoại đã được đưa xuống giảng dạy

ở bậc phổ thông ở mức độ đơn giản Với phương châm “học để làm” đôi hỏi sinh viên ngành sư phạm Hoá học phải thục hiện được các thí nghiệm liên quan đến

2 phuong pháp hiện đại này Được sự quan tâm của phòng Khoa học công nghệ và môi trường, Ban giám hiệu và sự đầu tư của Bộ giáo dục và đào tạo thông qua dự án

“Tăng cường năng lục nghiên cứu khoa học Hoá học”, năm 2021 khoa Hoá học đã có + bị uHPLC-MS và ET-IR Từ khảo sắt ban đã

nghiên củu liên quan đến các thiết bị trên, chúng tôi tiến hành xây dựng 2 bài

Bên cạnh đỏ việc có các công trình nghiên cứu ứng dụng trực tiếp vào giảng dạy

là một trong những tiêu chí quan trọng để kiểm định chương trình đảo tạo

theo chuẫn của Việt Nam và quốc

Do đố chủng tôi tiến hành nghiên cứu đề tải "Xây đựng một số bài thực hành trong học phần “Thực hành phân tích công cụ”

ngành Sư phạm Hoá học nhằm đáp ứng chương trình giáo dục phỗ thông 201i

là một việc làm cấp bích và có ý nghĩa thiết thực nhằm nâng cao chất lượng chương trình đảo tạo, cũng như tăng cường năng lực cho giảng viên và sinh viên

Phương pháp nghiên cứu

ĐỀ tải được tiến hành thông qua việc phối hợp một số phương pháp sau: phương pháp nghiên cứu lí luận, phương pháp thực nghiệm, phương pháp xử lí thông kê + Phương pháp nghiên cứu í luận:

Dựa trên sự tổng hợp các tài liệu có liên quan như các quy trinh phân tích

trong các bộ tiêu chuẩn của Việt Nam và thế giới, các yêu cầu cần đạt của

chương tình môn Hoá học, các bai bio vẻ việc xây dựng các bài thí nghiệm thực hành

vở bậc đại học, nhóm sẽ đề xuất 2 bài thí nghiệm phù hợp với mục tiêu đề ra + Phương pháp thực nghiệm:

IR cùng với các thiết bị hỗ trợ trong việc xử lí mẫu với độ an toàn cao, độ lập lại ốt,

thời gian hợp lí và phủ hợp với nội dung trong chương trình giáo đục phỏ thông 2018

+ Phương pháp xử í

Phương pháp xử lí thống kê nhằm tối ưu hoá các quy trình trong bài thí nghiệm,

Tiể hành xây dựng hai bài thí nghiệm trên 2 thiết bị uHPLC và FI

ác định độ lặp lại của thí nghiệm khi tiến hành trên trên các nhóm sinh viên khác nhau

Từ đó đề xuất các tiễn khai ác ải thí nghiệm hợp lí

Đối tượng nghiên cứu

- Thiết bị HPLC cu hang Waters,

~ Thiết bị FT-IR của hãng Jasco

- Tải iệu Thực hành phân tích công cụ

Trang

Phạm vị nghiên cứu

~ Học phần Thực hành phân tích công cụ

"Nội dung nghiên cứu

- Tối ưu hoá quy tình xác định phổ khối lượng của một chất hữu cơ quen thuộc

'ối ưu hoá quy trình xác định phô FT-IR của một hợp chất quen thuộc

~ Thử nghiệm quy trình trên các đối tượng sinh viên khác nh:

~ Áp đụng các phương pháp xử í thẳng kế đ khảo sát độ chính xác và độ tú lập của quy trình phân ích

~ Điều chỉnh, bổ sung tải liệu Thực bảnh phân tích công cụ

- Viễ báo cáo

Trang 10

Chương 1 TÔNG QUAN

1 Giới thiệu chung

1-1 Nguyên tắc của phương pháp phổ hồng ngoại Phd hồng ngoại là phổ của các phân từ và nhóm phân tử xuất hiện dưới tắc dụng

của chùm sáng kích thích có năng lượng phù hợp nằm trong vùng hồng ngoại (IR) làm

sho các phân tử, các nhóm phân tử, nguyên tử quay và dao động Dựa trên sự hắp thự

trong hợp chất như dao động hỏa tỉ (sretching) bắt đổi xứng làm thay đổi độ dải

liên kết, hay dao động biến dạng (bending) thay đổi độ lớn của góc liên kết Cùng một

nhóm chức, nhưng với sự thay đối về độ đài liên kết và góc liên kết sẽ có 2 vùng tẫn số

êm kết sẽ dễ thực hiện hơn, do đó dao động khác nhau Sự thay dổi độ lớn góc

kéo dãn (bending) sẽ nằm ở vùng có số sóng nhỏ, còn ngược lại dao động hóa trị

(stretching) sẽ ở vũng số sóng lớn hơn, Từ những vàng số sốngtn số đặc trưng

để quy kết được dao động của các nhóm chức phù hợp “Trong phân tử của các chất, các nguyên tử cỏ thé 6 ác liền kết đơn (ơ), liên kết

đôi (),

kết bội đôi và bội ba bao giờ cũng d hắp thụ năng lượng thái

theo những kiểu khác nhau, tùy thuộc vào các loại liên kết có trong phân tử chất, tức là

*n kết ba khác nhau nên phổ hồng ngoại của chúng cũng khác nhau, Các liên

để ạo ra các dao động

cấu tạo phân từ của các chất Trong toàn vùng phỏ hồng

miễn nhỏ như hồng ngoại gan (NIR): 12000 - 4000 cm”, ($00 - 3000 nm), hồng ngoại trùng bình (MIR): 4000 - 200 cnr! (3000 - 28000 nm) và hồng ngoại xa (FIR) '200 - 10 em?" (28000- 40000 nm)

Quang phổ hồng ngoại là một kĩ thuật đơn giản và đáng tin cậy được sử dụng tông rãi trong cả hóa học hữu cơ và vô cơ, trong nghiên cứu và công nghiệp Nó được

sử dụng trong kiểm soát chất lượng và theo dõi các ứng dụng như đo nồng độ CO;

ngoại, người ta chia làm các

trong nhà kính Nó cũng được sử dụng trong phân tích pháp y, phân tích và xác định sắc tổ trong các bức tranh và các vật nghệ thuật khác như các bản thảo

Một cách hữu ích

suy giảm phân xạ tổng số quang ph Sử dụng cách tiếp cận này, các mẫu được ép vào Š phân tích mẫu rắn mà không cần cắt mẫu sử dụng ATR hoặc

mặt của một tinh thể đơn Các bức xạ hồng ngoại đi qua tinh thé va chí tương tác với

mẫu tại giao diện giữa hai vật liệu,

Một số thiết bị quang phỏ hồng ngoại đang được các phòng thí nghiệm sử dụng

như: thiết bị quang phố hồng ngoại DR6000 (Hach), Agilent Cary FT-IR 630 (Agilent), FT-IR 7600 (Lambda), FT-IR 4700 (Jasco), FT-IR Alpha IL (Bruker)

Trang

1.2, Hệ thống sắc kí lông siêu eao ip WATER ACQUITY uHPLC H-Class

Hệ phân tích sắc kí lông siêu cao dp (HPLC) la mot he thing cải tiền toàn diện

so véi ki thuật sắc kí lồng cao áp (HPLC) nhằm cung cấp các giải pháp đáp ứng các hợp chất với khối lượng nhỏ, thể tích nhỏ và thời gian phản tích nhanh Với hệ (2 wm), ede phòng thí nghiệm sẽ tết kiệm được thị

phân tích (thân thiện với môi trường) Bên cạnh đó k

độ chọn lọc, độ nhạy, độ

gian phân tích, dung môi

p lại cũng như độ tai lặp nên kết quả sẽ tin cậy hơn

Thiết bị uHPLC sơ đồ cấu tạo khối tương tự các hệ thống HPLC và gồm một số

bộ phận chính như thể hiện trên Hình 1.1 duéi day [1]

trên và bơm dung môi Ở đầu các kênh dẫn này được trang bị một đầu lọc kim loại để ngăn

các hạt rắn nhỏ xâm nhập vào thiết bị Ngoài ra các đầu lọc này cũng giúp các kênh

dẫn luôn ngập sâu trong lỏng dung môi Sau khi dung môi được hút theo các kênh sẽ

đi tới hộp trộn và đây vào hệ thông bơm cao áp

— Có khả năng hoạt động ở áp suất cao và cung cấp một tốc độ dòng ổn định

Đa phần các máy bơm cho thiết bị uHPLC đều có thể cung cấp áp suất đầu vào cho cột tủy thuộc thể hệ máy và pha động sử dụng [2] Hiện ti với thiết bj wHPLC duge trang

bj ai Phòng thí nghiệm Phân tích Trung tâm — Trường Đại học Sư phạm Thành phố

Hỗ Chí Minh = Bom phải được chế tạo bằng vật liệu chịu áp cao, chịu ăn mòn đổi với các dung có thể hệ thông bơm lên tới 15000 pd

môi hữu cơ và các dung dịch đệm sứ dụng trong pha động Thông thường, phần thân

cylinder của bơm được làm từ các loại thép không gi và piston duge làm từ

"eoe lam thgch (sapphire) (3 4]

+ Bộ van tiêm mẫu

êm mẫu vào một dòng pha động đang đỉ chuyển với một áp suất lớn là kĩ thuật

quan trọng trong tắt cả các thiết bị sắc kí lỏng Tương tự các bệ thông HPLC trước đi thiết bị uHPLC vẫn sử dụng bộ van tiêm có vòng chứa mẫu (sample loop) để lấy ngắn và nhỏ hơn nên dung lượng cột cũng nhỏ hơn so với cột dùng cho HPLC tiêm mẫu trong uHIPLC cũng chỉ đao động trong khoảng vài |2]

Do vậy thể

THiện tại thiết bị H1PLC ti Phòng thí nghiệm Phần tích Trung âm, khoa Ho học

“Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hỗ Chí Minh có trang bị bộ phận tiêm mẫu

tự động với vòng chứa mẫu có thể tích thay đổi Nhờ vậy, thao tác tiêm mẫu là

n nhiệt Kĩ thuật viên chỉ cần khai báo chính xác vị trí của mẫu và thể tích cẻ máy sẽ tự động tiêm và ngất đúng thể tích mẫu như yêu cầu Hệ thống tiêm mẫu

tự động không chỉ tiện lợi trong thao tác mà còn đem lại độ chính xác cao + Cột

Cột sắc kí

thường được vi như tri tìm của cả thiết bị sắc kí vì nó quyết định

trực tiếp tới khả năng phân tách các hợp phân trong hỗn hợp phân tích Trong kĩ thuật không gi Bên rong cột được nhời chặt bởi các hạt pha nh có đường kính < 2 ym

“Tùy thuộc vào phương pháp sử dụng và đổi tượng phân tích mà người ta la chọn các loại cột có pha tĩnh thích hợp

Trước mỗi cột sắc kí thường được gắn thêm một cột tương tự như cột chính nhưng ngắn hơn nhiễu Cột phụ thêm này được gọi là

của tiền cột là loại bỏ các hạt mịn và các chất hắp phụ mạnh trước khi đi vào cột chính

n cbt có giá rẻ hơn so với cột chính ni

cột bảo vệ hay tiễn cột Vai trò

có thể được thay mới định kỳ

Trang 13

phạm Thành phố Hỗ Chí Minh có trang bị 2 đầu dò lả đầu dò khối phổ và đầu đò

PDA Dây đều là các đầu đò có độ nhạy cao và phù hợp với đa số các chất phân tích

“Trong đỀ tài này, tôi sử dụng đầu đồ khối phổ và đầu đò PDA để ghỉ nhận sắc kí đồ

Y Diu do Photodiode Array Detector có một số đặc điểm sau:

Thiết kế foweel: TaperSplit, chéng lại sự khúc xạ của ánh sing, tối da

năng lượng truyền qua

Sit dung duy nhất O1 đền Deuterium are, thiết kế tự động thu được tỉ lệ

nhieunhla (SN) dd đa cho cả phd VIS va UV

“Cang cắp đường nên ôn định, cung cắp tín hiệu đồng thồi trên kiễu 2D và 3D sing đền: Deteium are 2000 giờ (một đền duy nhấ) chương trình

điều dính năng lượng đòn cho hai vùng bước sông và duy uì cường độ ánh sáng

hiệu suất đèn tự động, Điều này bù đắp cho sự suy thoái đèn theo thời gian mà không

cẩn phải thường xuyên thay thế băng đền

ilu do PDA hay diiu dé mang divide quang (photodiode aray detector) cho phép

cquếtliên tục quang phỏ hip thụ của hỗn hợp rửa giải ra khỏi cột và tử đó truy xuất

cấu tạo cơ bản của một đầu đò PDA [1]

Trang HỆ

Hình 1.2 Sơ đồ cấu tạo đầu dò PDA

Nguồn sng từ đền deuterium duge truyền qua một tẾ bào đo chứa dung dich

giải ly (rửa giải) chảy ra liên tục từ cột sắc kí Sau khi tương tác với dịch giải ly

chim sing được dẫn tới một cách tử nhiễu xạ Tại đây chim sing được tán sắc thành

gồm nhiều điode và mỗi mạng có thể chứa tới 1056 điode quang đơn lẻ [1], Mỗi diode

quang này có thể tương tác với một ảnh sing đơn sắc xác định với độ phân giải khoảng

nm [1] Khi ánh sắng đi tới diode sẽ làm phát sinh một dòng điện nhỏ tỉ lệ với

độ hấp thụ tại từng bước sóng tương ứng Và như vậy, tại mỗi thời điểm ta sẽ thủ được

thống máy sẽ nhận diện và chủ)

một phổ đỗ hấp thụ Tập hợp các phổ đồ ở nhiều thời điểm liên tiếp sẽ được một sắc kí

đỗ 3 chiều như Hình 1.3 đưới đây [1] Từ sắc kí đồ này, ta có thể truy xuất s

¥ Đầu đồ Waters SQ Detector 2 có một số đặc điểm sau

SQ Dodedor2 tương ích với nhi nn tng si và nguôn lan hóa nhất

Là đầu dò khối phổ một tứ cực tiên tiến được thết kế cho các ứng dụng uHPLC/MS

Khoảng khối lượng rộng (đến 3000 Da), nguồn ion hoá ESI và APCI cho phép

phân tích cả hai loại hợp chất có trọng lượng phân tử thấp và cao

"Nguồn ion hod ESI: miu phân tích sau khi di đến đầu dò khổ hoá tại buồng (prob:), kết hợp với dòng nirogen 600 *C sẽ làm khô ion, lon tiếp tụ đi phổ sẽ được lon

vào sample cone Tại sample cone, áp năng lượng thể chênh lệch cộng hưởng với từ

trường để chỉ cho những ion mong muốn đi vào Các ion tiếp tụe đi vào Extractor, lon suide (cầu tạo từ các lá thép song song) và tứ eve Bộ phận tứ eve giúp chọn lọc các hiệu bởi PMT

"Nguồn ion hoá APCI: APCI là kĩ thuật ion hóa thường được sử dụng để phân tích những hợp chất có độ phân cực trung bình, có phân tử lượng nhỏ, dễ bay hơi

“Trong APCI, ion được hình thành như sau: mẫu hợp chất cần phân tích, hòa tan trong pha động, sau khi ra khỏi cột sắc kí, duge cho đi ngang qua dng mao quản đốt nóng

Khi ra khỏi ống, nhờ khí nitrogen, dung dịch được phun thành dạng sương từ đầu ra

của nguồn APCI, Các giọt sương nhỏ được một dòng khí dẫn đến một ống thạch anh,

để đến một vùng có áp suất khí quyển, nơi đây sẽ xây ra sự ion hóa hóa học nhờ vào

que phóng điện corona, tại đây có sự trao đổi proton để biến thành ion dương (M+H)*

xã trao đổi clecton hoặc proton để biển thành ion âm (M-H) Sau đỏ, các on sẽ được đưa vào bộ phân tic kh

Trang 16

phạm Thành phố Hồ Chí Minh là MassLynx V4.2 tương thích với hệ thống uHPLC

được sản xudt bai bing Waters,

1.3, Sự kết nối giữa chương trình giáo dục phổ thông 2018 và học phần Thực hành phân tích công cụ

Trong chương trình giáo dục phổ thông 2018, môn Hoá học thì kiến thức vẻ phô khối lượng và phổ hồng ngoại đã được đưa xuống giảng dạy ở lớp 11 Trong nội dung

“Đại cương hoá học hữu cơ” có các yêu cầu cần dat: (1) sté dung được bảng tín hiệu

phổ hằng ngoại để xác định một số nhóm chức cơ bản (phần hợp chất hữu cơ và hoá học hữu cơ); (2) sử dụng được kết quả phổ khối lượng (MS) để xác định phân tử khối

của hợp chất hữu cơ (phần công thức phân từ hợp chất hữu cơ) Vì vậy, sinh viên ngành Sự phạm hoá học phải được thực hành trên hai thiết bị phân tích hiện đại này

Trang T7

Thông qua học phần Thực hành phân tích công cụ, sinh viên sẽ phân tích được

sắc nguyên tắc cũa các bài thí nhiệm dựa tễn các định luật cơ bản trong quang học,

giải thích được các kết quả thí nghiệm cơ bản và để xuất được giải pháp cải tiến quy

trình tong các bài thí nghiệm quang phổ, diện hóa, sắc kí Vì vây sinh viên sẽ phân năng lực thực hành và tin giảng dạy chương tỉnh giáo dục phổ thông 201, đặc biệt

là ác nội dung liên quan đến các phương pháp phân ích hiện đại

3 Định lượng ibuprofen trên thiết bị nHPLC

«- Giới thiệu về ibuprofen (IBU)

IBU còn có tên là (289:214⁄2-methylpopyl)phenyllpropanoic acid, Theo

Hình 1.5 Công thức cấu tạo của IBU

VỀ tính chất vật lí, IBU là chất bột trắng hoặc gần như trắng hay tỉnh thể không màu với hìng số phân li acid pẤ, khoảng 4,45 ~ 53 [5] IBU không tan trong nước (ở 25 °C, độ tan trong nước của TRU có giá tị khoảng

VỀ mặt dược lí, IBU là thuốc chống viêm khéng steroid c6 tée dựng giảm đau,

hạ sốt và chống viêm Tác dụng hạ sốt của IBU mạnh hon aspirin, nhưng yêu hơn

indomethacin Thuốc có ác dụng chống viêm tốt và có tác dụng giảm đau tốt trong điều ị viêm khớp dạng thấp Thông thường,

sẽ xuất hiện sau ha ngày điều tr [7]

Hiện nay, IBU được lưu hành trên thị tường dưới nhiều dạng như viễn nén, vign nang, sito, thuốc cm, kem dùng ngoài da, thuốc tiêm tĩnh mạch, Riêng với

* Quy trinh định lượng ibuprofen

rosse và cộng sự sử dụng quy trình phân tích được giới thiệu trong Duge dién Hoa Ky USP 43, kết quả khảo sát của cho thấy cần tối thiểu 8 phút cho mỗi lần

định lượng IBU [8] Khoảng thời gian nảy đã được rút ngắn nhưng vẫn còn khá dài

4 dp dụng vào một bài thí nghiệm thực hành cho các lớp đông sinh viên Gin đây, một số tác giả tiếp tục nghiên cứu rút ngắn thời gian phân tích Đa số

các tác giả đều phát triển theo hướng áp dụng kĩ thuật sắc kí lỏng hiệu năng siêu cao

do Kt

dược phẩm bằng phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng siêu cao ghép nổi ¡ phố

hai Kin [9] Nhờ áp dụng thiết bị uHPLC, các tác giả đã giảm thời gian chạy sắc kí

xuống còn 3 phút mà vẫn giữ được độ phân giải tốt giữa peak [BU với peak nội chuẩn

Công trình của hing Thermo Scientific kết hợp cùng nhóm tác giả Grosse và cộng sự đã tiến hành cải tiến quy trình phân ích IBU ong viên nén để rút ngắn

thôi gian phân ích Bằng cich điều chỉnh một

tốc độ dòng pha động và thể tích tiêm mẫu, các tác giả đã áp dụng được quy tình phân

tích do USP 40 (vốn xây dựng cho HPLC) trên hệ thống thiết bị uHPLC do hãng

Điều kiện sắc kí giữa quy tình của USP 40 và quy tình

cải tiến của hãng Thermo Scientifie được tóm tắt trong Bảng 1.1 dưới đây

Bảng 1.1 So sinh diéu kign sic ki theo USP 40 và Thermo Scientific 8, 10]

Cộtsc kí CIS; 250 mm x446mm; C18 50 mam x 2,1 mam,

Việc vận dụng kĩ thuật uHPLC vào quy trình này giúp rút ngắn thời gian

shạy sắc kí xuống 16 lẫn giảm từ E phút còn 0.5 phút Điễu này đã giúp tiết kiệm

đã trình bày: rong đề ti này, chúng tôi quyết định sử dụng quy tình phân tích nhanh,

trong viên nén phù hợp với điều kiện tại khoa Hoá học, Trường Đại học Sư phạm

“Thành phổ Hồ Chí Minh

Trang 19

“Các hóa chất được dùng trong bai thực hành đo phổ khối

Bảng 2.1 Danh mục hóa chất cho bài thực hành sắc kí

(Reagent grade) (Tây Ban Nha)

“Cân phân tích Shimadzu AUW220 (độ chính xác 0,1 mg),

“Thiết bị FT-IR 6600 của hãng Jasco

Miy ly tim Hettich Zentrifugen D-78532 Tutdingen

‘May sigu Am Elmasonie § 100 H

“Thiết bị uHPLC của hãng Waters, đầu dò PDA và đầu dò khối phổ SQD2

(Model: ACQUITY UPLC H-Class/Xevo TQD)

Cot sic ki Acquity UMPLC® BEH C18 1,7 ym; 2,1 * 50 mm,

Trang 20

2.2 Quy trình xác định phổ hồng ngoại trên thiết bị ET- IR của hang Jasco + _ Dựa tên hướng dẫn của hãng Jasco, chúng tôi để xuất các bước thao tác đo phổ hồng ngoại như sau:

Bước I, Khoi động máy -> Nhấp đúp vào biêu tượng Spectra Manager

trên màn hình -> Dãng nhập,

Bước 2 Lấy đĩa ra khỏi máy, vệ sinh đĩa ö mẫu va dau dé bing dung mai ethanol (Hạn chế chạm tay vào đầu đỏ), (Đợi máy ôn định khoảng 15 phúU,

Bước 3, Để bắt đầu đo quang phổ, hãy nhấp dip vio bigu tượng Specua Measurement Ti (background) (vi may quang phổ dong JASCO là hệ thẳng thiết bị chùm sia don, nên phép đo nền phải được thực hiện trước mỗi lẫn đo mẫu) inh Đo

{1) Xác nhận răng buông mẫu trồng

(2) Sau độ chọn lệnh Background (B) từ menu của chương tỉnh Bước 4 Đo mẫu

(1) Cho mẫu đã nghiền nhỏ vào trong dia, Gan dia vio lai máy đo vặn chật đầu núm

vào đĩa, đóng buồng đo mẫu

\G) Sau đồ khỏi động trình tr đo bằng nút Sample (S) trên phần mễm, Bước 5 Xử li phố và Lưu phổ

(1) Sau khi thu nhận được phổ đỏ, tiến hành các bước smoothing (Processing ->

Corrections > Smoothing

(3) Liy Peake

(4) Xuất phổ bằng lệnh File -> Export

« _ Tiến hành do phổ hng ngoại cũa 10 hợp

Ất hữu cơ sau

(1) Mẫu được phẩm: aspiin; paraeetamol; đexamethasone aeetate; ampieilin (2) Cac hop chat hitu co: cinnamic acid; dibenzalacetone; chalcone;

1-nitro naphthalene; aryloxyacetate acid hay (4~methylphenoxy) acetic acids 1-(4-chlorophenyl)-N-phenylmethanimine

2.3 Khảo sát quy trình định lượng trên thiết bị uHPLC-MS

«_ Khảo sát thể tích tiêm mẫu

Để khảo sát thé ích tiêm mẫu, lẫn lượt tiến hành phân tích sắc kí dung dịch chuẩn IBU 500 ng-ml." 6 ede thể tích tiêm 1L, 5L, 10L, Các thông số được giữ cổ định là

~ Cột sắc ký Acqnity uHPLCP BEH CI§ 1,7 mm 2,1 x 50 mm,

Hệ pha động: Dung dịch HCOOH 0,16:ACN 40:60(v/9)

~ Kiểu giả ly: đẳng môi isocratic)

— Nhiệt độ buồng cột 30 5C

Trang

— Thông số khối phd: Chế độ E thể RE

lens 2,5V, thể cone 22V, nhiệt độ nguồn 130 °C, nhiệt độ khử dung môi hoá 400 °C,

tại mưz tại 205,1 + 0,5 (Hình 2.1)

— Tốc độ dòng: 0,9 mL-phiit *

«thé capillary 2,9kV, thế extractor 2)

~ Cột sắc kí: Acquity UHPLC® BEH C18 1,7 im; 2,1 * 50 mm,

HE pha dng: Dung dich HCOOH 0,1%: ACN 40:60 (wv)

— Kiễu giải ly: ding mi (isocratic)

“Thể tích tiêm mẫu: Thẻ tích tối ưu đã xác định

— Nhiệt độ buông cột: 30 °C

Thông số khối phổ: Chế độ EST, thé capillary 2.9KV, thé extractor 2V,

thé RF lens 2,5V, thé cone 22V, nhiệt độ nguon 130 °C, nhiệt độ khử dung môi hoá

400 °C, téc d6 khi Khir dung méi hos 600 Leh, téc d6 khí cone 60 L-h ! va ghỉ nhận

tin higu tai vz tai 205.1 + 045, Các thông số khối phố này liệu tham khảo [1]

sự tương đồng với tài

+ Tinh tương thích hệ thống

m lặp 6 lần dung địch IBU chuẩn 500 nẹ-miL ! vào hệ thống sắc kí ở điều kiện

đã chọn và thu sắc kí đồ Từ số liệu thu được, đánh giả độ lệch chuẩn tương đối (RSD),

Trang 33

‘+ GiGi han phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ)

"Với các phương pháp phân ích sử dụng thiết bị có đường nhiễu nén như điện di

và sắc kí, giới hạn phát biện có thể được xác định theo giá trị tỷ số tín hiệu trên nhiễu

SIN Theo đó, giới hạn phát hiện của phương pháp sắc kí được chấp nhận là nồng độ

chất phân tích mà tại đó tín hiệu của chất phân tích lớn gấp 3 lần hay tỷ số S/N bằng 3

Giới hạn định lượng (LOQ) là nông độ nhỏ nhất của chất phân tích mà ta có th định lượng được với kết quả có độ chính xác mong muốn

"Như vậy, để xác định LOD, chúng tôi pha loãng dẫn dung dịch IBU 100 ng-mL-"

và tiêm vào hệ thống sắc kí ở điều kiện đã chọn Nồng độ IBU mà tại đó tỷ số S/N sắp

xi 3 và 10 sẽ được chấp nhận là LOD và LOQ

«Tính tuyến tính

Chúng tôi tiền hành dựng chuẩn và đánh giá tính tuyển tính trong khoảng nông độ

IBU từ 100 1000 ng-ml=' Tiến hành tiêm lặp 3 lần

+ Hiệu suất thu hồi

tín hiệu nhiễu nền

Chúng tôi tiến hành đánh giá độ thu hồi bằng phương pháp thêm chuẩn vào mẫu trắng (dung môi) ở ba mức 400 ng ml “1, S00 ng.mL7” và 600 ng.mL21 Trong đó,

mỗi mức thêm chuẩn được phân tích lặp lại 3 lar

2.4, Khảo sắt quy trình định lượng trên thiết bị nHPL.C-PDA 2.4.1 Khảo sắt điều kiện định lượng

«- Khảo sát tốc độ dòng

Šn hành phân tích sic kí dung địch chuẩn IBU 10 mg-mL~ 6 efe tée độ dồng

06 m[ phú tới l0 mLphút 1, Các thông số được giữ cổ định là

~ Cột sắc kí Aeqniy.uHPLC® BEH CIR I.7 pm; 2l x50 mm,

~ Hệ pha động: Dung dich HCOOH 0,1%:ACN 40:60(/9)

— Kiễu giải ly: dng mỗi (isocratic)

~ Đầu dò PDA bước sóng định lượng 254 nm

~ Thé tích tiêm mẫu: 10 uL

~ Nhiệt độ buồng cột: 30 °C

+ Khảo sắt thể tích tiêm mẫu

ĐỂ khảo sit thể tích têm mẫu, lẫn lượt tiến hành phân tích sắc kí dụng dịch chuẩn IBU 10 mg-ml ở các thể tích tiêm tăng din tir 0,5 uL 46 10 pL Các thông số được giữ cổ định là

~ Cậtsắc kí: Acquity UHPLC® BEH C18 1,7 ym; 2,1 x 50 mm

Hệ pha động: Dung địch HCOOH 0,1%:ACN 40/60/2)

Trang 23

~ Kiểu giải ly: đẳng moi (isocratic)

~ Diu db PDA bước sóng định lượng 254 nm:

Nhiệt độ buồng cậu 30 °C

— Tốc độ dòng: Tốc độ đồng tối ưu đã xác định ở tên

« _ Khảo sát hiệu quả chiết mẫu

Thông tin mẫu thuốc: Ibuprofen 400 (nhà sản xuất: Nadyphar, số lô: 21004B, dđược thủ mua tại các nhà thuốc ở Tp Hỗ Chí Minh) Chúng tôi sử dụng mẫu thuốc này trong nghiên cứ,

Theo quy ình xử í nẫu đã đề xuắ, một khi lượng bật huốc ương dương

40 mg hoạt chất IBU được đem chit v6i dung mối aeeohiuils và tiêm vào TBU (nếu đăng kí tiêu chuẩn chất lượng sản xuất theo Dược điễn Việt Nam hoặc

tiêu chuẩn cơ sở) phải có hàm lượng hoạt chất IBU nằm trong khoáng 95,0% tới

105,0% so với lượng ghỉ trên nhãn |S| Bên cạnh đó, cúc thuốc IBU được đăng kí

tiêu chuẩn chất lượng theo Dược điển Mỹ (USP) thì hàm lượng IBU có thể dao động

trong khoảng 90.0% tối 110.09 so với lượng ghỉ trên nhãn [I0J, ĐỂ đảm bảo rằng

quá trình chiết hoạt chất IBU trong mẫu là hiệu quả với cả các mẫu có hàm lượng cao nên phần khảo sát nà) hành ở hai khối lượng bột thuốc tương đương

40 mg va 80 mg hoạt chất Tho đồ, quy trình khảo sát hiệu qua chiét IBU trong miu

ng và đánh siêu âm trong 5 phút

~ Sau khi đánh siêu âm, ly tâm 5 phốt ở tốc độ quay 6000 vòng phút !, chuyển phần dịch trong 2 éng vi 2 vio bình định mic 10 mL Al va BL Tring cin thin

phin ean rắn trong dng ly tam 3 ~ 4 lần, mỗi lần dùng 1 ~ 2 mL acetonitrile (ly tim

thêm néu cin), Toàn bộ dịch trắng được chuyển hết vào các bình định mức tương ứng dến khi chất lông trong c

— Phnrắn tò lạ tong ng ly âm tếp tụ được đình sk âm in hé với 5m, aeetonidil, ly tâm tương tự như trên để thu được địch trích Ai và Bì

h vừa dâng đến vạch định mức rỉ

Trang 24

+ Bổ sung hình ảnh minh họa thao tác thực hành

ét hon so với phiên bản L

+ Bồ sung hướng dẫn liy Peak ehi

+ Bồ sung hướng dẫn lấy Baseline chỉ tết hơn so v

+ Bồ sung hướng dẫn giải phổ (quy kết phổ) chỉ tiết hơn so với bản 1,

3.2 Kết quả khảo sát quy trình định lượng ibuprofen trén wHPLC-MS

an 1 + Khio sit thé tich tiêm mẫu

ĐỂ khảo sắt thể tích tiêm mẫu,

IBU 500 ng ml ! được pha loãng từ dung dịch chuẩn gốc bằng pha động ở các thể tích tiêm 1L, Š pH, 10 pH; tốe độ đồng 09 ml, ml-phúc!, Kết quả được thể

h lượt tiền hành phân tích sắc kí dung dịch chuẩn

kéo đuôi Kết quả

kí lâu hơn làm peak sic ki bi din ring va ting hi

hao sát cho thấy ở tốc độ dòng từ 0,9 tới 0,3 mL-min `, hệ số kéo đuôi không thay đổi

õ rệt nhưng lại tăng mạnh khi tốc độ dòng giảm xuống dưới 0,3 mlmin" Do vậy

Lin tiem lip Thờiganlum Điện tích peak

+ _ Giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) Pha loãng dẫn dung dịch chuẩn IBU trong pha động s

ác kí ở điều kiện đã chọn Kết quả như sau:

Hình 3.2 Sắc kí đồ của mẫu trắng và các dung dịch chuẩn IBU, Bảng 3.5, Kết quả xác định LOD và LOQ,

ng-mL Lin Lan2 Lin3 Trung bình

n hành dựng chuẩn và đảnh giá tính tuyển tính tong khoảng

ng độ IBU từ 100 ~ 1000 ng:mÏL2! Kết quả sau 3 ần tiêm lặp như sau:

Trang AE

Hệ số RẺ = 0.9992 > 0.0980 cho thấy rằng có sự phụ thuộc tuyến tính tốt giữa diện tích peak sắc kí với nồng độ của IBU trong khoảng nỗng độ từ 100 ~ 1000 ng-ml !

+ Higa suit tha

Chúng tôi tiến hành đánh giá độ thu hồi bằng phương pháp thêm chuẩn vào

mẫu tắng ở ba mức 400 ng.mLs 1, 500 ng-mL- va 600 ng-mL- Trong đó, mỗi mức

thêm chuẩn được phân tích lặp lại 3 lần và thu được kết quả như Bảng 3.6 dưới đây

Bảng 3.6 Kết quả khảo sắt độ thu hồi trên đầu dò khối phổ (MS)

nằm trong giới hạn cho phép của AOAO là 80% — 110% (mite 100 ng-mL) 6 ba mức thêm chuẩn 400 ng-mL ', 500 ng:mL ' va 600 ng-mL

Trang 36

3.3 Kết quả khảo sát quy trình định lượng ibuprofen trong viên nén

3.341 Kết quả khảo sát điều kiện định lượng ïbuprofen trên uHPILC-PDA

“Từ quá trình thực nghiệm của nhóm, chúng tôi thu được các kết quả sau [18];

+ Khảo sắt tốc độ dòng

Tiến hành chạy sắc kí dung dịch chuẩn IBU 10 mg-mL ! ở các tốc độ đồng

tăng dẫn từ 0,6 mL-phit" t6i 1,0 mL-phúC! với các điều kiện khác được giữ cố định

như mục 24.1 Kết quả thực nghiệm và sắc kí đổ thu được được thể hiện tong Bảng 37 và Hình 3.3 như đưới đây

5 1,0 (Ấp suất của máy không đủ chạy tốc độ dòng)

Kết quả thực nghiệm cho thấy, hệ thông sắc kí hoạt động on định từ tốc độ dòng

0.9 mph! trở xuống và thấp hơn so với tốc độ dòng được ấp dụng trong quy tình

1 duge Ia do sy khác biệt cột sắc kí được sử dụng là cột

ddo Grosse và các cộng sự phát tiễn |S] Điễu này có thị

vỀ kích thước hạt nhi trong cật sắc kí Trong để tài này,

50 x 2,1 mm nhôi hạt 1,7 pm khác với cột được sử dụng trong quy trình của Gros

sột 50 x 2,1 mm nhỗi hạt 2,6 gm [S] Vì khi hạt nhồi có lách thước nhỏ hơn, cột sẽ

thiết bị ở tốc độ đồng cao là không ôn định

“Từ sắc kí đổ trên Hình 3.4, nhận thấy peak chất chuẩn IBU đã tách hẳn khỏi peak đang môi từ tốc độ dòng 0.9 mlL:phút ' Khi tốc độ dòng giảm xuống, IBU bị giải ly

khỏi cột chậm hơn và peak sắc kí trở nên đăn rộng Điều này cũng được nhận thấy qua

sự thay đổi thời gian lưu ør và diện tích peak của IBU trong Bảng 3⁄7

“Tuy nhiên, vẫn đề quan trọng nhất được nhận thấy từ Hình 3.4 là sự chẻ mũi của peak chất chuẩn IBU Trong mỗi sắc kí đỗ, các peak của IBU chuẩn đều xuất hiện đồng giảm xuống Điễu này cho thấy rằng peak thu được trong sắc kí đỗ Hình 3.4 là sự dang các peak đối

Trang 37

Hinh 3.4 Sic kf dd lia dung dich IBU ở các tốc độ dòng khác nhau

Hiện tượng penk đôi có ỏ

bắt nguồn từ nhiễu nguyên nhân như Các vấn đề về cột, Nghền cột, cột bị nhiễm bản,

~ Đặc tính của chất phân tích: Bị hỗ biển, phân hủy ở điều kiện ắc kí

= Dung mỗi và lượng mẫu: Độ phân cực của dun mồi nồng độ và th tích êm mẫu

số khả năng hỗ b hit phân tích IBU là carboxylic acid không chứa các nhóm định chức

n Hơn hết, theo nghiên cứu của Walker và cộng sự, dung dịch IBU

35 mg ml có thể được bảo quản trong các vial thủy tỉnh hơn 92% nồng độ đầu trong cdung dịch và nhóm nguy cơ từ chất phân tích cũng có thể được loại trừ

Trang 38

nảy được được đề xuất dựa trên

— Thứ ba, quy trình phân tích tong để tả

quy tình của USP 43 nhưng cổ sự điễu chỉnh v8 dung mồi pha mẫu và đặc biệt là kích thước cột sắc kí Do vậy, việc điều chỉnh thể tích tiêm mẫu cho phù hợp là

“Trong phần tiếp theo của để tài này, tôi sẽ khảo sát ảnh hưởng của th tích tiêm mẫu

dang ota peak sic kí IBƯ ở tốc độ đồng 0.9 mL.phút "

+ - Khảo sắt thể tích tiêm mẫu

Tiến hành chạy sắc kí dung dịch chuân IBU 10 mg:mL ở các thể tích tiêm mẫu

tăng dần từ 0,5 uL tới 10 wL với tốc độ dòng 0.9 mLphút ! và các điều kiện khác được

cố định như mục 2.4.1 Kết quả thực nghiệm được thể hiện ở Bảng 3.8 và Hình 3.5

Bảng 3.8 Kết quả khảo sát thể tích tiêm mẫu,

ưu (phú) Diệntích peak

thay đổi đăng kể diện tích và hình dạng của penk sắc kí Theo đó, khi th tích iêm

mẫu giảm xuống, điện tích peak cũng giảm theo tỷ lệ tương ứng Điều này được

giải thích là do điện tích peak sắc kí t lệ thuận với lượng chất phân tích (ở một điều

tích peak sẽ giảm

kiện cố định) nên khi lượng mẫu tiêm vào hệ thống giảm thì

Đồng thời với sự giảm diện tích peak, hiện tượng chẻ peak của IBU cũng giảm

Cụ thể, sự chế peak được giảm mạnh khi th tích tiêm mẫu

giảm xuống 5 HL và mắt hoàn toàn khi thể tích tiêm mẫu giảm tới ] wL Như vậy

"nguyên nhân cũa sự chế peak hay peak đôi của IBU là do th tích tiêm mẫu quá lớn

n peak đối của IBU khi thể tích tiêm mẫu lớn có thể được

Khi thể tích tiêm mẫu giảm,

Hiện tượng xuất hi

giải thích như sau [19, 20]: Vì chất chuẩn IBU được pha trong dung môi acetonitrile

tình khiết khác với pha động (hỗn hợp acetonitrile và dung dich HCOOH 0,1% trong mẫu phân tích được hoà với pha động và tạo thành mOt ving gidu acetonitrile hơn,

Vi diy là phương pháp sắc kí lỏng pha đảo, nền vùng pha động giàu acetoniuile

ít phân cực sẽ có lực giải ly mạnh hơn và giải ly một phần chất phân tích ra khỏi cột

Trang 39

Điều này làm xuất hiện một peak sắc kí phụ nhỏ hơn nằm ngay trước và che phủ một phần penk chính của chất phân tích rên sắc kí đồ như đã quan sảt trên Hình 3.4

Hình 35 Sắc kí đồ của dung dịch dịch TBƯ ở c

Một lời giải thích khác cho hiện tượng penk đôi của IBU như sau: tốc độ dòng được sử dụng trong quy tình là khá lớn đổi với uHPLC (0.9 mL+phúC') nên dẫn tới

phân tích giữa hai pha Mặt khác, khi thể tích tiêm

hiện tượng cân bằng chậm của ch

mẫu lớn, lượng chất phân tích được đưa vào cột cũng lớn và bắt buộc chất phân tích

phải hấp thụ sâu bên trong các hạt pha tĩnh Điều nay làm tăng thời gian khuếch tấn

của các phân từ chất phân tích và làm hiện tượng cân bằng chậm giữa hai pha trở nên

nghiêm trọng Hệ quả của hiện tượng này không chỉ khiển peak sắc kí bị dẫn rộng mà

ki 3.5 Gil thich tin duge cing ¢6 them

còn có thể lầm peak sắc kí bị tách đôi như

nhờ phổ đỗ của hỗn hợp giải ly ra khỏi cột ở thời gian 0,43 phút (định của peak chính)

và 0.40 phút (phần vai trái ~ peak phụ) của IBU 10 mg-mL." (thé tich tiềm 10 lL

Trang 40

Sự đồng bộ về hình dạng của phổ UV cho thấy thành phần bị giải ly của hai peak là giống nhau và của cùng một chất

A90 210 230 Bude sing 250 & (am) 270 290

"Hình 36 Phổ hắp thụ UV của [BU 10 mg: mí ' ở 043 phút và 0.40 phút

Quan sát trên Hình 3.6, nhận thấy khi thé tích tiêm mẫu lớn peak bị mắt cân đối

do sự xuất hiện peak phụ Nhưng khi thể tích tiêm mẫu quá nhỏ thì peak sắc kí lại bị kéo đuôi Tuy vậy, hình dạng của peak sắc kí thu được ở thể tích tiêm không quá 5 0l

đều có thể chấp nhận được Trong phần tiếp theo ©

các yếu tổ khác ở thể tích tiêm mẫu 1 L Như vậy điều kiện sắc kí được đề xuất

~ Cột sắc kí: Acquity uHPLC” BEH C8 I,7 pm; 2,1 z 50 mm

~ Hệ pha động: Dung dich HCOOH 0,1%:ACN 40:60(v/9)

— Kiểu giải ly; đẳng môi (isocratic)

~ Đầu đồ PDA bước sóng định lượng 254 nm

Hình 37 Sắc kí đồ chuẳn của dung dịch IBU chuẩn I0 mẹ-ml-!

«_ Khảo sắt hiệu quả chiết mẫu

n hành chiết 3 lần liên tiếp theo quy tình đề xuất ở mục 241 đổi với

hai khối lượng bột thuốc tương đương 40 mg và 80 mg hoạt chất IBU Dịch chiết

1 ác kí ở điều kiện đã chọn & myc 24.1

Kết quả thụ được duge t6m tắt tong Bảng 3.9 dưới đây

Bang 3.9 Kết quả khảo sát hiệu quả chiết mẫu

‘Mowic Lan chiết Thời gianlưurz Diện tích peak

Từ kết quả thực nghiệm cho thấy tổng diện tích peak ở lần chiết thứ 2 và thứ 3 ở'

cả hai khối lượng mẫu đều chiếm khoảng 0.3% so với diện tích pesk ở lần chiết đầu

tiên Điểu này cho thấy gần như toản bộ hoạt chất IBU có trong bột thuốc

đều được chuyên hết vào dung dịch chỉ với 1 lẫn chiết Như vậy, quy trình phân tích

mẫu thuốc được để xuất là phù hợp và được tóm tắt trong sơ đỏ ở Hình 3.8 dưới đây:

Trang 42