Blume tại Việt Nam và làm tiền đề cho việc thử hoạt tính sinh học sau này, đề tài “Chiết xuất, phân lập và xác định cấu trúc của một số hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat của bộ phận tr
TỔNG QUAN
Tổng quan về chi Cratoxylum Blume
Theo hệ thống phân loại của Armen Takhtajan - Flowering Plants (2009), chi
Giới: Thực vật - Plantae Ngành: Ngọc Lan - Magnoliophyta Lớp: Ngọc Lan - Magnoliopsida Phân lớp: Sổ - Dilleniidae Siêu bộ: Ericanae Bộ: Hypericales
Họ: Ban - Hypericaceae Tông: Cratoxyleae
Theo phân loại của APG IV (2016), chi Cratoxylum Blume thuộc [12]:
Nhánh: Thực vật có hoa - Angiosperm
Nhánh: Thực vật hai lá mầm thật sự - Eudicots Nhánh : Superrosids Nhánh: Hoa hồng - Rosids
Nhánh: Eurosids I Bộ: Sơ ri - Malpighiales Họ: Ban - Hypericaceae
Tính đến tháng 12 năm 2023, đã có bảy loài thuộc chi Cratoxylum Blume được công nhận trên cơ sở dữ liệu trực tuyến “Plants of the World Online” [71]:
- Cratoxylum formosum (Jack) Benth & Hook.f ex Dyer
1.1.2 Đặc điểm thực vật, sinh thái, phân bố Đặc điểm thực vật
Tên của chi Cratoxylum Blume được bắt nguồn bởi các từ “kratos” và “xylon” trong tiếng Hy Lạp (kratos: sức mạnh, xylon: gỗ) nhằm ám chỉ đến loại gỗ cứng và bền của các loài thuộc chi Cratoxylum Blume [15], [36], [45]
3 Cây gỗ hay cây bụi Lá nguyên, có cuống hoặc gần như không cuống Cụm hoa ở nách lá hay ở ngọn thành chùy Lá đài 5, dai, và tồn tại trên quả nang Cánh hoa 5, màu trắng, hồng hoặc đỏ kèm theo vẩy gốc hay không, ở bên trong, và dính với cánh Tuyến 3 - 5, áp trên lưng của các lá noãn, nạc Nhị nhiều, thành 3 - 5 bó có cuống, cuống hình dải, dài bằng hoặc ngắn hơn chỉ nhị rời, chỉ nhị xếp trên một hoặc nhiều dãy, bao phấn nhỏ, hướng ngoài Bầu có 3 ô, với 3 vòi nhụy rời, dạng sợi Quả nang có
3 van mang theo vách, hạt 4 hoặc nhiều trong mỗi ô, đính trên những giá noãn, mọc đứng, có cánh [9]
Các loài thuộc chi Cratoxylum Blume rất hiếm khi thấy trong rừng nguyên sinh và thường mọc hoang ở các khu vực đồi núi thấp Ngoài ra, những loài này cũng có thể được tìm thấy ở các khu vực đất thoát nước tốt hay khu vực đầm lầy [15]
Chi Cratoxylum Blume phân bố rộng rãi ở khu vực Đông Nam Á bao gồm các quốc gia như Myanmar, Malaysia, Singapore, Indonesia, Việt Nam, Thái Lan, Philippines và 1 số nước châu Á như Trung Quốc, Ấn Độ [15], [36], [45], [117]
1.1.3 Thành phần hóa học Đã có hơn 270 chất chuyển hóa thứ cấp được phân lập từ các loài thuộc chi
Cratoxylum Blume trong đó xanthon chiếm tỷ lệ lớn với hơn 200 xanthon cùng với sự xuất hiện của anthraquinon, flavonoid, benzophenon, triterpenoid, phytosterol, tocopherol, mono-phenol, coumarin và các hợp chất khác [36]
1,3-dihydroxy-6,7-dimethoxy-2,8-diprenylxanthon và 2-geranylemodin được phân lập từ vỏ thân của C arborescens có tác dụng gây độc vừa phải trên dòng tế bào NCI- H187 với giỏ trị IC50 lần lượt là 3,69 ± 1,27 và 3,08 ± 0,73 àg/mL [69] α-mangostin được phân lập từ vỏ thân C arborescens cho thấy tác dụng gây độc tế bào rừ rệt đối với tế bào HeLa với giỏ trị IC50 là 24,53 ± 1,48 àM [31] β-mangostin được phân lập từ vỏ thân của C arborescens đã thể hiện hoạt tính gây độc chọn lọc đối với tế bào MCF-7 và MDA-MB-231 [96] Ở nồng độ 58 àM, β- mangostin có tác dụng chống tăng sinh đáng kể đối với các tế bào HL-60 [68] α-mangostin và β-mangostin được phân lập từ vỏ thân của C arborescens gây độc mạnh đối với tế bào MCF-7 với giỏ trị IC50 lần lượt là 12,48 và 28,42 àg/mL [115] Cao chiết EtOH 80% và tromethamin hydroclorid từ lá của C formosum có tác dụng gây độc đối với tế bào ung thư gan cũng như hoạt tính kháng HBV [110]
Cao chiết nước và EtOH từ lá của C formosum có tác dụng gây độc mạnh đối với tế bào KKU-M156 với giá trị IC50 lần lượt là 11,3 ± 3,5 và 12,1 ± 5,6 mg/mL [85]
4 Cao chiết EtOH từ lỏ của C formosum ở nồng độ 2000 àg/mL gõy độc trờn hai dòng tế bào HT-29 và HepG2 lần lượt ở mức 35,25 ± 5,95 % và 17,13 ± 0,58 % [77]
Cao chiết EtOH từ lá của C formosum gây độc đáng kể đối với tế bào MCF-7 [21] AgNPs thể hiện khả năng gây độc tế bào cao hơn đối với tế bào A549 so với cao chiết EtOH từ lá của C formosum Tuy nhiên, độc tính tế bào của AgNPs đối với tế bào A549 bị ảnh hưởng lớn bởi sự hiện diện của huyết thanh bào thai bò [11]
Cao chiết MeOH của C formosum subsp pruniflorum gây độc đối với các tế bào:
HeLa, SiHa và C-33A với giỏ trị IC50 lần lượt là 208,32, 338,06 và 107,74 àg/mL [76] Cao chiết EtOH 50% của C formosum subsp pruniflorum ức chế sự phát triển của tế bào HepG2 với giá trị IC50 = 55,9 ± 10,6 μg/mL và có độc tính thấp đối với các tế bào Vero bình thường (giá trị IC50 > 500 μg/mL) [66]
Formoxanthon C được phân lập từ rễ của C formosum subsp pruniflorum có tác dụng gây độc tế bào đáng kể đối với các dòng tế bào MCF-7, HeLa, HT-29 và KB với giỏ trị IC50 lần lượt là 4,9, 3,7, 5,3 và 3,3 àg/mL [20]
Cao chiết EtOH 50% từ cành của C formosum subsp pruniflorum dùng đường uống với liều 500 mg/kg đã làm giảm khả năng gây ung thư gan giai đoạn đầu do sử dụng diethylnitrosamin (DEN) làm chất gây ung thư ở chuột [73]
Gerontoxanthon I, macluraxanthon và formoxanthon C được phân lập từ vỏ thân của C maingayi thể hiện khả năng gây độc đáng kể đối với dòng tế bào NCI-H187 với giá trị IC50 lần lượt là 6,63, 3,42 và 0,22 μg/mL [49]
Các xanthon: cratoxyarborenon A-F được phân lập từ lá, cành và vỏ thân của
C sumatranum đều có khả năng gây độc tế bào KB với mức cao nhất được quan sát thấy đối với cratoxyarborenon B (giỏ trị EC50 = 1,0 ± 0,1 àg/mL) [86]
Cao chiết MeOH từ vỏ thân của C arborescens và C glaucum loại bỏ gốc tự do
DPPH hiệu quả với giá trị EC50 lần lượt là 10,4 và 7,48 μg/mL [91]
Cao chiết EtOH từ lá của C formosum chứa acid chlorogenic, acid dicaffeoylquinic có hoạt tính dọn dẹp gốc tự do mạnh trong các thử nghiệm DPPH và ABTS [59]
Macluraxanthon và 1,3,5,6-tetrahydroxyxanthon được phân lập từ cao chiết EtOH của C neriifolium thể hiện khả năng chống oxy hóa mạnh trong thử nghiệm dọn dẹp gốc tự do DPPH với giá trị IC50 lần lượt là 7,0 ± 1,0 và 6,0 ± 0,2 μM [101]
Các xanthon: α-mangostin và β-mangostin phân lập từ vỏ thân của C arborescens có khả năng ức chế các vi khuẩn: B cereus, B subtilis, S typhimurium và S aureus với đường kính vùng ức chế lần lượt là 16 - 20 mm và 7 - 11 mm [115]
5 Hiệu quả kháng khuẩn chống lại S aureus và E coli của CFB tăng lên khi nồng độ
CFB tăng từ 100-400 mg/mL và đường kính vùng ức chế trên S aureus và E coli lần lượt là 6,0 - 8,3 mm và 6,1 - 8,8 mm [65]
Nhựa từ vỏ thân của loài C formosum có hoạt tính kháng S mutans với đường kính vùng ức chế từ 9,5 - 11,5 mm và giá trị MIC từ 48 - 97 mg/mL [94]
Formoxanthon C, macluraxanthon, xanthon V1 và gerontoxanthon I được phân lập từ cao chiết hexan của rễ C formosum ức chế sự phát triển của các vi khuẩn:
B subtilis, S aureus, P aeruginosa, S faecalis và S typhimurium với giá trị MIC từ 1,1 - 18,7 àg/mL [20] Macluraxanthon cũng cú hoạt tớnh ức chế B subtilis, B cereus
(giỏ trị MIC đều là 4 àg/mL) [60]
Cao chiết MeOH từ lá của C formosum ức chế các vi khuẩn: B cereus, B subtilis,
S aureus, E coli và P aeruginosa (giỏ trị MIC từ 125 - 2000 àg/mL) [107]
Cao chiết aceton từ lá của C glaucum được nhũ hóa thành dạng nhũ tương nano và cho thấy hoạt tính kháng khuẩn trên S aureus với đường kinh vùng ức chế từ 14,03 -
15,22 mm khi nồng độ cao chiết tăng từ 20 đến 80% [32]
Rễ và cành của C neriifolium có chứa thành phần hóa học như benzophenon và xanthon góp phần tạo nên hoạt tính kháng khuẩn đối với M luteus, B cereus,
S epidermidis, S aureus, S typhimurium và P aeruginosa [101]
Tổng quan về cây Thành ngạnh nam
Thành ngạnh nam có tên khoa học là Cratoxylum cochinchinense (Lour.) Blume, thuộc họ Ban (Hypericaceae)
1.2.1 Đặc điểm thực vật, sinh thái, phân bố Đặc điểm thực vật
Cây gỗ cao 10 - 15 m, có gai, vỏ màu nâu vàng hay trăng trắng Lá có phiến xoan ngược, đầu tù hay nhọn nhọn, mỏng, mặt trên nâu tươi vàng vàng, mặt dưới mốc trắng; cuống 2 - 5 mm Hoa 1 - 4, đỏ - điều, không lông, cọng dài bằng cuống lá; cánh hoa hẹp, dài 9 mm, không vẩy tiết; nhị họp thành 3 bó, vòi nhụy 3, bầu hình nón Quả nang hình trứng, dài bằng hai đài, 12 mm; hột nhiều, dài 8 mm, có cánh [3], [6]
Mọc rải rác trên các đồi hoang, nương rẫy cũ, ven chân núi, trảng cây bụi Ra hoa từ tháng 5 - 7 [3]
Tại Việt Nam: Sơn La, Quảng Ninh, Tuyên Quang, Thái Nguyên, Bắc Giang,
Phú Thọ, Hòa Bình, Hà Nội, Ninh Bình, Quảng Trị, Thừa Thiên - Huế, Đà Nẵng, Kon
Tum, Lâm Đồng, Khánh Hòa, Ninh Thuận, Bình Dương, Đồng Nai [3], [10]
Trên thế giới: Trung Quốc, Ấn Độ, Myanmar, Lào, Camphuchia, Thái Lan,
Theo nhiều kết quả nghiên cứu về thành phần hóa học của Thành ngạnh nam cho thấy có hơn 190 hợp chất đã được phân lập trong đó xanthon chiếm tỷ lệ nhiều nhất với hơn 150 hợp chất còn lại là anthraquinon, flavonoid, benzophenon, diterpenoid, triterpenoid, physosterol, tocopherol và các hợp chất khác (phụ lục 1 và 2)
Ngoài các hợp chất trên, Thành ngạnh nam còn chứa một số tinh dầu Sáu mươi bảy hợp chất đã được xác định bằng phương pháp sắc ký khí khối phổ (GC/MS) Kết quả cho thấy trong mẫu tinh dầu có chứa [28]:
Hàm lượng hydrocarbon sesquiterpen chiếm tỷ lệ cao (60,2%) trong đó bicyclogermacren chiếm 18,4% và β-caryophyllen chiếm 16,0%; ngoài ra còn có germacren D (4,6%), germacren B (3,2%) và globulol (3,5%)
Hàm lượng monoterpen chiếm 20,2%, bao gồm phần lớn (19,1%) các hydrocarbon monoterpen là sabinen (2,5%), β-myrcen (7,1%) và (E)-β-ocimen (2,4%)
Cao phân đoạn MeOH 35% từ cao chiết MeOH 80% của lá C cochinchinense có chứa ≥ 90% mangiferin đã gây ra tác dụng gây độc tế bào chọn lọc đối với tế bào Jurkat T [99]
Các xanthon: celebixanthon, cochinchinon A, α-mangostin, β-mangostin và cochinchinon C được phân lập từ cao chiết hexan của rễ C cochinchinense có tác dụng gây độc đối với tế bào NCI-H187 với giá trị IC50 lần lượt là 5,2, 0,65, 2,4, 1,7 và 2,3 μg/mL [51]
7-geranyloxy-1,3-dihydroxyxanthon được phân lập từ cao chiết DCM của quả
C cochinchinense có tác dụng ức chế mạnh các dòng tế bào MCF-7, HeLa, HT-29 và
KB với giá trị IC50 lần lượt là 0,32, 0,4, 0,4 và 0,45 μg/mL Ngoài ra, celebixanthon cũng ức chế mạnh các dòng tế bào MCF-7, HeLa, HT-29 với giá trị IC50 đều là 0,2 μg/mL [58]
Vismion B và vismion F được phân lập từ quả của C cochinchinense ức chế mạnh dũng tế bào ung thư NCI-H187 với giỏ trị IC50 lần lượt là 1,19 và 6,62 àg/mL [49] α-mangostin được phân lập từ cao chiết MeOH của thân cây C cochinchinense,
6-O-benzoyl-α-mangostin và 3,6-di-O-acetyl-α-mangostin có tác dụng gây độc mạnh đối với dũng tế bào HT-29 với giỏ trị ED50 lần lượt là 4,1, 1,0 và 1,9 àM [81]
Từ cao chiết DCM của thân cây C cochinchinense đã phân lập được cochinchinon
C và cochinchinoxanthon có hoạt tính gây độc mạnh đối với tế bào A-431 với giá trị
IC50 lần lượt là 2,01, 1,78 μg/mL và tế bào SKBR3 với giá trị IC50 lần lượt là 1,54, 0,69 μg/mL [80]
10 Vismion F, cratoxanthon B và garcinon E được phân lập từ cao chiết EtOAc của cành và nhánh cây C cochinchinense có tác dụng ức chế mạnh mẽ sự tăng sinh đối với tế bào NALM-6 với giỏ trị IC50 lần lượt là 1,68, 8,27 và 8,67 àM [40]
Thu Z.M và cộng sự (2017) đã báo cáo prunifloron N có hoạt tính tốt và cao hơn tác nhân hóa trị liệu có thương hiệu trên thị trường là Cisplatin trên các dòng tế bào: MCF-7, Ishikawa, BG-1, IST-MES1 và HepG2 [106]
Cochinchinon G được phân lập từ quả của C cochinchinense có tác dụng gây độc tốt các dòng tế bào: BT474, ChaGO-K-1, HepG2, KATO-3 và SW-620 trong thử nghiệm MTT với giá trị IC50 lần lượt là 5,25, 5,44, 5,74, 5,32 và 4,64 μg/mL [24]
Theo Cuicui Jia và cộng sự (2019) [42]:
Cochinchinon A (IC50 = 1,0 μM), prunifloron N (IC50 = 1,89 μM) thể hiện hoạt tớnh chống tăng sinh mạnh hơn 5-FU (IC50 = 2,20 àM) đối với tế bào HL-60
Dulcisxanthon B, cudratricusxanthon E, 1,3,7-trihydroxy-2,4- diisoprenylxanthon, cochinchinon A, cochinchinon B, prunifloron Q, prunifloron N, xanthon V1 (IC50 từ 11,77 – 22,94 àM) cú hoạt tớnh chống tăng sinh mạnh hơn 5-FU (IC50 = 25,98 àM) đối với tế bào PC-3
1,3,7-trihydroxy-2,4-diisoprenylxanthon, cochinchinon A, cochinchinon B, prunifloron
Q và xanthon V1 (IC50 từ 7,94 - 18,46 àM) chống tăng sinh mạnh hơn 5-FU (IC50 38,69 àM) đối với tế bào MDA-MB-231
Trong nghiên cứu của Peeravat Natrsanga và cộng sự (2019) [63]:
Cratochinon B, macluraxanthon và prunifloron G cho thấy tác dụng gây độc tế bào đáng kể đối với các dòng tế bào: KB, HeLa S-3, HT-29, MCF-7, Hep G2 với giá trị IC50 từ 0,91 - 9,93 μM
9-hydroxycalabaxanthon thể hiện độc tính đối với các tế bào KB, HeLa S-3 và HT-29 với giá trị IC50 lần lượt là 7,39, 6,07 và 8,11 μM
Formoxanthon B có khả năng gây độc với tế bào KB và HeLa S-3 với giá trị
Từ keo ong của loài Lisotrigona furva có chứa nhựa của C cochinchinense, Oanh và cộng sự (2021) đã báo cáo [67]:
Cochinchinon A, cochinchinon J, cratoxylumxanthon B, 3-isomangostin, γ-mangostin có hoạt tính gây độc đối với các dòng tế bào: KB, HepG2, Lu-1, MCF-7 với giá trị IC50 từ 2,10 - 12,00 μg/mL
Prunifloron S và cochinchinon G có hoạt tính gây độc đối với ba dòng tế bào HepG2, Lu-1 và MCF-7 với giá trị IC50 từ 7,18 - 11,14 μg/mL
9-hydroxycalabaxanthon và cochinchinon I cho thấy hoạt tính gây độc chọn lọc đối với dòng tế bào Lu-1 với giá trị IC50 lần lượt là 4,00 và 4,03 μg/mL
11 Yeling Li và cộng sự (2022) đã báo cáo cratoxylumxanthon C có hoạt tính chống khối u đáng kể đối với tế bào A549 với giá trị IC50 = 17.5 ± 1.0 (tốt hơn etoposid với giá trị IC50 = 33.8 ± 1.0) và tác dụng chống tạo mạch trên mô hình cá ngựa vằn [55]
Cao chiết MeOH từ lá của C cochinchinense có TPC cao đã thể hiện hoạt tính chống oxy hóa trong thử nghiệm dọn dẹp gốc tự do ABTS cũng như có giá trị TEAC cao nhất (1,55) Ngoài ra, cao chiết này cũng được báo cáo là có khả năng loại bỏ superoxid (O2ˉ) mạnh với IC50 = 14,95 ± 2,95 àg/mL [100]
Cochinchinon B, macluraxanthon, celebixanthon được phân lập từ cao chiết DCM của rễ cây C cochinchinense thể hiện tốt khả năng dọn dẹp gốc tự do DPPH lần lượt là 79,3, 75,9, 79,3% và ở nồng độ 50 μM ba xanthon này thể hiện hoạt tính dọn dẹp gốc tự do mạnh và tốt hơn BHT (IC50 = 28,9 μM) với giá trị IC50 lần lượt là 9,4, 19,0 và 12,3 μM [57]
Norathyriol có trong loài C cochinchinense thể hiện khả năng dọn dẹp gốc tự do
DPPH và khả năng khử ion Fe 3+ thành Fe 2+ tốt hơn so với acid ascorbic [109]
Dulcisxanthon B được phân lập từ thân cây C cochinchinense thể hiện hoạt tính chống oxy hóa mạnh thông qua thử nghiệm dọn dẹp gốc tự do DPPH với giá trị IC50 0,39 mM và ức chế sự peroxid hóa lipid với IC50 = 0,024 mM [70]
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Nguyên vật liệu, thiết bị
2.1.1 Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu là bộ phận trên mặt đất (thân, cành, lá) của cây Thành ngạnh nam được thu hái vào tháng 07 năm 2023 tại Vườn quốc gia Bù Gia Mập, tỉnh Bình Phước
Mẫu nghiên cứu được ThS Nguyễn Quỳnh Nga và DS Nhâm Minh Phúc – Trung tâm Tài nguyên Dược liệu, Viện Dược liệu giám định tên khoa học là Cratoxylum cochinchinense (Lour.) Blume, thuộc họ Ban - Hypericaceae (Phụ lục 5) Mẫu dược liệu có số hiệu tiêu bản DV - N14 được lưu tại Trung tâm Tài nguyên Dược liệu, Viện Dược liệu (Phụ lục 4)
Mẫu nghiên cứu (hình 2.1) sau khi thu hái được thái nhỏ, sấy khô trong tủ sấy ở nhiệt độ 50°C, để nguội và bảo quản trong túi nilon kín để phục vụ quá trình nghiên cứu
Hình 2.1 Dược liệu Thành ngạnh nam 2.1.2 Hóa chất, dung môi
Hóa chất dùng cho nghiên cứu gồm có:
- Hóa chất dùng trong phản ứng định tính: Thuốc thử Diazo, Fehling A, Fehling
B, dung dịch H2SO4 đặc, HCl đặc, FeCl3 5%, Gelatin 1%, chì acetat 10%, bột magie kim loại, đạt tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam V
- Các dung môi: EtOH, MeOH, n-hexan, cloroform, EtOAc, DCM, aceton, toluen, acid formic,
- Bản mỏng tráng sẵn pha thuận silica gel F254 (Merck), pha đảo RP-18 F254 S, chất hấp phụ silica gel pha thuận (cỡ hạt 0,040 – 0,063 mm, Merck), silica pha đảo (75 μm YMC Co., Ltd, Nhật)
- Dung dịch acid sulfuric 10% trong EtOH (TT hiện màu) để phát hiện các vết chất trên bản mỏng
2.1.3 Máy móc, trang thiết bị nghiên cứu
- Cột sắc ký: các loại cột có đường kính từ 1,6 - 5,5 cm, chiều dài từ 15 - 50 cm; với các chất nhồi cột: Sephadex LH-20 (Sigma-Aldrich, Mỹ), silica gel pha thuận (silica gel 60; 0,040 - 0,063 mm; 230 - 400 mesh; Merck, Đức), silica gel pha đảo YMC (30 - 50 mm; Fujisilisa Chemical Ltd., Nhật Bản)
- Dụng cụ thủy tinh (loại A): pipet, bình định mức, ống nghiệm, bình cầu, cốc có mỏ, ống đong, phễu thủy tinh, ống đựng mẫu NMR,
- Máy đo độ ẩm MB 25 Ohaus (Ohaus, Mỹ)
- Máy đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) của Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam: Bruker AM500 FT-NMR Spectrometer (Billerica, Massachusetts, Hoa Kỳ)
- Bể siêu âm VEVOR Ultrasonic Cleaner 10L (Ruianshisuikangxieyeshanghang)
- Máy cất quay Rotavapor R-124, Rotavapor R-210, Rotavapor R-220 Pro 20L (Buchi, Thụy Sĩ)
- Bếp cách thủy Memmert WNB14 (Đức)
- Tủ sấy Binder FD 115 (Đức), Memmert UF110 (Đức)
- Cân kỹ thuật Ohaus PA2102 (Mỹ), cân phân tích Precisa XT 220A (Precisa, Thụy Sĩ)
- Cân phân tích Precisa, độ chính xác 0,1 mg (Precisa, Thụy Sĩ)
- Đèn tử ngoại VL-6.LC hai bước sóng 254 nm và 366 nm (Vilber, Pháp).
Nội dung nghiên cứu
- Định tính các nhóm chất thường gặp của cây Thành ngạnh nam bằng phản ứng hóa học
- Chiết cao tổng và cao ethyl acetat của cây Thành ngạnh nam
- Phân lập và xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat của cây Thành ngạnh nam.
Phương pháp nghiên cứu
2.3.1 Phương pháp định tính các nhóm chất thường gặp trong mẫu dược liệu Định tính sơ bộ các nhóm chất trong dược liệu bằng phản ứng hóa học đặc trưng cho từng nhóm chất theo các tài liệu [1], [2]:
Chuẩn bị các dịch chiết:
Dịch chiết n-hexan: Cân khoảng 10 g bột dược liệu cho vào bình chiết Sohxlet Chiết bằng n-hexan đến khi dung môi trong bình chiết không màu Dịch chiết đem cất thu hồi bớt dung môi Dịch chiết đậm đặc thu được dùng để làm các phản ứng định tính chất béo, phytosterol và carotenoid
17 Dịch chiết EtOH 90%: Bã dược liệu sau khi chiết bằng n-hexan để bay hơi dung môi đến khô Chiết hồi lưu với 50 mL EtOH 90% trong 30 phút Dịch chiết được lọc và cô còn 10 mL để làm các phản ứng định tính saponin, coumarin, flavonoid, acid hữu cơ và acid amin
Dịch chiết nước: Cho 10 g bột dược liệu vào bình nón dung tích 50 mL, thêm
30 mL nước cất, đun sôi trực tiếp 5 phút Lọc lấy dịch lọc làm các phản ứng định tính tanin, đường khử tự do và polysaccharid
Nhỏ vài giọt dịch chiết n-hexan trên giấy lọc, sấy nhẹ cho bay hết dung môi Phản ứng dương tính khi xuất hiện vết mờ trên giấy lọc
Cô 5 mL dịch chiết n-hexan tới cắn Thêm 1 - 2 giọt acid sulfuric đặc Phản ứng dương tính khi thấy xuất hiện màu xanh ve
Cho vào ống nghiệm 1 mL dịch chiết n-hexan Bốc hơi dung môi đến cắn Cho vào ống nghiệm 1 mL anhydrid acetic, lắc kỹ, thêm 1mL H2SO4 đặc theo thành ống nghiệm Phản ứng dương tính nếu kết quả cho thấy giữa hai lớp chất lỏng xuất hiện một vòng màu tím đỏ, lắc nhẹ, lớp chất lỏng trên có màu xanh
Cho 0,5 g bột dược liệu vào ống nghiệm có dung tích 20 mL, thêm vào đó 5 mL nước cất, đun sôi nhẹ, lọc nóng qua bông vào ống nghiệm có dung tích 20 mL, thêm 5 mL nước cất Bịt ống nghiệm bằng ngón tay cái, lắc mạnh ống nghiệm theo chiều dọc
5 phút, để yên và quan sát Phản ứng dương tính khi bọt bền sau 10 phút
Cho vào bình nón 2 g dược liệu, thêm 20 mL EtOH 90%, đun sôi cách thủy Lọc lấy dịch lọc và cho vào một ống nghiệm, bốc hơi dịch lọc đến cắn Hòa tan một ít cắn trong 1 mL anhydrid acetic sau đó thêm vào dung dịch 0,5 mL cloroform Dùng pipet nhỏ từ từ 1 - 2 mL H2SO4 đặc vào thành ống nghiệm Phản ứng dương tính khi xuất hiện vòng tím đỏ ở mặt ngăn cách
Phân biệt saponin steroid và saponin triterpenoid
Lấy vào 2 ống nghiệm, cho vào mỗi ống 5 giọt dịch chiết EtOH 90% Ống 1: thêm 5 mL dung dịch NaOH 0,1N Ống 2: thêm 5 mL dung dịch HCl 0,1N
Lắc mạnh đồng thời 2 ống trong 1 phút Quan sát cột bọt ở hai ống Nếu ống 1 cao hơn ống 2 thì là saponin steroid, nếu cột bọt ở hai ống bằng nhau thì là saponin triterpenoid
Phản ứng mở và đóng vòng lacton
Cho vào 2 ống nghiệm mỗi ống 1 mL dịch chiết ethanol, ống 1 thêm 0,5 mL dung dịch NaOH 10%, ống 2 để nguyên Sau đó đun cả 2 ống nghiệm trên cách thủy sôi trong vài phút, để nguội Ống 1 dung dịch có tủa vàng hoặc tủa đục có màu vàng, ống 2 trong Sau đó thêm vào cả 2 ống nghiệm, mỗi ống 2 mL nước cất Lắc đều, quan sát, phản ứng dương tính nếu thấy ống 1 trong suốt, ống 2 có tủa đục
Acid hóa ống 1 bằng vài giọt HCl đặc, ống 1 sẽ trở lại tủa đục giống như ống 2 Quan sát huỳnh quang
Nhỏ 1 giọt dung dịch chiết lên giấy thấm, nhỏ tiếp lên đó 1 giọt dung dịch NaOH 5%, sấy nhẹ Che một nửa vết bằng đồng xu rồi chiếu tia tử ngoại trong vài phút, sau đó cất đồng xu đi, quan sát thấy nửa hình tròn không che sáng hơn
Phản ứng với thuốc thử Diazo
Cho vào ống nghiệm 1 mL dịch chiết ethanol, thêm vào đó 2 mL dung dịch NaOH 10% Đun cách thủy tới sôi, để nguội, thêm vài giọt thuốc thử Diazo (mới pha), phản ứng dương tính khi xuất hiện màu đỏ gạch
Cho 2 mL dịch chiết ethanol vào một ống nghiệm, thêm một ít bột magie kim loại, rồi nhỏ từ từ 4 - 5 giọt acid hydrocloric đặc Đun nóng trên cách thủy sau vài phút Phản ứng dương tính nếu thấy xuất hiện màu tím đỏ
Phản ứng với dung dịch FeCl3 5%:
Cho 1 mL dịch chiết ethanol vào một ống nghiệm, thêm 2 - 3 giọt dd FeCl3 5%, lắc nhẹ Phản ứng dương tính khi dung dịch chuyển sang màu xanh lục, xanh hoặc nâu
Cho vào ống nghiệm 1 mL dịch chiết, thêm vài giọt dung dịch NaOH 10%, phản ứng dương tính khi màu vàng của dung dịch tăng thêm
7) Định tính acid hữu cơ
Cho vào ống nghiệm 1 mL dịch chiết ethanol và đem cô tới cắn Hòa cắn trong 1 mL nước và thêm vài tinh thể natri carbonat Phản ứng dương tính khi thấy có bọt khí nổi lên
Lấy 3 mL dịch chiết ethanol cho vào ống nghiệm Thêm 1 - 3 mảnh ninhydrin, đun sôi 2 phút Phản ứng dương tính khi thấy dung dịch chuyển màu tím
Tiến hành trong các ống nghiệm: Ống 1: 2 mL dịch lọc, thêm 2 giọt FeCl3 5% Phản ứng dương tính khi xuất hiện tủa xanh đen hoặc xanh nâu nhạt Ống 2: 2 mL dịch lọc, thêm 2 giọt chì acetat 10% Phản ứng dương tính khi xuất hiện tủa bông Ống 3: 2 mL dịch lọc, thêm 5 giọt dung dịch gelatin 1% Phản ứng dương tính khi xuất hiện tủa bông trắng
10) Định tính đường khử tự do
Lấy 2 mL dịch chiết nước cho vào ống nghiệm Thêm vào đó 0,5 mL TT Fehling A và 0,5 mL TT Fehling B Đun sôi cách thủy vài phút Phản ứng dương tính khi thấy xuất hiện tủa đỏ gạch
Cho vào 2 ống nghiệm: Ống 1: 4 mL nước cất + 5 giọt thuốc thử Lugol Ống 2: 4 mL dịch chiết nước + 5 giọt thuốc thử Lugol
Quan sát màu ống 2 đậm hơn ống 1 thì phản ứng dương tính
12) Định tính anthranoid: (Phản ứng Borntraeger)
THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
Kết quả định tính các nhóm chất thường gặp có trong dược liệu
Kết quả định tính các nhóm chất có trong bộ phận trên mặt đất (thân, cành, lá) của cây Thành ngạnh nam bằng phản ứng hóa học được trình bày trong bảng 3.1
Bảng 3.1 Kết quả định tính các nhóm chất bằng phản ứng hóa học
Dịch chiết STT Nhóm chất Phản ứng định tính Kết quả Kết luận n- hexan
1 Chất béo Tạo vết mờ trên giấy lọc - Không
2 Carotenoid Phản ứng với H2SO4 đặc - Không
Phản ứng Salkowski + Có Phân biệt saponin steroid và saponin triterpenoid
Phản ứng mở đóng vòng lacton ++
Quan sát huỳnh quang + Có Phản ứng với TT Diazo ++
Phản ứng Cyanidin + Phản ứng với FeCl3 5% ++ Có Phản ứng với NaOH 10% ++
7 Acid hữu cơ Phản ứng với Na2CO3 - Không
8 Acid amin Phản ứng với TT
Phản ứng với chì acetat Có
Phản ứng với TT Fehling
11 Polysaccharid Phản ứng với TT Lugol ++ Có
2% 12 Anthranoid Phản ứng Borntraeger + Có
Không Phản ứng với TT
Phản ứng với TT Mayer -
Chú thích: (-): Phản ứng âm tính, (+): Phản ứng dương tính, (++): Phản ứng dương tính rõ
Nhận xét: Qua các phản ứng định tính, sơ bộ thấy trong cây Thành ngạnh nam chứa saponin triterpenoid, coumarin, flavonoid, tanin, đường khử tự do, polysaccharid và anthranoid.
Kết quả chiết xuất, phân lập và xác định cấu trúc của các hợp chất
Dược liệu Thành ngạnh nam được sấy khô, xay nhỏ (8kg, độ ẩm 5%), đem ngâm nóng với EtOH 70% với tỷ lệ dược liệu/dung môi = 1/8 (kg/L) x 3 lần, mỗi lần chiết kéo dài trong vòng 3 giờ Kết thúc mỗi lần chiết, lọc thu dịch chiết và lấy bã dược liệu chiết tiếp lần sau Sau lần chiết thứ 3, lọc loại bỏ bã dược liệu, gộp dịch chiết của cả 3 lần rồi cất thu hồi dung môi dưới áp suất giảm sau đó làm khô bằng cách bốc hơi dung môi trên bếp cách thủy trong tủ hốt thu được cao tổng (525g, hiệu suất 5,56%, độ ẩm 15,6%)
Cao tổng được phân tán với một lượng nước nóng tối thiểu, sau đó tiến hành chiết lỏng - lỏng lần lượt với dung môi n-hexan và EtOAc trong bình gạn thủy tinh (3 lần), tỷ lệ dung môi 1:1 (v/v), thu được dịch chiết các phân đoạn n-hexan và EtOAc
Thu hồi dung môi bằng máy cô quay chân không thu được cao n-hexan (10 g) và
EtOAc (124 g) và cắn nước (300 g) Quá trình chiết xuất được thể hiện qua hình 3.1
Hình 3.1 Tóm tắt quá trình chiết xuất cao tổng và các cao phân đoạn từ cây Thành ngạnh nam
Khảo sát sơ bộ thành phần hóa học của cao tổng và các cao phân đoạn bằng sắc ký lớp mỏng Tiến hành với các hệ dung môi n-Hexan – Aceton, n-Hexan – Ethyl acetat, DCM – Aceton, DCM – MeOH Kết quả cho thấy với hệ DCM – MeOH thì trên sắc ký đồ cho các vết rõ và phân tách đẹp nhất Sắc ký đồ khi khai triển sắc ký bằng hệ dung môi DCM – MeOH (20:1, v/v) được thể hiện qua hình 3.2
Hình 3.2 Sắc ký đồ của các cao phân đoạn (a): Sắc ký đồ pha thuận quan sát dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 254nm (b): Sắc ký đồ pha thuận quan sát dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 366nm T: Cao tổng EtOH 70%; H: Cao n-Hexan; EA: Cao EtOAc; W: Cắn nước
Nhận xét: Từ kết quả sắc ký đồ trên có thể thấy cao phân đoạn n-hexan và ethyl acetat đều cho nhiều vết và các vết phân tách tốt, tuy nhiên lượng cao phân đoạn EtOAc lớn hơn nhiều lượng cao phân đoạn n-hexan do đó lựa chọn cao EtOAc để tiến hành phân lập các hợp chất
Cao EtOAc (124 g) được phân tách bằng sắc ký cột silica gel pha thuận, rửa giải bằng hệ dung môi gradient DCM – MeOH (20:1 – 1:1, v/v) thu được 7 phân đoạn ký hiệu là E1 - E7
Tiếp tục phân lập phân đoạn E3 (16 g) bằng sắc ký cột silicagel pha thuận, rửa giải bằng hệ dung môi gradient n-Hexan – EtOAc (10:1 – 1:1, v/v) thu được 8 phân đoạn ký hiệu là E3.1 - E3.8
Tiếp tục phân lập phân đoạn E3.6 (800 mg) bằng sắc ký cột silicagel pha đảo RP-
C18 với hệ dung môi rửa giải MeOH – H2O (2:1 – 9:1, v/v) thu được 4 phân đoạn ký hiệu là E3.6.1 - E3.6.4
Tinh chế phân đoạn E3.6.2 (72,7 mg) bằng sắc ký cột silicagel pha thuận với hệ dung môi rửa giải gradient n-Hexan – DCM (1:4 – 1:9, v/v) thu được hai hợp chất
Quá trình phân lập các hợp chất từ các phân đoạn được thể hiện qua hình 3.3
Hình 3.3 Tóm tắt quá trình phân lập các hợp chất từ phân đoạn EtOAc
Sắc ký đồ của hai hợp chất E3.6.2.1 và E3.6.2.2 khi khai triển sắc ký bằng hệ dung môi DCM – MeOH (20:1, v/v) được thể hiện qua hình 3.4
Hình 3.4 Sắc ký đồ của hai hợp chất được phân lập từ cao EtOAc
(A): Sắc ký đồ pha thuận quan sát dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 254nm
(B): Sắc ký đồ pha thuận quan sát dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 366nm
(C): Sắc ký đồ pha thuận dưới ánh sáng thường sau khi phun TT hiện màu và sấy khô T: Cao tổng EtOH 70%; EA: Cao EtOAc; 3.6.2.1 và 3.6.2.2 là hai hợp chất được phân lập từ cao EtOAc
3.2.3 Xác định cấu trúc của các hợp chất phân lập được
Hợp chất E3.6.2.1 thu được dạng chất rắn màu vàng nhạt Phổ 1 H-NMR (600 Hz,
CD3OD) và 13 C-NMR (150 Hz, CD3OD): xem bảng 3.2
Bảng 3.2 Dữ liệu phổ NMR của hợp chất E3.6.2.1 và hợp chất tham khảo
Hợp chất E3.6.2.1 2,8-Dihydroxy-1-methoxyxanthon δ H a,c (ppm) δ C a,d
Hợp chất E3.6.2.1 2,8-Dihydroxy-1-methoxyxanthon δ H a,c (ppm) δ C a,d
1-OCH3 3,95 (3H, s) 62,2 3,97 (s) 62,8 a) CD3OD, b) CDCl3, c) 600 MHz, d) 150 MHz, e) 300 MHz, f) 75 MHz
Phổ 1 H-NMR xuất hiện tín hiệu của 2 proton vòng thơm ở vị trí ortho tại δ H 7,41 (1H, d, 9,6 Hz, H-3) và 7,24 (1H, dd, 9,0; 0,6 Hz, H-4), 3 proton của vòng benzen thế 1,2,3 tại δ H 6,91 (1H, d, 8,4 Hz, H-5), 7,62 (1H, t, 8,4 Hz, H-6), 6,74 (1H, d, 8,4 Hz, H-7), 1 nhóm methoxy tại δ H 3,95 (3H, s, 1-OCH3) Phổ 13 C-NMR của hợp chất
E3.6.2.1 xuất hiện tín hiệu của 14 carbon, bao gồm 1 nhóm carbonyl tại δ C 183,8 (C- 9); 1 nhóm methoxy tại δ C 62,2; 5 carbon vòng thơm gắn với oxy tại δ C 146,6 (C-1), 148,3 (C-2), 151,9 (C-4a), 157,3 (C-5a), 163,1 (C-8) và 7 carbon vòng thơm không gắn với oxy tại δ C 126,1 (C-3), 114,9 (C-4), 107,6 (C-5), 137,8 (C-6), 110,9 (C-7), 110,0 (C-8a) và 116,4 (C-9a)
Tương tác HMBC giữa 1-OCH3 (δ H 3,95) với C-1 (δ C 146,6) và C-2 (δ C 148,3) cho phép xác định vị trí nhóm methoxy tại C-1 (phụ lục 6.4)
Từ các dữ liệu trên và so sánh với các tài liệu tham khảo, xác định được hợp chất
Hình 3.5 Cấu trúc hóa học của hợp chất E3.6.2.1 3.2.3.2 Hợp chất E3.6.2.2
Hợp chất E3.6.2.2 thu được dưới dạng tinh thể hình kim màu vàng Phổ 1 H-NMR (500 Hz, CD3OD) và 13 C-NMR (125 Hz, CD3OD): xem bảng 3.3
Bảng 3.3 Dữ liệu phổ NMR của hợp chất E3.6.2.2 và hợp chất tham khảo
9a - 109,5 - 108,3 a)CD3OD, b) CDCl3, c) 500 MHz, d) 125 MHz, e) 400 MHz, f) 100 MHz
Phổ 1 H-NMR và 13 C-NMR của hợp chất E3.6.2.2 xuất hiện các tín hiệu đặc trưng của một hydroxyl xanthon Trong đó, phổ 1 H-NMR cho thấy tín hiệu của 3 proton của vòng benzen thế 1,2,3 tại δ H 6,73 (1H, d, 8,0 Hz, H-2), 7,60 (1H, t, 8,5 Hz, H-3), 6,93 (1H, d, 8,5 Hz, H-4) và 3 proton của vòng benzen thế 1,3,4 tại δ H 7,40 (1H, d, 9,0 Hz, H-5), 7,31 (1H, dd, 9,0; 3,0 Hz, H-6), 7,53 (1H, d, 2,5 Hz, H-8) Phổ 13 C-NMR của hợp chất E3.6.2.2 xuất hiện tín hiệu của 13 carbon, bao gồm 1 nhóm carbonyl tại δ C
183,5 (C-9); 4 carbon vòng thơm gắn với oxy tại δ C 162,9 (C-1), 157,9 (C-4a), 151,6 (C-5a), 155,5 (C-7) và 8 carbon vòng thơm không gắn với oxy tại δ C 110,7 (C-2), 137,8 (C-3), 108,1 (C-4), 120,1 (C-5), 126,3 (C-6), 109,5 (C-8), 122,3 (C-8a), 109,5 (C-9a)
Từ các dữ liệu trên và so sánh với tài liệu tham khảo, xác định được hợp chất
E3.6.2.2 là 1,7-dihydroxyxanthon hay còn được gọi là euxanthon (hình 3.6) [102], [112]
Hình 3.6 Cấu trúc hóa học của hợp chất E3.6.2.2
Bàn luận
3.3.1 Về kết quả định tính
Kết quả định tính các nhóm chất thường gặp bằng phản ứng hóa học đặc trưng cho thấy cây Thành ngạnh nam có chứa saponin triterpenoid, coumarin, flavonoid, tanin, đường khử tự do, polysaccharid và anthranoid
Phương pháp này định tính bằng phản ứng hóa học đơn giản, dễ thao tác, phù hợp với nhiều mẫu nghiên cứu trong điều kiện phòng thí nghiệm
Theo kết quả định tính bằng phản ứng hóa học, cho kết quả khá tương đồng với những nhóm chất đã được xác định trong loài C cochinchinense Mẫu dược liệu
Thành ngạnh nam trong nghiên cứu này có kết quả âm tính với phytosterol Tuy nhiên, trong một nghiên cứu khác của Yulin Ren và cộng sự (2011): từ dịch chiết MeOH của thân cây Thành ngạnh nam ở Việt Nam đã phân lập được daucosterol [81]
Kết quả định tính giúp phân tích sơ bộ thành phần hóa học có trong cây Thành ngạnh nam, từ đó là cơ sở định hướng cho việc chiết xuất và phân lập các hợp chất hóa học từ loài cây này
Nghiên cứu này là nghiên cứu đầu tiên tại Việt Nam tiến hành định tính các nhóm chất thường gặp trong cây Thành ngạnh nam bằng phản ứng hóa học
3.3.2 Về kết quả chiết xuất
Phương pháp dùng để chiết dược liệu là phương pháp ngâm nóng với dung môi chiết là EtOH 70%, tỷ lệ dược liệu/dung môi = 1/8 (kg/L) × 3 lần, mỗi lần 3 giờ Việc lựa chọn phương pháp ngâm nóng có ưu điểm:
- Quy trình và dụng cụ đơn giản, ít tốn kém, phù hợp với quy mô phòng thí nghiệm
- Làm giảm độ nhớt và sức căng bề mặt của dung môi từ đó tăng tốc độ chuyển khối làm cho dung môi dễ thấm vào dược liệu
- Tăng độ tan và tốc độ khuếch tán hoạt chất
- Tăng khuếch tán đối lưu giúp rút ngắn thời gian chiết và tăng hiệu suất chiết
- Thích hợp với nhiều loại dược liệu và dung môi
Tuy nhiên, phương pháp này cũng có một số hạn chế như dễ phân hủy các hợp chất không bền với nhiệt, dịch chiết loãng do chiết nhiều lần, năng suất thấp, thao tác thủ công Do đó, quy trình chiết xuất đã thực hiện các biện pháp nhằm tăng hiệu suất chiết như:
- Sấy khô dược liệu để bất hoạt enzym tạm thời, xay nhỏ dược liệu trước khi chiết để làm tăng diện tích tiếp xúc giữa dung môi và dược liệu
- Tỷ lệ dược liệu/dung môi phù hợp
Ngoài ra, việc lựa chọn dung môi chiết xuất cao tổng là EtOH 70% là vì những lí do sau:
- Dung môi này có khả năng thẩm thấu xuyên qua màng tế bảo thực vật, cũng như có thể tạo liên kết hydro liên phân tử với các nhóm phân cực khác, nên được xem là dung môi vạn năng, có thể chiết được cả các hợp chất có độ phân cực mạnh, vừa và yếu, dẫn đến tăng hiệu suất chiết
- An toàn, ít độc, sẵn có, giá thành thấp
- Tính chọn lọc hòa tan tốt hơn nước (hạn chế hòa tan một số tạp chất)
- Nhiệt độ sôi của EtOH thấp hơn so với nước do đó thuận lợi khi cô thu hồi dung môi, hạn chế phân hủy các hoạt chất trong dịch chiết
- EtOH có tác dụng bảo quản, hạn chế nhiễm khuẩn so với dung môi nước, do đó có thể ngâm dược liệu trong nhiều ngày
- Thường hỗn hợp EtOH - nước cho điều kiện chiết xuất đơn giản hơn so với nước (nhiệt độ chiết thấp hơn; giảm lượng dung môi, thời gian và số lần chiết)
Từ những ưu điểm trên mà khóa luận đã chọn EtOH 70% là dung môi chiết xuất thay vì dung môi nước
3.3.3 Về kết quả phân lập các hợp chất
Khóa luận tiến hành phân lập các hợp chất hóa học bằng phương pháp sắc ký cột cổ điển vì phương pháp này sử dụng thiết bị, dụng cụ đơn giản hơn so với các phương pháp sắc ký cột cải tiến, phù hợp quy mô phòng thí nghiệm Khảo sát các vết hợp chất bằng sắc ký lớp mỏng với mục đích lựa chọn hệ dung môi pha động tối ưu và theo dõi quá trình rửa giải
Phân đoạn ethyl acetat được lựa chọn để phân lập chất vì lý do sau: khi khảo sát các cao phân đoạn bằng sắc ký lớp mỏng, nhận thấy trên sắc ký đồ của cao EtOAc và n – hexan đều cho nhiều vết và các vết phân tách nhau, tuy nhiên khối lượng cao phân đoạn ethyl acetat lại lớn hơn nhiều so với khối lượng cao phân đoạn n-hexan Do đó khi phân lập từ cao EtOAc có thể phân tách được nhiều chất hơn
Từ phân đoạn EtOAc đã phân lập được hai hợp chất là E3.6.2.1 và E3.6.2.2 Dựa trên đặc điểm về tính chất lý hóa, phổ cộng hưởng từ hạt nhân và so sánh với các dữ liệu đã được công bố, xác định được hai hợp chất E3.6.2.1 và E3.6.2.2 lần lượt là 2,8- dihydroxy-1-methoxyxanthon và euxanthon
3.3.3.1 Về hợp chất E3.6.2.1 (2,8-dihydroxy-1-methoxyxanthon)
Hợp chất 2,8-dihydroxy-1-methoxyxanthon có danh pháp IUPAC là 2,8-dihydroxy- 1-methoxyxanthen-9-on Xanthon này đã được phân lập từ chi Cratoxylum Blume [17], [39], [44], [78], [101] cũng như loài C cochinchinense ở Trung Quốc [42] và Việt Nam [4]
Hợp chất 2,8-dihydroxy-1-methoxyxanthon có hoạt tính kháng khuẩn trung bình đối với các vi khuẩn: S epidermidis (giá trị MIC = 32 μg/mL) và M luteus, B subtilis,
E coli (giá trị MIC đều là 64 μg/mL) [78]