BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ BẠCH TUẤN KIỆT KHẢO SÁT SỰ THAY ĐỔI TÍNH ĐỀ KHÁNG KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN Escherichia coli VÀ THỬ NGHIỆM SẢN PHẨM THAY THẾ KHÁNG SINH TRO
Giới thiệu
Tính cấp thiết của luận án
Bệnh truyền nhiễm do Escherichia coli (E coli) là bệnh quan trọng, phổ biến trên gia cầm và gây thiệt hại kinh tế đáng kể cho người chăn nuôi (Kikuyasu Nakamura, 2000; Ewers et al., 2003; Nolan et al., 2013) Bệnh làm tăng tỷ lệ chết, giảm năng suất và tăng tỷ lệ gia cầm loại thải (Barnes et al., 2003) Bệnh có thể được điều trị bằng kháng sinh, tuy nhiên việc sử dụng kháng sinh thiếu thận trọng ở người và vật nuôi có thể dẫn đến sự xuất hiện của vi khuẩn kháng kháng sinh (Helmy et al., 2023) Vi khuẩn E coli có tính linh hoạt di truyền và khả năng thích ứng nhanh với môi trường nên nó dễ hình thành nhiều cơ chế đề kháng với kháng sinh E coli có mặt khắp nơi trong đường tiêu hóa của động vật máu nóng nên được xem là vi khuẩn chỉ thị để theo dõi tình trạng đề kháng kháng sinh ở động vật (bao gồm cả gia cầm) (European Food Safety Authority, 2019; Anjum et al., 2021) Đề kháng kháng sinh được xem là vấn đề nghiêm trọng, đe dọa đến sức khỏe toàn cầu Theo báo cáo của Trung tâm Kiểm soát và phòng ngừa dịch bệnh Hoa Kỳ (Centers for Disease Control and Prevention - CDC), đề kháng kháng sinh là nguyên nhân hàng đầu khiến hơn 25.000 người ở Châu Âu và thậm chí hơn 700.000 người trên thế giới đã chết mỗi năm do nhiễm trùng mà không thể điều trị được bằng kháng sinh, do vi khuẩn kháng thuốc Các tiên lượng cho biết hậu quả sẽ còn tồi tệ hơn, nếu tình trạng đề kháng kháng sinh vẫn tiến triển như hiện tại thì đến năm 2050, đề kháng kháng sinh sẽ gây ra khoảng 10 triệu ca tử vong mỗi năm, vượt qua cả ung thư - là nguyên nhân hàng đầu gây tử vong trên toàn thế giới hiện nay (O’Neill, 2014; Kraker et al., 2016)
Các nghiên cứu gần đây cho thấy Việt Nam sử dụng kháng sinh trong chăn nuôi gà rất cao, gấp 6 lần mức ghi nhận ở châu Âu, trong đó 84% kháng sinh dùng cho mục đích phòng bệnh Khảo sát tại Tiền Giang chỉ ra 72% trang trại sử dụng ít nhất một loại kháng sinh phòng và trị bệnh Đặc biệt, một số kháng sinh quan trọng trong điều trị bệnh cho người cũng được dùng trong chăn nuôi Tại TP.HCM, 32,6% cơ sở nuôi gà thịt sử dụng kháng sinh không hợp lý, 44,5% không ngừng sử dụng thuốc kháng sinh trước giết thịt đúng quy định Sử dụng kháng sinh không hợp lý tạo ra sản phẩm chăn nuôi không đảm bảo an toàn, dễ dẫn đến kháng thuốc của vi khuẩn Thậm chí, một số chủng E coli lưu trú trên gia cầm còn là nguồn gen tiềm ẩn đề kháng kháng sinh có thể lây sang người.
Hiện nay, có nhiều giải pháp thay thế kháng sinh như: probiotic, prebiotic, axít hữu cơ, tinh dầu, enzyme, chất kích thích miễn dịch và phytogenic (phytobiotic) bao gồm các loại thảo mộc, tinh dầu thực vật được bổ sung vào trong thức ăn gia cầm ngày càng phổ biến và đóng vai trò cải thiện lượng ăn vào, tăng hệ số chuyển hóa thức ăn, cải thiện khả năng miễn dịch, cũng như khả năng hấp thu dưỡng chất và khả năng kháng khuẩn, giúp giảm thiểu tình trạng lạm dụng kháng sinh, đồng thời góp phần mang lại hiệu quả trong điều trị bệnh E coli và các bệnh nhiễm khuẩn cho gia cầm (Mohamed et al., 2022)
Trong hệ tiêu hóa của động vật, các loài vi sinh vật và các chủng vi khuẩn hội sinh thường xuyên bị tác động bởi kháng sinh trong quá trình sản xuất; quần thể vi sinh vật luôn có sự tương tác qua lại với nhau trong hệ thống tiêu hóa Vì vậy, cơ chế tác động, kiểu gen và kiểu hình đề kháng kháng sinh diễn biến rất phức tạp, không chỉ dựa trên một hoặc một vài chủng vi khuẩn Sự tương tác của các vi sinh vật và kháng sinh ở động vật còn nhiều vấn đề cần được sáng tỏ do sự đa dạng về liều lượng, đường dùng và dược lực học của từng loại kháng sinh thay đổi tùy theo vật chủ, khiến cho bức tranh về đề kháng kháng sinh trở nên phức tạp hơn (Luo et al., 2019) Các nghiên cứu trước đây thường chỉ khảo sát sự đề kháng của một vài chủng vi khuẩn riêng lẻ, trong khi sự đề kháng kháng sinh ở cấp độ quần thể chưa được nghiên cứu Ngoài ra, các nghiên cứu về sự đề kháng kháng sinh của vi khuẩn theo thời gian, đặc biệt là E coli trên các loài vật nuôi, cũng như trên gia cầm còn rất ít Vấn đề đặt ra là sau thời gian sử dụng kháng sinh hay các sản phẩm thay thế kháng sinh có gây ra sự đề kháng ở vi khuẩn hoặc làm giảm tính đề kháng của vi khuẩn với kháng sinh
Xuất phát từ thực tế trên, chúng tôi tiến hành nghiên cứu: “Khảo sát sự thay đổi tính đề kháng kháng sinh của vi khuẩn Escherichia coli và thử nghiệm sản phẩm thay thế kháng sinh trong phòng, trị bệnh Escherichia coli trên gà tại tỉnh Đồng Tháp ”.
Mục tiêu nghiên cứu
Khảo sát sự thay đổi tính đề kháng kháng sinh của hệ vi sinh vật đường ruột thông qua sự hiện diện của các gen đề kháng ở vi khuẩn trên gà và chuột, khảo sát hiệu quả của một số chế phẩm sinh học trong phòng, trị bệnh E coli cho gà cũng như tiềm năng thay thế kháng sinh trong chăn nuôi.
Phương tiện và phương pháp nghiên cứu
Nội dung, thời gian và địa điểm nghiên cứu
Luận án nghiên cứu gồm có 3 nội dung chính:
- Nội dung 1: Điều tra thực trạng tình hình chăn nuôi và sử dụng kháng sinh trong chăn nuôi gà tại tỉnh Đồng Tháp
- Nội dung 2: Khảo sát việc sử dụng kháng sinh và sự hiện diện của gen đề kháng kháng sinh của vi khuẩn trên gà và trên chuột tại các hộ chăn nuôi
- Nội dung 3: Đánh giá hiệu quả của một số chế phẩm sinh học trong phòng, trị bệnh
+ Hiệu quả của một số chế phẩm sinh học trong phòng, trị bệnh E coli trên gà 35 ngày tuổi;
+ Hiệu quả của một số chế phẩm sinh học trong điều trị bệnh E coli trên gà con
Luận án được thực hiện từ tháng 12 năm 2018 đến tháng 09 năm 2023
- Từ tháng 12 năm 2018 đến tháng 05 năm 2021: điều tra tình hình chăn nuôi, thực trạng sử dụng kháng sinh và hu thập mẫu phân gà, phân chuột để khảo sát sự hiện diện của các gen đề kháng kháng sinh
- Từ tháng 06 năm 2021 đến tháng 07 năm 2022: bố trí thí nghiệm sử dụng kháng sinh và các chế phẩm sinh học trong phòng, trị bệnh E coli cho gà
- Từ tháng 08 năm 2022 đến tháng 09 năm 2023: phân tích số liệu và viết luận án
- Địa điểm điều tra và bố trí thí nghiệm: được thực hiện tại các hộ chăn nuôi gà ở tỉnh Đồng Tháp
- Địa điểm phân tích mẫu: tại Chi cục Chăn nuôi, Thú y và Thủy sản tỉnh Đồng Tháp; Văn phòng Đơn vị Nghiên cứu lâm sàng Đại học Oxford tại Việt Nam (OUCRU – Việt Nam); Khoa Thú y, Trường Nông Nghiệp – Trường Đại học Cần Thơ; Viện Miễn dịch trị liệu và Bệnh truyền nhiễm Cambridge (CITIID) - Khoa y, Đại học Cambridge, Vương Quốc Anh.
Phương tiện nghiên cứu
Các thiết bị, dụng cụ phục vụ cho nghiên cứu bao gồm: tủ lạnh trữ mẫu (Toshiba, Nhật), tủ -20 o C, tủ -80 o C (Acson, Nhật), tủ sấy (Sibata – SPF 300, Nhật), nồi hấp khử trùng ướt (Hirayama – HVE50, Nhật), tủ sấy khử trùng khô (Sibata – Ega52A, Nhật), tủ cấy vi sinh (Dalton, Nhật; Telsta – Bio II A), cân phân tích (Sartorius –TE214S, Nhật), tủ ấm (Gemyco – IN010, Đài Loan), tủ ấm lắc (GEFL, Đức), kính hiển vi (Olympus, Nhật), máy ly tâm (Chibitan II, Nhật), đèn Bunsen; đĩa micro 96 giếng; tăm bông vô trùng, đèn cồn, que cấy, ống nghiệm, máy lắc mẫu Vortex MX-S (DLAB, Trung Quốc); máy gia nhiệt (Dry Block Heater – Daihan Labtech Co., Ltd), máy PCR XP cycler (BIOER); bộ thiết bị điện di và đọc kết quả PCR - UVP MultiDoc - It Digital Imaging System (Fisher scientific); máy High throughput qualitative Realtime PCR (HT- qPCR) (Fluidigm, Mỹ), bộ Kit QIAartmp DNA Stool Mini (QIAGEN, Hilden, Đức), bộ giếng Biomark Dynamic Array™ 96,96, máy đo quang phổ Nanodrop 2000 (Thermo Fisher, Mỹ), efpendor, thiết bị điện di đọc kết quả HT-qPCR (Thermo Fisher scientific, Waltham, MA, Mỹ)
3.2.2 Sinh phẩm và hóa chất
Hóa chất và môi trường nuôi cấy vi khuẩn E coli: Chromogenic Coliform Agar
(CCA) (Sigma-Aldrick, Mỹ), Nutrient Agar (NA) (Merck, Đức), Mueller Hinton Agar (MHA) (Merck, Đức), cồn, glycerol, nước sinh lý 0,85%, nước cất
Cỏc đĩa giấy khỏng sinh: amoxicillin 10 àg và doxycycline 30 àg (Cụng ty Nam Khoa)
Vi khuẩn E coli - JM109 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, Mỹ)
Hóa chất sử dụng cho phản ứng PCR: MyTagTM Mix, dNTPs, Taq-polymerase, dung dịch đệm, ethidium bromide, nước tinh khiết không chứa enzyme Dnase, Rnase; 100bp DNA ladder, agarose 1,5%, PSA mix dyle Chín mươi bốn (94) cặp mồi tương ứng với các gen đề kháng với 10 nhóm kháng sinh () (Phụ lục 6) được sử dụng để khảo sát sự hiện của các gen đề kháng kháng sinh của vi khuẩn trong nội dung khảo sát việc sử dụng kháng sinh và sự hiện diện của gen đề kháng kháng sinh của vi khuẩn trên gà và trên chuột tại các hộ chăn nuôi Ngoài ra, 10 cặp mồi tương ứng với 10 gen đề kháng là blaTEM, blaCTX-M, blaSHV, blaOXA, blaAmpC; tetA, tetB, tetC, tetD và tetM (Phụ lục 9b) được sử dụng để khảo sát sự hiện diện của các gen này ở vi khuẩn E coli trong nội dung đánh giá hiệu quả của một số chế phẩm sinh học trong phòng, trị bệnh E coli cho gà
Các ô chuồng nuôi gà thí nghiệm; vắc xin phòng bệnh: newcastle, gumboro, đậu, cúm gia cầm, tụ huyết trùng, tụ huyết trùng và E coli (lọ 50 mL) của Công ty Navetco, Lactizym (gói 100g) của Công ty Naphavet; kháng sinh Amoxi 10% (gói 100g) và Doxy 50% (gói 100g) của Công ty Vemedim), Activo (chai 1000 mL) của Công ty EW
Nutrient, tỏi Lý Sơn tươi mua ở Siêu thị Coopmart Cao Lãnh và vitamin C10% của Công ty Bio Pharmacheme; thức ăn hỗn hợp cho gà L16 và L26 của Công ty Con Cò và thức ăn 517 của Công ty Lái Thiêu
Chi tiết thành phần các loại thuốc, vắc xin và các chế phẩm sinh học sử dụng trong nghiên cứu được trình bày ở Phụ lục 5 Thành phần thức ăn sử dụng cho gà thí nghiệm được trình bày ở Phụ lục 6.
Đối tượng nghiên cứu
- Gà Nòi lai Bến Tre, 1 ngày tuổi (có nguồn gốc từ Đại lý giống gia cầm An Thịnh, thị trấn Mỹ An, huyện Tháp Mười, tỉnh Đồng Tháp);
- Quần thể vi khuẩn trong phân gà, phân chuột và vi khuẩn E coli trong phân gà.
Phương pháp nghiên cứu
3.4.1 Nội dung 1: Điều tra thực trạng tình hình chăn nuôi và sử dụng kháng sinh trong chăn nuôi gà tại tỉnh Đồng Tháp
Tình hình chăn nuôi gà và thực trạng sử dụng kháng sinh được tìm hiểu qua khảo sát cắt ngang 96 hộ chăn nuôi gà thả vườn trên địa bàn tỉnh Đồng Tháp
Phương pháp tiến hành: Các hộ chăn nuôi được chọn ngẫu nhiên trên phần mềm excel từ danh sách thống kê hộ chăn nuôi gà của Chi cục Chăn nuôi, Thú y và Thủy sản tỉnh Đồng Tháp, mỗi hộ có số lượng tổng đàn gà tối thiểu từ 100 con trở lên
Hộ chăn nuôi gà được thu thập thông tin qua phiếu điều tra và sổ nhật ký chăn nuôi (Phụ lục 1); người chăn nuôi được yêu cầu ghi chép đầy đủ các thông tin về quá trình chăn nuôi, dịch bệnh và tình hình sử dụng kháng sinh trên đàn gà hàng tuần
Các chỉ tiêu theo dõi
- Thông tin người chăn nuôi: tuổi, giới tính, trình độ học vấn, kinh nghiệm chăn nuôi
- Tình hình chăn nuôi: tổng đàn, con giống, nguồn gốc, thức ăn, quy trình phòng bệnh
- Tình hình sử dụng kháng sinh: loại kháng sinh, thành phần kháng sinh, thời điểm sử dụng, tần suất sử dụng
- Sự tương quan giữa tuổi, giới tính, kinh nghiệm, trình độ học vấn đến việc sử dụng kháng sinh của người chăn nuôi
3.4.2 Nội dung 2: Khảo sát việc sử dụng kháng sinh và sự hiện diện của gen đề kháng kháng sinh của vi khuẩn trên gà và trên chuột
Mười tám (18) trong số 96 hộ chăn nuôi đã điều tra được chọn cắt ngang để thực hiện khảo sát việc sử dụng kháng sinh và sự hiện diện của các gen đề kháng kháng sinh ở vi khuẩn trên gà và trên chuột với các têu chí: (1) hộ chăn nuôi bố trí được khu vực nuôi nhóm gà đối chứng cách tối thiểu từ 50 m so với đàn gà sử dụng kháng sinh tương tự với ; (2) thực hiện chế độ chăm sóc, nuôi dưỡng như nhau giữa hai nhóm gà kháng sinh và đối chứng (trừ việc sử dụng kháng sinh); (3) ghi chép đầy đủ các thông tin, dữ liệu của các đàn gà trong suốt thời gian nghiên cứu Để không ảnh hưởng đến kết quả thí nghiệm chuồng trại nơi nuôi nhốt gà đối chứng được hỗ trợ xây dựng kín đáo, chắc chắn bằng vật liệu gỗ, tole hoặc xi măng; máng ăn, máng uống được sử dụng riêng biệt cho lô gà đối chứng
Trong quá trình nghiên cứu, nếu người chăn nuôi có nhu cầu sử dụng kháng sinh cho đàn gà, các nhà nghiên cứu sẽ tách riêng 10 con gà làm lô đối chứng Cả đàn gà nghiên cứu và lô đối chứng đều được thu mẫu phân trước thời điểm sử dụng kháng sinh Suốt quá trình nghiên cứu, cả hai nhóm gà đều được chăm sóc, nuôi dưỡng và phòng ngừa bệnh giống nhau, sử dụng cùng loại thức ăn.
Các số liệu được thu thập bao gồm: tổng đàn, con giống, lứa tuổi, thức ăn, quy trình phòng bệnh; thuốc sử dụng, thời điểm sử dụng, tần suất sử dụng và liệu trình sử dụng
3.4.2.2 Phương pháp lấy mẫu phân gà và chuột a Cách lấy mẫu phân gà
Mẫu phân của đàn gà sử dụng kháng sinh và lô gà đối chứng được hứng trực tiếp bằng các tấm nhựa sạch, có kích thước 0,5 m x 0,5 m; được đặt ở ba vị trí khác nhau trong chuồng gà Dùng miếng gạc sạch, vô trùng lau lên bề mặt tấm nhựa cho mẫu phân dính đều rồi cho vào túi nylon, bảo quản ở 4 – 8 o C và vận chuyển về phòng xét nghiệm (Farooq et al., 2022) Mẫu phân được trộn đều rồi lấy khoảng 20 - 25g hòa với 50 mL nước sinh lý Sau đó, hút 0,8 mL dung dịch mẫu cho vào 0,2 mL glycerol 100% rồi lắc đều bằng máy Vortex trong 10 giây; ống mẫu được lưu giữ ở -20C để chiết tách DNA
(1) Ban đầu (trước khi đàn gà được người chăn nuôi cho dùng kháng sinh);
(2) 07 ngày từ thời điểm kết thúc liệu trình dùng kháng sinh;
(3) 14 ngày từ thời điểm kết thúc liệu trình dùng kháng sinh;
(4) 30 ngày từ thời điểm kết thúc liệu trình dùng kháng sinh;
(5) 60 ngày từ thời điểm kết thúc liệu trình dùng kháng sinh;
(6) Kết thúc chu kỳ nuôi
Lô gà đối chứng cũng được lấy mẫu song song, cùng thời điểm với đàn gà nghiên cứu
Hình 3.1 Lấy mẫu phân gà thí nghiệm b Cách lấy mẫu phân chuột
Việc lấy mẫu phân chuột được thực hiện đồng thời với việc lấy mẫu phân gà ở 18 hộ chăn nuôi Để thực hiện, mỗi hộ chăn nuôi được phát 20 bẫy chuột làm bằng kẽm, có kích thước 10 cm x 20 cm x 10 cm và được yêu cầu đặt bẫy ngẫu nhiên xung quanh chuồng gà nghiên cứu (10 bẫy) và chuồng gà đối chứng (10 bẫy)
Thời điểm lấy mẫu (đặt bẫy)
Thời gian lấy mẫu (đặt bẫy) chuột cùng lúc với thời điểm lấy mẫu phân gà ở mỗi hộ chăn nuôi; mỗi lần đặt bẫy 01 đêm Nếu không có chuột mắc bẫy thì được yêu cầu đặt bẫy thêm 02 đêm nữa để có cơ hội có chuột mắc bẫy Chuột được mổ khảo sát và lấy mẫu phân trong trực tràng theo hướng dẫn của CERoPath (Herbreteau et al., 2011)
Hình 3.2 Chuột mắc bẫy tại các hộ chăn nuôi gà khảo sát
3.4.2.3 Số lượng mẫu thu thập được
Trong nghiên cứu, 18 đàn gà được khảo sát, mỗi đàn chia thành hai nhóm: nhóm sử dụng kháng sinh và nhóm đối chứng gồm 10 con Kết quả bẫy bắt chuột ghi nhận tổng cộng 76 con, trong đó 58 con được bẫy ở các trại gà sử dụng kháng sinh và 18 con ở các trại gà đối chứng.
Tổng cộng có 192 mẫu phân gà và 76 mẫu (phân) chuột đã được thu thập theo các thời điểm lấy mẫu được trình bày ở Bảng 3.1
Bảng 3.1 Số lượng mẫu phân gà và phân chuột thu thập được
Thời điểm lấy mẫu Ban đầu 7 ngày 14 ngày 30 ngày 60 ngày Kết thúc
Gà sử dụng kháng sinh 18 18 18 18 18 6 96
Chuột ở các trại gà đối chứng 2 5 2 4 1 4 18
Chuột ở các trại gà sử dụng kháng sinh 5 22 7 12 5 7 58
Hình 3.3 Chuẩn bị mổ chuột lấy mẫu phân trong trực tràng
3.4.2.4 Phương pháp phân tích phát hiện các gen đề kháng kháng sinh của vi khuẩn trên gà và trên chuột
Chúng tôi sử dụng kỹ thuật High throughput qualitative real time PCR để phát hiện các gen đề kháng kháng sinh theo quy trình hướng dẫn của Fluiding, được thực hiện bởi Viện Miễn dịch trị liệu và Bệnh truyền nhiễm Cambridge (CITIID) - Khoa y, Đại học Cambridge, Vương Quốc Anh
DNA của vi khuẩn trong các mẫu phân gà (hoặc mẫu phân chuột) được chiết tách bằng bộ Kit QIAartmp DNA Stool Mini (QIAGEN, Hilden, Đức) và được định lượng bằng máy đo quang phổ Nanodrop 2000 (Thermo Fisher, Mỹ) Sau đó, DNA được pha loóng đến nồng độ 10 ng/àL rồi chạy quy trỡnh HT-qPCR để phỏt hiện cỏc gen đề khỏng (ARGs) bằng máy với bộ giếng Biomark Dynamic Array™ 96,96 (BioTools, Mỹ) Quy trỡnh được túm tắt như sau: cho 1,25 àL DNA trải qua 12 chu kỳ khuếch đại trong 3,75 àL hỗn hợp pha sẵn (Preamp Master Mix, hỗn hợp của tất cả 94 cặp mồi và nước khụng có nuclease) Mẫu khuếch đại được làm sạch bằng cách sử dụng exonuclease I, rồi pha loãng 5 lần trước khi nạp vào đĩa IFC 96,96 Chu kỳ nhiệt cuối cùng và đọc kết quả hình ảnh PCR được thực hiện trên thiết bị Biomark HD
Các plasmid tổng hợp (pUC57) chứa trình tự của 94 gen mục tiêu được thiết kế dựa trên hướng dẫn của phần mềm Geneious Prime Sau đó, các plasmid này được sao chép vào vi khuẩn E coli - JM109, một chủng vi khuẩn thường được sử dụng trong các nghiên cứu và ứng dụng công nghệ sinh học.
CA, USA) theo phương pháp được mô tả bởi Dower et al., (1988) DNA plasmid được chiết xuất bằng kit QIAprep® Spin Miniprep (QIAGEN, Hilden, Đức) và được phân giải bằng enzyme cắt giới hạn EcoRV-HF (New England Biolabs, Ipswich, MA, USA), sau đó được kiểm tra bằng điện di trên gel Plasmid chiết xuất được định lượng bằng máy Nanodrop (Thermo Fisher scientific, Waltham, MA, USA) Kết quả qPCR được tính toán và trích xuất bằng phần mềm Fluidigm® qPCR Analysis v2.1 (Fluidigm Corp.) Một mẫu được xem là dương tính với gen mục tiêu nếu giá trị Ct ≤20 a Tóm tắt các bước chính trong kỹ thuật HT-qPCR
Trong mỗi ống ly tâm (microcentrifuge tube), cho vào 1 μL huyễn dịch chứa 100 μM gen mục tiêu cần xét nghiệm (delta gene), cho đến khi lấp đầy 96 giếng
Thêm dung dịch đệm huyền phù DNA (10 mM Tris, pH 8, 0,1 mM EDTA; TEKnova, PN T0221) để tạo ra thể tích cuối cùng là 200 μL Nồng độ của mỗi xét nghiệm là 500 nM b Chuẩn bị phản ứng tiền biến tính
Phương pháp xử lý số liệu
Các số liệu nghiên cứu được thu thập, xử lý trên phần mềm Microsoft Excel 2010 và phân tích thống kê bằng phần mềm Minitab version 16: phân tích One way; tương quan hồi quy và phân tích ANOVA (phép thử Chi-square và phép thử Fisher được sử dụng để so sánh giá trị trung bình và tỷ lệ giữa các nghiệm thức)
Số gà được điều trị khỏi
(4)Tỷ lệ gà khỏi bệnh (%) = X 100
CHƯƠNG IV KẾT QUẢ THẢO LUẬN
4.1 Tình hình chăn nuôi và sử dụng kháng sinh trong chăn nuôi gà tại tỉnh Đồng Tháp
Kết quả nghiên cứu cắt ngang khảo sát tại 96 hộ chăn nuôi gà trên địa bàn tỉnh Đồng Tháp có tổng đàn gà khảo sát là 44.079 con; trong đó, số hộ nuôi quy mô từ 100 -
500 con, chiếm 66,67%; từ 501 - 1.000 con, chiếm 28,13% và nuôi trên 1.000 con, chiếm 5,20% Hộ nuôi ít nhất là 100 con và hộ nuôi nhiều nhất là 2.250 con Gà chủ yếu nuôi theo hình thức thả vườn chiếm 94,79%; nuôi nhốt hoàn toàn chỉ chiếm 5,21% Giống gà được người dân địa phương nuôi nhiều nhất là gà Nòi Bến Tre, chiếm 54,17%; kế đến là gà Nòi Bình Định, chiếm 26,04%; tiếp theo là giống gà Nòi địa phương, chiếm 10,42% và còn lại 9,37% là các giống gà của công ty Jafa và 3F Việt Quy trình phòng bệnh cho gà được các hộ chăn nuôi quan tâm thực hiện với việc tiêm phòng từ 03 bệnh truyền nhiễm, nguy hiểm trở lên chiếm hơn 83,33%, với các bệnh phổ biến là cúm gia cầm, newcastle và gumboro,… Trong đó, đáng chủ ý là số hộ tiêm phòng từ 05 bệnh truyền nhiễm trở lên chiếm hơn 20% Tuy nhiên, cũng có gần 16% hộ chăn nuôi chỉ tiêm phòng từ 01 – 02 bệnh truyền nhiễm, nguy hiểm cho gà (đáng lưu ý là không tiêm phòng vắc xin cúm gia cầm) và có 01 hộ chăn nuôi không tiêm phòng bất kỳ loại vắc xin nào Điều này tiềm ẩn nhiều nguy cơ bùng phát dịch bệnh truyền nhiễm, nguy hiểm trên đàn gà, đặc biệt là cúm gia cầm, gây tỷ lệ chết rất cao và có nguy cơ lây truyền bệnh từ gia cầm sang người
Bảng 4.1 Tình hình chăn nuôi gà tại các hộ chăn nuôi khảo sát (n)
Tình hình chăn nuôi Số lượng
Phương thức nuôi Thả vườn 91 94,79
Vắc xin phòng bệnh Không tiêm vắc xin 1 1,04
>= 5 bệnh (newcastle, gumboro, cúm, IB/đậu, tụ huyết trùng, E coli ) 20 20,83
4.1.2 Tình hình sử dụng kháng sinh của các hộ chăn nuôi
4.1.2.1 Số lượng kháng sinh, thời điểm sử dụng và thời gian ngừng sử dụng trước khi xuất bán
Kết quả khảo sát cho thấy tỷ lệ sử dụng kháng sinh trong chăn nuôi gà rất cao, với 87,5% hộ chăn nuôi sử dụng ít nhất một sản phẩm kháng sinh Trong đó, 54,17% hộ sử dụng 1-2 sản phẩm kháng sinh và 33,33% hộ sử dụng từ 3 sản phẩm trở lên, thậm chí có trường hợp sử dụng tới 12 sản phẩm kháng sinh trong một lứa nuôi Tỷ lệ này cao hơn so với nghiên cứu của Nguyễn Văn Cường và cộng sự (2016) tại Tiền Giang, với 72% trại chăn nuôi sử dụng kháng sinh để phòng và điều trị bệnh cho gà.
Bảng 4.2 Số lượng sản phẩm kháng sinh sử dụng, thời điểm sử dụng và thời gian ngừng sử dụng trước khi xuất bán (n)
Tình hình sử dụng kháng sinh Số hộ sử dụng Tỷ lệ (%)
Số lượng sản phẩm kháng sinh sử dụng trong một lứa nuôi
Thời điểm sử dụng kháng sinh
Thời gian ngừng sử dụng kháng sinh trước khi xuất bán Trước 15 ngày 96 100
Về lứa tuổi sử dụng thì đa phần người chăn nuôi đã sử dụng kháng sinh cho đàn gà từ rất sớm, có đến 70,83% kháng sinh được sử dụng cho gà ngay trong tuần tuổi đầu tiên của giai đoạn úm; 28,13% được sử dụng lúc gà được từ 02 tuần tuổi và 17,71% lúc gà ở 03 tuần tuổi Đặc biệt, khi gà được khoảng 01 tháng tuổi thì số hộ sử dụng kháng sinh cho gà lại tăng lên, chiếm 58,33% Điều này, có thể là do đây là giai đoạn nhạy cảm sau thời gian úm, gà được thả ra sân vườn nên có nhiều yếu tố bất lợi ảnh hưởng đến sức khỏe đàn gà Vì vậy, nhiều người chăn nuôi sử dụng kháng sinh để phòng bệnh cho gà trong giai đoạn này Theo Asokan & Kasimanickam (2013) việc sử dụng kháng sinh không hợp lý có thể sẽ tạo ra các sản phẩm chăn nuôi không đảm bảo an toàn cho người tiêu dùng và dễ dẫn tới sự phát triển tính đề kháng thuốc của vi khuẩn
Về thời gian ngừng sử dụng thuốc kháng sinh trước khi xuất bán thì hầu hết các hộ chăn nuôi khảo sát đều không còn sử dụng kháng sinh sau khi đàn gà được 03 tháng tuổi Nguyên nhân có thể là do gà từ 03 tháng tuổi trở lên ít có bệnh tật hơn gà ở giai đoạn còn nhỏ và việc không sử dụng kháng sinh ở tháng cuối cùng trước khi xuất bán có thể ít nguy cơ tồn dư kháng sinh trong sản phẩm thịt gà của các hộ chăn nuôi khảo sát Trong một nghiên cứu tại thành phố Hồ Chí Minh đã cho thấy có đến 32,6% cơ sở nuôi gà thịt sử dụng kháng sinh không hợp lý và 44,5% các cơ sở không ngừng sử dụng thuốc kháng sinh trước khi giết thịt đúng theo quy định (Võ Thị Trà An và ctv., 2002) và một nghiên cứu tại tỉnh Bình Dương cũng cho kết quả tương tự khi có đến 40% cơ sở chăn nuôi gà sử dụng kháng sinh không an toàn cho đến khi xuất bán (Do Thi Thuy Nga et al., 2014) Một nghiên cứu khác ở Nepal cũng cho thấy người nông dân đã không duy trì được khoảng thời gian tối thiểu giữa liều thuốc kháng sinh cuối cùng và thời điểm giết mổ gia cầm Kết quả này có thể là do nông dân chưa nhận thức đầy đủ về đề kháng kháng sinh, cũng như hậu quả của nó Việc không tuân thủ thời gian cai thuốc dẫn đến mức độ bài thải thuốc thấp và điều này có thể làm tăng nguy cơ kháng thuốc ở vi khuẩn (Prajapati et al., 2018) Mặc dù kết quả nghiên cứu của chúng tôi không có đàn gà nào còn sử dụng kháng sinh từ thời điểm sau 60 ngày tuổi cho đến khi xuất bán, tuy nhiên tỷ lệ hộ chăn nuôi có sử dụng kháng sinh chiếm tỷ lệ rất cao (87,5%) đây có thể là nguy cơ hình thành khả năng đề kháng kháng sinh của vi khuẩn lưu trú trên đàn gà Theo việc sử dụng kháng sinh là chìa khóa của đề kháng kháng sinh
4.1.2.2 Số lượng sản phẩm sử dụng
Qua khảo sát, có tổng cộng 577 loại sản phẩm của 57 công ty được người chăn nuôi sử dụng Trong đó, sản phẩm kháng sinh chiếm tỷ lệ lớn nhất với 203 loại (35,18%), tiếp theo là chất bổ trợ giảm đau, hạ sốt, vitamin và khoáng (230 loại, 39,86%) Các loại men tiêu hóa, thuốc tẩy ký sinh trùng và nhóm sản phẩm khác ( kháng thể, men vi sinh xử lý chất thải ) lần lượt chiếm 8,84%, 9,71% và 6,41%.
Bảng 4.3 Số lượng sản phẩm sử dụng (nW7)
Chỉ tiêu theo dõi Số lượng Tỷ lệ (%)
Sản phẩm có chứa kháng sinh 203 35,18
Sản phẩm chứa các chất bổ trợ, khoáng và vitamin 230 39,86 Sản phẩm là men tiêu hóa (lactizym, laczyme,…) 51 8,84
Sản phẩm là thuốc tẩy ký sinh trùng 56 9,71
Sản phẩm khác (kháng thể và men xử lý chất độn chuồng) 37 6,41
Sản phẩm là kháng sinh đơn 43 50,74
Sản phẩm có từ 02 kháng sinh trở lên 160 78,82
Sản phẩm chỉ chứa kháng sinh 132 65,02
Sản phẩm chứa kháng sinh và các thành phần khác (vitamin, khoáng, chất giảm đau, hạ sốt…) 71 34,98
Kết quả trên cho thấy, tỷ lệ sử dụng kháng sinh tại các hộ chăn nuôi gà khảo sát là khá cao, chiếm 35,18% Kết quả này thấp hơn với nghiên cứu của Đơn vị nghiên cứu lâm sàng Đại học Oxford (OUCRU – Việt Nam) tại các hộ chăn nuôi gà ở tỉnh Tiền Giang, cho thấy mức độ sử dụng kháng sinh tính theo đầu gia cầm cao gấp 6 lần so với mức ghi nhận được ở một số nước Châu Âu; trong đó, có đến 84% kháng sinh được sử dụng để phục vụ cho mục đích phòng và điều trị bệnh cho gà (Carrique Mas et al., 2014)
Trong 203 sản phẩm kháng sinh người chăn nuôi đã sử dụng, có 132 (65,02%) sản phẩm chỉ chứa kháng sinh và 71 (34,98%) sản phẩm ở dạng phối trộn với các hợp chất khác như chất giảm đau, hạ sốt, các vitamin và khoáng… Ngoài ra, có đến 160 (78,82%) sản phẩm ở dạng phối hợp từ hai loại kháng sinh trở lên và 43 (21,18%) sản phẩm chỉ chứa một loại kháng sinh
4.1.2.3 Phân nhóm kháng sinh sử dụng
Khảo sát cho thấy trong số 325 lượt thành phần kháng sinh sử dụng, có 133 lượt thuộc nhóm đặc biệt quan trọng (40,93%) và 42 lượt thuộc nhóm rất quan trọng (12,92%) Trong nhóm đặc biệt quan trọng, colistin được sử dụng nhiều nhất (21,54%), tiếp đến là tylosin (9,23%) Ngoài ra, oxytetracyline, một kháng sinh quan trọng, cũng được sử dụng rộng rãi (20,92%), cao hơn nghiên cứu của OUCRU nhưng thấp hơn khảo sát của Dương Thị Toan và cộng sự.
Bảng 4.4 Kết quả phân nhóm kháng sinh quan trọng trong điều trị bệnh cho người theo Tổ chức Y tế thế giới (WHO), 2019
Phân nhóm kháng sinh quan trọng trong điều trị bệnh cho người
Kháng sinh Số lượt sử dụng Tỷ lệ %
Nhóm đặc biệt quan trọng
Nhóm kháng sinh đặc biệt quan trọng và rất quan trọng được các hộ chăn nuôi gà sử dụng chiếm hơn 53% Theo Tổ chức Y tế thế giới (WHO) (2019), nhóm kháng sinh đặc biệt quan trọng được xem là liệu pháp cuối cùng được dùng cho các trường hợp nhiễm khuẩn nghiêm trọng, có thể gây nguy hiểm đến tính mạng con người Đây là nhóm kháng sinh được cân nhắc sử dụng và cần cẩn trọng khi sử dụng trên vật nuôi, nhằm hạn chế nguy cơ kháng thuốc và giữ lại các kháng sinh còn hiệu quả để điều trị các bệnh nhiễm khuẩn nguy hiểm cho con người Kết quả này cảnh báo nguy cơ đề kháng kháng sinh trên vật nuôi có thể lây truyền sang con người và nếu không được kiểm soát, cân nhắc, cẩn trọng khi sử dụng thì đến một lúc nào đó, một số bệnh nhiễm khuẩn, nguy hiểm ở người sẽ không còn được điều trị hiệu quả bởi bất kỳ loại kháng sinh nào và con người sẽ tử vong do vi khuẩn đề kháng thuốc Điều này cho thấy việc sử dụng các loại kháng sinh được cho là cực kỳ quan trọng trong điều trị các bệnh nhiễm khuẩn cho con người trong chăn nuôi, sẽ có nguy cơ tiềm ẩn dẫn đến sự đề kháng kháng sinh ở người nếu các loại kháng sinh này được sử dụng không hợp lý
Hình 4.1 Biểu đồ tỷ lệ kháng sinh được sử dụng theo phân nhóm kháng sinh quan trọng trong điều trị bệnh cho con người
4.2 Kết quả phân tích mối tương quan yếu tố ảnh hưởng đến việc sử dụng kháng sinh của người chăn nuôi
Trong quá trình điều tra, chúng tôi cũng thu thập nột số thông tin của người chăn nuôi và phân tich mối tương quan của các yếu tố ảnh hưởng đến việc sử dụng kháng sinh của người chăn nuôi được trình bày ở Bảng 4.5
Bảng 4.5 Thông tin của các hộ chăn nuôi trong nghiên cứu
Chỉ tiêu theo dõi Kết quả điều tra (số hộ) Tỷ lệ (%) Tuổi
- Trình độ chuyên môn chăn nuôi - thú y 2 2,08
Nhóm đặc biệt quan trọng…
Kết quả điều tra cho thấy đa số người chăn nuôi đều ở độ tuổi lao động, trong đó dưới 40 tuổi chiếm 21,88% và từ 40 – 60 tuổi chiếm 64,58%, quá tuổi lao động chiếm 13,54% Về giới tính đa số người chăn nuôi được điều tra là nam giới chiếm 79,17%; còn lại là 20,83 là nữ Về trình độ học vấn đa phần người chăn nuôi có trình độ từ trung học cơ sở trở lên chiếm tỷ lệ 41,67%, tiếp theo là trung học phổ thông chiếm tỷ lệ 36,46%; cao đẳng, đại học chiếm 6,25% và trong đó cũng có 2,08% người chăn nuôi có trình độ chuyên môn là chăn nuôi, thú y; số ít còn lại có trình độ.tiểu học 13,54%
Chúng tôi cũng phân tích mối tương quan giữa các yếu tố như: độ tuổi, giới tính, trình độ học vấn và kinh nghiệm của người chăn nuôi, chúng tôi nhận thấy độ tuổi, giới tính và trình độ học vấn không có mối tương quan đến việc sử dụng kháng sinh Tuy nhiên, kinh nghiệm chăn nuôi có mối tương quan thuận với việc sử dụng kháng sinh; người chăn nuôi càng có nhiều kinh nghiệm thì tần suất sử dụng kháng sinh nhiều hơn so với người có ít kinh nghiệm hơn ở mức ý nghĩa P = 0,015 (Hình 4.2)
Hình 4.2 Biểu đồ tương quan giữa kinh nghiệm chăn nuôi và tần suất sử dụng kháng sinh
Tần suất sử dụng kháng sinh (lần/chu kỳ)
Kinh nghiệm chăn nuôi (năm)
4.3 Kết quả khảo sát sự hiện diện của gen đề kháng kháng sinh ở vi khuẩn trên gà và chuột
4.3.1 Kết quả tình hình sử dụng kháng sinh của các đàn gà khảo sát
Bảng 4.6 Tình hình sử dụng kháng sinh tại các hộ chăn nuôi khảo sát (n)
Lần sử dụng Lần 1 Lần 2 Lần 3
Số ngày sử dụng Kháng sinh Tuổi gà
Số ngày sử dụng Kháng sinh Tuổi gà
Số ngày sử dụng Kháng sinh
6 1 4 colistin, oxytetracyline 36 4 colistin, ampicillin, sulfaquinoxaline 41 3 flumequin
11 1 7 oxytetracyline 21 2 diaveridine, sulfadimerazin 35 3 diaveridine, sulfadimidine
13 1 13 colistin, oxytetracyline 14 5 colistin, gentamicin; erythromycine, doxyciline; diaveridine, sulfamethoxazol
16 1 7 oxytetracyline, colistin 14 3 trimethoprim, sulfachloropyrazin 21 3 doxyciline, lincomycin
17 1 3 oxytetracycline, streptomycin 4 3 enrofloxacin 30 3 amoxicillin, colistin
54 Qua thống kê tình hình sử dụng kháng sinh tại 18 hộ chăn nuôi gà khảo sát, chúng tôi ghi nhận có 84 lượt sản phẩm thuốc thú y được sử dụng Trong đó, có 39/84 lượt sản phẩm có chứa kháng sinh, chiếm tỷ lệ 46,43% Colistin là thành phần kháng sinh được sử dụng nhiều nhất, chiếm 38,46% (15/29 lượt kháng sinh sử dụng); tiếp theo là oxytetracycline, chiếm 35,90% (14/39 lượt kháng sinh sử dụng), kế đến là doxycycline, chiếm 15,38% (06/39 lượt kháng sinh sử dụng) và amoxicillin là 12,82% (05/39 lượt kháng sinh sử dụng), còn lại các thành phần kháng sinh khác được sử dụng ít hơn Có thể trong thời gian gần đây do việc sử dụng amoxicillin tỏ ra kém hiệu quả, vì thế mà người chăn nuôi không ưu tiên lựa chọn amoxicillin sử dụng trong phòng và trị bệnh cho đàn gà của họ Theo Eric (2011), việc điều trị bệnh do vi khuẩn bằng kháng sinh hiện nay ít thành công hơn so với trước đây, do sự đề kháng kháng sinh lan rộng và thiếu kháng sinh mới Đa số các hộ chăn nuôi đã sử dụng kháng sinh cho đàn gà từ rất sớm, với 72,22% (13/18) hộ chăn nuôi sử dụng cho gà ở tuần tuổi đầu tiên; có 44,44% (08/18) hộ sử dụng cho gà ở tuần tuổi thứ hai và 61,11% (11/18) hộ sử dụng cho gà ở tuần tuổi thứ ba; từ sau 65 ngày tuổi trở đi thì không có đàn gà nào được sử dụng kháng sinh Có đến 44,44% (08/18) hộ chăn nuôi có tần suất hai lần sử dụng kháng sinh cho gà và 33,33% (06/18) hộ chăn nuôi có tần suất sử dụng ba lần kháng sinh trong quá trình nuôi
Colistin và Oxytetracycline Oxytetracycline và kháng sinh khác Amoxicillin Kháng sinh khác
Colistin và kháng sinh khác Oxytetracycline Doxycyline
Hình 4.3 Tình hình sử dụng kháng sinh ở các đàn gà khảo sát
4.3.2 Kết quả khảo sát sự hiện của các gen đề kháng kháng sinh ở vi khuẩn trên gà và trên chuột
4.3.2.1 Số kiểu gen đề kháng của vi khuẩn trên gà và trên chuột
Bảng 4.7 Kết quả số kiểu gen đề kháng kháng sinh của vi khuẩn phát hiện trên gà và trên chuột
Số kiểu gen mục tiêu khảo sát
Nhóm sử dụng kháng sinh (%) Ở các trại gà đối chứng (%) Ở các trại gà sử dụng kháng sinh (%)
Ghi chú: MLSB: macrolide, lincosamide và streptogramin B
Kết quả thảo luận
Tình hình chăn nuôi và sử dụng kháng sinh trong chăn nuôi gà
Kết quả nghiên cứu cắt ngang khảo sát tại 96 hộ chăn nuôi gà trên địa bàn tỉnh Đồng Tháp có tổng đàn gà khảo sát là 44.079 con; trong đó, số hộ nuôi quy mô từ 100 -
500 con, chiếm 66,67%; từ 501 - 1.000 con, chiếm 28,13% và nuôi trên 1.000 con, chiếm 5,20% Hộ nuôi ít nhất là 100 con và hộ nuôi nhiều nhất là 2.250 con Gà chủ yếu nuôi theo hình thức thả vườn chiếm 94,79%; nuôi nhốt hoàn toàn chỉ chiếm 5,21% Giống gà được người dân địa phương nuôi nhiều nhất là gà Nòi Bến Tre, chiếm 54,17%; kế đến là gà Nòi Bình Định, chiếm 26,04%; tiếp theo là giống gà Nòi địa phương, chiếm 10,42% và còn lại 9,37% là các giống gà của công ty Jafa và 3F Việt Quy trình phòng bệnh cho gà được các hộ chăn nuôi quan tâm thực hiện với việc tiêm phòng từ 03 bệnh truyền nhiễm, nguy hiểm trở lên chiếm hơn 83,33%, với các bệnh phổ biến là cúm gia cầm, newcastle và gumboro,… Trong đó, đáng chủ ý là số hộ tiêm phòng từ 05 bệnh truyền nhiễm trở lên chiếm hơn 20% Tuy nhiên, cũng có gần 16% hộ chăn nuôi chỉ tiêm phòng từ 01 – 02 bệnh truyền nhiễm, nguy hiểm cho gà (đáng lưu ý là không tiêm phòng vắc xin cúm gia cầm) và có 01 hộ chăn nuôi không tiêm phòng bất kỳ loại vắc xin nào Điều này tiềm ẩn nhiều nguy cơ bùng phát dịch bệnh truyền nhiễm, nguy hiểm trên đàn gà, đặc biệt là cúm gia cầm, gây tỷ lệ chết rất cao và có nguy cơ lây truyền bệnh từ gia cầm sang người
Bảng 4.1 Tình hình chăn nuôi gà tại các hộ chăn nuôi khảo sát (n)
Tình hình chăn nuôi Số lượng
Phương thức nuôi Thả vườn 91 94,79
Vắc xin phòng bệnh Không tiêm vắc xin 1 1,04
>= 5 bệnh (newcastle, gumboro, cúm, IB/đậu, tụ huyết trùng, E coli ) 20 20,83
4.1.2 Tình hình sử dụng kháng sinh của các hộ chăn nuôi
4.1.2.1 Số lượng kháng sinh, thời điểm sử dụng và thời gian ngừng sử dụng trước khi xuất bán
Kết quả khảo sát cho thấy 87,5% hộ chăn nuôi đã sử dụng ít nhất một sản phẩm kháng sinh cho đàn gà của mình Trong một chu kỳ nuôi, có 54,17% hộ chăn nuôi đã sử dụng từ 01 – 02 sản phẩm kháng sinh và có đến 33,33% hộ sử dụng từ 03 sản phẩm trở lên; trong đó, cá biệt có 01 hộ sử dụng đến 12 sản phẩm kháng sinh trong một lứa nuôi Kết quả này cao hơn nghiên cứu của Nguyen Van Cuong et al (2016) tại tỉnh Tiền Giang cho thấy có đến 72% số trại chăn nuôi sử dụng ít nhất một loại kháng sinh để phòng và điều trị bệnh cho gà
Bảng 4.2 Số lượng sản phẩm kháng sinh sử dụng, thời điểm sử dụng và thời gian ngừng sử dụng trước khi xuất bán (n)
Tình hình sử dụng kháng sinh Số hộ sử dụng Tỷ lệ (%)
Số lượng sản phẩm kháng sinh sử dụng trong một lứa nuôi
Thời điểm sử dụng kháng sinh
Thời gian ngừng sử dụng kháng sinh trước khi xuất bán Trước 15 ngày 96 100
Về lứa tuổi sử dụng thì đa phần người chăn nuôi đã sử dụng kháng sinh cho đàn gà từ rất sớm, có đến 70,83% kháng sinh được sử dụng cho gà ngay trong tuần tuổi đầu tiên của giai đoạn úm; 28,13% được sử dụng lúc gà được từ 02 tuần tuổi và 17,71% lúc gà ở 03 tuần tuổi Đặc biệt, khi gà được khoảng 01 tháng tuổi thì số hộ sử dụng kháng sinh cho gà lại tăng lên, chiếm 58,33% Điều này, có thể là do đây là giai đoạn nhạy cảm sau thời gian úm, gà được thả ra sân vườn nên có nhiều yếu tố bất lợi ảnh hưởng đến sức khỏe đàn gà Vì vậy, nhiều người chăn nuôi sử dụng kháng sinh để phòng bệnh cho gà trong giai đoạn này Theo Asokan & Kasimanickam (2013) việc sử dụng kháng sinh không hợp lý có thể sẽ tạo ra các sản phẩm chăn nuôi không đảm bảo an toàn cho người tiêu dùng và dễ dẫn tới sự phát triển tính đề kháng thuốc của vi khuẩn
Về thời gian ngừng sử dụng thuốc kháng sinh trước khi xuất bán thì hầu hết các hộ chăn nuôi khảo sát đều không còn sử dụng kháng sinh sau khi đàn gà được 03 tháng tuổi Nguyên nhân có thể là do gà từ 03 tháng tuổi trở lên ít có bệnh tật hơn gà ở giai đoạn còn nhỏ và việc không sử dụng kháng sinh ở tháng cuối cùng trước khi xuất bán có thể ít nguy cơ tồn dư kháng sinh trong sản phẩm thịt gà của các hộ chăn nuôi khảo sát Trong một nghiên cứu tại thành phố Hồ Chí Minh đã cho thấy có đến 32,6% cơ sở nuôi gà thịt sử dụng kháng sinh không hợp lý và 44,5% các cơ sở không ngừng sử dụng thuốc kháng sinh trước khi giết thịt đúng theo quy định (Võ Thị Trà An và ctv., 2002) và một nghiên cứu tại tỉnh Bình Dương cũng cho kết quả tương tự khi có đến 40% cơ sở chăn nuôi gà sử dụng kháng sinh không an toàn cho đến khi xuất bán (Do Thi Thuy Nga et al., 2014) Một nghiên cứu khác ở Nepal cũng cho thấy người nông dân đã không duy trì được khoảng thời gian tối thiểu giữa liều thuốc kháng sinh cuối cùng và thời điểm giết mổ gia cầm Kết quả này có thể là do nông dân chưa nhận thức đầy đủ về đề kháng kháng sinh, cũng như hậu quả của nó Việc không tuân thủ thời gian cai thuốc dẫn đến mức độ bài thải thuốc thấp và điều này có thể làm tăng nguy cơ kháng thuốc ở vi khuẩn (Prajapati et al., 2018) Mặc dù kết quả nghiên cứu của chúng tôi không có đàn gà nào còn sử dụng kháng sinh từ thời điểm sau 60 ngày tuổi cho đến khi xuất bán, tuy nhiên tỷ lệ hộ chăn nuôi có sử dụng kháng sinh chiếm tỷ lệ rất cao (87,5%) đây có thể là nguy cơ hình thành khả năng đề kháng kháng sinh của vi khuẩn lưu trú trên đàn gà Theo việc sử dụng kháng sinh là chìa khóa của đề kháng kháng sinh
4.1.2.2 Số lượng sản phẩm sử dụng
Qua khảo sát, có tổng cộng 577 sản phẩm của 57 công ty đã được người chăn nuôi sử dụng Trong đó, có 203 sản phẩm là kháng sinh, chiếm tỷ lệ 35,18%; còn lại là các sản phẩm khác bao gồm: 230 sản phẩm là các chất bổ trợ giảm đau, hạ sốt, vitamin và khoáng, chiếm tỷ lệ 39,86%, 51 sản phẩm là men tiêu hóa, chiếm tỷ lệ 8,84%, 56 sản phẩm là thuốc tẩy ký sinh trùng, chiếm tỷ lệ 9,71% và 37 sản phẩm khác gồm kháng thể và men vi sinh xử lý chất thải chiếm tỷ lệ 6,41%
Bảng 4.3 Số lượng sản phẩm sử dụng (nW7)
Chỉ tiêu theo dõi Số lượng Tỷ lệ (%)
Sản phẩm có chứa kháng sinh 203 35,18
Sản phẩm chứa các chất bổ trợ, khoáng và vitamin 230 39,86 Sản phẩm là men tiêu hóa (lactizym, laczyme,…) 51 8,84
Sản phẩm là thuốc tẩy ký sinh trùng 56 9,71
Sản phẩm khác (kháng thể và men xử lý chất độn chuồng) 37 6,41
Sản phẩm là kháng sinh đơn 43 50,74
Sản phẩm có từ 02 kháng sinh trở lên 160 78,82
Sản phẩm chỉ chứa kháng sinh 132 65,02
Sản phẩm chứa kháng sinh và các thành phần khác (vitamin, khoáng, chất giảm đau, hạ sốt…) 71 34,98
Kết quả trên cho thấy, tỷ lệ sử dụng kháng sinh tại các hộ chăn nuôi gà khảo sát là khá cao, chiếm 35,18% Kết quả này thấp hơn với nghiên cứu của Đơn vị nghiên cứu lâm sàng Đại học Oxford (OUCRU – Việt Nam) tại các hộ chăn nuôi gà ở tỉnh Tiền Giang, cho thấy mức độ sử dụng kháng sinh tính theo đầu gia cầm cao gấp 6 lần so với mức ghi nhận được ở một số nước Châu Âu; trong đó, có đến 84% kháng sinh được sử dụng để phục vụ cho mục đích phòng và điều trị bệnh cho gà (Carrique Mas et al., 2014)
Trong 203 sản phẩm kháng sinh mà người chăn nuôi sử dụng, có đến 160 sản phẩm (78,82%) là sự phối hợp của hai loại kháng sinh trở lên, trong khi chỉ có 43 sản phẩm (21,18%) chỉ chứa một loại kháng sinh Hầu hết các sản phẩm kháng sinh này (65,02%) chỉ bao gồm kháng sinh, trong khi 34,98% còn lại có sự kết hợp với các chất khác như giảm đau, hạ sốt, vitamin và khoáng chất.
4.1.2.3 Phân nhóm kháng sinh sử dụng
Kết quả khảo sát cho thấy, trong 203 sản phẩm kháng sinh sử dụng, có 35 loại kháng sinh, với 325 lượt thành phần kháng sinh đã được sử dụng Trong đó, có đến 40,93% (133/325) lượt thành phần kháng sinh thuộc nhóm kháng sinh đặc biệt quan trọng và 12,92% (42/325) lượt thành phần kháng sinh thuộc nhóm rất quan trọng trong điều trị bệnh cho con người Trong nhóm kháng sinh đặc biệt quan trọng, có hai kháng sinh được sử dụng nhiều là colistin chiếm 21,54% và tylosin chiếm 9,23% lượt thành phần kháng sinh sử dụng Ngoài ra, một loại kháng sinh khác thuộc nhóm khá quan trọng trong điều trị bệnh cho người cũng được các hộ chăn nuôi gà sử dụng rất nhiều là oxytetracyline chiếm đến 20,92% Kết quả này cao hơn nghiên cứu của Đơn vị Nghiên cứu Lâm sàng Đại học Oxford (OUCRU – Việt Nam) tại các hộ chăn nuôi gà ở tỉnh Tiền Giang cho thấy các loại thuốc kháng sinh được sử nhiều là colistin (18,6%) và nhóm tetracycline (doxycycline, oxytetracyline và tetracycline) (17,5%) (Carrique Mas et al., 2014), nhưng thấp hơn khảo sát của Dương Thị Toan và ctv (2015) về tình hình sử dụng kháng sinh trong chăn nuôi gà thịt tại tỉnh Bắc Giang, có tỷ lệ các loại kháng sinh được sử dụng nhiều là doxycycline (55,0%), tiamuline (50,0%), tylosine (45,0%), colistin (40,0%), enrofloxacine (40,0%) và chlotetracycline (35,0%)
Bảng 4.4 Kết quả phân nhóm kháng sinh quan trọng trong điều trị bệnh cho người theo Tổ chức Y tế thế giới (WHO), 2019
Phân nhóm kháng sinh quan trọng trong điều trị bệnh cho người
Kháng sinh Số lượt sử dụng Tỷ lệ %
Nhóm đặc biệt quan trọng
Nhóm kháng sinh đặc biệt quan trọng chiếm hơn 53% lượng sử dụng trong chăn nuôi gà Theo Tổ chức Y tế Thế giới (2019), nhóm kháng sinh này giữ vai trò là liệu pháp cuối cùng cho các ca nhiễm khuẩn nghiêm trọng, đe dọa tính mạng ở người Việc sử dụng không hợp lý nhóm kháng sinh này trên vật nuôi có nguy cơ lây truyền kháng thuốc sang người, khiến vi khuẩn đề kháng lại các loại kháng sinh còn hiệu quả, dẫn đến tình trạng không còn thuốc điều trị bệnh nhiễm khuẩn nguy hiểm ở người, gây tử vong cho bệnh nhân.
Hình 4.1 Biểu đồ tỷ lệ kháng sinh được sử dụng theo phân nhóm kháng sinh quan trọng trong điều trị bệnh cho con người
Kết quả phân tích mối tương quan yếu tố ảnh hưởng đến việc sử dụng kháng sinh của người chăn nuôi
Trong quá trình điều tra, chúng tôi cũng thu thập nột số thông tin của người chăn nuôi và phân tich mối tương quan của các yếu tố ảnh hưởng đến việc sử dụng kháng sinh của người chăn nuôi được trình bày ở Bảng 4.5
Bảng 4.5 Thông tin của các hộ chăn nuôi trong nghiên cứu
Chỉ tiêu theo dõi Kết quả điều tra (số hộ) Tỷ lệ (%) Tuổi
- Trình độ chuyên môn chăn nuôi - thú y 2 2,08
Nhóm đặc biệt quan trọng…
Kết quả điều tra cho thấy đa số người chăn nuôi đều ở độ tuổi lao động, trong đó dưới 40 tuổi chiếm 21,88% và từ 40 – 60 tuổi chiếm 64,58%, quá tuổi lao động chiếm 13,54% Về giới tính đa số người chăn nuôi được điều tra là nam giới chiếm 79,17%; còn lại là 20,83 là nữ Về trình độ học vấn đa phần người chăn nuôi có trình độ từ trung học cơ sở trở lên chiếm tỷ lệ 41,67%, tiếp theo là trung học phổ thông chiếm tỷ lệ 36,46%; cao đẳng, đại học chiếm 6,25% và trong đó cũng có 2,08% người chăn nuôi có trình độ chuyên môn là chăn nuôi, thú y; số ít còn lại có trình độ.tiểu học 13,54%
Chúng tôi đã phân tích mối tương quan giữa các yếu tố nhân khẩu học của người chăn nuôi, bao gồm tuổi tác, giới tính, trình độ học vấn và kinh nghiệm, với việc sử dụng kháng sinh trong chăn nuôi Kết quả cho thấy tuổi tác, giới tính và trình độ học vấn không có mối liên hệ đáng kể với tần suất sử dụng kháng sinh Tuy nhiên, kinh nghiệm chăn nuôi lại có mối tương quan thuận với việc sử dụng kháng sinh Người chăn nuôi có nhiều kinh nghiệm có xu hướng sử dụng kháng sinh thường xuyên hơn so với những người ít kinh nghiệm, với giá trị P = 0,015.
Hình 4.2 Biểu đồ tương quan giữa kinh nghiệm chăn nuôi và tần suất sử dụng kháng sinh
Tần suất sử dụng kháng sinh (lần/chu kỳ)
Kinh nghiệm chăn nuôi (năm)
Kết quả khảo sát sự hiện diện của gen đề kháng kháng sinh ở vi khuẩn trên gà và chuột
4.3.1 Kết quả tình hình sử dụng kháng sinh của các đàn gà khảo sát
Bảng 4.6 Tình hình sử dụng kháng sinh tại các hộ chăn nuôi khảo sát (n)
Lần sử dụng Lần 1 Lần 2 Lần 3
Số ngày sử dụng Kháng sinh Tuổi gà
Số ngày sử dụng Kháng sinh Tuổi gà
Số ngày sử dụng Kháng sinh
6 1 4 colistin, oxytetracyline 36 4 colistin, ampicillin, sulfaquinoxaline 41 3 flumequin
11 1 7 oxytetracyline 21 2 diaveridine, sulfadimerazin 35 3 diaveridine, sulfadimidine
13 1 13 colistin, oxytetracyline 14 5 colistin, gentamicin; erythromycine, doxyciline; diaveridine, sulfamethoxazol
16 1 7 oxytetracyline, colistin 14 3 trimethoprim, sulfachloropyrazin 21 3 doxyciline, lincomycin
17 1 3 oxytetracycline, streptomycin 4 3 enrofloxacin 30 3 amoxicillin, colistin
54 Qua thống kê tình hình sử dụng kháng sinh tại 18 hộ chăn nuôi gà khảo sát, chúng tôi ghi nhận có 84 lượt sản phẩm thuốc thú y được sử dụng Trong đó, có 39/84 lượt sản phẩm có chứa kháng sinh, chiếm tỷ lệ 46,43% Colistin là thành phần kháng sinh được sử dụng nhiều nhất, chiếm 38,46% (15/29 lượt kháng sinh sử dụng); tiếp theo là oxytetracycline, chiếm 35,90% (14/39 lượt kháng sinh sử dụng), kế đến là doxycycline, chiếm 15,38% (06/39 lượt kháng sinh sử dụng) và amoxicillin là 12,82% (05/39 lượt kháng sinh sử dụng), còn lại các thành phần kháng sinh khác được sử dụng ít hơn Có thể trong thời gian gần đây do việc sử dụng amoxicillin tỏ ra kém hiệu quả, vì thế mà người chăn nuôi không ưu tiên lựa chọn amoxicillin sử dụng trong phòng và trị bệnh cho đàn gà của họ Theo Eric (2011), việc điều trị bệnh do vi khuẩn bằng kháng sinh hiện nay ít thành công hơn so với trước đây, do sự đề kháng kháng sinh lan rộng và thiếu kháng sinh mới Đa số các hộ chăn nuôi đã sử dụng kháng sinh cho đàn gà từ rất sớm, với 72,22% (13/18) hộ chăn nuôi sử dụng cho gà ở tuần tuổi đầu tiên; có 44,44% (08/18) hộ sử dụng cho gà ở tuần tuổi thứ hai và 61,11% (11/18) hộ sử dụng cho gà ở tuần tuổi thứ ba; từ sau 65 ngày tuổi trở đi thì không có đàn gà nào được sử dụng kháng sinh Có đến 44,44% (08/18) hộ chăn nuôi có tần suất hai lần sử dụng kháng sinh cho gà và 33,33% (06/18) hộ chăn nuôi có tần suất sử dụng ba lần kháng sinh trong quá trình nuôi
Colistin và Oxytetracycline Oxytetracycline và kháng sinh khác Amoxicillin Kháng sinh khác
Colistin và kháng sinh khác Oxytetracycline Doxycyline
Hình 4.3 Tình hình sử dụng kháng sinh ở các đàn gà khảo sát
4.3.2 Kết quả khảo sát sự hiện của các gen đề kháng kháng sinh ở vi khuẩn trên gà và trên chuột
4.3.2.1 Số kiểu gen đề kháng của vi khuẩn trên gà và trên chuột
Bảng 4.7 Kết quả số kiểu gen đề kháng kháng sinh của vi khuẩn phát hiện trên gà và trên chuột
Số kiểu gen mục tiêu khảo sát
Nhóm sử dụng kháng sinh (%) Ở các trại gà đối chứng (%) Ở các trại gà sử dụng kháng sinh (%)
Ghi chú: MLSB: macrolide, lincosamide và streptogramin B
Khảo sát 94 gen mục tiêu, kết quả phát hiện 76 gen đề kháng, trong đó:- Ở nhóm gà sử dụng kháng sinh: 76 gen, bao gồm vanB (glycopeptide), qnrA (quinolone) và fosB (đa kháng).- Ở nhóm gà đối chứng: 73 gen, ít hơn 3 gen so với nhóm sử dụng kháng sinh.- Ở nhóm chuột bắt tại trại gà sử dụng kháng sinh: 71 gen, ít hơn 5 gen so với nhóm gà sử dụng kháng sinh, bao gồm blaPER1 (β-lactam), vanB (glycopeptide), mcr-1.
Vi khuẩn ở chuột tại các trại gà sử dụng kháng sinh có nhóm gen kháng thuốc đa dạng hơn so với chuột tại trại đối chứng Cụ thể, nhóm gen kháng thuốc tìm thấy ở chuột tại trại đối chứng chỉ có 61 gen, ít hơn 10 gen so với chuột tại trại sử dụng kháng sinh: aph2_lde (aminoglycoside), blaCTXM, blaCMY2 (β-lactam), ermA (MLSB), oqxA (đa kháng), cmr-1 (polymyxin), qnrA, qnrS (quinolone), tetB và tetC-01 (tetracycline).
12 gen so với E coli trên nhóm gà đối chứng là: aph2_lde (aminoglycoside), blaCTXM, blaCMY2, (β-lactam), ermA, ermB (MLSB), oqxA, oqxB, qacC (đa kháng), cmr-1
(polymyxin), qnrA (quinolone), tetB và tetC-01 (tetracycline)
Kết quả nghiên cứu của chúng tôi đã ghi nhận sự hiện diện của nhiều kiểu gen đề kháng ở vi khuẩn cả trên gà và trên chuột so với số gen mục tiêu khảo sát gồm: các gen đề kháng với nhóm aminoglycoside là 100%; kế đến là các gen đa kháng là 91,67%; tiếp theo là các gen đề kháng với nhóm sulfamide 83,33% và nhóm macrolide-lincosamide-streptogramin B (MLSB) là 77,78% Kết quả này phù hợp với kết luận của Tenover & McGowan (2006), số lượng gen đề kháng với nhóm aminoglycoside được phát hiện ở vi khuẩn Gram dương và Gram âm là rất lớn và đa dạng Ngoài ra, nghiên cứu của Juricova et al (2021) cũng cho kết quả là các gen mã hóa tính kháng với aminoglycoside, tetracycline và MLSB là phổ biến nhất Việc phát hiện được nhiều kiểu gen đa kháng và các gen đề kháng với nhóm aminoglycoside, nhóm MLSB ngoài phản ánh tình trạng đề kháng kháng sinh trong chăn nuôi gà tại tỉnh Đồng Tháp, mà còn cảnh báo vấn đề đảm bảo an toàn sức khỏe cho đàn vật nuôi; một khi đàn gia cầm bị nhiễm bệnh do vi khuẩn đề kháng thì việc tìm một loại kháng sinh phù hợp để điều trị là vấn đề được xem là đáng quan tâm khi mà vi khuẩn đã đề kháng với hầu hết các loại kháng sinh Theo WOAH (2018), macrolide là nhóm kháng sinh cực kỳ quan trọng trong thú y, nó được sử dụng rộng rãi trong điều trị bệnh cho vậ nuôi và có rất ít lựa chọn thay thế Bên cạnh đó, trên các trại gà nghiên cứu, có thể do colistin được sử dụng nhiều nhất (chiếm gần 39%) nên chúng tôi phát hiện có sự xuất hiện của gen cmr-1, trong khi đó trên các đàn gà đối chứng và trên chuột thì không thấy xuất hiện gen này Theo Tổ chức Y tế thế giới (2019), colistin được xếp vào nhóm kháng sinh đặc biệt quan trọng và được xem là liệu pháp cuối cùng được dùng cho các trường hợp nhiễm khuẩn nghiêm trọng, có thể nguy hiểm đến tính mạng con người Đây là nhóm kháng sinh được cân nhắc sử dụng và cần cẩn trọng khi sử dụng trên vật nuôi, nhằm hạn chế nguy cơ kháng thuốc và giữ lại các kháng sinh còn hiệu quả để điều trị các bệnh nhiễm khuẩn nguy hiểm cho con người Theo tổng hợp của Theethawat et al (2023), nhiều nghiên cứu đã chứng minh rằng chuột mang nhiều vi khuẩn kháng thuốc kháng sinh; chúng đóng vai trò là ổ chứa và lây lan vi khuẩn kháng thuốc Nhiều vi khuẩn kháng thuốc được phát hiện ở chuột, gây ra sự đề kháng với các loại thuốc kháng sinh cực kỳ quan trọng và là mối đe dọa đối với sức khỏe cộng đồng Một số gen đề kháng được phát hiện trên chuột trước đây được tìm thấy ở người và động vật nuôi Kết quả này gợi ý rằng chuột có thể đóng vai trò là nguồn chứa các gen đề kháng, tạo ra mối đe dọa lây truyền nghiêm trọng đối với con người và các loài động vật khác
Trên chuột, mặc dù chúng tôi chưa phát hiện được sự hiện diện của gen cmr-1, nhưng vẫn có sự tồn tại của nhiều gen đề kháng khác nhau, đặc biệt là các gen đa kháng Theo Allen et al (2011), vi khuẩn kháng thuốc được tìm thấy trên chuột sống trong tất cả các môi trường nghiên cứu, điều này chỉ ra rằng môi trường tiếp xúc với thuốc kháng sinh thì vi khuẩn kháng thuốc hoặc gen kháng thuốc sẽ phổ biến
Ngoài ra, kết quả nghiên cứu của chúng tôi cũng cho thấy trên gà có sử dụng kháng sinh thì số lượng các gen đề kháng nhiều hơn trên gà đối chứng; đồng thời trên gà thì sự hiện diện của các gen đề kháng nhiều hơn có ý nghĩa thống kê so với trên chuột
4.3.2.2 Số lượng gen đề kháng kháng sinh được phát hiện và số lượng gen đề kháng trung bình/mẫu
Kết quả nghiên cứu đã xác định được số lượng gen kháng thuốc phát hiện và số lượng gen kháng thuốc trung bình tương ứng với từng mẫu được thu thập Thông tin chi tiết được trình bày trong Bảng 4.8 và Bảng 4.9.
Bảng 4.8 Kết quả lũy kế số lượng gen đề kháng trên gà và chuột được phát hiện ở các thời điểm lấy mẫu Đối tượng Nhóm
CHUỘT Ở các trại gà đối chứng 46 142 35 64 45 80 412 Ở các trại gà sử dụng kháng sinh 168 705 271 295 128 270 1837
Tổng cộng có 12.608 các gen đề kháng được phát hiện cả trên gà và trên chuột Trong đó, trên gà phát hiện được 10.359 gen (gà đối chứng là 4.893 gen và gà sử dụng kháng sinh là 5.466 gen); trên chuột phát hiện được 2.249 gen (chuột ở các trại gà đối chứng là 412 gen và chuột ở các trại gà sử dụng kháng sinh là 1.837 gen)
Bảng 4.9 Số lượng gen đề kháng trung bình/mẫu ở vi khuẩn trên gà và trên chuột tương ứng với các thời điểm lấy mẫu (n)
Nhóm Thời điểm khảo sát
Ban đầu 07 ngày 14 ngày 30 ngày 60 ngày Kết thúc
Gà sử dụng kháng sinh 50,6±7,7 58,1±6,9 b 59,7±5,8 b 58,4±4,8 b 57,7±5,5 b 57,3±6,1 0,001
Chuột ở các trại gà đối chứng 23±11,3 28,4±8,1 17,5±17,7 16±14,9 c 45±0 20±12,1 0,356 Chuột ở các trại gà sử dụng kháng sinh 33,6±13,7 32,1±14,4 38,7±14,7 24,6±20,8 c 25,6±26,2 38,6±17,3 0,413
Ghi chú: P NT : giá trị thống kê so sánh giữa các nghiệm thức; Ptg: giá trị thống kê so sánh theo thời điểm lấy mẫu
Các số liệu trong cùng một hàng/cột có chữ số mũ khác nhau thì khác nhau có ý nghĩa thống kê (P
