Luận văn thạc sĩ Công nghệ sinh học: Khảo sát khả năng kháng nấm gây bệnh trên thực vật của tinh dầu tràm (Melaleuca alternifolia)

Tәng quan vӅ cây Tràm trà

Phân lo̩i và mô t̫ th͹c v̵t

&k\7UjPWUjÿѭӧc du nhұSYjRQѭӟc ta tӯ QăPFzQÿѭӧc gӑi (theo nguӗn gӕc và sinh thỏi cõy) là Tràm ỳc, Tràm lỏ kim, Tràm dҫXôYjÿѭӧc trӗng tҥLFiFÿӏa SKѭѫQJQKѭ+j1ӝi, Hà Tõy, QuҧQJ%uQK3K~@.

Thành ph̯n hóa h͕c cͯa tinh d̯u

7KjQKSKҫQKyDKӑFFӫDWLQKGҫXUҩWÿDGҥQJFyKѫQKӧSFKҩWNKiFQKDX ÿmÿѭӧFWuPWKҩ\WURQJWLQKGҫX7KjQKSKҫQKyDKӑFFӫDWLQKGҫX WKXӝFQKLӅXQKyP KӧSFKҩWNKiFQKDXQKѭQJFyÿһFÿLӇPFKXQJÿӅXOjQKӳQJKӧSFKҩWKӳXFѫcó phân WӱNKӕLQKӓGӉED\KѫLDPX0ӝWVӕQKyPKӧSFKҩWÿLӇQKuQKÿѭӧFWuPWKҩ\ WURQJKҫXKӃWFiFWLQKGҫXÿѭӧFOLӋWNrVDXÿk\ x Nhóm terpene (terpenoid): các FҩXWӱWURQJWLQK GҫXWKXӝFQKyPKӧSFKҩWQj\ WKѭӡQJ Fy FҩX WU~F PRQRWHUSHQH &10H 16 ) KRһF VHVTXLWHUSHQH &15H 24 NK{QJ QKLӅX KӧSFKҩWGLWHUSHQH& 20 H 32 KLӋQGLӋQWURQJWLQKGҫX7HUSHQRLGOjQKӳQJGүQ[XҩWFӫD WHUSHQHPjWURQJFҩXWU~FKyDKӑFFӫDQyFyFKӭDPӝWKRһFQKLӅXQKyPFKӭFKyDKӑF QKѭ alcol, aldehyde, ketone, ester, carboxylic acidô x Nhóm FiF KӧS FKҩW WKѫP QKyP SKHQ\OSURSHQH lj QKӳQJ GүQ [XҩW FӫD SKHQ\OSURSDQHÿѭӧFVLQKWәQJKӧSWӯWLӅQFKҩWOjDPLQRDFLGSKHQ\ODODQLQHQrQWURQJ F{QJWKӭFFҩXWҥRFӫDQKyPKӧSFKҩWQj\FyYzQJWKѫPEHQ]HQH1KyPQj\tWSKRQJ ph~KѫQVRYӟLQKyPWHUSHQRLGQKѭQJOjWKjQKSKҫQFKtQKWҥRQrQQKӳQJKRҥWWtQK VLQKKӑFTXêFKRWLQKGҫX x 1KyPKӧSFKҩWFyFKӭDVXOIXUYjQLWURJHQQKyPQj\tWSKәELӃQKѫQFKӍKLӋQ GLӋQWURQJWLQKGҫXFӫDPӝWVӕORjLÿһFWUѭng, tuy nhiên nKyPKӧSFKҩWFyFKӭDVXOfur và nitrogen FǊQJFyKRҥWWtQKNKiQJNKXҭQÿLӇQKuQKOjKDLKӧSFKҩWDOOLFLQYjDOO\OLVRWKLRF\DQDWH1JRjLUDWURQJWLQKGҫXFzQWuPWKҩ\FiFKӧSFKҩWDONDQHKRһFDONHQHSKkQWӱNKӕLQKӓQKѭQJFKӍKLӋQGLӋQӣGҥQJYӃW>@

7LQKGҫXWӯWKӵFYұWFyWKӇFKLӃW[XҩWKD\O\WUtFKEҵQJQKLӅXSKѭѫQJSKiSFiF SKѭѫQJSKiSWX\ NKiFQKDXYӅFiFKWKӵFKLӋQQKѭQJFyWKӇÿѭӧF[ӃS YjRKDLORҥLVDX x 3KѭѫQJSKiSFәÿLӇQSKѭѫQJSKiSFKѭQJFҩWO{LFXӕQKѫLQѭӟFWUӵFWLӃSYj JLiQWLӃSSKѭѫQJ FKLӃWEҵQJGXQJP{LKӳXFѫSKѭѫQJSKiSFѫKӑFYҳWpS,ô x 3KѭѫQJSKiSKLӋQÿҥLSKѭѫQJSKiSGQJFKҩWOѭXVLrXWӟLKҥQFKҩWOӓQJ GѭӟLWӟLKҥQ+2 và CO 2 SKѭѫQJSKiSFKLӃWFyVӵKӛWUӧFӫDYLVyQJFӫDVyQJVLrX õm,ô>@

1Kѭng dù Fy WLӃQ KjQK WKHR EҩW Fӭ SKѭѫQJ SKiS QjR WKu FǊQJ SKҧL ÿiS ӭQJ ÿѭӧFFiF \rXFҫXVDXtLQKGҫXWKXÿѭӧFSKҧLFyPLWKѫPWӵQKLrQTX\WUuQKFKLӃW [XҩWSKҧLSKKӧSYӟLQJX\rQOLӋXWLQKGҫXSKҧLÿѭӧFWUtFKNLӋWUDNKӓLQJX\rQOLӋX YӟLFKLSKtWKҩSQKҩWFy WKӇ

Nguyên WҳFO\WUtFKFӫDWҩWFҧFiFSKѭѫQJSKiSQyLWUrQÿӅXGӵDYjRQhӳQJÿһF ÿLӇPVDXFӫDWLQKGҫXGӉED\KѫLQKLӋWÿӝV{LWKҩSO{LFXӕQWKHRKѫLQѭӟFӣQKLӋWÿӝ SKKӧSKzDWDQGӉGjQJWURQJFiFGXQJP{LKӳXFѫGӉEӏKҩSWKөQJD\ӣWKӇNKt

Ly trích tinh dҫu bҵQJSKѭѫQJSKiSFKѭQJFҩt lôi cuӕQKѫLQѭӟc Nguyên lý chung

&Kѭng cҩt có thӇ ÿѭӧFÿӏQKQJKƭDOj³6ӵ tách rӡi các cҩu phҫn cӫa mӝt hӛn hӧp nhiӅu chҩt lӓng dӵa trên sӵ khác biӋt vӅ áp suҩWKѫLFӫDFK~QJ´7URQJWUѭӡng hӧSÿѫQ giҧn, khi cKѭng cҩt mӝt hӛn hӧp gӗm 2 chҩt lӓng không hòa tan vào nhau, áp suҩWKѫL tәng cӝng là tәng cӫa hai áp suҩWKѫLULrQJSKҫQ'RÿyQKLӋWÿӝ sôi cӫa hӛn hӧp sӁ WѭѫQJӭng vӟi áp suҩWKѫLWәng cӝQJ[iFÿӏnh, không tùy thuӝc vào thành phҫn bách phân cӫa hӛn hӧp, miӉQOjO~FÿyKDLSKDOӓng vүn còn tӗn tҥi [19], [22]

3KѭѫQJSKiSFKѭng cҩt lôi cuӕn tinh dҫu bҵQJKѫLQѭӟc dӵa trên nguyên lý cӫa sӵ thҭm thҩu, hòa tan, khuӃch tán và lôi cuӕQWKHRKѫLQѭӟc cӫa nhӳng chҩt hӳXFѫFy trong tinh dҫu chӭa trong các mô khi tiӃp xúc vӟLKѫLQѭӟc ӣ nhiӋWÿӝ cao Sӵ khuӃch tán dӉ dàng khi các tӃ bào chӭa tinh dҫXWUѭѫQJSKӗng do nguyên liӋu tiӃp xúc vӟLKѫLQѭӟc bão hòa trong mӝt khoҧng thӡi gian nhҩWÿӏnh Có thӇ dùng muӕLÿӇ hӛ trӧ sӵ khuӃch tán cӫa tinh dҫXYjRQѭӟc [19], [22]

- Sӵ khuӃch tán: có vai trò quan trӑng trong quá trình chiӃt xuҩt tinh dҫu KhuӃch tán là quá trình chuyӇQÿӝng ngүu nhiên cӫa chҩt tan tӯ QѫLFyQӗQJÿӝ cao ÿӃQ QѫL Fy QӗQJ ÿӝ thҩp trong dung môi Nguyên nhân cӫa sӵ khuӃch tán là do gradient nӗng ÿӝGRÿyFKҩWWDQFy[XKѭӟng khuӃFKWiQÿӇ cân bҵng nӗQJÿӝ [19], [22]

- Sӵ thҭm thҩu: có vai trò mang các phân tӱ tinh dҫu lên bӅ mһt mô tiӃt Trong sӵ thҭm thҩu, các phân tӱ dung môi dӉ dàng chuyӇQÿӝng tӯ mӝWQѫLFyQӗQJÿӝ thҩp do chuyӇQÿӝng phân tӱ Các tӃ EjRÿҭy các phân tӱ tinh dҫu tӯ QѫLFyQӗQJÿӝ FDRÿӃn QѫL Fy QӗQJ ÿӝ thҩp, quá trình này cҫn hҩS WKX QăQJ Oѭӧng nên cҫn cung cҩp mӝt Oѭӧng nhiӋt nhҩWÿӏnh Lúc này trong tӃ bào còn ít phân tӱ tinh dҫu, nӗQJÿӝ Qѭӟc bên ngoài tӃ bào lӟn, GRÿyQѭӟFFy[XKѭӟng di chuyӇn vào bên trong tӃ bào, quá trình này diӉQUDFKRÿӃQNKLÿҥt trҥng thái cân bҵng hai bên màng [19], [22]

- Sӵ hòa tan: các phân tӱ tinh dҫXÿѭӧc phân bӕ YjRWURQJQѭӟFGѭӟi tác dөng cӫa nhiӋWÿӝQѭӟc bӕFKѫLNpRWKHRWLQKGҫu qua bӝ phұn làm lҥnh, hӛn hӧp bҳWÿҫu QJѭng tө và phân ly thành hai lӟp chҩt lӓng dҫXYjQѭӟFNK{QJWDQYjRQKDXYjGRÿy dӉ dàng thu lҩy tinh dҫu [19], [22] ѬXYjNKX\ӃWÿLӇm cӫDSKѭѫQJSKiSFKѭQJFҩt lôi cuӕQKѫLQѭӟc ˰XÿL͋m

Quy trình kӻ thuұWWѭѫQJ ÿӕLÿѫQJLҧn

.K{QJÿzLKӓi nhiӅu vұt liӋu phө QKѭFiFSKѭѫQJSKiSWҭm trích, hҩp thө

ThӡLJLDQWѭѫQJÿӕi nhanh

Không có lӧLÿӕi vӟi nhӳng nguyên liӋXFyKjPOѭӧng tinh dҫu thҩp ChҩWOѭӧng tinh dҫu có thӇ bӏ ҧQKKѭӣng nӃu trong tinh dҫu có nhӳng cҩu phҫn dӉ bӏ phân hӫy Không lҩ\ ÿѭӧc các loҥi nhӵa và sáp có trong nguyên liӋX ÿy Oj QKӳng chҩW ÿӏnh KѭѫQJWKLrQQKLrQUҩt có giá trӏ7URQJQѭӟFFKѭng cҩt luôn luôn có mӝWOѭӧng tinh dҫXWѭѫQJÿӕi lӟn Tinh dҫu có nhiӋWÿӝ V{LFDRWKѭӡng cho hiӋu suҩt rҩt kém

Nguyên tҳc cӫa sӵ chiӃt lӓng - lӓng là dung môi không phân cӵc sӁ hòa tan tӕt các hӧp chҩt không phân cӵc, dung môi phân cӵc trung bình sӁ hòa tan tӕt các hӧp chҩt có tính phân cӵc trung bình và dung môi phân cӵc mҥnh sӁ hòa tan tӕt các hӧp chҩt có tính phân cӵc mҥnh [23]

ViӋc chiӃt lӓng - lӓQJÿѭӧc thӵc hiӋn bҵng bình lóng Sӱ dөng lҫQOѭӧt các dung môi hӳXFѫORҥi không hoà tan vӟLQѭӟc hoһc loҥi có thӇ hӛn hӧSÿѭӧc vӟLQѭӟFÿӇ chiӃt ra khӓLSKDQѭӟc các hӧp chҩt có tính phân cӵc khác nhau (tuǤ YjRÿӝ phân cӵc cӫa dung môi) Tùy vào tӹ trӑng so sánh giӳDGXQJP{LYjQѭӟc mà pha hӳXFѫQҵm ӣ lӟp trên hoһc ӣ Gѭӟi so vӟLSKDQѭӟc [23]

ViӋc chiӃWÿѭӧc thӵc hiӋn lҫQOѭӧt tӯ dung môi hӳXFѫNpPSKkQFӵFÿӃn dung môi phân cӵc thí dө QKѭ (ther dҫu hӓa hoһc hexane, chloroform, ethyl acetate, butanolôDung dӏch cӫa cỏc lҫn chiӃWÿѭӧc gom chung lҥLOjPNKDQQѭӟc vӟi cỏc chҩW OjP NKDQ QKѭ 1D 2 SO 4 , MgSO 4 , CaSO 4 ,ô ÿXәi dung mụi thu ÿѭӧc dӏch chiӃt ĈLӅu cҫQOѭu ý là quá trình chiӃt lӓng - lӓQJÿѭӧc thӵc hiӋn ӣ nhiӋWÿӝ phòng, nӃu gia WăQJQKLӋWÿӝ cho dung môi thì khҧ QăQJKzDWDQFӫa dung môi sӁ WăQJOrQYjQJX\rQ tҳc nêu trên sӁ có nhiӅXWKD\ÿәi [23]

1.2.5 Các y ͇ u t ͙ ̫QKK˱ͧ n Jÿ͇ n quá trình ly trích tinh d ̯ u

ThӡLJLDQFKѭng cҩt càng dài, hiӋu suҩt thu nhұn tinh dҫXFjQJFDRQKѭQJÿӃn mӝW QJѭӥng thӡi gian nhҩW ÿӏQK WKu Oѭӧng tinh dҫX WKX ÿѭӧF WăQJ WKrP FǊQJ NK{QJ ÿiQJNӇPjQJѭӧc lҥi có thӇ ҧnh hѭӣng xҩXÿӃn chҩWOѭӧng tinh dҫu

1.2.5.2 N͛QJÿ͡ và th͋ tích dung d͓ch NaCl

6DXNKLQJѭng tө, tinh dҫu tҥo vӟLQѭӟc thành hӋ QKǊWѭѫQJYLӋc cho muӕLăQ vào hӛn hӧSFKѭng cҩt sӁ giúp tránh thҩt thoát tinh dҫXGѭӟi dҥQJQKǊOjPJLҧPÿӝ tan cӫa mӝt sӕ thành phҫn ít phân cӵc có trong tinh dҫX YjR Qѭӟc Ngoài ra, muӕi NaCl là mӝt chҩWÿLӋn ly mҥQKOjPWăQJWӹ trӑQJYjÿӝ phân cӵc cӫDQѭӟc giúp tinh dҫXYjQѭӟc dӉ tách lӟSKѫQ7X\QKLrQÿӃn mӝWQJѭӥng nӗQJÿӝ nàRÿyOѭӧng tinh dҫXWKXÿѭӧc có thӇ giҧm nӃu tiӃp tөFWăQJQӗQJÿӝ cӫa muӕi, do khi sӱ dөng muӕi ӣ nӗQJÿӝ cao thì các lӟp biӇu bì ngoài chӭa tinh dҫu bӏ co lҥLQJăQFҧn sӵ thoát tinh dҫu ra ngoài [24]

1.2.6.1 7KjQKSK̯QKyDK͕FYjÿ̿FWtQKKyDOêFͯDWLQKG̯X7UjPWUà

Nguyên liӋu, hóa chҩt và thiӃt bӏ

Nguyên li͏u

Nguyên liӋXÿѭӧFGQJWURQJÿӅ tài là lá và thân non 7UjPWUjÿѭӧc thu mua trӵc tiӃp tҥLYѭӡn Tràm trà huyӋn Mӝc Hóa, tӍnh Long An vào tháng 03/2019

Tình trҥng nguyên liӋu: czQWѭѫL không dұp nát hay thӕi hӓng

Hình 2.1 Nguyên liӋu Tràm trà

Các dòng nҩm sӧi sӱ dөng trong thӱ nghiӋm:

Corynespora cassiicola (phân lұp tӯ lá cây cao su thuӝc dòng vô tính RRIV 4 ÿѭӧc thu hái tҥL1{QJWUѭӡng cao su CҭPĈѭӡng - tӍQKĈӗng Nai, có các biӇu hiӋn ÿһFWUѭQJFӫa bӋnh rөng lá Corynespora

Colletotrichum sp (ÿѭӧc phân lұp bӣi Trҫn QuӕF3K~Ĉҥi hӑc CҫQ7Kѫ Fusarium oxysporum (M42)

Pyricularia oryzae (ÿѭӧc phân lұp tӯ nhӳng lá lúa nhiӉm bӋnh tӵ nhiên thu thұp tҥi mӝt sӕ tӍnh CҫQ7Kѫ+ұX*LDQJ9ƭQK/RQJ7Uj9LQK6yF7UăQJYjÿѭӧc nuôi cҩ\WUrQP{LWUѭӡng oatmeal agar)

Hҥt giӕng ӟt hiӇm F1 sӕ 01 mua tӯ công ty TNHH Hҥt giӕng Thành Nông Thu hoҥch ӟt khi trái già chuyӇn màu có vӃWÿӓ (bҳWÿҫu chín) sau khi trә hoa 35 ngày.

Hóa ch̭t và thi͇t b͓

Dung môi hӳu FѫWK{QJWKѭӡng: ethanol tuyӋWÿӕi (Et) (99,7%), methanol (Me), GLHWK\OHWKHU&iFGXQJP{LQj\ÿӅu là hóa chҩt cӫa hãng Chemsol

Hóa chҩt khác: muӕi Na 2 SO 4 khan, muӕi NaCl (Trung QuӕFQѭӟc cҩt

Máy cô quay chân không Heidolph

Các thiӃt bӏ GQJÿӇ ly trích: x Becher 100 mL, 250 mL, 500 mL, 1000 mL x Bình lóng 100 mL, 250 mL x Ӕng ÿRQJP/P/P/ x Bình cҫu cô quay loҥi 1000 mL x PhӉXÿǊDWKӫy tinh, giҩy lӑc

HӋ thӕQJFKѭng cҩt tinh dҫu Clevenger (loҥi dùng cho tinh dҫu nhҽ KѫQQѭӟc)

HӋ thӕng máy sҳc ký khí ghép khӕi phә (GC-MS) cӫa THERMO SCIENCTIFIC Trace GC Ultra-ISQ

Khҧo sát hiӋu quҧ ly trích tinh dҫu

Khҧo sát các yӃu tӕ ҧQKKѭӣng ÿӃn quá trình ly trích tinh dҫu

- ̪QK K˱ͧng cͯa thͣi gian ly trích: 60; 120; 180 và 240 phút

- ̪QK K˱ͧng cͯa n͛QJ ÿ͡ dung d͓ch mu͙i NaCl: 0; 5; 10; 15 và 20%

- ̪QKK˱ͧng cͯa th͋ tích dung d͓ch NaCl:

TӕL ѭX KyD YLӋc ly trích tinh dҫu Tràm trà bҵng

SKѭѫQJ SKiS ӭng dөng enyme

- ̪QKK˱ͧQJFͯDWͽO HQ]\PH7UjPWUj 2; 3; 4 và 5%

- ̪QKK˱ͧQJFͯD WKͥL JLDQ [͵ Oê7UjPWUj FͯDHQ]\PHYjJLͥ ĈiQK JLi FKҩW Oѭӧng tinh dҫu Tràm trà bҵng SKѭѫQJ pháp phân tích GC-MS

Khҧo sát in vitro và in vivo hiӋu quҧ phòng/trӏ cӫa tinh dҫu Tràm trà trên nҩm gây bӋnh ӣ thӵc vұt

- Kh̫o sát in vitro hi u qu̫ ͱc ch͇ cͯa tinh d̯u Tràm trà trên ṋm gây b nh ͧ th͹c v̵t vͣi cỏc n͛QJÿ͡: 0; 2; 4; 6; 8 và 10 àL/mL

- Kh̫o sát in vivo hi u qu̫ phòng/tr͓ cͯa tinh d̯u Tràm trà trên ṋm gây b nh ͧ th͹c v̵t vͣi các n͛QJÿ͡: 2; 4; 6; 8 và 10%

- ĈiQKJLiKuQKWKiLW͇ bào ṋm sͫi: X͵ lý vͣi carbendazim và x͵ lý vͣi tinh d̯u Tràm trà

Khҧo sát in vitro và in vivo hiӋu quҧ phòng/trӏ cӫa tinh dҫX 7UjP WUj ÿѭӧc phӕi hӧp vӟi thuӕc diӋt nҩm nguӗn gӕc tәng hӧp trên nҩm gây bӋnh ӣ thӵc vұt

Kh̫o sát in vitro và in vivo hi u qu̫ phòng/tr͓ cͯa tinh d̯X7UjPWUjÿ˱ͫc ph͙i hͫp vͣi thu͙c di t ṋm ngu͛n g͙c t͝ng hͫp trên ṋm gây b nh th͹c v̵t vͣi các tͽ l tinh d̯u Tràm trà/carbendazim: 1:4; 2:3; 3:2 và 4:1

;iFÿӏnh mҩt khӕLOѭӧQJGROjPNK{ÿѭӧc tiӃQKjQKWKHR'ѭӧFÿLӇn ViӋt Nam V (phө lөF WUDQJ ÿӕi vӟi mүu nguyên liӋu khô khӕL Oѭӧng mҩt do làm khô không quá 13%

TiӃn hành sҩy cӕc sӭ Euÿӵng mүu thӱ) trong 30 phút tҥi 105 °C ± 2 °CVDXÿy cân khӕLOѭӧng cӕc sӭ Cho vào cӕc sӭ ÿmVҩy khoҧng 3 g mүu nguyên liӋu Tràm trà còQWѭѫLGjQÿӅu lӟp nguyên liӋu trong cӕc Sҩy cӕc chӭa mүu tҥi 60 °C ± 2 °C cho ÿӃn khi khӕLOѭӧQJNK{QJÿәi (chênh lӋch khӕLOѭӧng lҫn sҩ\WUѭӟc và lҫn sҩy sau cách nhau 1 giӡ không quá 0,5 mg), ghi nhұn khӕLOѭӧng cӕc sӭ sau khi sҩy TiӃn hành thí nghiӋm trên vӟi sӕ nghiӋm thӭc là 3, tính toán lҩy giá trӏ WUXQJEuQKĈӝ ҭm nguyên liӋXÿѭӧF[iFÿӏnh theo công thӭc:

ZOjÿӝ ҭm cӫa nguyên liӋu, tính bҵng phҫQWUăP m 1 là khӕLOѭӧng cӕc và mүu sau khi sҩy, tính bҵng gam (g); m 0 là khӕLOѭӧng cӕc sӭ EDQÿҫu, tính bҵng gam (g); m là khӕLOѭӧng nguyên liӋXEDQÿҫu, tính bҵng gam (g)

&KѭQJFҩt lôi cuӕQKѫLQѭӟc

2.2.2.2 T͙L˱XKyDYL c ly trích tinh d̯u Tràm trà b̹QJSK˱˯QJSKiSFK˱QJF̭t lôi cu͙QK˯LQ˱ͣc [19], [22]

MөFÿtFKFhiӃt tinh dҫu ra khӓi hӛn hӧp gӗPQѭӟc và tinh dҫXVDXNKLFKѭng cҩt lôi cuӕQKѫLQѭӟc

7URQJÿӅ WjLQj\SKѭѫQJSKiSFKLӃt lӓng - lӓQJÿѭӧc áp dөQJÿӇ chiӃt tinh dҫu ra khӓi hӛn hӧp gӗm tinh dҫXYjQѭӟFVDXNKLFKѭng cҩt lôi cuӕQKѫLQѭӟc Dung môi ÿѭӧc chӑQÿӇ chiӃt tinh dҫu là diethyl ether do FyѭXÿLӇm là hòa tan tӕt các cҩu tӱ trong tinh dҫu, rҩWtWWDQWURQJQѭӟc nên dӉ dàng tách lӟp, nhiӋWÿӝ sôi thҩp (xҩp xӍ 36 °C) nên dӉ dàng thu hӗi dung môi

Quy trình chiӃt xuҩt tinh dҫu Tràm trà [24]

Hình 2.3 Quy trình chiӃt xuҩt tinh dҫu Tràm trà

&KѭQJFҩt lôi cuӕn KѫLQѭӟc

ChiӃt 5 lҫn vӟi diethyl ether Làm khan bҵng Na 2 SO 4 Tinh dҫu

Thӱ hoҥt tính kháng nҩm in vitro và in vivo Khҧo sát thành phҫn hóa hӑc

Cân 50 g nguyên liӋXWѭѫLÿm[D\QKX\Ӊn vӟLNtFKWKѭӟc bӝt nguyên liӋu qua rây

Fy ÿѭӡng kính lӛ 0,6 mm và cҳt nhӓ nguyên liӋu tӯ 3 ± FP ÿӕi vӟi nguyên liӋu không xay, cho vào bình cҫXFKѭng cҩt dung tích 1000 mL, thêm vào bình cҫu 500 mL dung dӏch NaCl, ngâm nguyên liӋu khoҧng 30 phút

Lҳp bình cҫu vào hӋ thӕQJFKѭng cҩt lôi cuӕQKѫLQѭӟFFKѭng cҩWÿӇ thu tinh dҫu tӯ hӛn hӧp trên, bình cҫXÿѭӧFÿXQQyQJEҵng bӃp ÿLӋn vӟi nhiӋWÿӝ cӕ ÿӏnh là 100°C

Khi hӛn hӧSV{LKѫLQѭӟc tҥo thành sӁ lôi cuӕQKѫLWLQKGҫXED\OrQYjÿLYjRKӋ thӕng QJѭng tө 6DXNKLQJѭng tө sӁ WKXÿѭӧc mӝt hӛn hӧp lӓng gӗPQѭӟc và tinh dҫu

Thu lҩy hӛn hӧp này và cho vào bình chiӃt, chiӃt 5 lҫn, mӛi lҫn chiӃt vӟi 10 mL GLHWK\O HWKHU 6DX ÿy JRP WRjQ Eӝ dӏch chiӃt và làm khan dӏch chiӃt bҵng muӕi

Na 2 SO 4 khan Dӏch chiӃWVDXNKLOjPNKDQÿѭӧc cô quay và thu hӗLGXQJP{LGѭӟi áp suҩWNpPWKXÿѭӧc sҧn phҭm tinh dҫu

Sҧn phҭm tinh dҫXÿѭӧc bҧo quҧn ӣ nhiӋWÿӝ Gѭӟi 4 °C trong tӫ lҥQKFKRÿӃn khi tiӃn hành khҧo sát hoҥt tính sinh hӑc và phân tích GC-MS

HiӋu suҩWFKѭQJFҩt tinh dҫu +ÿѭӧc tính theo công thӭc:

7URQJÿy m là khӕLOѭӧng tinh dҫXWKXÿѭӧc, tính bҵng gam (g)

ZOjÿӝ ҭm cӫa nguyên liӋu, tính bҵng phҫQWUăP

Khҧo sát các yӃu tӕ ҧQKKѭӣQJÿӃn quá trình ly trích tinh dҫu

MөFÿtFKNhҧo sát các yӃu tӕ ҧQKKѭӣQJÿӃQTXiWUuQKFKѭng cҩt tinh dҫu, tӯ ÿy ÿӅ xuҩW FiF ÿLӅu kiӋn tӕL ѭX ÿӇ tách tinh dҫu Tràm trà ӣ quy mô phòng thí nghiӋm bҵQJSKѭѫQJSKiSFKѭng cҩt lôi cuӕQKѫLQѭӟc

Khҧo sát ҧQKKѭӣng cӫa thӡLJLDQFKѭQJFҩt

7URQJÿӅ tài này, thӡLJLDQFKѭng cҩt tinh dҫXÿѭӧc khҧo sát lҫQOѭӧt tӯ 60 phút ÿӃn 240 phút, mӛLOѭӧt khҧRViWWăQJWKrPSK~W7Kӡi JLDQÿѭӧc tính tӯ lúc giӑt tinh dҫXÿҫXWLrQQJѭng tө và nhӓ xuӕng ӕng hӭng tinh dҫu Cӕ ÿӏnh các yӃu tӕ QKѭ khӕi Oѭӧng nguyên liӋu, nhiӋWÿӝ FKѭng cҩt, thӇ tích và nӗQJÿӝ dung dӏch NaCl thêm vào Ghi nhұn thӇ tích và tính toán hiӋu suҩt ly trích tinh dҫu theo tӯng khoҧng thӡi gian khҧo sát, tӯ ÿy[iFÿӏnh thӡi gian tӕLѭu mà tҥLÿyhiӋu suҩt ly trích tinh dҫu cao nhҩt

Khҧo sát ҧQKKѭӣng cӫa nӗQJÿӝ dung dӏch NaCl

Vӟi thӡi gian ly trích tӕLѭXÿmOӵa chӑn, tiӃp tөc khҧo sát ҧQKKѭӣng cӫa nӗQJÿӝ dung dӏch muӕL1D&OÿӃn hiӋu suҩt ly trích tinh dҫu bҵng cách tiӃn hành ngâm nguyên liӋu trong dung dӏch NaCl lҫQOѭӧt ӣ mӛi nӗQJÿӝ tӯ ÿӃn 20%, mӛLOѭӧt khҧo sát WăQJQӗQJÿӝ WKrP6DXÿyFKѭng cҩWÿӇ thu tinh dҫu và ghi nhұn hiӋu suҩt ly trích tinh dҫu tѭѫQJӭng ӣ mӛi nӗQJÿӝ Các yӃu tӕ EDQÿҫXQKѭ khӕLOѭӧng nguyên liӋu, thӇ tích dung dӏch muӕi, nhiӋWÿӝ và thӡLJLDQFKѭng cҩWÿѭӧc cӕ ÿӏnh

Khҧo sát ҧQKKѭӣng cӫa thӇ tích dung dӏch NaCl

Vӟi thӡi gian ly trích và nӗQJÿӝ dung dӏch muӕi tӕLѭXÿmFKӑn, tiӃp tөc cӕ ÿӏnh nhiӋWÿӝ và khҧo sát quá trình ly trích tinh dҫu lҫQOѭӧt vӟi nhӳng thӇ tích dung dӏch NaCl tӯ P/ÿӃn 500 mL, mӛLOѭӧt khҧRViWWăQJWKrPP/*KLQKұn hiӋu suҩt ly trích tinh dҫu ӣ mӛi thӇ tích khác nhau, tӯ ÿyOӵa chӑn thӇ tích tӕLѭu nhҩt mà tҥLÿy hiӋu suҩt ly trích tinh dҫu cao nhҩt

2.2.2.3 Kh̫o sát vi c ly trích tinh d̯u Tràm trà b̹QJSK˱˯QJSKiSͱng dͭng enzyme

1JX\rQOLӋXVDXVѫFKӃÿѭӧFEәVXQJQѭӟFWKHRWӹOӋQKҩWÿӏQK4XiWUuQKWKӫ\ SKkQGLӉQUDWURQJEӇәQQKLӋWFyNKXҩ\FѫKӑFEҵQJNKXҩ\WӯFyÿLӅXQKLӋW.KLQKLӋW ÿӝWURQJEuQKWKӫ\SKkQSKKӧSYӟLQKLӋWÿӝ enzyme (macerozyme) KRҥWÿӝQJWKuEә VXQJHQ]\PHYӟLWӹOӋWKtFKKӧS7KӡLJLDQWKӫ\SKkQÿѭӧFWtQKWҥLWKӡLÿLӇPEәVXQJ HQ]\PH 6DX WKӫ\ SKkQ KӛQ KӧS WKӫ\ SKkQ ÿѭӧF JLD QKLӋW ÿӃQ o & ÿӇ EҩW KRҥW HQ]\PHNӃWWK~FTXiWUuQKWKӫ\SKkQ

(Q]\PHPDFHUR]\PHFyWKjQKSKҫQEDRJӗP3HFWLQDVH8PJ&HOOXODVHU/mg và Hemicellulase 0,25 U/mg

0үXWKtQJKLӋPYӟLJQJX\rQOLӋXPҿWURQJFӕFFyPӓPOEәVXQJthêm POQѭӟF4XiWUuQKWKӫ\SKkQGLӉQUDWURQJEӇәQQKLӋW0HPPHUW- ĈӭFNKXҩ\ ÿҧRKӛQKӧSEҵQJPi\NKXҩ\Fѫ,.$- ĈӭFWӕFÿӝYzQJSK~W

6DX WKӫ\ SKkQ KӛQ KӧS QJX\rQ OLӋX ÿѭӧF ÿHP ÿL FKLӃW [XҩW WLQK GҫX EҵQJ SKѭѫQJ SKiS FKѭQJ FҩW O{L FXӕQ Kѫi QѭӟF WUrQ Eӝ FҩW &OHYHQJHU 6ӵ JLD WăQJ KjP OѭӧQJWLQKGҫXVRYӟLÿӕLFKӭQJNK{QJVӱGөQJHQ]\PHÿѭӧF[iFÿӏQKWKHRF{QJWKӭF

7URQJÿy h e : hjPOѭӧQJWLQKGҫXWKHRSKѭѫQJSKiSHQ]\PHKӛWUӧ, tính bҵng gam (g) h 0 : hjPOѭӧQJWLQKGҫXNK{QJVӱGөQJHQ]\PH, tính bҵng gam (g)

KҧRViWҧQKKѭӣQJFӫDWӹOӋHQ]\PH7UjPWUj

3KҧQӭQJÿѭӧFWLӃQKjQKYӟLFiFWӹOӋNKӕLOѭӧQJHQ]\PH/Tràm trà WKD\ÿәLWӯ 1% ÿӃQNKL KLӋXVXҩW WKXKӗLWLQK GҫX 7UjPWUj NK{QJÿәL Các thôQJVӕFӕ ÿӏQKOj Khӕi Oѭӧng nguyên liӋu (50 g), nhiӋWÿӝ FKѭng cҩt (100 °C), nӗQJÿӝ dung dӏch NaCl, thӇ tích dung dӏch và thӡLJLDQFKѭQJFҩWÿѭӧc chӑn tӯ thí nghiӋm khҧo sát các yӃu tӕ ҧQKKѭӣQJÿӃQTXiWUuQKFKѭng cҩt tinh dҫu

KҧRViWҧQKKѭӣQJFӫa tKӡLJLDQ[ӱOê7UjPWUjYӟL enzyme

+jPOѭӧng tinh dҫu cӫa mүu xӱ OêHQ]\PHWKXÿѭӧc sau 1h, 2h, 3h;ÿѭӧc xác ÿӏnh MүXNK{QJHQ]\PHFǊQJÿѭӧc tiӃn hành song song

2.2.2.4 ĈiQKJLiFK̭WO˱ͫng tinh d̯u Tràm trà b̹ng SK˱˯QJSKiS phân tích GC-MS

TronJÿӅ tài này, thành phҫn hóa hӑc cӫa tinh dҫu TrjPWUj/RQJ$Qÿѭӧc phân tích bҵng thiӃt bӏ sҳc ký khí ghép khӕi phә (GC - MS) cӫa THERMO SCIENTIFIC Trace GC Ultra - ISQ, loҥi cӝt sҳc ký sӱ dөng là cӝt TG - SQC (15 m x 0,25 mm x 0,25 àm), khớ mang helium &KѭѫQJWUuQKQKLӋWÿӝ ÿѭӧc khҧRViWVDRFKRFiFPǊLWtQ hiӋXWѭѫQJӭng vӟi mӛi cҩu tӱ) tách rӡi nhau hoàn toàn trên sҳFNêÿӗ

Thành phҫn hóa hӑc cӫa tinh dҫXÿѭӧF[iFÿӏQKQKѭVDX;iFÿӏnh thӡLJLDQOѭX WѭѫQJÿӕi cӫa các chҩt trên sҳFNêÿӗ *&VDXÿyÿӕi chiӃu vӟi thӡLJLDQOѭu cӫa nhӳng chҩWÿmELӃWWUѭӟc Ĉӕi chiӃu phә khӕLOѭӧQJWKXÿѭӧc vӟi phә gӕFWURQJWKѭ viӋn phә NIST, tӯ ÿyÿӏnh danh các cҩu tӱ trong tinh dҫu Tràm tràÿӗng thӡi dӵa trên tӹ lӋ % diӋn tích peak cӫa các cҩu tӱ ÿӇ [iFÿӏQKKjPOѭӧng % cӫa chúng trong tinh dҫu ĈLӅu kiӋn phân tích sҳc ký khí GC ắ &KѭѫQJWUuQKQKLӋWÿӝ cho mỏy sҳFNờNKt7UDFH*&8OWUDÿѭӧc thiӃt lұSQKѭ sau:

Ramp 1: nhiӋWÿӝ EDQÿҫu 50°C, giӳ 1 phút

Ramp 2: tăQJOrQ0°C vӟi tӕFÿӝ 2°C/phút, giӳ 2 phút

Ramp 3: tăQJOrQ50°C vӟi tӕFÿӝ 2°C/phút, giӳ 2 phút

Ramp 4: tăQJOrQ0°C vӟi tӕFÿӝ 10°C/phút, giӳ 10 phút ắ Tiờm mүu:

ThӇ tớch mүu tiờm: 10 àL ĈLӅu kiӋn khӕi phә MS

KiӇu ion hóa: bҳQSKiÿLӋn tӱ (EI) ĈLӋn tích ion: dѭѫQJ

NhiӋWÿӝ MS tranfer line: 275°C

2.2.2.5 Kh̫o sát in vitro và in vivo hi u qu̫ phòng/tr͓ cͯa tinh d̯u Tràm trà trên m͡t s͙ dòng ṋm gây b nh ͧ th͹c v̵t

Khҧo sát in vitro hiӋu quҧ ӭc chӃ cӫa tinh dҫu Tràm trà trên mӝt sӕ dòng nҩm gây bӋnh ӣ thӵc vұt

Chuҭn bӏ nҩm: các dòng nҩm sӧi thӱ nghiӋm hoҥWWtQKÿѭӧc nuôi cҩy trên môi WUѭӡng PDA (Potato Dextrose Agar) - OjP{LWUѭӡng thuұn lӧi cho các loài vi nҩm phát triӇn

Chuҭn bӏ tinh dҫu: tinh dҫX7UjPWUjÿѭӧc pha loãng vӟi Tween 80 ÿӇ ÿѭӧc các nӗQJÿӝ 0 àL/mL, 2 àL/mL, 4 àL/mL, 6 àL/mL, 8 àL/mL và 10 àL/mL

Khҧo sát hoҥt tính kháng nҩm: dQJWKѭӟc thҷng có chia vҥch ÿӇ ÿRÿѭӡng kính cӫa tҧn nҩm sau thӡi gian ӫ là 6 ngày, tính bán kính tҧn nҩm phát triӇn theo thӡi gian nuôi cҩy

Công thӭc tính khҧ QăQJӭc chӃ (hiӋu suҩt) cӫa tinh dҫu vӟi sӵ phát triӇn cӫa vi nҩm (%) [24]:

TURQJÿy5Eán kính nҩm phát triӇn ӣ mүXÿӕi chӭng (cm) r: bán kính nҩm ӣ mүu tinh dҫu (cm)

Mӛi thí nghiӋPÿѭӧc tiӃn hành 3 lҫn

Khҧo sát in vivo hiӋu quҧ phòng/trӏ cӫa tinh dҫu Tràm trà trên mӝt sӕ dòng nҩm gây bӋnh ӣ thӵc vұt

Bӕ trí theo kiӇu hoàn toàn ngүu nhiên, gӗm 7 công thӭc, mӛi công thӭc 10 cây là ÿӕi tѭӧng nhiӉm bӋnh nҩm phә biӃn, lһp lҥi 3 lҫn

NT1: xӱ lý vӟi tinh dҫu Tràm trà WUѭӟc và sau 24 giӡ lây bӋnh

NT2: xӱ lý vӟi tinh dҫu Tràm trà 4WUѭӟc và sau 24 giӡ lây bӋnh

NT6: lây bӋQKWUѭӟc và sau 24 giӡ xӱ lý vӟi tinh dҫu Tràm trà 2%

NT11 ÿӕi chӭng âm): xӱ lý vӟi Qѭӟc lã

NT12 ÿӕi chӭng GѭѫQJxӱ lý vӟi thuӕc hóa hӑc diӋt nҩm carbendazim (97%) (Sigma-$OGULFK+RD.Ǥ)

3K˱˯QJSKiSx͵ lý vͣi tinh d̯u: tҥo vӃWWKѭѫQJWUrQWUiLӟt bҵng cách dùng bó

NLPFk\ ÿӇ tҥo vӃWWKѭѫQJ ӣ vӏ trí trung tâm (giӳD WUiL 6DX ÿySKXQWLQKGҫu Phun tinh dҫu tҥi vӏ trí vӃW WKѭѫQJ SKXQ Oҫn/trái (vӟi mөF ÿtFK SKӫ ÿӅu trên trái) NghiӋm thӭFÿӕi chӭQJSKXQQѭӟc muӕLVLQKOê1D&OÅ6DXÿyÿһt trái vào trong bӑc nilon có chӭa miӃng bông gòn tҭPQѭӟFÿӇ tҥRÿӝ ҭPYjÿһWWURQJÿLӅu kiӋn 25 o C [41]

ĈiQKJLiFKҩWOѭӧng tinh dҫu Tràm trà bҵng SKѭѫQJSKiSphân tích GC-MS

VӟL FKѭѫQJ WUuQKnhiӋW ÿӝ ÿm ÿѭӧc tӕL ѭu, tinh dҫu TrjP WUj ÿѭӧc phân tích bҵng thiӃt bӏ GC - MS

- HiӋXQăQJWiFKFӫa cӝt khá tӕt, các cҩu tӱ trong tinh dҫu phân tách ra rõ rӋt VDXNKLÿLTXDFӝt sҳc ký, không có hiӋQWѭӧQJPǊLVҳc ký (peak) nào bӏ trùng lҳp hoһc bӏ chҿ PǊL&yWKӇ kӃt luұQFiFÿLӅu kiӋn sҳFNêEDQÿҫXÿmÿѭӧc lӵa chӑn tӕLѭu

- Xuҩt hiӋQSHDNFyFѭӡQJÿӝ lӟn nhҩt (so vӟi các peak còn lҥi) trên sҳc ký ÿӗWѭѫQJӭng ӣ các thӡLJLDQOѭXSK~WSK~WYj SK~WĈLӅu này cho thҩy, ba cҩu tӱ này là nhӳng thành phҫn chiӃP KjP Oѭӧng cao nhҩt trong tinh dҫu Tràm trà

Tӯ ÿyQKұn dҥng cҩu trúc hóa hӑFYjÿӏnh danh bҵQJFiFKÿӕi chiӃu khӕi phә cӫa mӛi chҩt vӟLWKѭ viӋn khӕi phә cӫDPi\ÿm[iFÿӏQKÿѭӧc ba hӧp chҩWWѭѫQJӭng vӟi ba thӡLJLDQOѭu trên, kӃt quҧ ÿѭӧc thӇ hiӋn trong Bҧng 3.9

Bҧng 3.9 Các hӧp phҫQFyKjPOѭӧng cao nhҩt trong tinh dҫu Tràm trà

(phút) Tên hӧp chҩt Công thӭc phân tӱ

KhӕLOѭӧng phân tӱ (amu)

TiӃQKjQKÿӕi chiӃu phә 06YjÿӏQKGDQKWѭѫQJWӵ ÿӕi vӟi các peak còn lҥi, chӍ lӵa chӑn các peak có % diӋn tích peak lӟQKѫQWѭѫQJӭng vӟLKjPOѭӧng lӟQKѫQWKXÿѭӧc bҧng kӃt quҧ tóm tҳt vӅ thành phҫn hóa hӑc chính trong tinh dҫu Tràm trà ӣ /RQJ$QQKѭ Bҧng 3.10

Bҧng 3.10 Thành phҫn hóa hӑc chính cӫa tinh dҫu Tràm trà ӣ Long An

STT ThӡLJLDQOѭu (phút) Thành phҫn +jPOѭӧng (%)

Napthalene, 1, 2, 3, 5, 6, 8a ± hexahydro ± 4, 7 ± dimethyl ± 1 ± (1 ± methylethyl) -, (S ± cis) -

1H ± cycloprop[e]azulene ± 4 ± ol, decahydro - 1, 1, 4, 7 ± tetramethyl -, [1ar ± DĮȕ DȕĮDȕEĮ@-

KӃt quҧ phân tích GC - MS cho thҩy trong tinh dҫu Tràm trà Long An có 13 thành phҫn, thuӝc bҧy nhóm hӧp chҩt là nhóm etyl butanoat QKѭ 2 ± pentanone, 4 ± hydroxyl ± 4 ± methyl -SLQHQHQKѭĮ- pinene và ȕ± pinene, ȕ± myrcene, terpinene

QKѭ ± cyclohexadiene, 1 - methyl ± 4 ± (1 ± methylethyl) -, cyclohexene, 1 - methyl ± 4 ± (1 ± methylethylidene) -, eucalyptol, terpineol QKѭ3 ± cyclohexen ± 1 ± ol, 4 ± methyl ± 1 ± (1 ± methylethyl) ± và 3 ± cyclohexen ± 1 ± PHWKDQROĮĮ± trimethyl - , (S) -, aristolochene QKѭ+± cycloprop[e]azulene, 1a, 2, 3, 5, 6, 7, 7a, 7b ± octahydro ± 1, 1, 4, 7 ± tetramethyl -, [1aR ± DĮĮDȕEĮ] ± và napthalene, 1,

2, 3, 5, 6, 8a ± hexahydro ± 4, 7 ± dimethyl ± 1 ± (1 ± methylethyl) -, (S ± cis) ± và các hӧp chҩt OHGROQKѭ globulol và 1H ± cycloprop[e]azulene ± 4 ± ol, decahydro - 1, 1, 4,

7 ± tetramethyl -, [1ar ± DĮȕDȕĮDȕEĮ@- TәQJKjPOѭӧng cӫa tҩt cҧ các cҩu tӱ chiӃPWUrQOѭӧng tinh dҫXO\WUtFKÿѭӧc Các cҩu tӱ FyKjPOѭӧng cao nhҩt trong tinh dҫXÿӅu là nhӳng hӧp chҩt eucalyptol và terpineolGRÿyWLQKGҫu có nhiӋt ÿӝ sôi, tӹ trӑng và chiӃt suҩt khá cao, phù hӧp vӟi kӃt quҧ cӫa các công trình nghiên cӭu vӅ tinh dҫu Tràm trà ÿmF{QJEӕ Chính các hӧp chҩt eucalyptol và terpineol này mang lҥi nhӳng hoҥt tính sinh hӑc quý cho tinh dҫXQKѭ hoҥt tính kháng khuҭn, kháng nҩm, chӕQJR[\KyDÿӝc tớnh tӃ EjRô

Eucalyptol là mӝt hӧp chҩt hӳXFѫ tӵ QKLrQWURQJÿLӅu kiӋn nhiӋWÿӝ phòng là mӝt chҩt lӓng không màu Nó là mӝt ether YzQJ ÿӗng thӡi là mӝt mono terpenoid Terpineol là mӝt loҥLUѭӧu monoterpene ÿmÿѭӧc phân lұp tӯ nhiӅu nguӗn khác nhau QKѭdҫu Tràm, dҫu Thông và dҫu Petitgrain Có bӕn ÿӗng phân , Į -, ȕ-, ஔ - terpineol và terpinen ± 4 - ol ȕ- và ஔ - terpineol chӍ khác nhau bӣi vӏ trí cӫa liên kӃWÿ{L Terpineol WKѭӡng là mӝt hӛn hӧp cӫDFiFÿӗng phân này vӟi Į - terpineol là thành phҫn chính

Mһt khác, Xing và cӝng sӵ (2014), cho rҵng hoҥt tính kháng nҩm chính cӫa tinh dҫu QuӃ ÿѭӧc cho là do cinnamaldehyde, cinnamaldehyde có tác dөng ӭc chӃ enzym tәng hӧp vách tӃ EjR ȕ- (1,3) - JOXFDQ V\QWKDVH Yj V\QWKDVH FKLWLQ GR ÿy làm vӥ màng tӃ bào, mҩt tӃ bào chҩt, phá hӫy ty thӇ và mҩt sӵ әQÿӏnh cӫa thành tӃ bào nên ҧQKKѭӣQJÿӃn hình thái và sӵ phát triӇn cӫa nҩm [43] Các thành phҫn aldehyde cӫa citral là hӛn hӧp cӫDKDLÿӗng phân là geranial và neral có trong tinh dҫu Sҧ ÿmÿѭӧc chӭng minh hoҥt tính kháng nҩPÿiQJNӇ kháng lҥi các loҥi nҩm gây tәn thҩt sau thu hoҥFK>@7ѭѫQJWӵ, Amit và cӝng sӵ (2010) cho rҵng hoҥt tính kháng sӧi cӫa tinh dҫu Sҧ chanh do sӵ hiӋn diӋn cӫa monoterpene ÿѭӧc hình thành bӣLĮ- citral Yjȕ- citral [45] ĈLӅu này cho thҩy các thành phҫn kháng khuҭn trong tinh dҫu có vai trò rҩt quan trӑng trong viӋc ӭc chӃ vi sinh vұt gây hҥi Nghiên cӭu cӫa Lopez và cӝng sӵ (2005) cho thҩy, tinh dҫu QuӃ có khҧ QăQJӭc chӃ hiӋu quҧ lên ba loҥi nҩm (nҩm men Candida albicans và hai loҥi nҩm sӧi Penicillium islandicum và Aspergillus flavus) [46]

Tӯ kӃt quҧ, cho thҩy tinh dҫX7UjPWUjWURQJÿӅ tài này có thành phҫn hoҥt chҩt FKtQKOjHXFDO\SWROÿiSӭng các yêu cҫu cӫD,62WѭѫQJWӵ QKѭ các thành phҫQÿmÿѭӧc nghiên cӭXWUѭӟFÿk\ [4].

Kh̫o sát in vitro hi͏u qu̫ ͱc ch͇ cͯa tinh d̯u Tràm trà trên ṋm gây b͏nh ͧ th͹c v̵t

Vӟi nӗQJÿӝ EDQÿҫu là 10 àL/mL, tinh dҫXÿѭӧc pha loóng vӟi Tween 80 ӣ cỏc thang nӗQJÿӝ thҩp dҫn, tӯ ÿy[iFÿӏnh giá trӏ MIC KӃt quҧ cho thҩy, xung quanh tҧn nҩPÿѭӧc nuôi cҩ\WURQJP{LWUѭӡng có tinh dҫu Tràm trà xuҩt hiӋn vòng tròn tҧn nҩm vӟLNtFKWKѭӟFWKD\ÿәi tuǤ nӗQJÿӝ tinh dҫu (Hình 3.2WURQJNKLÿy tҧn nҩm phát triӇQEuQKWKѭӡng khi ÿѭӧc nuôi cҩ\WURQJP{LWUѭӡng có Tween 801KѭYұy, sӱ dөng dung môi Tween 80 không ҧQKKѭӣQJÿӃn kӃt quҧ thí nghiӋm và viӋc sӱ dөng Tween

80 OjPGXQJP{LÿӇ pha loãng tinh dҫu là thích hӧp KӃt quҧ thӱ nghiӋPÿѭӧc trình bày trong Bҧng 3.11 và Hình 3.2

Bҧng 3.11 HiӋu suҩt kháng nҩm gây bӋnh trên thӵc vұt cӫa tinh dҫu Tràm trà

Ghi chú: các mүu tӵ theo sau các giá trӏ trong cùng mӝt hàng khác nhau thì khác biӋWFyêQJKƭD thӕng kê vӟLÿӝ tin cұy > 95% (-) là không kháng nҩm

Aspergillus niger Corynespora cassiicola Colletotrichum sp Fusarium oxysporum Pyricularia oryzae

Hình 3.2 Ĉѭӡng kính tҧn nҩm ӣ các nӗQJÿӝ tinh dҫu Tràm trà khác nhau

KӃt quҧ cho thҩy hoҥt tính kháng nҩm cӫa tinh dҫu Tràm trà phө thuӝc vào nӗng ÿӝ Tinh dҫu Tràm trà ӭc chӃ sӵ phát triӇn sӧi nҩm cӫa các dòng nҩm: Aspergillus

10 mm 10 mm 10 mm 10 mm 10 mm

10 mm 10 mm 10 mm 10 mm 10 mm niger, Corynespora cassiicola, Colletotrichum sp., Fusarium oxysporum và Pyricularia oryzae Trong tҩt cҧ các dòng nҩm thӱ nghiӋm, sӵ ӭc chӃ WăQJWUѭӣng sӧi nҩm hoàn toàn cӫa tinh dҫu Tràm trà có nӗQJ ÿӝ ȝ/P/ +uQK 2) Tinh dҫu Tràm trà có tác dөng ӭc chӃ FDRKѫQÿiQJNӇ (݌ ÿӕi vӟi Colletotrichum sp và

Pyricularia oryzae so vӟi trên Corynespora cassiicola, Aspergillus niger và Fusarium oxysporum ӣ nӗQJÿӝ ȝ/P/VDX ngày ӫ HiӋu suҩt ӭc chӃ WăQJWUѭӣng sӧi nҩm là tӯ ÿӃn 100% Ӣ nӗQJÿӝ ȝ/P/, tinh dҫu Tràm trà ÿmӭc chӃ hoàn toàn sӵ phát triӇn sӧi nҩm cӫa Colletotrichum sp và Pyricularia oryzae Tuy nhiên, sӵ ӭc chӃ hoàn toàn Corynespora cassiicola ӣ nӗQJÿӝ ȝ/P/; Aspergillus niger và Fusarium oxysporum ӣ nӗQJÿӝ ȝ/P/ (Bҧng 3.11)

HiӋu suҩt ӭc chӃ WăQJWUѭӣng sӧi nҩm cao nhҩt và thҩp nhҩt cӫa tinh dҫu Tràm trà ӣ nӗQJ ÿӝ ȝ/P/ ÿӕi vӟi Colletotrichum sp và Pyricularia oryzae lҫQ Oѭӧt là

55,31% và 14,52% Sӵ ӭc chӃ WăQJWUѭӣng sӧi nҩPWURQJQăP dòng nҩm thӱ nghiӋm ӣ nӗQJÿӝ tinh dҫu Tràm trà là 2 ȝ/P/ NKiFQKDXÿiQJNӇ (݌ 1ӗQJÿӝ ӭc chӃ tӕi thiӇu (MIC) cӫa tinh dҫu Tràm trà trên hӋ sӧi nҩm thӱ nghiӋm nҵm trong khoҧng 6

- 8 ȝ/P/ Giá trӏ MIC thҩp nhҩt (6 ȝ/P/) ÿӕi vӟi Colletotrichum sp và Pyricularia oryzae trong khi dòng Corynespora cassiicola có giá trӏ MIC là 8 ȝ/P/ và 10 ȝ/P/ ÿӕi vӟi Aspergillus niger và Fusarium oxysporum

Tinh dҫu Tràm trà có hoҥt tính kháng nҩm gây bӋnh trên thӵc vұt phө thuӝc nӗng ÿӝ thӱ nghiӋm Nhìn chung, khi nӗQJ ÿӝ cӫa tinh dҫu Tràm trà WăQJ OrQ KRҥt tính kháng nҩm WăQJOrQÿѭӧc thӇ hiӋn bҵng sӵ giҧm ÿѭӡng kính cӫa các YzQJVLQKWUѭӣng nҩm Khi tinh dҫu Tràm trà có nӗQJÿӝ thҩp KѫQWҥo ra vùng ӭc chӃ nhӓ KѫQVRYӟi nӗQJÿӝ cao KѫQ9uYұy, khi nӗQJÿӝ tinh dҫu Tràm trà WăQJOrQKRҥt tính kháng nҩm gây bӋnh trên thӵc vұt WăQJOrQ

Sӵ phát triӇn hӋ sӧi nҩm có thӇ bӏ WiFÿiQJÿiQJNӇ bӣi tinh dҫu Theo Nikos và cӝng sӵ (2007), tinh dҫu Sҧ chanh ӣ nӗQJÿӝ 25 SSPÿã ӭc chӃ ÿӃn 70% nҩm sinh bào tӱNKLWăQJQӗQJÿӝ 500 ppm thì ӭc chӃ hoàn toàn Tinh dҫu Sҧ cho thҩ\WiFÿӝng làm giҧm nҧy mҫm bào tӱ và chiӅu dài ӕng mҫm vӟi Colletotrichum coccodes, Botrytis cinerea, Cladosporium herbarum, Rhizopus stolonifer và Aspergillus niger vӟi hiӋu quҧ phө thuӝc vào nӗQJÿӝ tinh dҫu [47] Nghiên cӭXÿiQKJLiKRҥt tính kháng nҩm

Colletotrichum sp gây bӋnh ӣ thӵc vұt cӫa tinh dҫu Tràm trà ӣ Long An cho thҩy tinh dҫu Tràm trà có khҧ QăQJNKiQJFiFGzQJnҩm sӧi gây bӋnh ӣ thӵc vұWQKѭFiFQJKLrQFӭXWUѭӟFÿk\

Tӯ kӃt quҧ nghiên cӭu vӅ khҧ QăQJNKiQJnҩm gây bӋnh ӣ thӵc vұt cӫa tinh dҫu Tràm trà cho thҩy tinh dҫu Tràm trà rҩt tiӅPQăQJYӟi hoҥt tính kháng nҩm gây bӋnh ӣ thӵc vұt, khҧ QăQJҧQKKѭӣng rӝng trên nhiӅu tác nhân vi sinh gây bӋnh khác nhau ӣ thӵc vұt.

ĈiQKJLiKuQKWKiLW͇ bào ṋm sͫi

ĈӕLFKӭng Carbendazim 7LQKGҫX7UjPWUj

Hình 3.3 Hình dҥng cӫa sӧi nҩPÿѭӧFTXDQViWGѭӟi kính hiӇQYLÿLӋn tӱ quét SEM

6(0ÿѭӧc sӱ dөQJÿӇ kiӇPWUDFiFWKD\ÿәi hình thái cӫa hӋ sӧLQăP dòng nҩm gây bӋnh trên thӵc vұt: Aspergillus niger, Corynespora cassiicola, Colletotrichum sp.,

Fusarium oxysporum và Pyricularia oryzae (Hình 3.3) KӃt quҧ cho thҩy nhӳng thay ÿәLÿiQJFK~êYӅ hình thái cӫa sӧi nҩm Hình dҥng sӧi nҩm cӫa Aspergillus niger rҩt WKѭDWKӟt, sӧi nҩPNK{QJÿӅu và có nhӳQJQѫLVӧi nҩm lӟQKѫQPүXÿӕi chӭng HӋ sӧi nҩm Corynespora cassiicola mӑFWKѭDWKӟt, sӧi nҩm dài, phân nhánh và sӧi nҩm biӃn dҥng bҩWWKѭӡng Sӧi nҩm cӫa Colletotrichum sp phát triӇn kém, tҥo thành mӝt cөm các bào tӱ ÿƭDSKҷng, liӅm, cuӕng bào tӱ cong (vӟi sӵ khác biӋWÿiQJFK~êYjFiFEjR tӱ bӏ phá vӥ theo chiӅu ngang Sӕ Oѭӧng sӧi nҩm cӫa Fusarium oxysporum tWKѫQVӧi nҩP GjL WKѭD WKӟt và phân nhánh kém Sӕ Oѭӧng sӧi nҩm cӫa Pyricularia oryzae ít

KѫQQKҹn và phân nhánh kém Các bào tӱ cӫa Pyricularia oryzae mӑc thành cөm và có nhiӅu phân vùng tҥo thành nhiӅXQJăQ.Ӄt quҧ 6(0FǊQJFKRWKҩy tác dөQJÿӕi vӟi nҩPOjWѭѫQJWӵ giӳa tinh dҫu Tràm trà và carbendazim

Các nghiên cӭX WUѭӟF ÿk\ FKR WKҩy, thành phҫn chính trong tinh dҫu bao gӗm phenol, terpen, aldehyde và xeton [51] và nhìn chung tinh dҫu chӫ yӃXWiFÿӝng lên màng tӃ bào chҩt cӫa vi sinh vұt Do sӵ khác biӋt vӅ sӕ Oѭӧng và thành phҫn tinh dҫu nên ÿһc tính kháng nҩm cӫa tinh dҫu không phҧi do mӝWFѫFKӃ cө thӇ PjWiFÿӝng bӣi nhiӅXFѫFKӃ khác nhau ӣ mӭFÿӝ tӃ bào [52] &ѫFKӃ ÿѭӧc nghiên cӭu nhiӅu nhҩt vӅ hoҥt tính kháng khuҭn cӫa tinh dҫXÿѭӧc gӑLOjFѫFKӃ JLiQÿRҥn" [53] Do tính chҩt kӷ Qѭӟc cӫa tinh dҫu nên tinh dҫu có thӅ tҩn công và phá vӥ màng tӃ bào, tinh dҫu FǊQJFó thӅ ҧQKKѭӣQJÿӃn hӋ thӕng enzym dүQÿӃn ӭc chӃ hô hҩp và gây chӃt tӃ bào

KӃt quҧ SEM cho thҩy tinh dҫu Tràm trà ÿyQJYDLWUzTXDQWUӑng trong viӋc phá hӫy hình thái và cҩu trúc sӧi nҩm Sӵ ҧQKKѭӣng cӫa tinh dҫu Tràm trà ÿӕi vӟi sӵ phát triӇn cӫD QăP dòng nҩm gây bӋnh trên thӭc vұt: Aspergillus niger, Corynespora cassiicola, Colletotrichum sp., Fusarium oxysporum và Pyricularia oryzae là hoҥt chҩt sinh hӑc có khҧ QăQJNKiQJ nâm gây bӋnh trên thӵc vұWWURQJWѭѫQJODL

Kh̫o sát in vivo hi͏u qu̫ phòng/tr͓ cͯa tinh d̯u Tràm trà trên ṋm

Sau khi có kӃt quҧ tӯ thí nghiӋm khҧo sát in vitro hiӋu quҧ cӫa tinh dҫu Tràm trà trên nҩm gây bӋnh ӣ thӵc vұW ÿӅ tài lӵa chӑn dòng nҩm Colletotrichum sp ÿӇ tiӃn hành thí nghiӋm in vivo Xӱ lý vӟi tinh dҫu Tràm trà ӣ các nӗQJÿӝ 2%; 4%; 6%; 8% và 10% rӗi sau 24 giӡ phun lây bӋnh và QJѭӧc lҥi, tӭc phun lây bӋnh rӗi sau 24 giӡ xӱ lý vӟi tinh dҫu Tràm trà KӃt quҧ ÿiQKJLiKLӋu quҧ phòng trӏ cӫa tinh dҫu Tràm trà ӣ hai biӋn pháp xӱ Oê NKiF QKDX Oj WUѭӟc sau khi lây bӋnh ÿӕi vӟi dòng nҩm

Colletotrichum sp trên trái ӟWÿѭӧc tách khӓLFk\ÿѭӧc ghi nhұn ӣ Bҧng 3.12

Bҧng 3.12 HiӋu quҧ tinh dҫu Tràm trà qua hai biӋn pháp xӱ lý WUѭӟc và sau khi lây bӋnh qua các thӡLÿLӇm khҧo sát

Ghi chú: các mүu tӵ theo sau các giá trӏ trong cùng mӝt hàng khác nhau thì khác biӋWFyêQJKƭD thӕng kê vӟLÿӝ tin cұy > 95%

ChiӅu dài vӃt bӋnh (mm) Ĉӕi chӭng âm

TUѭӟc khi lây bӋnh

Toàn trái Ӣ thӡL ÿLӇm 4 ngày sau khi lây bӋnh: ӣ biӋn pháp xӱ lý WUѭӟc khi lây bӋnh, nghiӋm thӭc nӗQJ ÿӝ tinh dҫu Tràm trà là 2% (3,7 mm) thӇ hiӋn hiӋu quҧ cao vӟi chiӅu dài vӃt bӋnh nhӓ KѫQYjNKiFELӋWêQJKƭDVRYӟi các nghiӋm thӭc còn lҥi, kӃ ÿӃn là nghiӋm thӭc thӭc nӗQJÿӝ tinh dҫu Tràm trà là 8% và 10% (5 mm và 5,1 mm), sau cùng là nghiӋm thӭc nӗQJÿӝ tinh dҫu Tràm trà là 4% (6,8 mm) và nӗQJÿӝ tinh dҫu Tràm trà là 6% (6,5 PPWURQJNKLÿӕi chӭng âm (9,5 mm) Yjÿӕi chӭQJGѭѫQJ mm) Ӣ cách xӱ lý sau khi lây bӋnh, nghiӋm thӭc nӗQJÿӝ tinh dҫu Tràm trà là 6% (3,6 mm) cho hiӋu quҧ cao nhҩt và có khác biӋWêQJKƭDVRYӟi các nghiӋm thӭc còn lҥi.Nhìn chung, biӋn pháp xӱ lý lý sau khi lây bӋnh cho hiӋu quҧ FDRKѫQVRYӟi biӋn pháp xӱ lý WUѭӟc khi lây bӋnh Ӣ thӡL ÿLӇm 5 ngày sau khi lây bӋnh: ӣ biӋn pháp xӱ lý WUѭӟc khi lây bӋnh, nghiӋm thӭc nӗQJÿӝ tinh dҫu Tràm trà 10% thӇ hiӋn hiӋu quҧ cao nhҩt vӟi chiӅu dài vӃt bӋnh là 5,8 mm, thҩS KѫQ Yj NKiF ELӋW ê QJKƭD VR Yӟi các nghiӋm thӭc còn lҥi, WURQJNKLÿyÿӕi chӭng âm (9,8 mm) Yjÿӕi chӭQJGѭѫQJPP Ӣ biӋn pháp xӱ lý sau khi lây bӋnh, nghiӋm thӭc nӗQJÿӝ tinh dҫu Tràm trà là 2% cho hiӋu quҧ cao nhҩt và khác biӋWêQJKƭDVRYӟi các nghiӋm thӭc còn lҥi (Hình 3.4) Trong hai biӋn pháp xӱ lý, biӋn pháp xӱ lý sau khi lây bӋnh vүn cho hiӋu quҧ FDRKѫQ so vӟi biӋn pháp WUѭӟc khi lây bӋnh (Bҧng 3.12) Ӣ thӡLÿLӇm 6 ngày sau khi lây bӋnh: trong hai biӋn pháp xӱ lý thì biӋn pháp xӱ lý WUѭӟc khi lây bӋnh có hiӋu quҧ FDRKѫQ so vӟi biӋn pháp xӱ lý sau khi lây bӋnh Qua kӃt quҧ hai biӋn pháp xӱ lý, các nghiӋm thӭc xӱ OêÿӅu thӇ hiӋn hiӋu quҧ giҧm bӋnh, nghiӋm thӭc nӗQJÿӝ tinh dҫu Tràm trà là 10% (7,7 mm) tiӃp tөc cho hiӋu quҧ cao nhҩt và khác biӋt so vӟi các nghiӋm thӭc còn lҥi KӃ ÿӃn là nghiӋm thӭc nӗQJÿӝ tinh dҫu Tràm trà 2% (8,1 mm) hiӋu quҧ KѫQYjNKiFELӋt so nӗQJÿӝ tinh dҫu Tràm trà 6% (toàn trái) và nӗQJÿӝ tinh dҫu Tràm trà 8% (14,8 mm) Trong hai biӋn pháp xӱ lý, biӋn pháp xӱ lý sau khi lây bӋnh vүn cho hiӋu quҧ FDRKѫQYjFyNKiFELӋWêQJKƭDVR vӟi biӋn pháp xӱ lý WUѭӟc khi lây bӋnh (Bҧng 3.12) Ӣ thӡLÿLӇm 7 ngày sau khi lây bӋnh: hҫXQKѭWUiLӟt ӣ các nghiӋm thӭc ÿӅu bӏ nhiӉm bӋnh toàn trái

Tóm lҥi, qua 4 thӡLÿLӇm khҧo sát, nhұn thҩy tinh dҫu Tràm trà ӣ nӗQJÿӝ 10% có hiӋu quҧ tӕt, kӃ ÿӃn là nӗQJÿӝ 8% FǊQJFyKLӋu quҧ khá tӕt và nӗQJÿӝ 2% và 6% có hiӋu quҧ trung bình trong viӋc phòng trӏ bӋQKWKiQWKѭWUrQӟt chӍ thiên ӣ cҧ hai biӋn pháp xӱ lý Trong hai biӋn pháp xӱ lý thì biӋn pháp xӱ lý sau khi lây bӋnh có hiӋu quҧ

KѫQVRYӟi biӋn pháp xӱ lý WUѭӟc khi lây bӋnh Trong phòng trӯ sinh hӑc bӋnh cây, các tác nhân phòng trӯ WKѭӡng sӱ dөng mӝt sӕ FѫFKӃ ÿӇ chӕng lҥi mҫm bӋQKQKѭFѫFKӃ cҥnh tranh, kháng sinh hoһc kí sinh [48], [49], [50] KӃt quҧ WUrQÿmJySSKҫn khҷng ÿӏnh tiӅPQăQJVӱ dөng tinh dҫu QKѭPӝt tác nhân sinh hӑc phòng trӏ bӋQKWKiQWKѭGR nҩm Colletotrichum sp gây ra ӣ JLDLÿRҥn sau thu hoҥch

Xӱ lý vӟi tinh dҫu WUѭӟc khi lây bӋnh Xӱ lý vӟi tinh dҫu sau khi lây bӋnh

Hình 3.4 HiӋu quҧ phòng trӯ cӫa tinh dҫu Tràm WUjÿӕi vӟi bӋQKWKiQWKѭWUrQӟt chӍ thiên ӣ thӡLÿLӇm 5 ngày sau khi lây bӋnh

10 % Ĉӕi chӭQJGѭѫQJ Ĉӕi chӭng âm

Khҧo sát in vitro và in vivo hiӋu quҧ phòng/trӏ cӫa tinh dҫX7UjPWUjÿѭӧc phӕi hӧp vӟi thuӕc diӋt nҩm nguӗn gӕc tәng hӧp trên nҩm gây bӋnh ӣ thӵc vұt

Kh̫o sát in vitro hi͏u qu̫ ͱc ch͇ cͯa tinh d̯X 7UjP WUj ÿ˱ͫc ph͙i hͫp vͣi thu͙c di͏t ṋm ngu͛n g͙c t͝ng hͫp trên ṋm gây b͏nh ͧ th͹c v̵t

KӃt quҧ ÿiQKJLiKRҥt tính kháng nҩm gây bӋnh trên thӵc vұt cӫa tinh dҫu Tràm trà YjFDUEHQGD]LPÿѭӧc ghi trong Bҧng 3.13

Bҧng 3.13 HiӋu suҩt kháng nҩm gây bӋnh trên thӵc vұt cӫa tinh dҫu Tràm trà kӃt hӧp vӟi carbendazim

Ghi chú: các mүu tӵ theo sau các giá trӏ trong cùng mӝt cӝt khác nhau thì khác biӋWFyêQJKƭD thӕng kê vӟLÿӝ tin cұy > 95%

Hình 3.5 Ĉѭӡng kính tҧn nҩm ӣ các tӹOӋQӗQJÿӝWLQKGҫX7UjPWUjFDUEHQGD]LP khác nhau

Bҧng 3.13 và Hình 3.5, cho thҩy hiӋu quҧ cӫa viӋc kӃt hӧp tinh dҫu Tràm trà vӟi thuӕc diӋt nҩPFDUEHQGD]LPWUrQQăP dòng nҩm gây bӋnh trên thӵc vұt: Aspergillus niger, Corynespora cassiicola, Colletotrichum sp., Fusarium oxysum và Pyricularia oryzae Có mӝt mӕi liên hӋ ÿӕLNKiQJÿiQJNӇ giӳa tinh dҫu Tràm trà và carbendazim so vӟLFDUEHQGD]LPÿѫQWKXҫn (Bҧng 3.11, Bҧng 3.13, Hình 3.2 và Hình 3.5) ĈLӅu này ÿѭӧc chӭng minh bҵng sӵ ӭc chӃ WăQJ WUѭӣng ӣ nӗQJ ÿӝ tinh dҫu thҩS KѫQ VR Yӟi thuӕc chӕng nҩm carbendazim Bҧng 3.11 và Bҧng 3.13 ÿmFKӭng minh rҵng tinh dҫu Tràm trà nguyên chҩt kӃt hӧp vӟi carbendazim ӣ tӹ lӋ là 3:2 kháng 100% vӟi 4 dòng nҩPÿѭӧc thӱ nghiӋm (Aspergillus niger, Corynespora cassiicola, Colletotrichum sp và Fusarium oxysporum) và tӹ lӋ là 4:1 vӟi Pyricularia oryzae Tinh dҫu Tràm trà chiӃt xuҩt tinh khiӃt ghi nhұn các chӍ sӕ kháng nҩm cao kháng lҥi tҩt cҧ các dòng nҩm ÿѭӧc khҧo sát Tuy nhiên, các chӍ sӕ kháng nҩP WѭѫQJ ÿѭѫQJ ӣ nӗQJ ÿӝ 2

10 mm 10 mm 10 mm 10 mm 10 mm

10 mm 10 mm 10 mm 10 mm 10 mm ȝ/P/ tinh dҫu Tràm trà nguyên chҩt và tinh dҫu Tràm trà kӃt hӧp vӟi carbendazim FDRKѫQWLQKGҫu Tràm trà chiӃt xuҩt nguyên chҩt Thông qua 4 mӭc tӹ lӋ giӳa tinh dҫu Tràm trà và carbendazim có nguӗn gӕc tәng hӧp, tác dөng kháng nҩm gây bӋnh trên thӵc vұt có tӹ lӋ tinh dҫu Tràm trà:carbendazim có nguӗn gӕc tәng hӧp là 4:ÿӕi vӟi

Pyricularia oryzae, 3:ÿӕi vӟi Corynespora cassiicola, Colletotrichum sp., Fusarium oxysum Mһc dù vӟi tӹ lӋ tinh dҫu Tràm trà:carbendazim có nguӗn gӕc tәng hӧp là 4: 1 cho hiӋu suҩt kháng nҩP ÿӕi vӟi Aspergillus niger QKѭQJ YӅ mһt thӕng kê, không có sӵ khác biӋWÿiQJNӇ vӟi tӹ lӋ tinh dҫu Tràm trà: thuӕc diӋt nҩm có nguӗn gӕc tәng hӧp là 3: 2

Trong nghiên cӭu hiӋn tҥi, tinh dҫu Tràm trà ÿmÿѭӧc thӱ nghiӋPÿӝc lұp và kӃt hӧp vӟi thuӕc kháng nҩm tiêu chuҭn kháng lҥi các dòng nҩm khác nhau KӃt quҧ cho thҩy tinh dҫu Tràm trà có khҧ QăQJkháng lҥi các dòng nҩm Vӟi tӹ lӋ các dòng nҩm kháng thuӕFQJj\FjQJWăQJYLӋFWKăPGzFiFVҧn phҭm tӵ nhiên tӯ thӵc vұt là mӝt liӋu pháp thay thӃ, vì chúng có thӇ ÿLӅu chӍnh hoҥWÿӝng cӫa kháng thuӕc, bҵng cách WăQJKRһc giҧm hoҥWÿӝng cӫDFK~QJ+ѫQQӳa, hoҥWÿӝng cӫa mӝt sӕ chҩt kháng nҩm ÿmÿѭӧFWăQJFѭӡng khi bә sung các loҥi tinh dҫXYjRP{LWUѭӡQJWăQJWUѭӣng ӣ nӗng ÿӝ ӭc chӃ.

Mӝt sӕ thành phҫn chính cӫa tinh dҫu Tràm trà

7rQKӧSFKҩW /RҥLFӫDKӧSFKҩW &{QJWKӭF ĈӝKza tan (ppm) Log K OW

Terpinen-4-ol Monocyclic terpene alcohol C 10 H 18 O 1491 3,26 ஔ- terpinene Monocyclic terpene C10H16 1 4,36 Į- terpinene Monocyclic terpene C 10 H 16 8,2 4,25

1,8 - cineole Monocyclic terpene alcohol C 10 H 18 O 907 2,84 Į- terpinolene Monocyclic terpene C 10 H 16 4,3 4,24 ȡ- cymene Monocyclic terpene C10H14 6,2 -

(+) ± Į- pinene Dicyclic terpene C10H16 0,57 4,44 Į- terpineneol Monocyclic terpene alcohol C10H18O 1,827 3,28

.ӃWTXҧFӫDQKLӅXNKҧRViWFKRWKҩ\ FiFWKjQKSKҫQWURQJWLQKGҫX7UjPWUjFyVӵ NKiFELӋWNKiOӟQYӅKjPOѭӧQJW\YjRÿһFÿLӇPFӫDQJX\rQOLӋX[4] ĈLӅu này có thӇ do sӵ ҧQKKѭӣng cӫDÿҩt trӗng, tuәi cӫa nguyên liӋXFǊQJQKѭÿLӅu kiӋn thӡi tiӃt và khí hұu cӫa các vùng Các chӍ sӕ hóa lý cӫa tinh dҫXWKѭӡQJÿѭӧc quan tâm là các chӍ tiêu cҧm quan (màu sҳF PL ÿӝ trong), tӹ trӑQJ WѭѫQJ ÿӕi vӟL QѭӟF ÿӝ quay cӵc, khҧ QăQJ KzD WDQ WURQJ HWKDQRO &iF FKӍ sӕ hóa lý cӫa tinh dҫX 7UjP WUj ÿѭӧc thӇ hiӋn trong Bҧng 1.2

Bҧng 1.2 Mӝt sӕ thông sӕ vұWOêÿһFWUѭQJFӫa tinh dҫu Tràm trà

7tQKFKҩWYұWOê *LiWUӏQKӓQKҩW *LiWUӏOӟQQKҩW

&ҧPTXDQ 6ҥFKGҥQJOӓQJYjNK{QJOүQQѭӟF

.KҧQăQJKzDWDQWURQJ ethanol 85% (v/v) (20 o C) ËWKѫQOҫQWKӇWtFK

.KҧQăQJNKiQJQҩPciFF{QJEӕNKRDKӑFYӅNKҧQăQJNKiQJQҩPFӫDWLQKGҫX 7UjPWUj ÿm FKӭQJPLQKORҥLWiQKGҫX Qj\Fy NKҧ QăQJӭF FKӃ PӝWVӕ ORҥLQҩP men, QҩPVӧLQҩPGD7LQKGҫX7UjPWUjӣGҥQJbay KѫLFǊQJFKRWKҩ\NKҧQăQJӭFFKӃ VӵSKiWWULӇQFӫD QҩP>@, [27] FǊQJQKѭVӵ hình thành bào tӱ [27] Dӳ liӋu vӅ khҧ QăQJNKiQJQҩm cӫa tinh dҫX7UjPWUjÿѭӧc thӇ hiӋn cө thӇ qua Bҧng 1.3 [25]

%ҧQJ1.3 'ӳOLӋXYӅNKҧQăQJNKiQJQҩPFӫDWLQKGҫX7UjPWUj [25]

Khҧ QăQJNKiQJYLUXVKoҥt tính kháng virus cӫa tinh dҫu Tràm trà lҫQÿҫu tiên ÿѭӧc ghi nhұn trên virus gây bӋnh khҧm trên cây thuӕc lá (Nicotiana glutinosa) Trong các thӱ nghiӋm vӟi Nicotiana glutinosa, cây bӏ bӋQKÿmÿѭӧc phun dӏch chӭa tinh dҫu Tràm trà vӟi nӗQJÿӝ YjSSPYjÿLӅu trӏ bҵQJSKѭѫQJSKiSWK{QJWKѭӡng ÿӕi chӭng) Sau 10 ngày, các tәQWKѭѫQJWUrQOiFӫDFk\ÿmJLҧPÿLÿiQJNӇ NKLÿѭӧc ÿLӅu trӏ bҵng tinh dҫu Tràm trà so vӟLQKyPÿӕi chӭng [28]

1.*LӟLWKLӋXYӅPӝWVӕQҩPVӧLgk\EӋQKWUrQWKӵFYұW

Nҩm sӧi Aspergillus niger: là mӝt loҥi nҩm sӧi hiӃXNKtVLQKWUѭӣng trên các vұt chҩt hӳXFѫFyPjXÿHQNKLTXDQViWEҵng mҳWWKѭӡng do chúng tҥo bào tӱ ÿtQKPjX ÿHQQKѭng lҥi có màu nâu khi quan sát Gѭӟi kính hiӇQYLFyÿӝ phóng ÿҥi thҩp Chúng có hai bӝ cuӕQJÿtQKEjRWӱ và tҥo bào tӱ ÿtQKPjXQkXKѫLÿHQYjFyJDL%ӑng và sӧi cuӕQWKѭӡng có màu nâu bóng Nҩm sӧi Aspergillus niger WKѭӡng phát triӇn mҥnh ӣ khu vӵc nhiӋWÿӟi và cұn nhiӋWÿӟLGRFyFiFÿLӅu kiӋn phù hӧp vӅ nhiӋWÿӝ Yjÿӝ ҭm 7URQJTXiWUuQKVLQKWUѭӣng nҩm sӧi Aspergillus niger có khҧ QăQJVLQKUDÿӝc tӕ Cho ÿӃQQD\ÿmELӃWFyKѫQORҥLÿӝc tӕ nҩPÿѭӧc sinh ra chӫ yӃu bӣi Aspergillus niger [29] Aspergillus niger gây hiӋQWѭӧng mӕFÿHQWUrQPӝt sӕ loҥLQJǊFӕc, gia vӏ QKѭ hành tӓi Theo tә chӭF1{QJOѭѫQJ7KӃ giӟL)$2ѭӟc tính mӛLQăPFyNKRҧng 1 tӍ tҩn thӵc phҭm trên toàn cҫu bӏ hӓQJGRÿӝc tӕ nҩm Aspergillus niger sinh ra trong quá trình bҧo quҧn [30]

Hình 1.2 VӃt bӋnh trên lá mҫm lҥc vӟi rҩt nhiӅu bào tӱ cӫa nҩm Aspergillus niger

1ҩP VӧLCorynespora cassiicola: nҩPCorynespora cassiicola Ok\ QKLӉP WUrQORjLWKӵFYұW [31] WURQJKӑ 1ҩPCorynespora cassiicola SKәELӃQQKҩWӣYQJQKLӋWÿӟLYjFұQQKLӋWÿӟL [31] 1ҩPCorynespora cassiicola ÿѭӧF ELӃWÿӃQQKѭPӝW

WiF QKkQ Jk\ EӋQK FӫD QKLӅX ORҥL Fk\ WUӗQJ Q{QJ QJKLӋS ÿһF ELӋW Oj ÿұX ÿǊD, GѭD FKXӝW, ÿXÿӫ, cao su, ÿұXWѭѫQJ và cà chua 1ҩPCorynespora cassiicola ÿmJk\UDWKҩW mùa GүQÿӃQWKLӋWKҥLNLQKWӃFDRӣKѫQTXӕFJLD [31] 7UrQPӝWVӕORjLWKӵFYұW FKҷQJKҥQQKѭFjFKXDQҩPCorynespora cassiicola gây ra mӝWFăQEӋQKJӑLOjÿӕP lá

Hình 1.3 TriӋu chӭQJÿLӇn hình cӫa bӋnh rөng lá Corynespora [31]

1ҩP VӧLColletotrichum sp.: nҩP Colletotrichum sp Jk\ KҥL UҩW SKә ELӃQ Yj QJKLrPWUӑQJWUrQQKLӅXORҥLFk\WUӗQJWӯFky rau màXQKѭӟWFjFKXDEҫXEtGѭDô ÿӃQFiFORҥLFk\ăQWUiLQKѭ[RjLVҫXULrQJ ÿXÿӫFKXӕLWKDQKORQJ 0ӝWORjLQҩP

Colletotrichum Fy WKӇ Jk\ KҥL WUrQ QKLӅX ORҥL Fk\ WUӗQJ Yj QJѭӧF OҥL PӝW ORҥL Fk\ WUӗQJFyWKӇEӏWҩQF{QJEӣLQKLӅXORjLQҩPColletotrichum

Hình 1.4 Quҧ ӟt bӏ bӋQKWKiQWKѭGRQҩm Colletotrichum sp gây ra [51]

Nҩm sӧi Fusarium oxysporumÿây là loҥi nҩm có thành phҫn rҩt phong phú và ÿDGҥQJWURQJÿyVӵ biӃQÿӝng cӫa mӝt sӕ loài phө thuӝFFѫEҧQYjRÿһFÿLӇm khí hұu ӣ các vùng khác nhau trên thӃ giӟi Loài nҩm này gây hҥi nhiӅu loҥi cây trӗng trên tҩt cҧ các bӝ phұQÿһc biӋt bӝ phұn gӕc, rӉ cӫa cây: bӋnh nghӁn mҥch (héo), thӕi rӉ, thӕi thân, thӕi trái và hҥt Nҩm F oxysporum sӕng phә biӃQWURQJÿҩWOѭu tӗQGѭӟi dҥng bào tӱ áo hoһc khuҭn ty sӕng trên xác bã thӵc vұWGѭ thӯa hay nhӳng chҩt hӳXFѫ0ӝt sӕ loài tҥo bào tӱ ÿtQKED\WURQJNK{QJNKtÿk\OjQJX\rQQKkQJk\UDQKӳng bӋnh trên thân, lá và bông Nҩm F oxysporum là tác nhân gây bӋnh thӕi rӉ nguy hiӇm nhҩt trên diӋn rӝng ӣ ÿұu và cà chua [32]

Hình 1.5 Thӕi rӉ Fusarium oxysporum ӣ cây lҥc [51]

1ҩPVӧLPyricularia oryzae: nҩPPyricularia oryzae Jk\EӋQKÿҥR{QO~DOjWiFQKkQQJX\KLӇPQKҩWÿӕLYӟLO~DWUrQWKӃJLӟLFǊQJQKѭӣ9LӋW1DP1ҩPP oryzae là PӝWTXҫQWKӇNK{QJÿӗQJQKҩW'ӵDWUrQFiFSKkQWtFKSKkQWӱQKuQFKXQJQҩPÿѭӧF phân nhóm WUrQFӣVӣSKkQEӕÿӏDOê>@&iFTXҫQWKӇQҩPWKXӝFFiFNKXYӵFNKӣLQJX\rQ Fk\ O~D FKҷQJ KҥQ ӣ NKX YӵF Gm\ +\PDOD\D KRһF Ĉ{QJ 1DP È ÿm ÿѭӧFNKҷQJÿӏQKFyPӭFÿӝÿDGҥQJFDR KѫQFiFNKX YӵFNKiF>@>@>@

Hình 1.6 VӃt bӋnh trên lúa do nҩm Pyricularia oryzae gây ra

&ѫFKӃ kháng vi sinh vұt cӫa tinh dҫu

&ѫFKӃ kháng khuҭn cӫa tinh dҫXÿmÿѭӧc mӝt sӕ nhà khoa hӑc trên thӃ giӟLÿӅ xuҩt [37] Màng bao vi khuҭn Gram (+) không có các phân tӱ OLSRSRO\VDFFKDULGHÿӇ QJăQFҧn sӵ xâm nhұp cӫa các thành phҫQѭDEpRQKѭWLQKGҫu Chính vì thӃ, các thành phҫn kӏ Qѭӟc cӫa tinh dҫu có khҧ QăQJNӃp hӧp trӵc tiӃp vӟi lӟp phospholipid kép cӫa màng tӃ EjRWăQJWtQKWKҩm ion gây rӕi loҥQWUDRÿәi chҩt hai bên màng tӃ bào và rò rӍ cӫa các thành phҫn trong tӃ bào vi khuҭn, hoһc làm suy giҧm hӋ thӕng enzyme cӫa vi khuҭn [38] Hӧp chҩt cinnamaldehyde có hoҥt tính kháng khuҭQ FDR ÿӕi vӟi cҧ vi khuҭn Gram (+) và vi khuҭn Gram (-) nhӡ ӭc chӃ quá trình tәng hӧp ATP và gây ra sӵ giҧm viӋc sҧn xuҩt ATP nӝi bào Các thành phҫn vӟLKjPOѭӧng thҩp trong tinh dҫu BҥF Kj +ѭѫQJ QKX QKѭ Oj Į - SLQHQH ȕ - SLQHQH WK\PRO Ȗ -terpinen, terpinolene, SHULOOHQFHFǊQJOjWiFQKkQNKiQJNKXҭn chӫ yӃu cӫa tinh dҫXÿy

&ѫFKӃNKiQJQҩPFӫD WLQKGҫX 7UjPWUjFǊQJÿm ÿѭӧF NKҧRViW ĈD SKҫQFiF QJKLrQ FӭX ÿѭӧF WLӃQ KjQK WUrQ FKӫQJ QҩPCandida albicans &ѫ FKӃ FӫD WLQK GҫX

7UjPWUjOrQFKӫQJQҩPQj\FKӫ\ӃXGROjPWKD\ÿәLWtQKWKҩPGүQÿӃQOjP WăQJOѭXÿӝQJTXDPjQJWӃEjRFӫDQҩP&ѫFKӃӭFFKӃK{KҩSWӃEjRFǊQJÿmÿѭӧF FKӭQJPLQKNKLVӱGөQJWLQKGҫX7UjPWUjWUrQFiFFKӫQJQҩPCandida albicans và

Fusarium solaniӢQӗQJÿӝWLQKGҫX7UjPWUjӭFFKӃK{KҩSWUrQFKӫQJ Candida albicansWӹOӋQj\OjNKLQӗQJÿӝWLQKGҫX7UjPWUjVӱGөQJOj>@ Ĉӕi vӟi Fusarium solani WӹOӋEӏӭFFKӃK{KҩSOjNKLVӱGөQJWLQKGҫX7UjPWUjӣQӗQJÿӝ>@

2.1 Nguyên liӋu, hóa chҩt và thiӃt bӏ