khóa luận nghiên cứu đặc điểm mô bệnh học và miễn dịch huỳnh quang trực tiếp trong bệnh da bọng nước tự miễn tại bệnh viện bạch mai

Lßch sử nghiên cứu và ứng dÿng cāa miễn dßch huỳnh quang trực tiếp trong bệnh da báng n°ớc tự miễn .... Mát sá đặc điểm lâm sàng cāa mát sá bệnh da báng n°ớc tự miễn t¿i Trung tâm Giải p

Đ¾I HàC QUàC GIA HÀ NàI

TR¯äNG Đ¾I HàC Y D¯þC - �㵦 �㵮 �㵤 -

HOÀNG NG àC DIÆP

NGHIÊN C ĀU Đ¾C ĐIÂM MÔ BÆNH HàC VÀ

MI ÄN DÞCH HUþNH QUANG TRþC TI¾P TRONG B ÆNH DA BàNG N¯âC Tþ MIÄN

T ¾I BÆNH VIÆN B¾CH MAI

KHOÁ LU ÀN TÞT NGHIÆP Đ¾I HàC

HÀ N àI – 2023

Đ¾I HàC QUàC GIA HÀ NàI

TR¯äNG Đ¾I HàC Y D¯þC - �㵦 �㵮 �㵤 -

HOÀNG NG àC DIÆP

NGHIÊN C ĀU Đ¾C ĐIÂM MÔ BÆNH HàC VÀ

MI ÄN DÞCH HUþNH QUANG TRþC TI¾P

TRONG B ÆNH DA BàNG N¯âC Tþ MIÄN

T ¾I BÆNH VIÆN B¾CH MAI

KHOÁ LU ÀN TÞT NGHIÆP Đ¾I HàC

Ng°ßi h°ớng dẫn: 1 BSCKII TRÄN VĂN CH¯¡NG ………

2 Th S NINH VĂN QUY¾T ………

HÀ N àI – 2023

L äI CÀM ¡N

Em xin bày t ỏ lòng kính trọng và cảm ơn tới:

tr ực tiếp dìu dắt, tận tình hướng dẫn và truyền đạt cho em những kinh nghiệm quý báu, giúp đỡ em vượt qua những khó khăn trong quá trình thực hiện nghiên

c āu để em hoàn thành tốt khoá luận này

Cùng v ới đó, em trân trọng cảm ơn Ban giám hiệu, phòng đào tạo trường Đại học Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội, bộ môn Bệnh học trường Đại học

Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội, các thầy cô, anh chị tại Trung tâm Giải phẫu bệnh - Tế bào học, bệnh viện Bạch Mai đã tạo mọi điều kiện và giúp đỡ

em trong quá trình thu th ập số liệu cho nghiên cāu

Cu ối cùng, con xin cảm ơn gia đình và bạn bè đã động viên, giúp đỡ, ÿng hộ, tiếp sāc mạnh giúp con vững bước và tạo mọi điều kiện cho con trên con đường học tập cũng như quá trình thực hiện khoá luận này!

Hà N ội, ngày 22 tháng 05 năm 2023

Sinh viên

L äI CAM ĐOAN

Tôi là Hoàng Ngác Diệp, sinh viên chuyên ngành Kỹ thuật xét nghiệm y hác, khoá QH.2019.Y, tr°ßng Đ¿i hác Y D°ợc – Đ¿i hác Quác gia Hà Nái, tôi xin cam đoan:

1 Đây là kết quả làm việc trực tiếp cāa tôi, thực hiện d°ới sự h°ớng dẫn

cāa BSCKII Trần Văn Ch°¡ng và ThS Ninh Văn Quyết

2 Công trình nghiên cứu này đ°ợc tôi thực hiện đác lập, đảm bảo không

vi ph¿m yêu cầu về tính trung thực trong hác thuật

3 Các sá liệu và thông tin trong nghiên cứu là trung thực, chính xác và khách quan, đã đ°ợc xác nhận t¿i c¡ sá nghiên cứu

Hà N ội, ngày 22 tháng 05 năm 2023

Người viết cam đoan

DANH M ĀC CHĀ VI¾T TÂT

BCĐNAT B¿ch cầu đa nhân ái toan

BCĐNTT B¿ch cầu đa nhân trung tính

DANH M ĀC BÀNG

Bảng 1 Phân lo¿i các bệnh da báng n°ớc tự miễn 5

Bảng 2 Chẩn đoán từ các nhà lâm sàng (n=42) 28

Bảng 3 Phân bá bệnh da báng n°ớc tự miễn theo giới 30

Bảng 4 Phân bá vùng da tổn th°¡ng theo từng bệnh 31

Bảng 5 Tỷ lệ tế bào ly gai theo kết quả mô bệnh hác 32

Bảng 6 Tỷ lệ tế bào viêm trên tiêu bản mô bệnh hác 33

Bảng 7 Kết quả phát hiện kháng thể lắng đáng theo từng bệnh da báng n°ớc tự miễn (n=23) 34

Bảng 8 Hình thái lắng đáng trong bệnh da báng n°ớc t° miễn 35

Bảng 9 Các yếu tá lßi á các mức đá trong kỹ thuật cắt (n=92) 35

Bảng 10 Tín hiệu phát quang trên tiêu bản nhuám miễn dßch huỳnh quang trực tiếp 36

DANH M ĀC HÌNH ÀNH

Hình 1 Tổn th°¡ng cāa bệnh nhân pemphigus thông th°ßng 7

Hình 2 Tổn th°¡ng cāa bệnh nhân pemphigus sùi 8

Hình 3 Tổn th°¡ng da cāa bệnh nhân pemphigus vảy lá 9

Hình 4 Tổn th°¡ng da cāa bệnh nhân pemphigoid báng n°ớc 10

Hình 5 Tổn th°¡ng da cāa bệnh nhân pemphigoid báng n°ớc 11

Hình 6 Tổn th°¡ng cāa bệnh nhân Lupus Ban đß hệ tháng thể báng n°ớc 11

Hình 7 Các lo¿i marker nhuám miễn dßch huỳnh quang trực tiếp trong bệnh da báng n°ớc tự miễn 25

Hình 8 Nhß kháng thể lên lam kính đã đ°ợc đánh dấu 25

M ĀC LĀC

M æ ĐÄU 1

Ch°¢ng 1: T ÞNG QUAN 3

1.1 Các bệnh da báng n°ớc tự miễn 3

1.1.1 Khái ni ệm về bệnh da bọng nước tự miễn 3

1.1.2 Phân lo ại các bệnh da bọng nước tự miễn 3

1.1.3 Đặc điểm lâm sàng một số bệnh da bọng nước tự miễn 6

1.1.4 Đặc điểm mô bệnh học các bệnh da bọng nước tự miễn 11

1.1.5 Đặc điểm xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang trực tiếp các bệnh da b ọng nước tự miễn 13

1.2 Lßch sử nghiên cứu và ứng dÿng cāa miễn dßch huỳnh quang trực tiếp trong bệnh da báng n°ớc tự miễn 14

1.2.1 L ịch sử nghiên cāu, nguyên tắc và āng dụng cÿa miễn dịch huỳnh quang tr ực tiếp trong bệnh da bọng nước tự miễn 14

1.2.2 Āng dụng miễn dịch huỳnh quang trực tiếp trong bệnh da bọng nước tự miễn 16

1.3 Tình hình nghiên cứu trong bệnh da báng n°ớc tự miễn t¿i Việt Nam và n°ớc ngoài 18

1.3.1 Tình hình nghiên c āu tại Việt Nam 18

1.3.2 Tình hình nghiên c āu tại nước ngoài 19

Ch°¢ng 2: ĐÞI T¯þNG VÀ PH¯¡NG PHÁP NGHIÊN CĀU 21

2.1 Đái t°ợng nghiên cứu 21

2.1.1 Tiêu chu ẩn lựa chọn 21

2.1.2 Tiêu chu ẩn loại trừ 21

2.2 Thßi gian và đßa điểm nghiên cứu 21

2.1.2 Th ời gian nghiên cāu 21

2.1.2 Địa điểm nghiên cāu 21

2.3 Ph°¡ng pháp nghiên cứu 21

2.3.1 Thi ết kế nghiên cāu 21

2.3.2 Cỡ mẫu nghiên cāu 22

2.3.3 Nghiên c āu một số đặc điểm lâm sàng 22

2.3.4 Nghiên c āu đặc điểm mô bệnh học 22

2.3.6 Nghiên c āu đặc điểm miễn dịch huỳnh quang trực tiếp 24

2.4 Ph°¡ng pháp xử lý sá liệu 26

2.5 H¿n chế cāa đề tài 26

2.6 Khía c¿nh đ¿o đức cāa đề tài 26

Ch°¢ng 3: K¾T QUÀ NGHIÊN CĀU 28

3.1 Mát sá đặc điểm lâm sàng cāa mát sá bệnh da báng n°ớc tự miễn t¿i Trung tâm Giải phẫu bệnh – Tế bào hác, Bệnh viện B¿ch Mai 28

3.1.1 Ch ẩn đoán lâm sàng 28

3.1.2 Tu ổi 29

3.1.3 Gi ới 29

3.1.4 Vùng da t ổn thương 30

3.2 Đặc điểm mô bệnh hác cāa mát sá bệnh da báng n°ớc 31

3.2.1 Kết quả mô bệnh học cÿa một số bệnh da bọng nước tự miễn 31

3.2.2 T ế bào ly gai trên tiêu bản mô bệnh học 32

3.2.3 Các t ế bào viêm trên mô bệnh học 32

3.3 Đặc điểm miễn dßch huỳnh quang trực tiếp cāa mát sá bệnh da báng n°ớc 33

3.3.1 T ỷ lệ các tự kháng thể lắng đọng trong bệnh da bọng nước tự miễn 34

3.3.2 Hình thái l ắng đọng các kháng thể trong bệnh da bọng nước tự

tiếp với khoảng thßi gian ā kháng thể khác nhau 46

K ¾T LUÀN 48

ĐÀ XUÂT 50

PH Ā LĀC (ĐÍNH KÈM)

1

M æ ĐÄU

Bệnh da báng n°ớc tự miễn (BDBNTM) là mát nhóm bệnh gồm các rái

lo¿n có c¡ chế bệnh sinh liên quan đến quá trình tự miễn, có tổn th°¡ng c¡ bản

là báng n°ớc á da và/ hoặc niêm m¿c và có c¡ chế bệnh th°ợng bì Bệnh xảy

ra á khắp n¡i trên thế giới Tỷ lệ và tần suất bệnh thay đổi theo từng vùng, từng

quác gia, nh°ng hầu nh° không khác biệt nhiều giữa các n°ớc kinh tế phát triển

và các n°ớc đang phát triển1 Tỷ lệ này thay đổi từ 0,5 – 4/100.000 dân2

Theo sá liệu tháng kê cho thấy sá bệnh nhân (BN) đ°ợc chẩn đoán BDBNTM tiếp tÿc có xu h°ớng tăng lên trong những năm gần đây Từ ngày 01/09/2019 đến 31/06/2021 t¿i Bá môn Mô Phôi - Giải Phẫu Bệnh, Đ¿i hác Y D°ợc Thành phá Hồ Chí Minh có 92 tr°ßng hợp đ°ợc chẩn đoán xác đßnh BDBNTM Trong đó, 55 ca BDBNTM trong th°ợng bì gồm: pemphigus thông th°ßng, pemphigus lá, pemphgus IgA với tỷ lệ lần l°ợt là 74,6%, 23,6% và 1,8% 37 ca BDBNTM d°ới th°ợng bì gồm: pemphigoid báng n°ớc, bệnh IgA

d¿ng dải, lupus ban đß hệ tháng thể báng n°ớc và viêm da d¿ng herpes với tỷ

lệ lần l°ợt là 73%, 21,6%, 2,7% và 2,7%3

.

BDBNTM là nhóm bệnh da đa d¿ng với tiên l°ợng và điều trß khác biệt

Biểu hiện bệnh chā yếu trên lâm sàng là các báng n°ớc và vết trợt loét diễn

biến m¿n tính Không chỉ gây ảnh h°áng tới yếu tá thẩm mỹ, mát sá lo¿i bệnh nhóm này có nguy c¡ diễn biến nặng, gây biến chứng, thậm chí gây tử vong

nếu không đ°ợc điều trß kßp thßi Tuy tỉ lệ BDBNTM không cao trong các bệnh

da liễu, nh°ng để chẩn đoán chính xác và điều trß cũng nh° tiên l°ợng còn gặp nhiều khó khăn

Chẩn đoán bệnh da báng n°ớc tự miễn cần có sự phái hợp lâm sàng, mô

bệnh hoc và miễn dßch hác trong đó miễn dßch huỳnh quang trực tiếp (MDHQTT) đ°ợc xem là <tiêu chuẩn vàng= Tr°ớc đây, công tác chẩn đoán xác đßnh vß trí hình thành báng n°ớc và phân lo¿i bệnh chā yếu dựa trên đặc điểm lâm sàng cāa các hình thái và các xét nghiệm trên mô bệnh hác (MBH) Sau khi kỹ thuật MDHQTT phát triển trong BDBNTM thì ng°ßi ta đã phát hiện

ra sự thay đổi miễn dßch khác nhau, c¡ chế bệnh sinh trên từng lo¿i bệnh cÿ thể, đánh giá mức đá tiến triển cũng nh° hiệu quả điều trß lâm sàng

2

Do tính khoa hác và vai trò quan tráng trong chẩn đoán, á nhiều n°ớc trên thế giới đã kết hợp xét nghiệm mô bệnh hác th°ßng quy, miễn dßch huỳnh quang (MDHQ) giúp chẩn đoán chính xác từng thể bệnh, đánh giá mức đá tiến triển nhằm nâng cao chất l°ợng điều trß, cũng nh° giảm nguy c¡ tái phát bệnh

và tái °u hóa phát hiện sớm bệnh, đặc biệt á những bệnh nhân không có báng n°ớc

Tuy nhiên, á Việt Nam mới chỉ áp dÿng kỹ thuật MDHQ trong vài năm trá l¿i đây và chỉ có á mát sá bệnh viện lớn Mặc dù giá trß cāa kỹ thuật trên ngày càng đ°ợc khẳng đßnh nh°ng thực tế, các nghiên cứu về BDBNTM còn ít đ°ợc đề cập và ch°a phản ánh đẩy đā Vì thế, đề tài: “Nghiên cāu đ¿c điÃm

mô b Çnh hác và miÅn dßch huÿnh quang trÿc ti¿p trong bÇnh da báng n°ãc

t ÿ miÅn t¿i bÇnh viÇn B¿ch Mai= đ°ợc tiến hành nhằm mÿc tiêu sau:

kỷ XVI Nhóm bệnh này có thể nguyên phát do di truyền khiếm khuyết gen hoặc mắc phải do rái lo¿n quá trình tự miễn hoặc do nhiễm virus, vi khuẩn1

BDBNTM là mát nhóm bệnh da có biểu hiện lâm sàng là báng n°ớc trên

da với có hoặc không kèm theo tổn th°¡ng niêm m¿c, là bệnh mắc phải do rái lo¿n liên quan đến quá trình tự miễn Ng°ßi bệnh xuất hiện những tự kháng thể cháng l¿i những thành phần cấu trúc cāa da và niêm m¿c

Theo nhiều nghiên cứu đã đ°ợc công bá thì BDBNTM đ°ợc chia thành

2 nhóm chính dựa vào vß trí hình thành báng n°ớc nh° sau:

- Nhóm BDBNTM t rong thượng bì gồm: pemphigus thông th°ßng (PV),

pemphigus sùi (PVe), pemphigus vảy lá (PF), pemphigus đß da (PE), pemphigus đặc hữu (EPF), pemphigus IgA (IAP), pemphigus á u (PNP), pemphigus d¿ng herpes (PH), pemphigus do thuác (DIP)4

pemphigoid niêm m¿c (MMP), pemphigoid thai kỳ (GP), ly th°ợng bì báng n°ớc mắc phải (EBA), bệnh IgA d¿ng dải (LAD), lupus ban đß hệ tháng thể báng n°ớc (BSLE) và viêm da d¿ng herpes (DH)4

BDBNTM là mát nhóm bệnh đa d¿ng trong các bệnh da liễu gồm các bệnh pemphigus, pemphigoid báng n°ớc, viêm da d¿ng herpes,… Tùy từng thể bệnh có đặc điểm lâm sàng, hình ảnh mô bệnh hác và sự lắng đáng các tự kháng thể miễn dßch khác nhau, á những vß trí khác nhau trong các lớp cāa da

Có nhiều cách phân lo¿i BDBNTM Dựa vào vß trí hình thành báng n°ớc trong các lớp cāa da, bệnh này đ°ợc chia thành 2 nhóm chính:

4

- BDBNTM trong th°ợng bì hay nhóm bệnh pemphigus

- BDBNTM d°ới th°ợng bì hay nhóm bệnh pemphigoid

1.2.2.1 Nhóm pemphigus

à nhóm này, c¡ thể ng°ßi bệnh sinh ra các tự khánh thể (KT) cháng l¿i các cầu nái liên kết giữa các tế bào gai á th°ợng bì, dẫn đến mất liên kết giữa các tế bào th°ợng bì, hình thành hiện t°ợng ly gai/tiêu gai và t¿o ra các hác chứa đầy dßch Có nhiều yếu tá gây ra bệnh nh° nhiễm khuẩn, thuác, hoá chất,… Phần lớn các tr°ßng hợp BN có KT IgG kháng l¿i các cầu nái liên kết giữa các tế bào gai á th°ợng bì

Dựa vào biểu hiện lâm sàng, thay đổi miễn dßch hác, hình ảnh mô bệnh hác và vß trí tổn th°¡ng, bệnh đ°ợc chia thành hai nhóm chính:

- Nhóm Pemphigus sâu bao gồm Pemphigus thể thông th°ßng và Pemphigus sùi

- Nhóm Pemphigus nông bao gồm Pemphigus thể vảy lá và Pemphigus thể đß da

Ngoài các hình thái chính trên, trong vài thập kỷ gần đây mát sá hình thái hiếm gặp cāa bệnh Pemphigus cũng đ°ợc mô tả nh° Pemphigus d¿ng Herpes (Pemphigus herpetiteforme), Pemphigus IgA, Pemphigus thể á u (Pemphigus paraneoplastic)…Hiện nay, nhß hiểu thêm c¡ chế miễn dßch hác, hình ảnh mô bệnh hác và kết hợp lâm sàng, việc phân lo¿i pemphigus ngày càng cÿ thể và hoàn thiện

1.2.2.2 Nhóm pemphigoid

Pemphigoid là bệnh da báng n°ớc tự miễn d°ới th°ợng bì lành tính tiến triển m¿n tính, th°ßng xuất hiện á da, ít gặp á niêm m¿c Bệnh có á hầu hết các n°ớc trên thế giới và th°ßng gặp á nhóm ng°ßi lớn tuổi, ch°a có sự xác đßnh

rõ ràng về tuổi, giới, chāng tác

Bệnh Pemphigoid đã đ°ợc tách riêng ra thành mát bệnh đác lập khác với những bệnh Pemphigus vào năm 1956 bái Lever Đến năm 1964, Jordon và Beutner chứng minh nhóm bệnh này có các tự KT t¿i mô và tự KT tuần hoàn cháng l¿i các thành phần vùng màng đáy, làm lớp mô á đây lßng lẻo, hình thành

- Pemphigoid thai kì (Pemphigoid gestationis - PG)

- Pemphigoid niêm m¿c (mucous membrane pemphigoid –MMP)

- Bệnh IgA d¿ng dải (LABD)

- Bệnh viêm da d¿ng herpes (DH)

- Ly th°ợng bì báng n°ớc mắc phải (EBA)

- Lupus ban đß hệ tháng thể báng n°ớc (BSLE)

B ảng 1 Phân loại các bệnh da bọng nước tự miễn

mất liên kết

giữa các tế bào th°ợng bì, hình thành hiện t°ợng ly gai và

Pemphigus thông

th°ßng

Pemphigus vulgaris

(PV) Pemphigus sùi Pemphigus vegetans

Endemic pemphigus foliaceus (EPF) Pemphigus IgA IgA Pemphigus (IAP)

Pemphigus á u Pemphigus

paraneoplastic (PNP)

6

t¿o ra các hác

chứa đầy dßch

Pemphigus d¿ng herpes

Pemphigus hepatitform

(PH)

Pemphigus do thuác

Bệnh IgA d¿ng

dải

Linear IgA Disease

(LAD) Viêm da d¿ng

herpes

Dermatitis herpetiformis (DH) Lupus Ban đß hệ

tháng thể báng n°ớc

Bullous Systemic Lupus Erythematosus Pemphigoid gestationis

(BSLE) Pemphigoid thai

1.1.3.1 Nhóm pemphigus

Biểu hiện lâm sàng cāa nhóm pemphigus là các báng n°ớc nhăn nheo, xuất hiện đát ngát, rải rác toàn thân và dễ vỡ Ngoài ra, bệnh nhân có thể có vết loét á niêm m¿c miệng Bệnh tiến triển mãn tính Nguyên nhân tử vong chā yếu là do các biến chứng nhiễm trùng, rái lo¿n n°ớc điện giải và suy kiệt

Nhóm này có nhiều thể bệnh, các bệnh th°ßng gặp:

7

a Pemphigus thông th°ßng - Pemphigus vulgaris (PV)

- Là thể lâm sàng hay gặp nhất, chiếm khoảng 60-70% trong tổng sá các hình thái pemphigus Bệnh hay gặp á ng°ßi 40-50 tuổi Tỷ lệ mắc bệnh

giữa nam và nữ là t°¡ng đ°¡ng nhau2

- Báng n°ớc xảy ra đát ngát trên toàn thân trong vài tuần hay vài tháng,

rải rác khắp c¡ thể, tập trung á vùng tỳ đè Báng n°ớc nằm rßi r¿c trên nền da bình th°ßng, kích th°ớc từ mát đến vài centimet, nhăn nheo, lấp đầy bái dßch trong và dßch huyết thanh, rất dễ vỡ

- Ngứa ít, th°ßng bệnh nhân có đau rát

- Toàn tr¿ng sớm bß ảnh h°áng, có thể sát cao, kéo dài Thể tr¿ng suy

sÿp dần do những đợt phát bệnh liên tÿc, hoặc có thể có những đợt rái lo¿n tiêu hóa, tâm thần, tiết niệu

8

b Pemphigus sùi - Pemphigus vegetans (PVe)

- Là mát biến thể lâm sàng khu trú cāa pemphigus thể thông th°ßng, bệnh rất hiếm gặp

- Báng n°ớc vỡ nhanh, sau đó sùi lên hình thành những vùng u nhú có

mā, đóng vảy tiết, bác mùi hôi thái đặc biệt Vß trí th°ßng á niêm m¿c và các

nếp gấp lớn nh° nách, bẹn, mông, nếp d°ới vú

c Pemphigus vảy lá - Pemphigus foliaces (PF)

Gồm 2 giai đo¿n:

- Giai đo¿n báng n°ớc: Khái đầu bằng những báng n°ớc nhß, mềm, nhăn nheo Vß trí á mặt, ngực, l°ng Tổn th°¡ng có thể xuất hiện trên nền da lành hay mảng đß da Niêm m¿c không bß tổn th°¡ng Đây là tiêu chuẩn quan tráng

để chẩn đoán phân biệt với pemphigus thể thông th°ßng

- Giai đo¿n đß da: báng n°ớc biến mất nhanh, để l¿i những mảng ban

đß, tróc vảy, rỉ dßch nhiều, chiếm toàn bá c¡ thể hình thành bệnh c¿nh đß da toàn thân2

Th°ßng gặp chā yếu 2 thể bệnh sau:

a Bệnh pemphigoid báng n°ớc - Bullous pemphigoid (BP)

- Là BDBNTM d°ới th°ợng bì lành tính, tiến triển m¿n tính Bệnh điển hình gặp á ng°ßi già, tuổi th°ßng gặp 60-80 tuổi Tỉ lệ mắc á nam và nữ bằng nhau hoặc nam h¡i nhiều h¡n nữ

- Các báng n°ớc có kích th°ớc lớn từ mát đến vài centimet, hình tròn hay hình bầu dÿc trên nền da đß hay bình th°ßng, rải rác từng cái hoặc tập trung thành hình đa cung Báng n°ớc căng chắc, không vỡ, chứa dßch trong, có khi

là máu, khi vỡ thành đám phā vảy tiết Ngoài báng n°ớc còn có thể thấy các lo¿i tổn th°¡ng khác nh° dát đß, sẩn và mảng mày đay hình vằn vèo và có báng

n°ớc xuất hiện trên đó

- Tổn th°¡ng khi lành không để l¿i sẹo, có thể là những mảng tăng hoặc

giảm sắc tá, hiếm h¡n là những h¿t kê Vß trí tổn th°¡ng đái xứng, th°ßng gặp

10

á bÿng d°ới, mặt trong đùi, bẹn, nách, mặt gấp cẳng tay, phần d°ới cẳng chân

Ít gặp tổn th°¡ng niêm m¿c, nếu có th°ßng á niêm m¿c miệng, báng n°ớc nhß, khó vỡ khi vỡ lành nhanh để l¿i sẹo

- Ngứa thay đổi từ không ngứa đến ngứa rất nhiều, có thể xuất hiện tr°ớc tổn th°¡ng da mát thßi gian

- Toàn thân chỉ bß ảnh h°áng nếu tổn th°¡ng da lan ráng2

b Viêm da d¿ng herpes - Dermatitis herpetiformis (DH)

- Tổn th°¡ng th°ßng xuất hiện từ từ Bệnh nhân sát nhẹ hoặc không sát,

mệt mßi, sút cân, kém ăn không đáng kể Th°ßng có dấu tiền triệu là ngứa, rát

bßng và đau

- Vß trí tổn th°¡ng chā yếu là da, đái xứng, á khuỷu, mặt gấp cẳng chân,

cẳng tay, kế tiếp là á mông, kẽ mông, đùi, mắt cá chân sau đó là l°ng và bÿng

Tổn th°¡ng niêm m¿c chiếm 4,6% tr°ßng hợp, chā yếu á háng

- Tổn th°¡ng khái phát là các ban đß, mÿn n°ớc, sẩn, mảng mề đay, sau

dần trá thành báng n°ớc, xuất hiện lẻ tẻ hoặc chÿm l¿i giáng trong bệnh Herpes

- Báng n°ớc to bằng h¿t ngô căng, chứa dßch màu vàng chanh, hiếm có

báng n°ớc xuất huyết, tồn t¿i 5-7 ngày sau đó làm mā và vỡ ra, đóng vảy tiết,

vảy mā

11

c Lupus Ban đß hệ tháng thể báng n°ớc - Bullous Systemic Lupus Erythematosus (BSLE)

- Tổn th°¡ng giáng trong bệnh Viêm da d¿ng herpes

- Báng n°ớc căng trên da bình th°ßng hoặc ban đß, chā yếu khu trú trên thân, cánh tay, đầu và cổ Ít gặp tổn th°¡ng niêm m¿c miệng7

- Ngứa thay đổi từ không ngứa đến ngứa rất nhiều

12

1.1.4.1 Nhóm pemphigus

Các thể bệnh pemphigus có đặc điểm chung là:

- Mô bệnh hác : Báng n°ớc nằm á nông, á th°ợng bì Đặc tr°ng bái hiện t°ợng ly gai/tiêu gai á th°ợng bì Đây là hậu quả cāa sự mất liên kết giữa các

tế bào th°ợng bì do c¡ thể sinh ra các tự KT kháng thành phần cāa các cầu nái liên kết giữa các tế bào gai Vß trí xảy ra ly gai phÿ thuác vào từng thể bệnh

a Pemphigus thông th°ßng - Pemphigus vulgaris (PV)

- Báng n°ớc đặc tr°ng hình thành trên lớp tế bào đáy, hoặc á phần thấp

lớp tế bào gai th°ợng bì Hiện t°ợng tiêu gai xảy ra á phần sâu trên màng đáy

- Trong báng n°ớc th°ßng thấy các tế bào ly gai, dßch chứa b¿ch cầu đa nhân trung tính (BCĐNTT) và lympho bào Các tế bào ly gai tập trung thành đám hoặc riêng lẻ, hình tròn, bào t°¡ng °a toan, h¿t nhân to, tăng sắc

b Pemphigus sùi - Pemphigus vegetans (PVe)

- Đặc điểm mô bệnh hác cāa pemphigus sùi gồm dày sừng, hiện t°ợng tiêu gai xảy ra á phần sâu trên màng đáy kèm tăng sản th°ợng bì và t¿o nhú th°ợng bì

- Dßch báng n°ớc chứa BCĐNTT và b¿ch cầu đa nhân ái toan (BCĐNAT)

c Pemphigus vảy lá - Pemphigus foliaces (PF)

- Báng n°ớc d°ới lớp sừng hoặc trong lớp gai, chứa dßch huyết thanh, tế bào ly gai và mát vài BCĐNTT, đôi khi xuất hiện sá l°ợng nhß BCĐNAT

- Tiêu gai rất nông á phần cao cāa lớp gai hay ngay d°ới lớp sừng

1.1.4.2 Nhóm pemphigoid

Đặc điểm chung MBH nhóm này là báng n°ớc nằm á sâu, d°ới th°ợng

bì và không có hiện t°ợng tiêu gai

a Bệnh pemphigoid - Bullous pemphigoid (BP)

13

- Trong bệnh báng n°ớc pempigoid, báng n°ớc hình thành d°ới th°ợng

bì với xâm nhập chā yếu BCĐNAT á trung bì và trong báng n°ớc

- Sinh thiết tổn th°¡ng báng n°ớc trên nền da lành cho thấy xâm nhập

rải rác tế bào viêm Nh°ng các tổn th°¡ng báng n°ớc trên nền da đß cho thấy xâm nhập nhiều tế bào viêm á phần nông trung bì Ngoài ra, hiện t°ợng ly gai

có BCĐNAT cũng có thể quan sát thấy á vùng da đß á rìa các báng n°ớc này

b Viêm da d¿ng herpes - Dermatitis herpetiformis (DH)

- Th°ợng bì hoàn toàn bình th°ßng, bß đẩy lên cùng màng đáy, không có

và IgG4, bổ thể C3 ít gặp h¡n

b Pemphigus sùi - Pemphigus vegetans (PVe)

- MDHQTT giáng với PV

c Pemphigus vảy lá - Pemphigus foliaces (PF)

- MDHQTT: lắng đáng IgG d¿ng dải hoặc h¿t á bề mặt tế bào th°ợng bì nông hoặc toàn bá gian bào th°ợng bì

1.1.5.2 Nhóm pemphigoid

a Bệnh pemphigoid - Bullous pemphigoid (BP)

14

- MDHQTT: 90% BN có lắng đáng IgG, gần 100% thấy có C3 Lắng

đáng IgG và C3 dác theo màng đáy thành đ°ßng v¿ch mảnh, nhß, liên tÿc

b Viêm da d¿ng herpes - Dermatitis herpetiformis (DH)

- MDHQTT: là xét nghiệm có giá trß nhất trong chẩn đoán DH Vß trí lý t°áng là vùng da quanh tổn th°¡ng 80 – 90% tr°ßng hợp lắng đáng IgA d¿ng

h¿t Lắng đáng IgA có thể mất đi khi chế đá ăn không gluten nghiêm ngắt và kéo dài

c Lupus Ban đß hệ tháng thể báng n°ớc - Bullous Systemic Lupus Erythematosus (BSLE)

- MDHQTT: chā yếu là lắng đáng IgG d¿ng dải, C3 và IgM cũng đ°ợc

thấy d°ới d¿ng h¿t t¿i vùng màng đáy

1.2 L ßch sÿ nghiên cāu và āng dāng cÿa MDHQTT trong BDBNTM

trong BDBNTM

1.2.1.1 L ịch sử nghiên cāu và khái niệm MDHQ

Vào năm 1941, Coons, Creech và Jones đã phát minh ra kỹ thuật MDHQ

– mát kỹ thuật đánh dấu miễn dßch tin cậy để phát hiện những KN khác nhau t¿i mô, trong dßch c¡ thể… Từ những năm 60, kỹ thuật đ°ợc áp dÿng trong

chẩn đoán, theo dõi, tiên l°ợng nhiều bệnh da, trong đó có bệnh da báng n°ớc

Miễn dßch huỳnh quang (Immunofluorescence) là mát kỹ thuật hóa mô

để phát hiện kháng nguyên (KN) hoặc kháng thể (KT) và vß trí khu trú cāa các

KN hoặc KT đó

1.2.1.2 Nguyên lý c ÿa MDHQ

Nguyên lý c¡ bản cāa ph°¡ng pháp này là sự kết hợp đặc hiệu giữa kháng nguyên và kháng thể đ°ợc gắn chất màu huỳnh quang (Fluochromes) Fluochromes là hợp chất chứa electron, khi đ°ợc chiếu sáng d°ới b°ớc sóng cÿ

thể sẽ nhanh chóng đ¿t tr¿ng thái năng l°ợng mới không ổn đßnh, do đó ngay

lập tức trá về tr¿ng thái c¡ bản và phát ra ánh sáng có b°ớc sóng dài h¡n Mát

chất màu huỳnh quang lý t°áng cần t¿o liên kết bền với phân tử protein, đảm

15

bảo không bß mất đi trong quá trình rửa, phát ra b°ớc sóng ánh sáng có thể quan sát đ°ợc bằng tia tử ngo¿i và đồng thßi không làm thay đổi các phản ứng miễn dßch khi gắn vào KT đặc hiệu Hiện nay có hai lo¿i chất màu huỳnh quang th°ßng đ°ợc sử dÿng là Fluorescine isothiocyannate-FITC và Tetramethylrhodamin isothiocyanate-TRITC

Phức hợp kháng thể huỳnh quang đ°ợc t¿o ra sẽ gắn chặt vào KN, sẽ t¿o nên mát phức hợp miễn dßch bền vững Không mát kháng thể nào bß mất trong quá trình rửa Phức hợp kháng nguyên –kháng thể - chất màu phát ra ánh sáng màu xanh (FITC) hoặc đß (TRITC) và đ°ợc quan sát d°ới kính hiển vi huỳnh quang

Bá điều hoà cāa kính hiển vi chứa nguồn ánh sáng có c°ßng đá lớn, kích thích kính lác để t¿o ra b°ớc sóng có khả năng gây ho¿t hoá huỳnh quang, tấm chắn cāa kính lác có tác dÿng lo¿i bß các b°ớc sóng gây nhiễu cāa ánh sáng Quan sát bằng kính hiển vi huỳnh quang d°ới với nền tái, kháng nguyên gắn đặc hiệu với kháng thể huỳnh quang có thể đ°ợc phát hiện bái màu xanh (FITC) hoặc đß (TRITC)

Nhß đó, ng°ßi nghiên cứu nhận đßnh đ°ợc sự lắng đáng miễn dßch, vß trí lắng đáng cũng nh° kiểu lắng đáng MDHQ là mát xét nghiệm quan tráng trong chẩn đoán các bệnh da báng n°ớc, bệnh tự miễn và các bệnh mô liên kết

Có 3 lo¿i kỹ thuật MDHQ c¡ bản đ°ợc sử dÿng:

- MDHQ trực tiếp (Direct Immunofluorescein: DIF)

- MDHQ gián tiếp (Indirect Immunofluorescein: IIF)

- MDHQ gián tiếp bổ thể (Complement Indirect immunofluorescein: CIIF)

MDHQ trực tiếp là kỹ thuật xét nghiệm để phát hiện KT á da ng°ßi bệnh MDHQ gián tiếp là kỹ thuật xác đßnh KT á trong huyết thanh, huyết t°¡ng, dßch báng n°ớc hoặc trong các dßch khác

MDHQ gián tiếp bổ thể là sự biến đổi cāa kỹ thuật MDHQ gián tiếp để xác đßnh KT gắn bổ thể á trong dßch cāa ng°ßi bệnh

16

Trong 3 kỹ thuật trên, hiện nay Trung tâm Giải phẫu bệnh – Tế bào hác, Bệnh viện B¿ch Mai đang sử dÿng 2 kỹ thuật MDHQTT và MDHQGT Trong

đó, MDHQTT là <tiêu chuẩn vàng= trong chẩn đoán các BDBNTM

¯u điểm cāa MDHQTT là có đá nh¿y và đá đặc hiệu cao, đ¡n giản h¡n các ph°¡ng pháp khác Tuy nhiên, c°ßng đá phát quang không m¿nh, chỉ phát hiện đ°ợc những KN có nồng đá cao, việc lấy bệnh phẩm khó khăn á những bệnh nhân tổn th°¡ng niêm m¿c miệng đ¡n thuần và á mắt dẫn đến kết

quả không đ°ợc chính xác MDHQTT để xác đßnh sự lắng đáng các globulin

miễn dßch (IgG, IgM, IgA), bổ thể (C3) và Fibrin á da ng°ßi bệnh

Trong khi đó, MDHQGT có °u điểm c°ßng đá huỳnh quang rõ, tiện lợi

và kinh tế h¡n ph°¡ng pháp trực tiếp bái chỉ dùng l°ợng ít kháng huyết thanh

và chỉ cần dùng mát KT huỳnh quang đặc hiệu loài là có thể nghiên cứu đ°ợc nhiều lo¿i KN khác Tuy nhiên, kỹ thuật này còn nhiều h¿n chế nh°: có thể bß ng°ng kết không đặc hiệu trong quá trình tiến hành hai phản ứng liên tiếp, mát

KT hoặc KN đã đ°ợc gắn chất màu huỳnh quang phản ứng trực tiếp với

KN hoặc KT đặc hiệu trên mẫu sinh thiết Muán phát hiện mßi KN l¿i cần có

mát KT huỳnh quang t°¡ng ứng Mảnh cắt l¿nh đ°ợc ā với các chất phát huỳnh quang gắn KT Để thu đ°ợc tín hiệu huỳnh quang đặc hiệu tát nhất cần pha thật chính xác các phức hợp huỳnh quang và nên nhuám tiêu bản chứng

17

Để tránh cho mảnh sinh thiết bß khô, nên gói bệnh phẩm trong g¿c tẩm

°ớt bằng n°ớc muái 0,9% và để ngay bệnh phẩm vào Ni-t¡ lßng càng sớm càng tát Trong tr°ßng hợp không có Ni-t¡ lßng, thì nên giữ bệnh phẩm trong môi tr°ßng vận chuyển Michel á nhiệt đá 4°C và chuyển đến phòng xét nghiệm tr°ớc 24 giß

Khi vận chuyển bệnh phẩm cần để bệnh phẩm trong môi tr°ßng Michel, môi tr°ßng này tránh cho mảnh mô không bß thoái hoá, không ức chế các men cāa phản ứng miễn dßch Khi lấy bệnh phẩm ra khßi môi tr°ßng vận chuyển, cần rửa mảnh mô trong dung dßch Buffer 30 phút và giữ mô á nhiệt đá – 70 °C cho đến khi làm phản ứng

Mảnh sinh thiết dùng để làm phản ứng MDHQ không nên cá đßnh bằng bất kỳ mát lo¿i hoá chất nào Đặc biệt không đ°ợc cá đßnh trong formalin, vì c¡ chế cāa formalin là giết các mô tế bào, sẽ làm biến đổi protein và làm giảm đáng kể đá chính xác cāa kết quả

Tất cả các lo¿i hóa chất phải đảm bảo chất l°ợng tr°ớc khi sử dÿng Hóa chất phải đ°ợc pha đúng chỉ dẫn cāa nhà sản xuất, bảo quản đúng cách và th°ßng xuyên kiểm tra chất l°ợng cāa chúng Tát nhất nên dùng các lo¿i hóa chất đồng bá với nhau, pha sẵn và đ°ợc cung cấp bái nhà sản xuất

Không để các phiến kính khô trong xuyên suát quá trình thực hiện Để tránh làm khô và phai màu huỳnh quang, thực hiện thao tác ā kháng thể huỳnh quang á nhiệt đá phòng, trong háp kín, ẩm và tái màu và tránh ánh sáng trực tiếp chiếu vào

Để đ¿t kết quả phản ứng MDHQTT, thì chán vß trí tổn th°¡ng thích hợp

để sinh thiết là cực kỳ quan tráng.Mảnh sinh thiết cần lấy á rìa tổn th°¡ng, là vùng da nhìn bình th°ßng nằm sát tổn th°¡ng mới, bái á những tổn th°¡ng cũ, màng đáy có thể bß phá hāy hoàn toàn dẫn đến âm tính giả Ngoài ra, âm tính giả có thể xảy ra khi sinh thiết đ°ợc lấy á vùng da tổn th°¡ng, do các kháng thể liên kết á đây bß tiêu biến bái các tế bào viêm Tát nhất nên sinh thiết đ°ợc

cả vùng tổn th°¡ng để quan sát đ°ợc vß trí hình thành tổn th°¡ng đó Đái với tổn th°¡ng á niêm m¿c cũng yêu cầu sinh thiết á rìa tổn th°¡ng mới, bái á các

Trong BDBNTM, MDHQTT (+) có 2 kiểu lắng đáng KT: gian bào và màng đáy Tùy từng bệnh sẽ có vß trí, kiểu lắng đáng và các tự KT lắng đáng khác nhau:

- Lắng đáng IgG á khoảng gian bào đặc tr°ng cho tất cả các thể cāa nhóm bệnh Pemphigus trừ thể Pemphigus IgA

- Lắng đáng IgG á khoảng gian bào và vùng màng đáy đặc tr°ng cho Pemphigus đß da, Pemphigus á u và Pemphigus do thuác

- Lắng đáng IgA á gian bào là đặc tr°ng cho thể Pemphigus IgA

- Lắng đáng vùng màng đáy đặc tr°ng cho nhóm Pemphigoid

- Lắng đáng IgG và/hoặc C3 á vùng màng đáy gặp trong pemphigoid báng

thai kỳ, ly th°ợng bì báng n°ớc mắc phải

- Lắng đáng IgA vùng màng đáy là đặc tr°ng cāa bệnh IgA d¿ng dải

- Lắng đáng á nhú bì: lắng đáng d¿ng h¿t cāa IgA và C3 á nhú bì và dác vùng màng đáy là đặc tr°ng cāa viêm da d¿ng herpes

1.3 Tình hình nghiên c āu trong BDBNTM t¿i ViÇt Nam và n°ãc ngoài

Trần Ngác Ánh (2010) nghiên cứu đặc điểm lâm sàng và tự kháng thể trong mô da bằng xét nghiệm MDHQTT trên 120 bệnh nhân bß BDBNTM điều

trß nái trú bệnh viện Da liễu thành phá Hồ Chí Minh cho thấy: MDHQTT có

19

đá nh¿y 84,2% Nhóm pemphigus có đá nh¿y MDHQTT là 90,6% với hình ảnh

lắng đáng phức hợp MD á gian bào th°ợng bì có hình m¿ng l°ới màu xanh lá Nhóm pemphigoid có đá nh¿y MDHQTT là 68,6% với d¿ng lắng đáng MD

d¿ng dải dác màng đáy màu xanh lá, d¿ng h¿t liên tÿc hay đứt khúc Tuy nhiên ch°a xác đßnh đ°ợc các thể bệnh pemphigus và pemphigoid Hiệu giá kháng

thể không liên quan đến mức đá bệnh8

Nguyễn Thß Linh (2013) nghiên cứu đặc điểm mô bệnh hác và MDHQTT cāa mát sá BDBNTM trên 42 bệnh nhân t¿i Bệnh viện Da liễu Trung °¡ng cho thấy: tỷ lệ mô bệnh hác đ°a ra đ°ợc chẩn đoán là 71,3%, trong

đó 95,6% nhóm pemphigus có báng n°ớc nằm á th°ợng bì, 100% nhóm pemphigoid có báng n°ớc á d°ới th°ợng bì9

Nguyễn Tiến Thành (2015) nghiên cứu đặc điểm phát hiện tự kháng thể l°u hành trong máu bệnh nhân pemphigus và pemphigoid bằng MDHQGT trên 88 bệnh nhân pemphigus, pemphigoid t¿i Bệnh viện Da liễu Trung °¡ng cho thấy: Tỷ lệ d°¡ng tính, đá nh¿y và đá đặc hiệu cāa 2 ph°¡ng pháp MDHQTT và MDHQGT là t°¡ng đ°¡ng nhau trong chẩn đoán bệnh pemphigus và pemphigoid Đá đăc hiệu cāa 2 ph°¡ng pháp đều là 100%10

Lý Thß Huyền Trang (2021) đái chiếu mô bệnh hác, miễn dßch huỳnh quang với mát sá đặc điểm lâm sàng cāa bệnh Pemphigus và Pemphigoid trên

49 bệnh nhân t¿i Bệnh viện Da liễu Trung °¡ng cho thấy: tỷ lệ tr°ßng hợp

Pemphigus thông th°ßng có cùng chẩn đoán lâm sàng, MBH và MDHQTT là 89,3%; Tất cả tr°ßng hợp nghi ngß pemphigus vảy lá và tr°ßng hợp nghi ngß pemphigoid trên lâm sàng có cùng chẩn đoán MBH và MDHQTT Lâm sàng

và MBH/MDHQTT có chẩn đoán gần nh° t°¡ng đồng5

Hübner Franziska và các cáng sự nghiên cứu tỷ lệ mắc và phân bá đá

tuổi cāa bệnh Pemghigus và Pemphigoid á Đức cho thấy: Tỷ lệ mắc bệnh pemphigus và pemphigoid vào năm 2014 là 0,05%, t°¡ng đ°¡ng khoảng 40.400 bệnh nhân trên tổng dân sá 80,925 triệu ng°ßi á Đức Pemphigoid báng n°ớc có tỷ lệ mắc bệnh cao nhất, tiếp theo là pemphigus thông th°ßng11

20

Katherine Brick và các cáng sự nghiên cứu tỷ lệ mắc bệnh và tử vong á

bệnh nhân mắc pemphigoid báng n°ớc á quận Olmsted, tiểu bang Minnesota, Hoa Kỳ từ năm 1960 đến 2009 Kết quả cho thấy tỷ lệ mắc BP á Hoa Kỳ t°¡ng đ°¡ng với á Châu Âu và Châu Á Tỷ lệ bệnh nhân tử vong cāa Hoa Kỳ cāa

thấp h¡n so với châu Âu, nh°ng cao h¡n °ớc tính tr°ớc đó12

Nima Milani và cáng sự nghiên cứu xác đßnh sự liên quan giữa bệnh pemphigoid báng n°ớc và các bệnh lý thần kinh Kết quả nghiên cứu cho thấy bệnh nhân mắc bệnh pemphigoid có nguy c¡ đát quỵ Bệnh lý thần kinh xuất

hiện tr°ớc bệnh pemphigoid trong phần lớn các ca bệnh Tỷ lệ tử vong trongmát năm tăng lên á những bệnh nhân mắc đồng thßi BP và đát quỵ13

21

Ch°¢ng 2 ĐÞI T¯þNG VÀ PH¯¡NG PHÁP NGHIÊN CĀU

2 1 Đßi t°ÿng nghiên cāu

Tất cả các bệnh nhân điều trß nái trú t¿i khoa Da liễu và khoa Dß ứng,

bệnh viện B¿ch Mai nghi ngß mắc BDBNTM có mẫu sinh thiết đ°ợc chỉ đßnh làm xét nghiệm MBH và/hoặc MDHQTT t¿i Trung tâm Giải phẫu bệnh – Tế bào hác, Bệnh viện B¿ch Mai từ 01/2021 đến 03/2023

- BN đ°ợc chẩn đoán BDBNTM

- BN có mảnh sinh thiết đ°ợc lấy đā sá l°ợng bệnh phẩm và trúng vß trí

tổn th°¡ng theo đúng h°ớng dẫn á mÿc 1.2.2

- Có phiếu chỉ đßnh xét nghiệm đầy đā thông tin BN

- Có đầy đā thông tin về chẩn đoán cāa BN

- Lấy không đā sá l°ợng và sai vß trí tổn th°¡ng

- BN không có đầy đā hồ s¡ bệnh án

2.2 Th åi gian và đßa điÃm nghiên cāu

Nghiên cứu đ°ợc tiến hành từ 01/2021 đến 03/2023

2.1.2 Đßa điểm nghiên cāu:

Nghiên cứu đ°ợc tiến hành t¿i Trung tâm Giải phẫu bệnh – Tế bào hác, Bệnh viện B¿ch Mai

2.3 Ph°¢ng pháp nghiên cāu

Mô tả cắt ngang, tiến cứu kết hợp hồi cứu

22

- Tất cả các bệnh phẩm đā tiêu chuẩn lựa chán trong khoảng thßi gian nghiên cứu Trong nghiên cứu này tôi chán đ°ợc 42 bệnh nhân

+ 42 bệnh nhân thực hiện xét nghiệm mô bệnh hác th°ßng quy

+ 23 bệnh nhân thực hiện xét nghiệm miễn dßch huỳnh quang trực tiếp

- Tra cứu thông tin bệnh nhân trên phiếu xét nghiệm sinh thiết

- Thông tin cāa bệnh nhân đ°ợc ghi nhận theo bệnh án nghiên cứu (Phÿ

lÿc)

- Các thông sá lâm sàng cần ghi nhận gồm:

+ Tuổi bệnh nhân: tuổi trung bình, nhóm tuổi < 30, 30-60, > 60

+ Giới

+ Vß trí tổn th°¡ng: đầu mặt cổ, tay chân, thân mình, bẹn sinh dÿc, niêm m¿c miệng

 Quy trình nghiên cứu:

- Các bệnh nhân sau khi đ°ợc chẩn đoán lâm sàng h°ớng đến BDBNTM đều đ°ợc sinh thiết da (2 mẫu bệnh phẩm) để xét nghiệm mô bệnh hác và miễn dßch huỳnh quang trực tiếp

- Cách thức sinh thiết: chán các báng n°ớc mới, còn nguyên vẹn Mẫu sinh thiết da đảm bảo có đ°ợc cả trán nguyên vẹn báng n°ớc và mát phần da lành kế cận

- Xử lý mẫu sinh thiết: Mẫu sinh thiết da đ°ợc cá đßnh ngay trong dung dßch formol trung tính 10% (không quá 30 phút kể từ khi bệnh phẩm đ°ợc lấy

23

□ Tẩy parafin trong 3 bể toluen (hoặc xylen), mßi bể 5 phút

□ Qua 4 bể cồn: 1000– 950– 800– 700, mßi bể nhúng 15 lần

□ Rửa d°ới vòi n°ớc chảy

□ Nhuám nhân bằng Hematoxylin: 3-5 phút hoặc lâu h¡n (tuỳ vào chất l°ợng thuác nhuám)

□ Rửa d°ới vòi n°ớc chảy 5 – 10 phút

□ Kiểm tra màu cāa nhân qua kính hiển vi, nếu đậm tẩy nhẹ qua cồn-acid

□ Rửa d°ới vòi n°ớc chảy 1 phút

□ Nhuám Eosin: 1-2 phút

□ Rửa d°ới vòi n°ớc chảy 1 phút

□ Biệt hoá trong 2 bể cồn lần l°ợt 950 - 1000, mßi bể nhúng 15 lần

□ Oxy hoá trong acid periodic 1%: 10 phút

□ Rửa d°ới vòi n°ớc chảy: 5-10 phút

□ Ngâm trong thuác thử Schiff: 15 – 30 phút (hoặc khi thấy có màu hồng)

□ Nhuám nhân bằng Hematoxylin: khoảng 1 phút

□ Rửa d°ới vòi n°ớc chảy: 5 phút

□ Đẩy n°ớc bằng cồn 950 - 1000