1. Trang chủ
  2. » Mẫu Slide

XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ

198 0 0
Tài liệu đã được kiểm tra trùng lặp

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Tiêu đề Xác Định Độ Mẫn Cảm Kháng Sinh Của Vi Khuẩn E. Coli Và Salmonella Trong Hội Chứng Tiêu Chảy Ở Bê Giai Đoạn Bú Sữa Và Thử Nghiệm Một Số Phác Đồ Điều Trị
Tác giả PGS. TS. Nguyễn Xuân Hòa, CN. Lê Trần Hoàn, TS. Trần Quang Vui, ThS. Thượng Thị Thanh Lễ, TS. Phan Vũ Hải, TS. Lê Quốc Việt
Trường học Đại Học Huế
Chuyên ngành Nông Lâm
Thể loại báo cáo tổng kết
Năm xuất bản 2021
Thành phố Thừa Thiên Huế
Định dạng
Số trang 198
Dung lượng 9,13 MB

Cấu trúc

  • 1. SỰ CẦN THIẾT CỦA ĐỀ TÀI (14)
  • 2. MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU (9)
  • 3. ĐỐI TƢỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU (15)
    • 3.1. Đối tƣợng nghiên cứu (15)
    • 3.2. Ph m vi nghiên cứu (0)
    • 3.3. Th i gian thực hiện (0)
  • CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU (16)
    • 1.1. Tình hình nghiên cứu về E. coli và Salmonella g y tiêu chảy ở bê (0)
      • 1.1.1. Trên thế giới (16)
      • 1.1.2. T i Việt Nam (0)
    • 1.2. Những nghiên cứu về hội chứng tiêu chảy (17)
    • 1.3. Nguyên nh n g y ra hội chứng tiêu chảy (0)
      • 1.3.1. Do vi sinh vật (18)
      • 1.3.2. Do nguyên nhân khác (20)
    • 1.4. Vi khuẩn E. coli và Salmonella (21)
      • 1.4.1. Vi khuẩn E. coli (21)
      • 1.4.2. Vi khuẩn Salmonella (33)
    • 1.5. Tổng quan về phương pháp PCR (45)
  • CHƯƠNG 2. ĐỐI TƯỢNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU (48)
    • 2.1. Mục tiêu nghiên cứu (48)
      • 2.1.1. Mục tiêu tổng thể (48)
      • 2.1.2. Các mục tiêu cụ thể (48)
    • 2.2. Đối tƣợng và ph m vi nghiên cứu (0)
      • 2.2.1. Đối tƣợng nghiên cứu (0)
      • 2.2.2. Ph m vi nghiên cứu (0)
    • 2.2. Nội dung nghiên cứu (48)
    • 2.3. Cách tiếp cận và phương pháp nghiên cứu (49)
      • 2.3.1. Cách tiếp cận (49)
      • 2.3.2. Phương pháp nghiên cứu (49)
  • CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN (55)
    • 3.1. Xác định sự biến động về số lƣợng của vi khuẩn E. coli và vi khuẩn Salmonella trong (55)
      • 3.1.1. Tình hình bệnh tiêu chảy trên bê sữa nu i ở n ng hộ t i huyện Đức Trọng tỉnh (0)
      • 3.1.2. Sự khác nhau về số lƣợng (CFU/g) của vi khuẩn E. coli và vi khuẩn Salmonella (0)
      • 3.1.3. Kết quả ph n lập vi khuẩn E. coli và Salmonella (0)
      • 3.1.4. Đặc tính sinh hóa của các chủng vi khuẩn E. coli ph n lập đƣợc (60)
      • 3.1.5. Kiểm tra các đặc tính sinh hóa của các chủng Salmonella ph n lập đƣợc (61)
    • 3.2. Kết quả xác định độc lực và tính mẫn cảm kháng sinh của các chủng vi khuẩn E (62)
      • 3.2.1. Kết quả xác định độc lực của các chủng vi khuẩn ph n lập đƣợc (62)
      • 3.2.2. Kết quả xác định tính mẫn cảm kháng sinh của một số mẫu vi khuẩn E. coli và (67)
    • 3.3. Kết quả xác định phác đồ điều trị phù hợp (68)
  • CHƯƠNG 4. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ (71)
    • 4.1. Kết luận (71)
    • 4.2. Kiến nghị (71)
  • TÀI LIỆU THAM KHẢO (72)

Nội dung

Y Tế - Sức Khỏe - Nông - Lâm - Ngư - Khoa Học - Science ĐẠI HỌC HUẾ TRỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP ĐẠI HỌC HUẾ XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E. COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ Mã số: DHH2019-02-121 Chủ nhiệm đề tài: PGS. TS. Nguyễn Xuân Hòa Thừa Thiên Huế, 82021 ĐẠI HỌC HUẾ TRỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP ĐẠI HỌC HUẾ XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E. COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ Mã số: DHH2019-02-121 Xác nhận của cơ quan chủ trì đề tài Chủ nhiệm đề tài (ký, họ tên, đóng dấu) (ký, họ tên) PGS. TS. Nguyễn Xuân Hòa Thừa Thiên Huế, 82021 1 DANH SÁCH THÀNH VIÊN THAM GIA VÀ ĐƠN VỊ PHỐI HỢP DANH SÁCH THÀNH VIÊN THAM GIA Họ và tên Đơn vị công tác CN.Lê Trần Hoàn ộ m n Th y Trƣ ng Đ i học N ng L m Đ i học Huế TS.Trần Quang Vui ộ m n Th y Trƣ ng Đ i học N ng L m Đ i học Huế ThS.Thƣợng Thị Thanh Lễ Ph ng tổ chức HC Trƣ ng Đ i học N ng L m Đ i học Huế TS.Phan Vũ Hải ộ m n Th y Trƣ ng Đ i học N ng L m Đ i học Huế TS.Lê Quốc Việt C ng ty TNHH Dinh Dƣỡng Quốc Tế Việt Đức i MỤC LỤC PHẦN MỞ ĐẦU .............................................................................................................1 1. SỰ CẦN THIẾT CỦA ĐỀ TÀI ..................................................................................1 2. MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU ........................................................................................2 3. ĐỐI TỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU ............................................................ 2 3.1. Đối tƣợng nghiên cứu ............................................................................................... 2 3.2. Ph m vi nghiên cứu ..................................................................................................2 3.3. Th i gian thực hiện:..................................................................................................2 CHƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU ...............................................3 1.1. Tình hình nghiên cứu về E. coli và Salmonella g y tiêu chảy ở bê .........................3 1.1.1. Trên thế giới ..........................................................................................................3 1.1.2. T i Việt Nam .........................................................................................................4 1.2. Những nghiên cứu về hội chứng tiêu chảy ............................................................... 4 1.3. Nguyên nh n g y ra hội chứng tiêu chảy .................................................................5 1.3.1. Do vi sinh vật .........................................................................................................5 1.3.2. Do nguyên nhân khác ............................................................................................ 7 1.4. Vi khuẩn E. coli và Salmonella ................................................................................8 1.4.1. Vi khuẩn E. coli .....................................................................................................8 1.4.2.Vi khuẩn Salmonella ............................................................................................ 20 1.5. Tổng quan về phƣơng pháp PCR ...........................................................................32 CHƠNG 2. ĐỐI TỢNG NỘI DUNG VÀ PHƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .......35 2.1. Mục tiêu nghiên cứu ............................................................................................... 35 2.1.1. Mục tiêu tổng thể: ................................................................................................ 35 2.1.2. Các mục tiêu cụ thể ............................................................................................. 35 2.2. Đối tƣợng và ph m vi nghiên cứu ..........................................................................35 2.2.1. Đối tƣợng nghiên cứu .......................................................................................... 35 2.2.2. Ph m vi nghiên cứu ............................................................................................. 35 2.2. Nội dung nghiên cứu .............................................................................................. 35 ii 2.3. Cách tiếp cận và phƣơng pháp nghiên cứu............................................................. 36 2.3.1. Cách tiếp cận .......................................................................................................36 2.3.2. Phƣơng pháp nghiên cứu .....................................................................................36 CHƠNG 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN ......................................42 3.1. Xác định sự biến động về số lƣợng của vi khuẩn E. coli và vi khuẩn Salmonella trong ph n của bê bị tiêu chảy nghi do E. coli hay Salmonella và mẫu ph n kh ng tiêu chảy ...42 3.1.1. Tình hình bệnh tiêu chảy trên bê sữa nu i ở n ng hộ t i huyện Đức Trọng tỉnh L m Đồng ......................................................................................................................42 3.1.2. Sự khác nhau về số lƣợng (CFUg) của vi khuẩn E. coli và vi khuẩn Salmonella trong ph n của bê bị tiêu chảy và kh ng tiêu chảy .......................................................... 44 3.1.3. Kết quả ph n lập vi khuẩn E. coli và Salmonella ................................................45 3.1.4. Đặc tính sinh hóa của các chủng vi khuẩn E. coli ph n lập đƣợc .......................47 3.1.5. Kiểm tra các đặc tính sinh hóa của các chủng Salmonella ph n lập đƣợc ..........48 3.2. Kết quả xác định độc lực và tính mẫn cảm kháng sinh của các chủng vi khuẩn E. coli và Salmonella ph n lập đƣợc ..................................................................................49 3.2.1. Kết quả xác định độc lực của các chủng vi khuẩn ph n lập đƣợc .......................49 3.2.2. Kết quả xác định tính mẫn cảm kháng sinh của một số mẫu vi khuẩn E. coli và Salmonella mang gene độc tố ph n lập đƣợc ................................................................ 54 3.3. Kết quả xác định phác đồ điều trị phù hợp ............................................................. 55 CHƠNG 4. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ................................................................ 58 4.1. Kết luận...................................................................................................................58 4.2. Kiến nghị ................................................................................................................58 TÀI LIỆU THAM KHẢO ............................................................................................. 59 iii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1. Đặc tính sinh hóa của vi khuẩn E. coli. (TCVN 8400-16:2011) ...........10 Bảng 1.2. Đặc tính sinh hóa của vi khuẩn Salmonella ...........................................23 Bảng 1.3. Th i gian sống của Salmonella trong các lo i m i trƣ ng....................24 Bảng 2.1. Tên gene, mồi dùng và kích thƣớc sản phẩm cho phản ứng PCR.........38 Bảng 2.2. Chu trình nhiệt của phản ứng PCR xác định gen độc ........................... 39 Bảng 2.3. Tiêu chuẩn đánh giá tính mẫn cảm các lo i kháng sinh theo quy đị nh của nhà sản xuất.....................................................................................40 Bảng 3.1a. Tỉ lệ bệnh tiêu chảy trên bê nuôi ở nông hộ t i huyện Đức Trọng .......42 Bảng 3.1b. Tỉ lệ bê bị bệnh tiêu chảy theo tháng tuổi .............................................43 Bảng 3.1.2. Kết quả xác định số lƣợng (CFUg) vi khuẩn trong mẫu phân ............44 Bảng 3.1.3. Tỉ lệ vi khuẩn phân lập đƣợc trong phân không tiêu chảy và tiêu chảy 46 Bảng 3.1.4. Giám định một số đặc tính sinh vật học các chủng E. coli phân lập đƣợ c ...............................................................................................................47 Bảng 3.1.5 Đặc tính sinh hóa các chủng Salmonella phân lập đƣợc .......................48 Bảng 3.2.1.1. Kết quả xác định gene mã hóa độc tố của vi khuẩn E. coli ...................49 Bảng 3.2.1.2. Kết quả PCR xác định gene mã hóa độc tố ở vi khuẩn Salmonella ......50 Bảng 3.2.1.3. Kết quả kiểm tra độc lực của chủng vi khuẩn E. coli mang gene độc tố ...............................................................................................................52 Bảng 3.2.1.4. Kết quả kiểm tra độc lực vi khuẩn Salmonella mang gene độc tố bằ ng tiêm truyền động vật thí nghiệm............................................................ 53 Bảng 3.2.2.1. Kết quả đánh giá tính mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn E. coli..........54 Bảng 3.2.1.2. Kết quả đánh giá tính mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn Salmonella ..55 Bảng 3.3. Kết quả điều trị bệnh tiêu chảy ở bê ......................................................56 iv DANH MỤC HÌNH Hình 1.1. Sơ đồ phản ứng PCR (Lộc và nnk., 2007). .........................................33 Hình 1.2. Các chu kỳ phản ứng PCR (Lộc và nnk., 2007)..................................33 Hình 3.2.1.1. Kết quả xác định mang gene mã hóa độc tố của vi khuẩn E. coli bằ ng phản ứng PCR .....................................................................................50 Hình 3.2.1.2. Kết quả xác định gene mã hóa độc tố của vi khuẩn Salmonella bằng phƣơng pháp PCR ...............................................................................51 v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Cụm từ viết tắt Tên tiếng anh ADN Acid Deoxyribonucleic ARN Acid Ribonucleic bp Base pair dNTP Deoxyribonucleotide Triphosphate E. coli Escherichia coli EDTA Ethylene diamine tetraacetic acid ELISA Enzyme-Linked Immunosorbent Assay IPTG Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside kDa Kilo Dalton LB Luria Broth OD Optical Density PCR Polymerase Chain Reaction SDS-PAGE Sodium Dodecyl Sulfate - Polyacrylamide Gel Electrophoresis TAE Tris-Acetate-EDTA Taq Thermus aquaticus vi ĐẠI HỌC HUẾ TRỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP ĐẠI HỌC HUẾ 1. Thông tin chung 1.1. Tên đề tài: Xác định độ mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn E. coli và Salmonella trong hội chứng tiêu chảy ở bê giai đoạn bú sữa và thử nghiệm một số phác đồ điều trị. 1.2. Mã số: DHH2019-02-121 1.3. Chủ nhiệm: PGS.TS. Nguyễn Xu n H a 1.4. Cơ quan chủ trì: Trƣ ng Đ i học N ng L m - Đ i học Huế 1.5. Thời gian thực hiện:Từ tháng 01 năm 2019 đến tháng 12 năm 2020 2. Mục tiêu Đánh giá đƣợc tình hình bệnh tiêu chảy trên bê giai đo n b sữa ở các trang tr i n ng hộ ở các tỉnh miền trung và xác định độ mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn E. coli và Salmonella và thử nghiệm một số phác đồ điều trị bệnh tiêu chảy trên bê giai đo n b sữa. 3. Tính mới và sáng tạo Đ y là nghiên cứu đầu tiên về bệnh tiêu chảy trên bê sữa t i tỉnh L m Đồng Việt Nam. 4. Các kết quả nghiên cứu thu đƣợc Sau khi tiến hành khảo sát tình hình chăn nu i bê sữa trên 21 hộ chăn nu i ở huyện Đức Trọng tỉnh L m Đồng ch ng t i nhận thấy tỉ lệ bê sữa bị bệnh tiêu chảy rất cao (51 25). Đặc biệt bê dƣới 1 tháng tuổi có tỉ lệ tiêu chảy cao nhất (75 61). Trong các mẫu ph n bê tiêu chảy số lƣợng vi khuẩn E. coli ph n lập đƣợc trung bình là 271,4 x 106 CFUgam cao hơn 11 7 lần so với ph n bình thƣ ng (231 6x 105 CFUgam). Số lƣợng vi khuẩn Salmonella trung bình trong ph n tiêu chảy 71 9 x 104 CFUgam ph n cao hơn 59 4 lần so với ph n bình thƣ ng (121 x 102 CFUgam). Trong tổng số 74 mẫu ph n thu thập đƣợc tiến hành ph n lập vi khuẩn kết quả có 73 chủng vi khuẩn E. coli và 38 chủng vi khuẩn Salmonella phâ n lập đƣợc mang đầy đủ các đặc tính sinh hóa nhƣ các tài liệu đã m tả. Hầu hết các chủng vi khuẩn E. coli, Salmonella ph n lập đƣợc từ các mẫu ph n tiêu chảy đều mang gene độc tố đƣ ng ruột và yếu tố bám dính. Trong khi đó các vi vii khuẩn đƣợc ph n lập từ ph n kh ng tiêu chảy đều m tính với các gen độc kiểm tra. Hầu hết những chủng vi khuẩn E. coli, Salmonella dƣơng tính với các gene độc kiểm tra đều có biểu hiện độc lực cao khi g y chết 100 động vật thí nghiệm. Điều này chứng tỏ hầu hết các gene mã hóa độc lực đều đƣợc biểu hiện kiểu hình tƣơng ứng. Vi khuẩn E. coli ph n lập đƣợc mẫn cảm cao 90 với enrofloxacin gentamicin và ceftiofur 80; trong khi đó đề kháng với amoxicillin doxycycline và oxytetracycline. Vi khuẩn Salmonella mẫn cảm cao với 2 lo i kháng sinh gentamycin và enrofloxacin (80- 90); trung bình với amoxicillin doxycycline và ceftiofur; trong khi đó đề kháng hoàn toàn kháng sinh oxytetracycline. Kết quả điều trị cho thấy kháng sinh thích hợp để điều trị bệnh tiêu chảy trên bê sữa ở L m Đồng là ceftiofur và enrofloxacin. 5. Các sản phẩm của đề tài 5.1. Sản phẩm khoa học: 01 bài báo trên t p chí Khoa học Đ i học Huế và 01 bài báo trên T p chí Th y. Nguyễn Xuân Hòa, Phạm Đăng Tuấn, Lê Trần Hoàn, Lê Quốc Việt, Lê Văn Phƣớc, Nguyễn Đức Danh, Phan Vũ Hải, 2020.Độc lực độ mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn Salmonella spp. ph n lập từ bê giai đo n b sữa bị tiêu chảy t i huyện Đức Trọng tỉnh L m Đồng T p chí KHĐHH tập 129 số 3D. Nguyễn Xuân Hòa, Phạm Đăng Tuấn, Lê Trần Hoàn, Lê Quốc Việt, Thƣợng Thị Thanh Lễ, Phan Vũ Hải, Trần Quang Vui, 2020 . Độc lực và tính mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn E. coli ph n lập từ bê sữa bị bệnh tiêu chảy T p chí KHKTTY tập 27 số 7. 5.2. Sản phẩm đào tạo: 02 ác sĩ th y : Xác định độ mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn Salmonella spp. ph n lập từ bê giai đo n b sữa bị tiêu chảy t i huyện Đức Trọng tỉnh L m Đồng (Nguyễn Thủy Tiên, 2020) Xác định độ mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn E. coli ph n lập từ bê giai đo n b sữa bị tiêu chảy t i huyện Đức Trọng tỉnh L m Đồng (Nguyễn Thị Thùy Dung 2020) 01 Th c sĩ Xác định độc lực độ mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn E. coli và Salmonella spp. ph n lập từ bê giai đo n b sữa bị tiêu chảy t i một số trang tr i b sữa. (Ph m Đăng Tuấn 2020) viii 5.3. Sản phẩm ứng dụng: - 01 phác đồ điều trị bệnh tiêu chảy do E. coli và Salmonella trên bê giai đo n b sữa. 5.4. Sản phẩm khác: 01 chuyên đề: Thực tr ng bệnh tiêu chảy ở bê giai đo n b sữa do vi khuẩn E. coli và Salmonella (đã nghiệm thu: Đ t) 01 áo cáo tổng kết 01 poster về đề tài nghiên cứu: Xác định độc lực độ mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn E. coli và Salmonella spp. Trong hội chứng tiêu chảy ở bê giai đo n b sữa và thử nghiệm một số phác đồ điều trị (đã nghiệm thu : Đ t) 6. Các đóng góp, khả năng ứng dụng và phƣơng thức chuyển giao kết quả nghiên cứu Kết quả nghiên cứu đã và đang đƣợc chuyển giao cho các th ý trong địa bàn huyện Đức Trọng tỉnh L m Đồng để tiến hành điều trị bệnh tiêu chảy do E. coli và Salmonella trên bê bị bệnh tiêu chảy. Thừa thiên Huế ngày 20 tháng 8 năm 2021 Cơ quan chủ trì (ký, họ và tên, đóng dấu) Chủ nhiệm đề tài (ký, họ và tên) PGS.TS. Nguyễn Xu n H a ix MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING HUE UNIVERSITY INFORMATION ON STUDY RESULTS RESEARCH PROJECT ASSIGNED BY HUE UNIVERSITY 1. General information of project 1.1. Project title: Determination of antibiotic susceptibility of E. coli and Salmonella isolated from calf with diarrhea syndrome and dairy beef calves and testing some treatment regimens 1.2. Projectcode: DHH2019-02-121 1.3. Coordinator: Assoc. Prof. Dr. Nguyen Xuan Hoa 1.4. Implementing institution: University of Agriculture and Forestry, Hue University 1.5. Implementingduration: From May 2019 to December 2020 2. Study objective (s) Evaluating the situation of diarrhea in dairy beef calves in industrial farms and households’s farms in Vietnam central and determining antibiotic susceptibility of E. coli and Salmonella bacteria and testing some treatment regimens towards diarrhea on lactating calves. 3. Novelty and creativeness of the study This is the first study on diarrhea of dairy beef calves in Vietnam central. 4. Main study results After conducting a survey on the raising of dairy beef calves in 21 households in Ductrong district, Lamdong province, we found that the rate of dairy beef calves suffering from diarrhea was very high (51.25). In particular, the diarrhea rate of calves under 1-month-old was highest (75.61). In the diarrhea feces samples, the average number of E. coli was 271.4 x 106 CFUgram, which was 11.7 times higher than the non diarhea group (231.6x 105 CFUgram). The average number of Salmonella in the diarrhea group was 71.9 x 104CFUgram, which was 59.4 times higher than the non diarrhea group (121x 102 CFUgram). Of the total studied 74 samples, 73 E. coli were isolated strains, and 38 isolated strains Salmonella, which expressed biochemical properties as described. Most E. coli and Salmonella s trains, isolated from diarrhea fecal samples, carried toxin genes encoded intestinal toxin and adhesion factors. Meanwhile, the bacteria isolated from non diarrhea feces were negative for the test toxin genes. Most x strains of E. coli and Salmonella that were positive for the toxin genes expressed high virulence which was lethal to 100 of experimental animals. This demonstrates that most of the genes encoding virulence are phenotyped accordingly. All E. coli isolates showed a highly susceptibility 90 to enrofloxacin, 80 gentamicin and ceftiofur; meanwhile, resistant to amoxicillin, doxycycline, and oxytetracycline. Salmonella isolates showed a highly susceptibility to two antibiotics examined including gentamicin and enrofloxacin; moderate susceptibility to amoxicillin and doxycycline (75) and enrofloxacin (100); gentamicin (87) meanwhile these strains showed completely resistance to oxytetracycline. The treatment results showed that the appropriate antibiotics to treat diarrhea in dairy beef calves in Lam Dong were ceftiofur and enrofloxacin. 5. Project output 5.1. Publication: 01 paper has published on Hue University Science Journal and 01 paper has published on National Veterinary Journal. 5.2. Training and education: 02 Veterinarians and 01 Master thesis 5.3. Applied product: 01 therapy diarrhea caused by E. coli and Salmonella in lactating beef calves. 5.4. Other products: 01 Thematic report 01 Final report 01 Poster 6. Contribution, applicability and delivery method of research results The study results have been applied for the treatment of lactating beef calves’ diarrhea caused by E. coli and Salmonella at dairy farm in Duc Trong of Lam Dong province. Date:Thua Thien Hue, 20th August 2021 Implementation institution (sign, full name and seal) Project coordinator (sign and full name) Nguyen Xuan Hoa Associate Professor, Dr. Veterinary medicine 1 PHẦN MỞ ĐẦU 1. SỰ CẦN THIẾT CỦA ĐỀ TÀI Chăn nu i b ngoài cung cấp thịt sữa sức kéo c n đem l i nguồn thu nhập lớn cho nhiều hộ gia đình nhiều hộ đã thoát nghèo nh chăn nu i b . Song với việc phát triển đàn b ph ng và trị bệnh cũng lu n đƣợc coi trọng. Trong khi một số các bệnh truyền nhiễm nguy hiểm nhƣ: lở mồm long móng tụ huyết trùng nhiệt thán ... đã đƣợc khống chế và tiến dần đến việc thanh toán thì bệnh tiêu chảy chƣa đƣợc quan t m đ ng mực dẫn đến thiệt h i kh ng nhỏ cho ngƣ i chăn nu i b nhất là bê giai đo n b sữa. Hội chứng tiêu chảy ở gia s c nói chung và ở bê nói riêng là một hiện tƣợng bệnh lý rất phức t p g y ra bởi sự tác động tổng hợp của nhiều nguyên nh n. Các tác nh n g y tiêu chảy phổ biến nhƣ: điều kiện ngo i cảnh bất lợi g y ra stress cho cơ thể (chăm sóc quản lý kém th i tiết vận chuyển ... ) và do bản th n con vật có sức đề kháng yếu sẽ t o điều kiện thuận lợi cho việc cho việc x m nhập các vi sinh vật g y bệnh vào vật chủ đặc biệt là các vi sinh vật g y bệnh ở đƣ ng tiêu hoá dẫn tới sự nhiễm khuẩn và lo n khuẩn. Tỉ lệ lƣu hành của từng mầm bệnh và tỉ lệ mắc bệnh có thể khác nhau tùy theo vùng sinh thái phƣơng thức quản lý trang tr i và quy m đàn. Theo Cho Yoon (2014) hội chứng tiêu chảy ở động vật do nhiều nguyên nh n g y ra cho nên việc kiểm soát gặp nhiều khó khăn kém hiệu quả. Tiêu chảy do các tác nh n có thể truyền nhiễm là nguyên nh n quan trọng nhất làm tăng tỉ lệ mắc và tử vong ở bê sữa sơ sinh. Nguyên nh n chính g y tử vong của bê sơ sinh là do mắc các bệnh nhƣ tiêu chảy và viêm phổi (Khan và nnk. 2009 Shimizu Nagatoma 1978). Tỉ lệ tử vong ở bê sơ sinh trong tháng tuổi đầu tiên chiếm khoảng hơn 80 tổng tỉ lệ tử vong ở giai đo n theo mẹ (Jenny vànnk., 1981 – trích dẫn bởi Anwarullah vànnk. 2014). Theo Chí (1995) thì ở bê 70 - 80 tổn thất trong th i kỳ nu i dƣỡng và 80 - 90 trong số đó là hậu quả của bệnh tiêu chảy g y ra. Còn theo h ệ thống theo dõi sức khỏe động vật quốc gia (NAHMS) năm 2007 đối với sữa Hoa Kỳ (USDA. Dairy 2007) đã báo cáo rằng 57 tỉ lệ tử vong của bê là do tiêu chảy và hầu hết các trƣ ng hợp xảy ra ở bê dƣới 1 tháng tuổi. Theo kết quả nghiên cứu của Hur và cộng sự (2013) cũng cho thấy bê giai đo n b sữa dễ bị tiêu chảy và tỉ lệ tử vong có thể đến 53 4. Ngoài các yếu tố m i trƣ ng và quản lý thì các vi khuẩn g y tiêu chảy ở bê gồm có E. coli, Salmonella, C. perfringens, Streptococcus ;các lo i ký sinh trùng virus ... đƣợc xem là những yếu tố g y bệnh phổ biến. Xét về nguyên nh n vi khuẩn học trực khuẩn đƣ ng ruột nhƣ E. coli và Salmonella là tác nh n g y bệnh tiêu chảy phổ biến nhất và tác g y tổn thất kinh tế nghiêm trọng trong chăn nu i (House và nnk., 1978). Năm 2006 thiệt h i kinh tế liên quan bê chết ở Na Uy là khoảng 10 triệu USD nơi sản xuất 280.000 con bê mỗi năm (Østerås 2007). Những thiệt h i kinh tế kh ng 2 chỉ do tử vong mà c n do các chi phí khác bao gồm điều trị chẩn đoán đỡ đẻ can thiệp th y và giảm số lần thay thế đàn cũng nhƣ hiệu quả tăng trƣởng bệnh mãn tính và suy giảm khả năng phát triển sau đó ( azeley 2003). Sử dụng thuốc kháng sinh đƣợc xem nhƣ giải pháp hữu hiệu nhất khi bệnh tiêu chảy do nhiễm khuẩn xảy ra. Tuy nhiên do sử dụng kháng sinh kh ng hợp lý dẫn đến tình tr ng kháng thuốc kháng sinh ngày càng tăng làm giảm hiệu quả trong điều trị thậm chí kh ng có tác dụng nhƣ mong muốn. Nhằm đánh giá tình hình tiêu chảy ở bê sữa nu i ở các trang tr i của tỉnh L m Đồng do vi khuẩn E. coli và Salmonella gây ra và chọn lựa đƣợc kháng sinh phù hợp ch ng t i tiến hành nghiên cứu: Xác định độ mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn E. coli và Salmonella trong hội chứng tiêu chảy ở bê giai đoạn bú sữa và thử nghiệm một số phác đồ điều trị. 2. MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Đánh giá đƣợc tình hình bệnh tiêu chảy trên bê thịt giai đo n b sữa nu i ở các trang tr i n ng hộ ở miền trung Việt Nam; xác định độ mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn E. coli và Salmonella và thử nghiệm một số phác đồ điều trị bệnh tiêu chảy trên bê giai đo n b sữa. 3. ĐỐI TỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU 3.1. Đối tƣợng nghiên cứu Vi khuẩn E. coli và Salmonella ph n lập đƣợc từ các mẫu ph n bê thịt giai đo n b sữa bị tiêu chảy. 3.2. Phạm vi nghiên cứu Mẫu thu thập từ một số trang tr i và n ng hộ chăn nu i bê giai đo n b sữa t i huyện một số tỉnh Nghệ An Hà Tĩnh và L m Đồng (Tuy nhiên do tình hình dịch bệnh dịch tả lợn Ch u Phi và dịch Covid 19 diễn biến phức t p nên t i Nghệ An và Hà Tĩnh năm 2019-2020 kh ng thể triển khai thu mẫu toàn bộ mẫu đƣợc thu t i huyện Đức Trọng tỉnh L m Đồng (đính kèm giải trình ở phụ lục). 3.3. Thời gian thực hiện: từ tháng 1 năm 2019 đến tháng 12 năm 2020. 3 CHƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU 1.1. Tình hình nghiên cứu về E. coli và Salmonella gây tiêu chảy ở bê 1.1.1. Trên thế giới ệnh tiêu chảy ở bê giai đo n b sữa do vi khuẩn E. coli và Salmonella gây ra rất phổ biến ở các tr i chăn nu i b sữa. Vi khuẩn E. coli và Salmonella thƣ ng ký sinh trong ruột già của động vật và nó duy trì một số lƣợng nhất định c n bằng với các hệ vi sinh vật có lợi. Vì vậy khi sức đề kháng của cơ thể giảm do các yếu tố th i tiết khí hậu biến động do tách hoặc nhập đàn thức ăn nƣớc uống dẫn đến số lƣợng E. coli và Salmonella tăng lên đột biến sản sinh độc tố làm rối lo n trao đổi nƣớc và các chất điện giải g y ra tình tr ng tiêu chảy. Nghiên cứu về các độc tố của vi khuẩn E. coli ph n lập từ bê tiêu chảy cho thấy hai lo i độc tố chịu nhiệt và kh ng chịu nhiệt là thành phần chính của các độc tố đƣ ng ruột (Enterotoxin). Vi khuẩn Salmonella có khả năng sản sinh nội độc tố g y tổn h i đến d dày ruột của động vật (Smith 1963). ệnh tiêu chảy do vi khuẩn E. coli sản sinh các độc tố đƣ ng ruột (Enterotoxigenic E. coli ETEC) là bệnh nhiễm khuẩn của bê xảy ra từ những ngày đầu sau sinh. ETEC sản sinh độc tố đƣ ng ruột gi p ch ng phát triển ở ruột và t o ra Enterotoxin (Raybould và nnk. 1987). Nghiên cứu của Janke nnk. (1989) cho thấy tuổi của bê nghé cảm nhiễm độc tố bám dính (Adherencia Enteropathogenic E. coli, AEEC) từ 2 đến 4 tháng tuổi sự cảm nhiễm với AEEC dƣ ng nhƣ là nguyên nh n duy nhất của bệnh tiêu chảy và nguyên nh n tử vong của một số gia s c. Hiện tƣợng xuất huyết đƣ ng ruột kéo theo các tổn thƣơng từng đám nhỏ trên các vết thƣơng lớn lan rộng khắp màng nhầy ruột là do quá trình bám dính của vi khuẩn g y ra. Các đặc điểm sinh hóa đặc biệt của vi khuẩn này là di động và sản sinh enzyme ph n giải urê. Các serotype huyết thanh của ch ng là O5: Các chủng E. coli kh ng điển hình ph n lập từ bê có sản sinh Verotoxin nhƣng kh ng sản sinh độc tố chịu nhiệt và kh ng chịu nhiệt (ST và LT). Otoi Hashimoto (1990), đã nghiên cứu sự cảm nhiễm E. coli có mang kháng nguyên K99 ở bê và kết quả điều trị bằng kháng huyết thanh cho thấy có 11 mẫu E. coli mang K99. Các mẫu E. coli ph n lập đƣợc từ ph n của 50 bê bị tiêu chảy các mẫu này đều có khả năng sản sinh độc tố chịu nhiệt ST nhƣng kh ng sản sinh độc tố kh ng chịu nhiệt LT và có 9 mẫu mang kháng nguyên O9 2 m u có kháng nguyên O8. Nghiên cứu huyết thanh học của 100 gia s c từ 92 trang tr i kết quả cho thấy sau 6-9 tháng có 34100 gia s c có đáp ứng miễn dịch với kháng nguyên K99 với hiệu giá cao gấp 4 lần so với đối chứng. Kết quả nghiên cứu của Janke và nnk. (1989) cho thấy vi khuẩn E. coli g y hội chứng tiêu chảy ở bê chủ yếu đều cƣ tr ở đo n kết tràng ch ng g y ra các tổn thƣơng đặc biệt bao gồm viêm kết tràng xuất huyết ở manh tràng. Có đến 90 bê cảm nhiễm với vi khuẩn E. coli là sơ sinh tuổi trung bình bị cảm nhiễm là 11 8 ngày sau sinh khi đó xuất hiện hiện rối lo n trao đổi nƣớc và các chất điện giải g y ra tiêu chảy. 4 1.1.2. Tại Việt Nam Trên bê nghé có tới 70 - 80 tổn thất do bệnh tật là trong th i kỳ nu i dƣỡng bằng sữa đầu và trong đó 80 - 90 là do tiêu chảy g y ra (Chí 1995). Sửu (2005) đã nghiên cứu t i các tỉnh miền n i phía ắc cho thấy có sự sai khác rõ rệt về số lƣợng vi khuẩn E. coli ở bê nghé tiêu chảy so với bê nghé kh ng tiêu chảy. Nghiên cứu về vai tr của Salmonella và E. coli trong hội chứng tiêu chảy của b bê cho thấy E. coli và Salmonella bội nhiễm với tỉ lệ cao số lƣợng E. coli tăng gấp 3 lần Salmonella tăng 1 98 lần so với những con kh ng bị tiêu chảy (Quang 2004). Nghiên cứu trên bê nu i t i các tỉnh miền n i phía ắc khi bị tiêu chảy có số lƣợng E. coli là 17,79 x 106 CFUg ph n cao hơn so với 9 84 x 106 CFUg ph n ở bê kh ng tiêu chảy (Sửu 2005). Trong khi đó Hiên và nnk. (2001) nghiên cứu sự biến động số lƣợng vi khuẩn E. coli trong ph n bê tiêu chảy cho thấy số lƣợng E. coli tăng 279 so với ph n bê bình thƣ ng. Quang và nnk. (2007) cho rằng khi bê nghé bị tiêu chảy thì tỉ lệ ph n lập và số lƣợng Salmonella cũng cao hơn 1 87 lần so với ph n bình thƣ ng trong đó tỉ lệ ph n lập 72 66 so với 47 11 số lƣợng vi khuẩngram ph n 2,80 x 106 CFUgam so với 1 50 x 106 CFUgram. Nghiên cứu của Thìn và nnk.(2009) cho biết khi kiểm tra 55 mẫu Salmonella với yếu tố x m nhiễm (InvA) và độc tố đƣ ng ruột (Stn) có tỉ lệ lần lƣợt là InvA 2555 chủng chiếm tỉ lệ 45,45; Stn 1955 chủng chiếm tỉ lệ 34,55. Kiểm tra độc lực của Salmonella cho thấy 810 mẫu có khả năng giết chết 100 chuột thí nghiệm 210 mẫu giết chết 50 chuột thí nghiệm th i gian chết chuột là từ 12 đến 36 h. Hƣơng và nnk. (2008) đã ph n lập vi khuẩn từ mẫu ph n bê sữa bị tiêu chảy và bê bình thƣ ng t i thành phố Hồ Chí Minh và Đồng Nai cho thấy tất cả 103 mẫu ph n bê đƣợc xét nghiệm đều nhiễm E. coli. Tuyên (1995), tỉ lệ nhiễm Salmonella trong hội chứng tiêu chảy ở bê nghé t i các tỉnh phía ắc là 61 95. Khi nghiên cứu t i các tỉnh Nam Trung ộ Quang (2004) cho rằng 40 54 b bê tiêu chảy là do Salmonella. Ng n (2008) đã ph n lập đƣợc Salmonella trong 154251 (61 35) mẫu ph n bê tiêu chảy. Nghiên cứu của Quang và nnk. (2006) cho thấy khi bê bị tiêu chảy thì số lƣợng và tỉ lệ các mẫu vi khuẩn E. coli, Salmonella ph n lập đƣợc mang các yếu tố g y bệnh và sản sinh độc tố cao hơn so với bê kh ng bị tiêu chảy. Điều này khẳng định vi khuẩn E. coli và Salmonella có vai tr đặc biệt quan trọng trong hội chứng tiêu chảy ở bê. 1.2. Những nghiên cứu về hội chứng tiêu chảy Hội chứng tiêu chảy bê là một tình tr ng bệnh lý phổ biến đã và đang g y thiệt h i lớn cho ngành chăn nu i. Hội chứng tiêu chảy g y chết với tỉ lệ thấp nhƣng tác h i của nó làm biến đổi cấu tr c niêm m c ruột non dẫn đến giảm khả năng hấp thu thức ăn làm cho bê c i cọc tăng tiêu tốn thức ăn1 kg tăng trọng. Nguy hiểm hơn nguyên nh n của hội chứng tiêu chảy rất phức t p đã g y ra sự nhầm lẫn trong chẩn đoán và điều trị.Qua nhiều nghiên cứu cho thấy hội chứng tiêu chảy là một hiện tƣợng bệnh lý 5 ở đƣ ng tiêu hóa có liên quan đến rất nhiều các yếu tố có yếu tố là nguyên nh n nguyên phát có yếu tố là nguyên nh n thứ phát. Xuất phát từ nguyên nh n hay triệu chứng l m sàng căn cứ vào đặc điểm th i gian hoặc tính chất của bệnh mà có các tên gọi khác nhau: Hội chứng tiêu chảy bệnh tiêu chảy kh ng nhiễm trùng bệnh tiêu chảy ở gia s c sơ sinh bệnh ph n sữa. Các nghiên cứu bệnh lý tiêu chảy ở gia s c cho thấy biểu hiện bệnh lý chủ yếu là mất nƣớc và chất điện giải cuối cùng con vật bị tr ng độc kiệt sức và chết. Vì vậy trong điều trị hội chứng tiêu chảy việc bổ sung nƣớc và chất điện giải là yếu tố cần thiết. Đối với gia s c non tỉ lệ chết do hội chứng tiêu chảy tƣơng đối cao. Theo Chí (1995) hội chứng tiêu chảy làm cho bê nghé giảm khả năng sinh trƣởng c i cọc tỉ lệ tử vong cao. Theo Lƣơng (1993) Thịnh (1985) Chí (1995) cho biết lợn bị tiêu chảy thƣ ng mất nƣớc mất điện giải và kiệt sức. Những gia s c khỏi bệnh thƣ ng c i cọc thiếu máu chậm lớn tỉ lệ nu i sống thấp.Đó cũng là nguyên nh n làm cho hiệu quả chăn nu i kh ng cao. Do điều kiện khí hậu nƣớc ta thay đổi phức t p hội chứng tiêu chảy xảy ra quanh năm đặc biệt khi th i tiết thay đổi đột ngột l nh ẩm độ ẩm kh ng khí cao. Theo T m (1987); Ninh (1993); T o và nnk. (1993) ở nƣớc ta tiêu chảy trên gia s c xảy ra quanh năm đặc biệt vào vụ đ ng xu n khi th i tiết thay đổi đột ngột và th i điểm chuyển mùa quanh năm. 1.3. Nguyên nhân gây ra hội chứng tiêu chảy Trong lịch sử nghiên cứu hội chứng tiêu chảy nhiều tác giả đã đƣa ra kết quả cho thấy nguyên nh n g y hội chứng tiêu chảy rất phức t p và thậm chí c n khác nhau theo th i gian địa điểm và giai đo n phát triển của con vật. Tuy nhiên hội chứng tiêu chảy là một bệnh lý ở đƣ ng tiêu hóa liên quan đến nhiều yếu tố: Có yếu tố là nguyên n h n nguyên phát có yếu tố là nguyên nh n thứ phát. Vì vậy việc ph n biệt giữa các nguyên nh n g y ra tiêu chảy là rất khó khăn (Th ch 1996). Các nhà khoa học đã tổng hợp những nguyên nh n chính g y ra hội chứng tiêu chảy ở gia s c nhƣ sau: 1.3.1. Do vi sinh vật 1.3.1.1. Vi khuẩn Nguyên nh n tiêu chảy do vi sinh vật là một trong những nguyên nh n phổ biến đã đƣợc nhiều nhà nghiên cứu chứng minh. Trong đƣ ng ruột của gia s c có rất nhiều lo i vi khuẩn nhƣ: E. coli, Salmonella, Shigella, … khu tr ở d ng một hệ sinh thái. Hệ sinh thái vi sinh vật đƣ ng ruột ở tr ng thái c n bằng động theo hƣớng có lợi cho cơ thể vật chủ. Ho t động sinh lý của gia s c chỉ diễn ra bình thƣ ng khi mà hệ sinh thái đƣ ng ruột lu n ở tr ng thái c n bằng. Dƣới tác động của các yếu tố g y bệnh tr ng thái c n bằng bị phá vỡ dẫn đến lo n khuẩn và hậu quả là gia s c bị tiêu chảy. Nhiều tác giả nghiên cứu về hội chứng tiêu chảy đã chứng minh: Khi gặp điều kiện thuận lợi những vi khuẩn thƣ ng gặp ở đƣ ng tiêu hóa sẽ tăng độc tính phát triển với số lƣợng lớn trở thành có h i và g y bệnh. 6 Ngữ và nnk. (1979); Quang (2005) cho rằng do một số tác nh n nào đó tr ng thái c n bằng của hệ sinh thái đƣ ng ruột bị phá vỡ tất cả hoặc chỉ một lo i nào đó sinh sản lên quá nhiều sẽ sinh ra hiện tƣợng lo n khuẩn. Lo n khuẩn đƣ ng ruột là nguyên nh n chủ yếu g y ra bệnh đƣ ng tiêu hóa và đặc biệt là hội chứng tiêu chảy. Nghiên cứu của V n (2007) cho thấy tr u bị tiêu chảy có tỉ lệ nhiễm Salmonella cao hơn so với tr u bình thƣ ng tƣơng ứng với tỉ lệ là 27,50 và 18,87. Theo Đ t và nnk. (1996), E. coli chiếm tỉ lệ cao nhất (45 6) trong số các vi khuẩn đƣ ng ruột g y tiêu chảy. Trong khi vi khuẩn yếm khí Cl. perfringens g y bệnh khi có điều kiện thuận lợi và khi nó trở thành vai tr chính. Nam và nnk. (1997); Archie (2000) khẳng định rằng vi khuẩn đƣ ng ruột có vai tr kh ng thể thiếu đƣợc trong hội chứng tiêu chảy. Thành phần vi khuẩn trong ph n bê nghé bị tiêu chảy tập trung có 4 lo i chính: E. coli, Salmonella, Shigella, Klebsiella trong đó chủ yếu là E. coli và Salmonella có tỉ lệ nhiễm tƣơng ứng là (72 48 và 51 32). Nghiên cứu của Đ t T m (1995) cho thấy tr u nghé khỏe m nh có tỉ lệ nhiễm Salmonella từ 23 3- 30 07 nhƣng trong trƣ ng hợp tiêu chảy tỉ lệ này tăng lên 37 5 (ở tr u) và 71 43 (ở nghé). Quang (2004) nghiên cứu vai tr của Salmonella và E. coli trong hội chứng tiêu chảy của b bê cho thấy E. coli và Salmonella bội nhiễm với tỉ lệ cao số lƣợng E. coli tăng gấp 3 lần Salmonella tăng 1 98 lần. Sửu (2005) nghiên cứu ở ba tỉnh miền n i phía ắc đã kết luận: Vi khuẩn E. coli, Salmonella và Cl. perfringens thấy ở bê nghé bị tiêu chảy cao hơn bê nghé ở tr ng thái bình thƣ ng. Minh Ph (1999) nghiên cứu về E. coli và Salmonella g y tiêu chảy trên lợn cho biết tỉ lệ phát hiện E. coli độc trong ph n là 80 - 90 trong số mẫu xét nghiệm. Nhƣ vậy E. coli, Salmonella, Clostridium perfringens là những vi khuẩn thƣ ng gặp trong các lo i vi khuẩn g y tiêu chảy cho gia s c nói chung và bê nghé nói riêng. 1.3.1.2. Virus Virus cũng là một trong những nguyên nh n g y ra hội chứng tiêu chảy ở gia s c. Đã có nhiều nghiên cứu kết luận một số virus nhƣ: Rotavirus, TGE, Enterovirus, Parvovirus, Adenovirus cũng có vai tr nhất định g y ra hội chứng tiêu chảy. Virus là tổn thƣơng niêm m c đƣ ng tiêu hóa suy giảm sức đề kháng của cơ thể và g y tiêu chảy ở thể cấp tính. Virus TGE có sự liên hệ đặc biệt với các tế bào ruột non. Khi x m nhập vào tế bào và phá hủy tế bào trong v ng đến 5 tiếng. Trong đó sữa kh ng đƣợc tiêu hóa nƣớc kh ng đƣợc hấp thu dẫn đến tiêu chảy mất dịch chất điện giải và con vật có thể bị chết. Rotavirus thƣ ng g y ra hội chứng tiêu chảy cho lợn b và ngƣ i. Lợn con từ 1 đến 6 tuần tuổi thƣ ng hay mắc với các biểu hiện l m sàng kém ăn bỏ ăn tiêu chảy nhiều lần trong ngày gầy s t do mất nƣớc và nằm bẹp ở một chỗ. Giai đo n cuối con vật biểu hiện thiếu máu trụy tim m ch và chết. Lecce và nnk.(1976) Nilson (1984) đã xác định vai tr của Rotavirus trong hội chứng tiêu hóa ở lợn. 7 1.3.1.3. Ký sinh trùng Ký sinh trùng ký sinh trong đƣ ng tiêu hóa là một trong những nguyên nh n g y ra hội chứng tiêu chảy.Ngoài tác động lấy đi chất dinh dƣỡng của vật chủ ký sinh trùng c n làm tổn thƣơng niêm m c đƣ ng tiêu hóa. Đ y là cơ hội cho các vi sinh vật có h i g y nhiễm trùng. Theo Th ch (1998) gia s c bị mắc bệnh do giun tr n g y ra có biểu hiện gầy yếu ăn uống kém da và niêm m c nhợt nh t do thiếu máu tiêu chảy ở mức độ trung bình kh ng liên tục. Nguyễn Thị Kim Lan và nnk.(2006) các lo i ký sinh trùng g y tiêu chảy cho tr u b thƣ ng gặp là Nematode, Strongyloides, Ascaris suum, Fasciola hepatica . Qua việc nghiên cứu tình hình nhiễm giun sán của tr u b : Theo kết quả của Lăng và nnk. (2006) có 16 lo i giun ký sinh trong đƣ ng tiêu hóa của tr u b ở Đắc Lắc trong đó có một 1 lo i ký sinh ở gan 11 lo i ở d cỏ 1 ở d m i khế 2 lo i ở ruột non và 1 lo i ở ruột già. Lo i g y tác h i nặng nhất là Fasciola sp. ký sinh ở ống dẫn mật làm rối lo n chức năng sinh lý của gan làm cho gia s c gầy yếu rối lo n tiêu hóa. Giun đũa Toxocara vitulorum thƣ ng g y tiêu chảy ph n trắng cho bê nghé non từ 1 đến 3 tháng tuổi. Sán lá gan Fasciola gigantica trong quá trình ký sinh tiết độc tố g y tiêu chảy cho bê non. Ký sinh trùng thƣ ng là nguyên nh n tiền phát cho nhiễm trùng và tiêu chảy nặng ở bê (Lăng T o 2002). Theo Năm (2004) lợn con bê nghé nhiễm cầu trùng thƣ ng đƣợc chẩn đoán không chính xác nên 30- 50 gia s c non bị chết số c n l i c i cọc và chậm lớn.Lăng T o (2002) cho biết: Giun đũa Ascaris suum trƣởng thành cƣ tr ở ruột non g y viêm niêm m c ruột g y loét niêm m c làm gia s c đau bụng và tiêu chảy. 1.3.2. Do nguyên nhân khác 1.3.2.1. Thời tiết khí hậu Ngo i cảnh là yếu tố quan trọng ảnh hƣởng đến sức đề kháng của cơ thể động vật nói chung và đối với vật nu i nói riêng đặc biệt là gia s c non. Theo nghiên cứu Phƣớc (1978); Đ t (1996) nƣớc ta nằm trong vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa th i tiết đƣợc chia làm 4 mùa rõ rệt trong mỗi mùa đều có sự biến đổi th i tiết nhiệt độ độ ẩm ánh sáng … và các thay đổi về chăm sóc nu i dƣỡng. Những sự thay đổi đó là điều kiện thuận lợi cho các mầm bệnh g y h i phát triển g y chết nhiều gia s c trong đó phổ biến là các bệnh về đƣ ng tiêu hóa. Trong các yếu tố th i tiết thì sự thay đổi về nhiệt độ và ẩm độ cao là hai yếu tố g y ảnh hƣởng nhiều nhất tới sức khỏe đàn vật nu i. L nh và ẩm g y rối lo n hệ thống điều h a th n nhiệt ảnh hƣởng đến quá trình trao đổi chất làm giảm sức đề kháng khi đó hệ vi sinh vật đƣ ng tiêu hóa có điều kiện thuận lợi tăng số lƣợng độc lực và g y bệnh. Các tác giả Niconxki (1986); Ninh (1993); Nam và nnk. (1997) khi gia s c chịu l nh ẩm kéo dài hệ miễn dịch suy giảm do đó gia s c dễ bị vi khuẩn cƣ ng độc g y bệnh. Theo Dung (2004) các yếu tố nóng l nh mƣa nắng hanh ẩm thay đổi bất 8 thƣ ng và điều kiện chăm sóc nu i dƣỡng ảnh hƣởng trực tiếp đến cơ thể lợn nhất là cơ thể lợn con chƣa phát triển hoàn chỉnh các phản ứng thích nghi c n yếu. 1.3.2.2. Kỹ thuật chăm sóc nuôi dưỡng Chăm sóc nu i dƣỡng có vai tr hết sức quan trọng trong chăn nu i. Việc thực hiện đ ng quy trình chăm sóc nu i dƣỡng sẽ đem l i sức khỏe và sự tăng trƣởng cho gia s c. Khi chất lƣợng thức ăn thấp kém chuồng tr i kh ng đảm bảo kỹ thuật nu i chăm sóc kh ng phù hợp là nguyên nh n làm giảm sức đề kháng gia s c dễ mắc bệnh. Theo nghiên cứu Thịnh (1985); Nam và nnk. (1997) khẩu phần ăn cho vật nu i kh ng thích hợp tr ng thái thức ăn kh ng tốt thức ăn kém chất lƣợng nhƣ: Mốc thối và nhiễm các t p chất các vi sinh vật có h i dẫn đến rối lo n tiêu hóa kèm theo viêm ruột tiêu chảy ở gia s c. T hay đổi thức ăn đột ngột đặc biệt là tăng hàm lƣợng đ m và chất béo thƣ ng làm cho bê nghé rối lo n tiêu hóa dẫn đến viêm ruột thức ăn thiếu các chất khoáng vitamin cần thiết cho cơ thể gia s c đồng th i phƣơng thức cho ăn kh ng phù hợp sẽ làm giảm sức đề kháng của gia s c và t o cơ hội cho các vi khuẩn g y hội chứng tiêu chảy (Lăng T o 2002). Nhƣ vậy có thể nói hội chứng tiêu chảy của bê nghé là một hội chứng bệnh lý rất phức t p ở đƣ ng tiêu hóa do nhiều nguyên nh n nhiều yếu tố tác động. Trong ph m vi nghiên cứu của đề tài ch ng t i xin trình bày vai tr của vi khuẩn E. coli, Salmonella g y bệnh tiêu chảy trên đàn bê sữa. 1.4. Vi khuẩn E. coli và Salmonella 1.4.1. Vi khuẩn E. coli Vi khuẩn E. coli đƣợc Theodor Escherich ph n lập năm 1885 từ ph n trẻ em. E. coli thƣ ng xuất hiện rất sớm trong hệ tiêu hóa của ngƣ i và động vật sau khi đƣợc sinh ra và tồn t i đến khi con vật chết. Trong đƣ ng ruột động vật E. coli chiếm khoáng 80 tổng số các vi khuẩn hiếu khí. Các chủng vi khuẩn E. coli thuộc nhiều serotype khác nhau. Cho đến nay đã phát hiện đƣợc 279 serotype trong đó có 25 serotype có độc lực và có vai tr quan trọng trong một số bệnh của gia s c. 1.4.1.1. Đặc tính hình thái Vi khuẩn E. coli thuộc họ Enterobacteriaceae, chi Escherichia, loài coli là trực khuẩn hình gậy ngắn kích thƣớc 2 – 3 μm x 0 5 μm hai đầu tr n. Trong cơ thể động vật vi khuẩn có hình cầu trực khuẩn đứng riêng lẻ đ i khi xếp thành chuỗi ngắn. Trong m i trƣ ng nu i cấy có khi quan sát thấy những trực khuẩn dài 4 – 8 μm và thƣ ng gặp trong canh khuẩn già. Phần lớn vi khuẩn E. coli có khả năng di động do có l ng roi và l ng xung quanh th n. Vi khuẩn bắt màu Gram m có thể bắt màu đều hoặc sẫm ở hai đầu kh ng sinh nha bào và có thể có giáp m (Sơn 2002; Thanh và nnk., 1997). 9 1.4.1.2. Đặc tính nuôi cấy Vi khuẩn E. coli là trực khuẩn hiếu khí và yếm khí tùy tiện có thể sinh trƣởng ở phổ nhiệt độ khá rộng (5 - 400C) nhiệt độ thích hợp là 370 C và cũng thích hợp với pH từ 7 2 - 7,4. Vi khuẩn E. coli dễ dàng phát triển đƣợc trên m i trƣ ng nu i cấy th ng thƣ ng một số chủng có thể phát triển ở m i trƣ ng tổng hợp nên ngƣ i ta chọn ch ng để nghiên cứu về sinh vật học. Để ph n lập thƣ ng nu i cấy khởi đầu trên m i trƣ ng tuyển lựa nhƣ m i trƣ ng Istrati MacConkey Endo desoxycholate,... Trên m i trƣ ng th ch thƣ ng ở 35 – 37 oC sau 12 - 18 gi hình thành khuẩn l c tr n lồi kh ng trong suốt bóng láng.Nu i l u khuẩn l c có màu n u nh t và mọc rộng ra có thể quan sát thấy cả khuẩn l c d ng R (Rough) và d ng M (Mucous). Trên m i trƣ ng th ch máu sau 24 gi nu i cấy ở 37o C hình thành khuẩn l c to ƣớt lồi viền kh ng gọn màu sáng đa số chủng kh ng g y dung huyết nhƣng cũng có chủng dung huyết. Trên m i trƣ ng nƣớc thịt sau 24 gi nu i cấy ở 37oC vi khuẩn phát triển rất nhanh m i trƣ ng đục có cặn màu tro trắng lắng xuống đ i khi có váng xám nh t trên mặt m i trƣ ng. Trên m i trƣ ng MacConkey sau 24 gi nu i cấy ở 37oC khuẩn l c có màu cánh sen tr n nhỏ hơi lồi kh ng nhầy rìa gọn kh ng làm chuyển màu m i trƣ ng (Thanh và nnk., 1997). Trên m i trƣ ng EM (Eosin Methylene lue):Sau 24 gi nu i cấy ở 37oC, vi khuẩn hình thành những khuẩn l c màu tím đen có ánh kim. Trên m i trƣ ng th ch SS: E. coli phát triển thành các khuẩn l c có màu đỏ. Trên m i trƣ ng th ch rilliant Green Agar: Sau 24 gi nu i cấy ở 37oC, vi khuẩn E. coli hình thành khuẩn l c d ng S (Smooth) màu vàng chanh. Trên m i trƣ ng Endo: Sau 24 gi nu i cấy ở 37o C vi khuẩn hình thành khuẩn l c màu đỏ mận chín có hoặc kh ng có ánh kim. 1.4.1.3. Đặc tính sinh hóa E. coli có phản ứng indol dƣơng tính methyl red (MR) dƣơng tính Voges Proskauer (VP) m tính phản ứng sử dụng citrate m tính phản ứng sinh H2 S âm tính, di động dƣơng tính,lysine decarboxylase dƣơng tính lên men lactose và mannitol (Sơn 2002). Phản ứng lên men đƣ ng: Vi khuẩn E. coli lên men sinh hơi các lo i đƣ ng lactose, fructose, glucose, levulose, galactose, xylose, mannitol . Hầu hết các chủng vi khuẩn E. coli đều lên men đƣ ng lactose nhanh và sinh hơi. 10 Bảng 1.1. Đặc tính sinh hóa của vi khuẩn E. coli. (TCVN 8400-16:2011) Phản ứng sinh hóa Biểu hiện Lactose + Indol + Urê - Sucrose + H2S - Mannitol + Sinh indol + Đỏ methyl + Voges Proskauer - Khả năng sử dụng citrat - “Nguồn: Tiêu chuẩn Việt Nam 8400-16: 2011”. 1.4.1.4. Sức đề kháng Cũng nhƣ các lo i vi khuẩn kh ng sinh nha bào khác E. coli kh ng chịu đƣợc nhiệt độ đun 50oC trong 1 gi 60oC trong 30 phút, và 100o C vi khuẩn chết ngay. Các chất sát trùng th ng thƣ ng: axit phenic, biclorua thủy ng n formol (0 2) diệt vi khuẩn sau 5 ph t. Ở m i trƣ ng bên ngoài các chủng E. coli độc tố có thể tồn t i đến 4 tháng.Vi khuẩn E. coli có khả năng đề kháng với sự sấy kh và hun khói. Trong đất và nƣớc E. coli sống đƣợc khoảng vài tháng. Ch ng có độ nh y cảm cao với nhiều lo i kháng sinh (Đ t và nnk. 1995). 1.4.1.5. Cấu trúc kháng nguyên của vi khuẩn E. coli Cấu tr c kháng nguyên của vi khuẩn E. coli g y bệnh trên gia s c rất đa d ng và phức t p với 4 nhóm kháng nguyên chính là các kháng nguyên O (kháng nguyên th n) chịu nhiệt kháng nguyên H (kháng nguyên l ng) kh ng chịu nhiệt kháng nguyên K (kháng nguyên giáp m ) và kháng nguyên F (kháng nguyên bám dính) chịu nhiệt ở mức độ trung gian. Sự đa d ng về tính kháng nguyên này g y rất nhiều khó khăn cho c ng tác ph ng chống bệnh trên gia s c (Sơn 2002). 11 Kháng nguyên O (xuất phát từ chữ Ohne Hauch - kh ng có màng hơi) là các hợp chất lipopolysaccharide có trong thành phần vách tế bào là chất g y sốt rất độc đối với động vật chịu nhiệt (100 o C hơn 2 gi ) kh ng bị ethanol 50 phá hủy nhƣng bị formol 0 5 làm biến tính. Các kháng nguyên th n đều nằm trên bề mặt nên có thể tiếp x c với hệ thống miễn dịch của cơ thể động vật trừ một số trƣ ng hợp bị kháng nguyên bề mặt che lấp. Khi trộn kháng nguyên th n với kháng thể tƣơng ứng thì xuất h iện phản ứng ngƣng kết gọi là ngƣng kết O: Th n tế bào vi khuẩn dính với nhau hình thành những h t nhỏ lắc rất khó tan huyền dịch vi khuẩn trong. Kháng nguyên H (xuất phát từ chữ Hauch - màng hơi) là những ph n tử protein flagellin gần giống myosin trong cơ của động vật kh ng chịu nhiệt dễ bị ethanol 50 và enzyme proteinase phá hủy nhƣng bảo tồn trong formol 0 5. Khi gặp kháng thể tƣơng ứng kháng nguyên H hình thành ngƣng kết gọi là phản ứng lên b ng do các tế bào vi khuẩn dính nhau gián tiếp qua các l ng roi nên hình thành các khối nhỏ kh ng bền dễ vỡ khi lắc. Kháng nguyên K (xuất phát từ chữ Kapsule - vỏ bọc) là kháng nguyên bao bọc th n vi khuẩn. Tuy gọi là kháng nguyên vỏ bọc nhƣng về mặt hình thái học l i có nguồn gốc từ những hợp chất có trên bề mặt tế bào chứ kh ng phải trong thành phần của vỏ nhầy. Điều đáng ch ý là những kháng nguyên này ức chế phản ứng ngƣng kết O rất m nh vì vậy khi thí nghiệm với các kháng thể O phải rất lƣu ý. Hiện nay ngƣ i ta phát hiện đƣợc rằng bản chất của nhiều kháng nguyên K là các sợi l ng nhung (hay Fimbria) có thuộc tính gi p vi khuẩn bám dính nên ngƣ i ta gọi các kháng nguyên nhóm này là kháng nguyên F (F antigen từ chữ Fimbria - lông nhung), là kháng nguyên bám dính hay yếu tố bám dính (Adhesin) vì vậy xuất hiện các ký hiệu F1 F2 … (Sơn 2013). Kháng nguyên F (Kháng nguyên Fimbriae - kháng nguyên bám dính): Hầu hết các chủng E. coli g y bệnh đều sản sinh ra một hoặc nhiều kháng nguyên bám dính. Các chủng kh ng g y bệnh thì kh ng có kháng nguyên bám dính. Kháng nguyên bám dính gi p vi khuẩn bám vào các thụ thể đặc hiệu trên bề mặt tế bào biểu m ruột và trên lớp màng nhầy để x m nhập và g y bệnh đồng th i chống l i khả năng đào thải vi khuẩn của nhu động ruột. Một số lo i kháng nguyên bám dính của vi khuẩn E. coli thuộc nhóm ETEC (EnterotoxigenicE. coli) g y bệnh chủ yếu cho lợn là F4 F18 và F41 (Carter và nnk.,1995). Thìn và nnk. (2011) cũng đã tách chiết thành c ng kháng nguyên bám dính F4 F18 từ mẫu vi khuẩn E. coli GIS 26 và F10786 bằng phƣơng pháp phá vỡ cơ học kết hợp với ly t m và kết tủa. Tác giả cho thấy nồng độ kháng nguyên sau chiết tách đ t 0 68 mgml (kháng nguyên F4) và 0 46 mgml (kháng nguyên F18). Điện di sản phẩm trên th ch SDS - polyacrylamide cho thấy chỉ có 1 v ch với trọng lƣợng ph n tử 26 kDa đối với kháng nguyên F4 và 1 v ch với 15 kDa đối với kháng nguyên F18. 12 1.4.1.6. Các yếu tố gây bệnh của vi khuẩn E. coli Các nh n tố g y bệnh ở vi khuẩn họ này gồm có tính kết bám (adhesiveness) hay bám dính vào niêm m c ký chủ khả năng x m nhập (invasiveness) khả năng sản sinh các độc tố ruột độc tố g y chết khả năng dung huyết khả năng kháng khuẩn. Những đặc tính này hoặc bị chi phối bởi các gen trên nhiễm sắc thể vi khuẩn hoặc bởi các plasmid và thực khuẩn thể (bacteriophage). Các chủng vi khuẩn E. coli không có các yếu tố trên thì kh ng có khả năng g y bệnh. Dựa vào các yếu tố g y bệnh nói trên ngƣ i ta đã ph n lo i vi khuẩn E. coli thành các lo i sau (Sơn 2006). E. coli g y bệnh nguyên đƣ ng ruột (enteropathogenic E. coli - EPEC) thuộc vào một nhóm huyết thanh học riêng biệt có tính kết bám (bám dính). E. coli x m lấn đƣ ng ruột (enteroinvasive E. coli - EIEC) có khả năng x m nhập đƣ ng ruột do plasmid chi phối. E. coli độc tố nguyên đƣ ng ruột (enterotoxigenic E. coli - ETEC) có năng lực hình thành các kháng nguyên l ng F2 (tên cũ CFAI) F3 (CFAII) F4 (K88) F5 (K99) F6 (987P) và các độc tố ruột (enterotoxin) do plasmid chi phối. E. coli sinh độc tố tế bào vero (verocytotoxin - producing E. coli - VTEC) hay E. coli xuất huyết ruột (enterohemorrhagic E. coli - EHEC) có năng lực sản sinh độc tố vero g y độc tế bào do bacteriophage chi phối. Tất cả các vi khuẩn trên đều g y bệnh cục bộ. Ngoài ra đ i khi E. coli xâm nhập kết bám và phát bệnh ở các cơ quan khác nhau ngoài đƣ ng ruột (Sơn 2006). Trong đó các chủng vi khuẩn thuộc nhóm ETEC và VTEC thƣ ng g y bệnh tiêu chảy cho lợn con sơ sinh và lợn sau cai sữa (Fairbrother, 1992). ● Yếu tố bám dính của E. coli Là một trong những yếu tố quan trọng của vi khuẩn đƣ ng ruột gi p vi khuẩn bám đƣợc vào tế bào vật chủ yếu tố bám dính c n gọi là kháng nguyên bám dính. Khi vi khuẩn cƣ tr trong đƣ ng tiêu hóa trong quá trình di động xảy ra hiện tƣợng tiếp x c giữa vi khuẩn và tế bào nhung mao ruột. Sự tiếp x c này là tình c và ngẫu nhiên nếu gặp điều kiện thuận lợi trên bề mặt tế bào niêm m c ruột thì sự tiếp x c này sẽ tăng tính bền vững và vi khuẩn sẽ ở l i l u trong lớp nhầy. Tiếp theo là sự tiếp x c và sự hấp phụ của vi khuẩn lên bề mặt niêm m c ruột và yếu tố bám dính (Fimbriae type I) của vi khuẩn sẽ bám vào điểm tiếp nhận của tế bào nhung mao. Quá trình bám dính của vi khuẩn lên tế bào nhung mao đƣợc thực hiện có sự phù hợp giữa cấu tr c ph n tử điểm tiếp cận (Nagy Fekete, 1999). Trong trƣ ng hợp kh ng thể bám dính vi khuẩn sẽ bị bài khứ khỏi tổ chức bởi lớp dày niêm dịch và thể dịch. Sau khi bám dính vi khuẩn hình thành khuẩn l c nhỏ và bắt đầu giai đo n tiếp theo của quá trình cảm nhiễm. Trên bề mặt của tế bào cũng 13 nhƣ bề mặt vi khuẩn có những ph n tử bề mặt phản ứng tƣơng bổ một cách đặc hiệu (Sơn 2006). Các chủng ETEC đều có mang 1 hoặc nhiều yếu tố bám dính nhƣ F4(K88), F5(K99), F6 (K987p), F17, F18, F41, F42 và F165. ● Yếu tố xâm nhập của E. coli Là một khái niệm dùng để chỉ quá trình chƣa đƣợc xác định một cách rõ ràng mà nh đó vi khuẩn E. coli qua đƣợc hàng rào bảo vệ của lớp màng nhầy (mucosa) trên bề mặt niêm m c để x m nhập vào tế bào biểu m (Epithel) đồng th i sinh sản và phát triển trong lớp tế bào này. Trong khi đó những vi khuẩn khác kh ng có khả năng x m nhập khôn g thể qua đƣợc hàng rào bảo vệ của lớp màng nhầy hoặc khi qua đƣợc hàng rào này sẽ bị giữ l i bởi tế bào đ i thực bào của tổ chức h niêm m c (Giannella, 1976). Tính x m nhập đƣợc chi phối bởi một gen duy nhất của nhiễm sắc thể và độc lập với những gen cần thiết cho việc phát huy tính g y bệnh của vi khuẩn do plasmid chi phối (Sơn 2006). ● Yếu tố dung huyết (Hly) của E. coli Vi khuẩn đƣ ng ruột phát triển trong tổ chức cơ quan sắt đƣợc cung cấp cho sự dinh dƣỡng phụ thuộc vào chất Siderophore do vi khuẩn sản sinh ra chất này có khả năng ph n huỷ sắt liên kết trong tổ chức vật chủ th ng qua sự phá vỡ hồng cầu giải phóng sắt dƣới d ng hợp chất HEM để vi khuẩn sử dụng. Sự ph n huỷ hồng cầu chủ yếu vẫn là do hemolysis của vi khuẩn đảm nhiệm vì vậy việc sản sinh ra hemolysis g y dung huyết của vi khuẩn có thể coi là một yếu tố độc lực của vi khuẩn. Có bốn kiểu dung huyết của E. coli (α- haemolysin β- haemolysin γ- haemolysin và €- haemolysin ) nhƣng quan trọng nhất là kiểu α và β. Kiểu β phá vỡ hồng cầu hoàn toàn vì vậy hình thành một v ng sáng xung quanh khuẩn l c trong suốt và rộng. Kiểu α phá vỡ hồng cầu kh ng hoàn toàn do đó v ng dung huyết m nh t hơn (Quinn, 1994 ). Một số tài liệu đã chứng minh đƣợc rằng mức độ g y chết của hemolysin trên chuột trên ph i trứng g y ho i tử trên da thỏ trên tế bào sơ ph i gà tế bào thận chuột. Khối lƣợng ph n tử của hemolysin khoảng 300.000 Dalton đƣợc cấu t o chủ yếu là protein và c n có cả hydratcacbon (Cavalieri Snyder 1982). Quá trình tổng hợp và giải phóng hemolyzin phải tiến hành đồng th i hai quá trình: Quá trình thứ nhất: Giải phóng hemolyzin đã tổng hợp qua màng rồi tập hợp thành những t i nhỏ trong khoảng trống của màng cytoplasm ngo i vi quá trình này cần năng lƣợng. Quá trình thứ hai: Xảy ra kh ng cần năng lƣợng nhƣng phụ thuộc vào nhiệt độ là quá trình giải phóng hemolyzin qua màng. ● Yếu tố kháng khuẩn Colicin V của E. coli (ColV) Nhiều chủng vi khuẩn E. coli có khả năng sản sinh ra chất kháng khuẩn có tác dụng ức chế hoặc tiêu diệt các lo i vi khuẩn khác gọi là Colicin V. Vì vậy yếu tố 14 này cũng đƣợc coi là một trong các yếu tố độc lực của vi khuẩn E. coli (Smith Halls, 1967). ● Tính kháng thuốc kháng sinh của E. coli Sử dụng kháng sinh để điều trị bệnh là một trong những biện pháp quan trọng nhất để làm giảm tỉ lệ chết ở gia s c. Tuy nhiên trong những năm gần đ y vi khuẩn có khả năng kháng l i với một hoặc nhiều lo i kháng sinh đặc biệt là đối với những lo i kháng sinh đƣợc sử dụng rộng rãi trong chăn nu i và th y (Pritchard nnk., 2003). Việc sử dụng nhiều kháng sinh kh ng những t o áp lực chọn lọc đối với vi khuẩn g y bệnh mà c n ảnh hƣởng đến hệ vi sinh vật trong đƣ ng tiêu hóa làm cho vi khuẩn trở nên đề kháng với kháng sinh. Cơ chế tác động của kháng sinh: Theo Sơn (2006) kháng sinh là những lo i thuốc có khả năng ức chế hay tiêu diệt các vi sinh vật. Kháng sinh tác động vào các enzyme (bản chất là protein) làm nhiệm vụ x c tác quá trình trao đổi chất của vi khuẩn làm gián đo n quá trình đó của vi khuẩn. Nói chung mỗi lo i kháng sinh tác động vào một hay vài lo i vi khuẩn khác nhau và tác động một trong các cơ chế sau: - Ngừng tổng hợp màng vi khuẩn: Các kháng sinh có tác dụng ngăn trở sự hình thành Murein (một thành phần cấu t o của vi khuẩn) nên màng ngoài của vi khuẩn kh ng đƣợc tổng hợp điển hình gồm có kháng sinh: Penicilline cycloserine, bacitracin, ... - Tác động vào màng vi khuẩn làm rối lo n tính thấm hoặc phá vỡ màng tế bào: Các chất kháng sinh tác động làm thay đổi cấu tr c của màng tế bào vi khuẩn do đó quá trình trao đổi chất của vi khuẩn bị ức chế điển hình gồm có: Polimycine nystatin. - Làm rối lo n ức chế quá trình tổng hợp protein: Một số kháng sinh trong nhóm này nhƣ tetracycline ph n bố các men tổng hợp protein hay ngăn trở sự dẫn truyền th ng tin của ADN đến ribôxôm, là m ngăn trở quá trình tổng hợp protein. Đa số các lo i kháng sinh c n l i đều g y rối lo n cơ chế h hấp ở mức ph n tử t o phức kh ng tan với ADN làm tổn thƣơng màng và các lo i nucleotide có khi làm rối lo n protein. - Làm ức chế tổng hợp axit nucleic của nh n vi khuẩn: Kháng sinh tác động trực tiếp vào quá trình tổng hợp axit nucleic của nh n t o phức bền vững với ADN của vi khuẩn. Những kháng sinh này rất độc đối với cơ thể sống chỉ sử dụng khi cần thiết. Hosoda và nnk. (1990) đã nghiên cứu sự kháng thuốc của vi khuẩn E. coli và các plasmid - R của vi khuẩn này ph n lập đƣợc từ bê tiêu chảy. Kết quả nghiên cứu cho thấy tỉ lệ kháng với tetracyclin là

MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU

Đánh giá đƣợc tình hình bệnh tiêu chảy trên bê giai đo n b sữa ở các trang tr i n ng hộ ở các tỉnh miền trung và xác định độ mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn E coli và Salmonella và thử nghiệm một số phác đồ điều trị bệnh tiêu chảy trên bê giai đo n b sữa

3 Tính mới và sáng tạo Đ y là nghiên cứu đầu tiên về bệnh tiêu chảy trên bê sữa t i tỉnh L m Đồng Việt Nam

4 Các kết quả nghiên cứu thu đƣợc

Sau khi tiến hành khảo sát tình hình chăn nu i bê sữa trên 21 hộ chăn nu i ở huyện Đức Trọng tỉnh L m Đồng ch ng t i nhận thấy tỉ lệ bê sữa bị bệnh tiêu chảy rất cao (51 25%) Đặc biệt bê dưới 1 tháng tuổi có tỉ lệ tiêu chảy cao nhất (75 61%) Trong các mẫu ph n bê tiêu chảy số lƣợng vi khuẩn E coli ph n lập đƣợc trung bình là 271,4 x 10 6 CFU/gam cao hơn 11 7 lần so với ph n bình thƣ ng (231 6x 10 5 CFU/gam) Số lƣợng vi khuẩn Salmonella trung bình trong ph n tiêu chảy 71 9 x 10 4 CFU/gam ph n cao hơn 59 4 lần so với ph n bình thƣ ng (121 x 10 2 CFU/gam) Trong tổng số 74 mẫu ph n thu thập đƣợc tiến hành ph n lập vi khuẩn kết quả có 73 chủng vi khuẩn E coli và 38 chủng vi khuẩn Salmonella phân lập đƣợc mang đầy đủ các đặc tính sinh hóa nhƣ các tài liệu đã m tả

Hầu hết các chủng vi khuẩn E coli, Salmonella ph n lập đƣợc từ các mẫu ph n tiêu chảy đều mang gene độc tố đƣ ng ruột và yếu tố bám dính Trong khi đó các vi khuẩn đƣợc ph n lập từ ph n kh ng tiêu chảy đều m tính với các gen độc kiểm tra Hầu hết những chủng vi khuẩn E coli, Salmonella dương tính với các gene độc kiểm tra đều có biểu hiện độc lực cao khi g y chết 100% động vật thí nghiệm Điều này chứng tỏ hầu hết các gene mã hóa độc lực đều được biểu hiện kiểu hình tương ứng

Vi khuẩn E coli ph n lập đƣợc mẫn cảm cao 90 % với enrofloxacin gentamicin và ceftiofur 80%; trong khi đó đề kháng với amoxicillin doxycycline và oxytetracycline

Salmonella bacteria exhibit varying levels of antimicrobial susceptibility, showing high sensitivity (80-90%) to gentamycin and enrofloxacin Moderate susceptibility is observed against amoxicillin, doxycycline, and ceftiofur Notably, Salmonella demonstrates complete resistance to oxytetracycline This differential susceptibility underscores the need for appropriate antibiotic selection in the treatment of Salmonella infections to ensure optimal outcomes.

Kết quả điều trị cho thấy kháng sinh thích hợp để điều trị bệnh tiêu chảy trên bê sữa ở L m Đồng là ceftiofur và enrofloxacin

5 Các sản phẩm của đề tài

5.1 Sản phẩm khoa học: 01 bài báo trên t p chí Khoa học Đ i học Huế và 01 bài báo trên T p chí Th y

Nguyễn Xuân Hòa, Phạm Đăng Tuấn, Lê Trần Hoàn, Lê Quốc Việt, Lê Văn Phước, Nguyễn Đức Danh, Phan Vũ Hải, 2020.Độc lực độ mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn Salmonella spp ph n lập từ bê giai đo n b sữa bị tiêu chảy t i huyện Đức Trọng tỉnh L m Đồng T p chí KHĐHH tập 129 số 3D

Nguyễn Xuân Hòa, Phạm Đăng Tuấn, Lê Trần Hoàn, Lê Quốc Việt, Thƣợng Thị Thanh Lễ, Phan Vũ Hải, Trần Quang Vui, 2020 Độc lực và tính mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn E coli ph n lập từ bê sữa bị bệnh tiêu chảy T p chí

Xác định độ mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn Salmonella spp ph n lập từ bê giai đo n b sữa bị tiêu chảy t i huyện Đức Trọng tỉnh L m Đồng (Nguyễn Thủy Tiên, 2020)

Xác định độ mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn E coli ph n lập từ bê giai đo n b sữa bị tiêu chảy t i huyện Đức Trọng tỉnh L m Đồng (Nguyễn Thị Thùy Dung 2020)

Xác định độc lực độ mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn E coli và Salmonella spp ph n lập từ bê giai đo n b sữa bị tiêu chảy t i một số trang tr i b sữa (Ph m Đăng Tuấn 2020)

- 01 phác đồ điều trị bệnh tiêu chảy do E coli và Salmonella trên bê giai đo n b sữa

01 chuyên đề: Thực tr ng bệnh tiêu chảy ở bê giai đo n b sữa do vi khuẩn E coli và Salmonella (đã nghiệm thu: Đ t)

01 poster về đề tài nghiên cứu: Xác định độc lực độ mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn E coli và Salmonella spp Trong hội chứng tiêu chảy ở bê giai đo n b sữa và thử nghiệm một số phác đồ điều trị (đã nghiệm thu : Đ t)

6 Các đóng góp, khả năng ứng dụng và phương thức chuyển giao kết quả nghiên cứu

Kết quả nghiên cứu đã và đang đƣợc chuyển giao cho các th ý trong địa bàn huyện Đức Trọng tỉnh L m Đồng để tiến hành điều trị bệnh tiêu chảy do E coli và

Salmonella trên bê bị bệnh tiêu chảy

Thừa thiên Huế ngày 20 tháng 8 năm 2021

(ký, họ và tên, đóng dấu)

MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING

INFORMATION ON STUDY RESULTS RESEARCH PROJECT ASSIGNED BY HUE UNIVERSITY

1.1 Project title: Determination of antibiotic susceptibility of E coli and Salmonella isolated from calf with diarrhea syndrome and dairy beef calves and testing some treatment regimens

1.3 Coordinator: Assoc Prof Dr Nguyen Xuan Hoa

1.4 Implementing institution: University of Agriculture and Forestry, Hue

1.5 Implementingduration: From May 2019 to December 2020

Evaluating the situation of diarrhea in dairy beef calves in industrial farms and households’s farms in Vietnam central and determining antibiotic susceptibility of E coli and Salmonella bacteria and testing some treatment regimens towards diarrhea on lactating calves

3 Novelty and creativeness of the study

This is the first study on diarrhea of dairy beef calves in Vietnam central

After conducting a survey on the raising of dairy beef calves in 21 households in Ductrong district, Lamdong province, we found that the rate of dairy beef calves suffering from diarrhea was very high (51.25%) In particular, the diarrhea rate of calves under 1-month-old was highest (75.61%)

In the diarrhea feces samples, the average number of E coli was 271.4 x 10 6

CFU/gram, which was 11.7 times higher than the non diarhea group (231.6x 10 5 CFU/gram) The average number of Salmonella in the diarrhea group was 71.9 x

10 4 CFU/gram, which was 59.4 times higher than the non diarrhea group (121x 10 2 CFU/gram) Of the total studied 74 samples, 73 E coli were isolated strains, and 38 isolated strains Salmonella, which expressed biochemical properties as described

Most E coli and Salmonellas trains, isolated from diarrhea fecal samples, carried toxin genes encoded intestinal toxin and adhesion factors Meanwhile, the bacteria isolated from non diarrhea feces were negative for the test toxin genes Most strains of E coli and Salmonella that were positive for the toxin genes expressed high virulence which was lethal to 100% of experimental animals This demonstrates that most of the genes encoding virulence are phenotyped accordingly

All E coli isolates showed a highly susceptibility 90% to enrofloxacin, 80% gentamicin and ceftiofur; meanwhile, resistant to amoxicillin, doxycycline, and oxytetracycline

ĐỐI TƢỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU

Đối tƣợng nghiên cứu

Vi khuẩn E coli và Salmonella ph n lập đƣợc từ các mẫu ph n bê thịt giai đo n b sữa bị tiêu chảy

Mẫu thu thập từ một số trang tr i và n ng hộ chăn nu i bê giai đo n b sữa t i huyện một số tỉnh Nghệ An Hà Tĩnh và L m Đồng (Tuy nhiên do tình hình dịch bệnh dịch tả lợn Ch u Phi và dịch Covid 19 diễn biến phức t p nên t i Nghệ An và Hà Tĩnh năm 2019-2020 kh ng thể triển khai thu mẫu toàn bộ mẫu đƣợc thu t i huyện Đức Trọng tỉnh L m Đồng (đính kèm giải trình ở phụ lục)

3.3 Thời gian thực hiện: từ tháng 1 năm 2019 đến tháng 12 năm 2020.

Th i gian thực hiện

1.1 Tình hình nghiên cứu về E coli và Salmonella gây tiêu chảy ở bê

1.1.1 Trên thế giới ệnh tiêu chảy ở bê giai đo n b sữa do vi khuẩn E coli và Salmonella gây ra rất phổ biến ở các tr i chăn nu i b sữa Vi khuẩn E coli và Salmonella thƣ ng ký sinh trong ruột già của động vật và nó duy trì một số lƣợng nhất định c n bằng với các hệ vi sinh vật có lợi Vì vậy khi sức đề kháng của cơ thể giảm do các yếu tố th i tiết khí hậu biến động do tách hoặc nhập đàn thức ăn nước uống dẫn đến số lượng E coli và Salmonella tăng lên đột biến sản sinh độc tố làm rối lo n trao đổi nước và các chất điện giải g y ra tình tr ng tiêu chảy

Nghiên cứu về các độc tố của vi khuẩn E coli ph n lập từ bê tiêu chảy cho thấy hai lo i độc tố chịu nhiệt và kh ng chịu nhiệt là thành phần chính của các độc tố đƣ ng ruột (Enterotoxin) Vi khuẩn Salmonella có khả năng sản sinh nội độc tố g y tổn h i đến d dày ruột của động vật (Smith 1963) ệnh tiêu chảy do vi khuẩn E coli sản sinh các độc tố đƣ ng ruột (Enterotoxigenic E coli ETEC) là bệnh nhiễm khuẩn của bê xảy ra từ những ngày đầu sau sinh ETEC sản sinh độc tố đƣ ng ruột gi p ch ng phát triển ở ruột và t o ra Enterotoxin (Raybould và nnk 1987) Nghiên cứu của Janke & nnk (1989) cho thấy tuổi của bê nghé cảm nhiễm độc tố bám dính (Adherencia Enteropathogenic E coli, AEEC) từ 2 đến 4 tháng tuổi sự cảm nhiễm với AEEC dƣ ng nhƣ là nguyên nh n duy nhất của bệnh tiêu chảy và nguyên nh n tử vong của một số gia s c Hiện tượng xuất huyết đư ng ruột kéo theo các tổn thương từng đám nhỏ trên các vết thương lớn lan rộng khắp màng nhầy ruột là do quá trình bám dính của vi khuẩn g y ra Các đặc điểm sinh hóa đặc biệt của vi khuẩn này là di động và sản sinh enzyme ph n giải urê Các serotype huyết thanh của ch ng là O5: Các chủng E coli kh ng điển hình ph n lập từ bê có sản sinh Verotoxin nhƣng kh ng sản sinh độc tố chịu nhiệt và kh ng chịu nhiệt (ST và LT) Otoi & Hashimoto (1990), đã nghiên cứu sự cảm nhiễm E coli có mang kháng nguyên K99 ở bê và kết quả điều trị bằng kháng huyết thanh cho thấy có 11 mẫu E coli mang K99 Các mẫu E coli ph n lập đƣợc từ ph n của 50 bê bị tiêu chảy các mẫu này đều có khả năng sản sinh độc tố chịu nhiệt ST nhƣng kh ng sản sinh độc tố kh ng chịu nhiệt LT và có 9 mẫu mang kháng nguyên O9 2 m u có kháng nguyên O8 Nghiên cứu huyết thanh học của

Kết quả nghiên cứu trên 100 gia súc kéo dài 92 trang chỉ ra sau 6-9 tháng có 34/100 gia súc có đáp ứng miễn dịch với kháng nguyên K99 cao gấp 4 lần so với nhóm đối chứng Theo nghiên cứu của Janke và cộng sự (1989), vi khuẩn E coli gây Hội chứng tiêu chảy ở bê chủ yếu cư trú tại đoạn kết tràng chùng, gây tổn thương đặc trưng là viêm kết tràng xuất huyết tại manh tràng Khoảng 90% bê bị nhiễm E coli là bê sơ sinh, tuổi trung bình mắc bệnh là 11-18 ngày tuổi, biểu hiện rối loạn trao đổi nước và chất điện giải, dẫn đến tiêu chảy.

ĐỐI TƯỢNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Mục tiêu nghiên cứu

2.1.1 Mục tiêu tổng thể: Đánh giá đƣợc tình hình bệnh tiêu chảy trên bê giai đo n b sữa ở các trang tr i n ng hộ ở một số tỉnh miền Trung (Nghệ An Hà Tĩnh L m Đồng) và xác định độ mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn E coli và Salmonella và thử nghiệm một số phác đồ điều trị bệnh tiêu chảy trên bê giai đo n b sữa

2.1.2 Các mục tiêu cụ thể

- Đánh giá thực tr ng bệnh tiêu chảy ở bê giai đo n b sữa

- Xác định độ mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn E coli và Salmonella

- Thử nghiệm một số phác đồ điều trị

2.2 Đối tƣợng và phạm vi nghiên cứu

Vi khuẩn E coli và Salmonella đƣợc ph n lập từ 74 mẫu ph n bê đƣợc thu thập từ 21 hộ chăn nu i với quy m chăn nu i từ 1 đến 8 con t i huyện Đức Trọng tỉnh

- Địa điểm lấy mẫu: theo thuyết minh nghiên cứu mẫu sẽ đƣợc thu thập từ các trang tr i tr i hộ chăn nu i t i (Nghệ An Hà Tĩnh L m Đồng) mỗi tỉnh dự kiến thu

30 mẫu Tuy nhiên trong quá trình triển khai nghiên cứu năm 2019 và 2020 dịch bệnh dịch tả lợn Ch u Phi và Covid-19 nên ở tỉnh Hà Tĩnh và Nghệ An kh ng thể triển khai thu mẫu (có bản giải trình đính kèm ở phụ lục), vì vậy toàn bộ mẫu (81 mẫu) trong nghiên cứu trong nghiên cứu này đƣợc tổ chức thu t i n ng hộ chăn nu i bê sữa nu i thịt t i huyện Đức Trọng tỉnh L m Đồng

- Địa điểm xét nghiệm mẫu: Ph ng Vi trùng - Truyền nhiễm Ph ng C ng Nghệ sinh học Khoa Chăn nu i Th y và ph ng thí nghiệm c ng nghệ sinh học khoa Thủy Sản Trƣ ng Đ i học N ng L m Đ i học Huế

- Th i gian nghiên cứu: Từ tháng 1/2019 đến tháng 12/2020

- Xác định sự biến động về số lƣợng của vi khuẩn E coli và vi khuẩn Salmonella trong ph n của bê bị tiêu chảy nghi do E coli hay Salmonella

- Xác định độc lực và tính mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn E coli và Salmonella ph n lập đƣợc từ mẫu bệnh phẩm

2.3 Cách tiếp cận và phương pháp nghiên cứu

- Tiếp cận từ thực tiễn -> tổng hợp, phát triển bổ sung lý thuyết -> giải pháp

- Căn cứ vào khảo sát tình hình thực tế chăn nu i bê giai đo n b sữa cho thấy bệnh tiêu chảy thƣ ng xảy ra đã và đang g y nên những tổn thất trầm trọng cho ngành chăn nu i Trên cơ sở đó ch ng t i tiến hành khảo sát ph n tích nguyên nh n phổ biến g y nên tiêu chảy ở bê sữa Khi tìm ra nguyên nh n cơ bản g y bệnh tiêu chảy ở bê sữa ch ng t i tiến hành x y dựng giải pháp bằng cách nghiên cứu tính mẫn cảm kháng sinh để chọn ra những kháng sinh có hiệu quả diệt khuẩn với E coli, Salmonella tốt nhất

+ Phương pháp phỏng vấn, điều tra

Sử dụng phiếu điều tra để thu thập th ng tin th ng qua phỏng vấn cán bộ phụ trách và khảo sát trực tiếp trên các chuồng chăn nu i bê ở th i điểm hiện t i; điều tra số liệu hồi cứu về tình hình bệnh tiêu chảy ở bê t i trang tr i chăn nu i bê giai đo n b sữa từ khi thành lập đến hiện t i (Dự kiến khảo sát 30 phiếu)

Phương pháp đếm khuẩn lạc : Sử dụng phương pháp đếm gián tiếp th ng qua số lƣợng vi khuẩn có khả năng hình thành khuẩn l c (CFU/g phân) trên các m i trƣ ng đặc hiệu: Pha loãng 1 g mẫu ph n tiêu chảy/kh ng tiêu chảy ở các mức khác nhau theo cơ số

10 trong dung dịch nước muối sinh lý từ 10 -1 đến 10 -7 Sau đó tùy thuộc vào vi khuẩn để ch ng ta ƣớc lƣợng các mức pha loãng lấy để phủ đĩa th ch thƣ ng E colich ng ta đếm các mức từ 10 -5 đến 10 -7 , trong khi Salmonella l i chọn các mức 10 -1 - 10 -3

Xác định số lượng vi khuẩn E coli cfu/g phân

Mỗi độ pha loãng sử dụng 2 đĩa th ch EM (Eosin methylene blue agar) Mỗi đĩa đƣợc phủ 0 2 ml dung dịch pha loãng dùng que trang thủy tinh trải đều dung dịch trên mặt m i trư ng đợi hơi nước bốc hơi sau đó ủ ở 37 o C Sau 24h kiểm tra sự hình thành khuẩn l c chỉ chọn những đĩa có số khuẩn l c đếm đƣợc ph n bố đều th ng thƣ ng chỉ chọn những đĩa có số khuẩn l c từ 30 đến 300 từ số lƣợng khuẩn l c đếm đƣợc tiến hành quy đổi thành số đơn vị hình thành khuẩn l c (cfu) vi khuẩn E coli/g 1 gam phân;

Xác định số lượng vi khuẩn Salmonella cfu/g phân

Từ dung dịch gốc mỗi độ pha loãng sử dụng 2 đĩa th ch SS (Salmonella shigella agar) Mỗi đĩa đƣợc phủ 0 2 ml dung dịch pha loãng trải đều dung dịch trên mặt m i trư ng đợi hơi nước bốc hơi sau đó ủ ở 37 0 C Sau 24h kiểm tra sự hình thành khuẩn l c chỉ chọn những đĩa có số khuẩn l c đếm đƣợc ph n bố đều th ng thƣ ng chỉ chọn những đĩa có số khuẩn l c từ 30 đến 300 từ số lƣợng khuẩn l c đếm đƣợc tiến hành quy đổi thành số đơn vị hình thành khuẩn l c (cfu) vi khuẩn Salmonella/g 1 gam phân;

Các mẫu ph n tiêu chảy sẽ đƣợc pha loãng đếm số và ph n lập vi khuẩn E coli và Salmonella theo phương pháp thư ng quy

Từ đĩa đếm vi khuẩn E coli và Salmonella, lựa chọn riêng lẻ các khuẩn lạc có hình dạng và màu sắc điển hình E coli có khuẩn lạc màu xanh lá trên môi trường EM, trong khi khuẩn lạc điển hình của Salmonella có kích thước lớn, tâm đen và viền trắng trên môi trường SS.

Từ các mẫu vi khuẩn E coli và Salmonella ph n lập đƣợc tiến hành kiểm tra hình thái nhuộm màu Gram tính chất sinh hóa thƣ ng quy nhƣ khả năng lên men đƣ ng G L sinh H2S Ure và Indol

Mẫu vi khuẩn đƣợc bảo tồn ở -20 0 C trong glyceryl 40%

Phương pháp xác định gene độc tố của vi khuẩn

Gene độc của vi khuẩn được xác định bằng phương pháp PCR ADN của các mẫu vi khuẩn E coli và Salmonella đƣợc tỏch chiết bằng cỏch: lấy 500àl dung dịch canh khuẩn ly t m 5000 v ng/ph t thu cặn g n rửa hai lần bằng dung dịch đệm P S (Phosphate uffered Saline) ly t m thu xác vi khuẩn Tái huyền phù bằng cách thêm

200àl H 2 O (nước cỏch 2 lần) đun cỏch thủy 200àl dung dịch ở 100 o C trong 5 phỳt, sau đó cho vào đá l nh và ủ trong 20 ph t Tiến hành ly t m ở tốc độ 10.000 v ng/ph t trong 10 ph t Chỉ thu 50 àl dịch nổi chứa ADN để dựng cho làm khu n cho phản ứng PCR ADN sẽ đƣợc làm khu n cho phản ứng xác định gene độc stx2 (shiga toxin 2), eae (intimin gene) ở vi khuẩn E coli; độc tố stn (Salmonella enterotoxin) và yếu tố x m nhập invA (invasion A) ở vi khuẩn Salmonella

Bảng 2.1.Tên gene, mồi dùng và kích thước sản phẩm cho phản ứng PCR

Vi khuẩn Tên primers Trình tự: 3’ -5’ Kích thước sản phẩm PCR (bp)

587 Douglas & nnk., (2012) stx2-R 3’-GCGTCATCGTATACACAGGAGC-5’ eae-F 5’-CTTTGACGGTAGTTCACTGGACTTC-3’

Inv A -R 3’-CTG ACT CCT ACC TTG CTG ATG-5’

Nội dung nghiên cứu

- Xác định sự biến động về số lƣợng của vi khuẩn E coli và vi khuẩn Salmonella trong ph n của bê bị tiêu chảy nghi do E coli hay Salmonella

- Xác định độc lực và tính mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn E coli và Salmonella ph n lập đƣợc từ mẫu bệnh phẩm.

Cách tiếp cận và phương pháp nghiên cứu

- Tiếp cận từ thực tiễn -> tổng hợp, phát triển bổ sung lý thuyết -> giải pháp

- Căn cứ vào khảo sát tình hình thực tế chăn nu i bê giai đo n b sữa cho thấy bệnh tiêu chảy thƣ ng xảy ra đã và đang g y nên những tổn thất trầm trọng cho ngành chăn nu i Trên cơ sở đó ch ng t i tiến hành khảo sát ph n tích nguyên nh n phổ biến g y nên tiêu chảy ở bê sữa Khi tìm ra nguyên nh n cơ bản g y bệnh tiêu chảy ở bê sữa ch ng t i tiến hành x y dựng giải pháp bằng cách nghiên cứu tính mẫn cảm kháng sinh để chọn ra những kháng sinh có hiệu quả diệt khuẩn với E coli, Salmonella tốt nhất

+ Phương pháp phỏng vấn, điều tra

Sử dụng phiếu điều tra để thu thập th ng tin th ng qua phỏng vấn cán bộ phụ trách và khảo sát trực tiếp trên các chuồng chăn nu i bê ở th i điểm hiện t i; điều tra số liệu hồi cứu về tình hình bệnh tiêu chảy ở bê t i trang tr i chăn nu i bê giai đo n b sữa từ khi thành lập đến hiện t i (Dự kiến khảo sát 30 phiếu)

Phương pháp đếm khuẩn lạc là kỹ thuật gián tiếp xác định lượng vi khuẩn trong mẫu bằng cách đếm số khuẩn lạc hình thành (CFU/g mẫu) trên môi trường nuôi cấy chọn lọc Để thực hiện phương pháp này, 1g mẫu phân tiêu chảy hoặc không tiêu chảy được pha loãng theo các bậc khác nhau theo cơ số 10.

10 trong dung dịch nước muối sinh lý từ 10 -1 đến 10 -7 Sau đó tùy thuộc vào vi khuẩn để ch ng ta ƣớc lƣợng các mức pha loãng lấy để phủ đĩa th ch thƣ ng E colich ng ta đếm các mức từ 10 -5 đến 10 -7 , trong khi Salmonella l i chọn các mức 10 -1 - 10 -3

Xác định số lượng vi khuẩn E coli cfu/g phân

Mỗi độ pha loãng sử dụng 2 đĩa th ch EM (Eosin methylene blue agar) Mỗi đĩa đƣợc phủ 0 2 ml dung dịch pha loãng dùng que trang thủy tinh trải đều dung dịch trên mặt m i trư ng đợi hơi nước bốc hơi sau đó ủ ở 37 o C Sau 24h kiểm tra sự hình thành khuẩn l c chỉ chọn những đĩa có số khuẩn l c đếm đƣợc ph n bố đều th ng thƣ ng chỉ chọn những đĩa có số khuẩn l c từ 30 đến 300 từ số lƣợng khuẩn l c đếm đƣợc tiến hành quy đổi thành số đơn vị hình thành khuẩn l c (cfu) vi khuẩn E coli/g 1 gam phân;

Xác định số lượng vi khuẩn Salmonella cfu/g phân

Từ dung dịch gốc mỗi độ pha loãng sử dụng 2 đĩa th ch SS (Salmonella shigella agar) Mỗi đĩa đƣợc phủ 0 2 ml dung dịch pha loãng trải đều dung dịch trên mặt m i trư ng đợi hơi nước bốc hơi sau đó ủ ở 37 0 C Sau 24h kiểm tra sự hình thành khuẩn l c chỉ chọn những đĩa có số khuẩn l c đếm đƣợc ph n bố đều th ng thƣ ng chỉ chọn những đĩa có số khuẩn l c từ 30 đến 300 từ số lƣợng khuẩn l c đếm đƣợc tiến hành quy đổi thành số đơn vị hình thành khuẩn l c (cfu) vi khuẩn Salmonella/g 1 gam phân;

Các mẫu ph n tiêu chảy sẽ đƣợc pha loãng đếm số và ph n lập vi khuẩn E coli và Salmonella theo phương pháp thư ng quy

Từ các đĩa đếm số lƣợng khuẩn l c vi khuẩn E coli và Salmonella, chọn những khuẩn l c riêng rẽ có hình d ng màu sắc điển hình cho E coli (màu xanh lá m trên m i trƣ ng EM ) khuẩn l c điển hình cho Salmonella là những khuẩn l c tr n to có t m đen ở giữa viền xung quanh trắng (trên m i trƣ ng SS)

Từ các mẫu vi khuẩn E coli và Salmonella ph n lập đƣợc tiến hành kiểm tra hình thái nhuộm màu Gram tính chất sinh hóa thƣ ng quy nhƣ khả năng lên men đƣ ng G L sinh H2S Ure và Indol

Mẫu vi khuẩn đƣợc bảo tồn ở -20 0 C trong glyceryl 40%

Phương pháp xác định gene độc tố của vi khuẩn

Áp dụng phương pháp PCR để xác định gen độc của vi khuẩn, ADN của các mẫu vi khuẩn E coli và Salmonella được tách chiết thông qua quy trình: thu 500 μl dung dịch canh khuẩn ly tâm 5000 vòng/phút, thu cặn gạn rồi rửa hai lần bằng dung dịch đệm PBS (Phosphate Buffered Saline) ly tâm, thu xác vi khuẩn Tiếp theo, tái huyền phù xác vi khuẩn bằng cách thêm 200 μl dung dịch đệm TE (Tris-EDTA) 1X, đun sôi ở 100oC trong 15 phút, sau đó ly tâm 12000 vòng/phút Sau đó, thu phần supernatant để sử dụng cho phản ứng PCR.

200àl H 2 O (nước cỏch 2 lần) đun cỏch thủy 200àl dung dịch ở 100 o C trong 5 phỳt, sau đó cho vào đá l nh và ủ trong 20 ph t Tiến hành ly t m ở tốc độ 10.000 v ng/ph t trong 10 ph t Chỉ thu 50 àl dịch nổi chứa ADN để dựng cho làm khu n cho phản ứng PCR ADN sẽ đƣợc làm khu n cho phản ứng xác định gene độc stx2 (shiga toxin 2), eae (intimin gene) ở vi khuẩn E coli; độc tố stn (Salmonella enterotoxin) và yếu tố x m nhập invA (invasion A) ở vi khuẩn Salmonella

Bảng 2.1.Tên gene, mồi dùng và kích thước sản phẩm cho phản ứng PCR

Vi khuẩn Tên primers Trình tự: 3’ -5’ Kích thước sản phẩm PCR (bp)

587 Douglas & nnk., (2012) stx2-R 3’-GCGTCATCGTATACACAGGAGC-5’ eae-F 5’-CTTTGACGGTAGTTCACTGGACTTC-3’

Inv A -R 3’-CTG ACT CCT ACC TTG CTG ATG-5’

Thành phần phản ứng PCR bao gồm: 6 25 àl 2x Gotaq green master Mix (Promega) 0 5 àl mồi xu i (10 pmol/ àl) 0 5 àl mồi ngược (10 pmol/ àl) 2 àl ADN khu n mẫu và 3 25 àl nước tinh khiết PCR được thực hiện trong mỏy lu n nhiệt với chu trỡnh nhiệt đƣợc trình bày t i bảng 2.2

Bảng 2.2 Chu trình nhiệt của phản ứng PCR xác định gen độc

Stx và Eae Inv A và Stn

4 ºC 4 ºC Nhiệt độ bảo quản

Sản phẩm PCR đƣợc kiểm tra bằng điện di trên gel agarose 1% trong đệm TAE 1X (40 mM Tris-HCl 20 mM acetic acid 1 mM EDTA) ở 100 V trong 35 ph t Gel sau khi điện di đƣợc nhuộm bằng ethidium bromide nồng độ 0 5 μg/ml trong th i gian

15 - 30 ph t trên máy lắc Gel đƣợc quan sát và chụp ảnh bằng máy GelDoc (Bio-rad) Marker 2000bp của hãng Sigma

Phương pháp xác định độc lực của chủng vi khuẩn E coli và Salmonella

Từ những mẫu vi khuẩn đã đƣợc xác định có mang gene độc tiến hành g y nhiễm cho động vật thí nghiệm để xác định độc lực của các mẫu vi khuẩn E coli và

Vi khuẩn Salmonella được nuôi cấy ở 37 độ C, lắc 200 vòng/phút trong 16 giờ Mật độ vi khuẩn được đo ở bước sóng 600 nm (OD600) Sau đó, 0,2 ml dung dịch canh khuẩn được tiêm vào khoang phúc mạc từng loại vi khuẩn cho 3 con chuột nhắt trắng (18-20g) Thời gian chết và số lượng chuột chết được theo dõi để đánh giá độc lực (chỉ đánh giá những chuột chết sau khi tiêm 4 giờ) Chủng độc là chủng gây chết động vật thí nghiệm ở tỷ lệ cao và thời gian ngắn Dựa vào số lượng chuột chết và thời gian chuột chết để đánh giá độc lực của vi khuẩn Động vật bị chết được mổ khám và tái phân lập vi khuẩn từ gan để xác định nguyên nhân gây chết.

Xác định tính mẫn cảm kháng sinh

Sử dụng phương pháp khuếch tán kháng sinh trên th ch để đánh giá tính mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn E coli và Salmonella từ đó có cơ sở khoa học để chọn kháng sinh sinh hợp lý trong điều trị bệnh tiêu chảy cho bê nghé nghi nhiễm khuẩn E coli và Salmonella Đưa ra phác đồ điều trị và điều trị thử nghiệm trên bê

KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN

Xác định sự biến động về số lƣợng của vi khuẩn E coli và vi khuẩn Salmonella trong

3.1.1 Tình hình bệnh tiêu chảy trên bê sữa nuôi ở nông hộ tại huyện Đức Trọng tỉnh Lâm Đồng

Tiến hành khảo sát tình hình chăn nu i bê sữa và bệnh tiêu chảy trên 21 hộ chăn nu i bê sữa trên địa bàn huyện Đức Trọng tỉnh L m Đồng kết quả thể hiện qua bảng 3.1.a,b

Qua bảng 3.1a cho thấy: trung bình mỗi n ng hộ chăn nu i bê sữa có 3 con (1- đến 8) Tỉ lệ bị bệnh tiêu chảy t i th i điểm khảo sát là 51 25 % Trong 21 hộ khảo sát tổng số 80 con bê có độ tuổi từ dưới 1 đến 4 tháng tuổi ê dưới 1 tháng tuổi có tỉ lệ bị bệnh tiêu chảy cao nhất 75 61%

Bảng 3.1a Tỉ lệ bệnh tiêu chảy trên bê nuôi ở nông hộ tại huyện Đức Trọng

STT Ký hiệu Số bê có trong trại

Số bê đang bị tiêu chảy Tỉ lệ bị tiêu chảy ( %)

STT Ký hiệu Số bê có trong trại

Số bê đang bị tiêu chảy Tỉ lệ bị tiêu chảy ( %)

Bảng 3.1b.Tỉ lệ bê bị bệnh tiêu chảy theo tháng tuổi

Tháng tuổi Số mắc bệnh (con) Tỉ lệ mắc bệnh (%)

Cũng qua bảng 3.1b cho thấy bê từ tháng thứ 2 trở lên có tỉ lệ bệnh tiêu chảy giảm dần Điều này phù hợp với các nghiên cứu về sinh lý tiêu hóa cho thấy bê con so sinh sau khi tách mẹ nó chịu tác động của nhiều yếu tố th i tiết khí hậu thức ăn và hệ vi sinh vật đƣ ng tiêu hóa đặc biệt các nhóm vi khuẩn ruột già x m nhiễm phát triển dẫn đến rối lo n trao đổi nước và điện giải từ đó sinh ra tiêu chảy Thịnh (1985); Nam và nnk (1997)

3.1.2 Sự khác nhau về số lượng (CFU/g) của vi khuẩn E coli và vi khuẩn Salmonella trong phân của bê bị tiêu chảy và không tiêu chảy Để đánh giá sự biến động của vi khuẩn E coli và Salmonella trong mẫu ph n bê bị tiêu chảy và kh ng bị tiêu chảy từ 33 mẫu ph n tiêu chảy và 41 mẫu ph n kh ng tiêu chảy ch ng t i thu thập đƣợc trên địa bàn huyện Đức Trọng tỉnh L m Đồng tiến hành pha loãng mẫu và đếm số lƣợng CFU/g ph n kết quả đƣợc trình bày ở bảng 3.1.2

Bảng 3.1.2 Kết quả xác định số lượng (CFU/g) vi khuẩn trong mẫu phân

Cao nhất (CFU/ gam phân)

Thấp nhất (CFU/ gam phân)

Cao nhất (CFU/ gam phân)

Qua bảng 3.1.2 cho thấy những mẫu ph n bê kh ng tiêu chảy trung bình số lƣợng vi khuẩn E coli (231,6 x 10 5 (CFU/gam) thấp hơn so với trung bình số lƣợng vi khuẩn E coli/ g trong mẫu ph n bê tiêu chảy (271,4 x 10 6 (CFU/gam) Trung bình số lƣợng vi khuẩn E coli (CFU/g) trong mẫu ph n tiêu chảy cao hơn 11 7 lần so với ph n không tiêu chảy Tương tự số lượng vi khuẩn Salmonella trong ph n kh ng tiêu chảy là 121 x 10 2 (CFU/gam) thấp hơn so với mẫu ph n tiêu chảy (71,9 x 10 4 CFU/gam), nhƣ vậy số lƣợng (CFU/g) vi khuẩn Salmonella trong mẫu ph n tiêu chảy cao hơn

59 4 lần so với ph n bình thƣ ng Từ kết quả số lƣợng vi khuẩn E coli, Salmonella trong mẫu ph n tiêu chảy cao hơn so với mẫu ph n kh ng tiêu chảy điều này cho thấy có thể khi cơ thể bê bị giảm sức đề kháng sẽ dẫn đến sự gia tăng số lƣợng các vi khuẩn

E coli và Salmonella Vi khuẩn E coli và Salmonella khi tăng sinh về số lƣợng nó bám dính vào các tế bào l ng nhung ruột dẫn đến tổn thương các l ng nhung làm cho rối lo n quá trình chuyển hóa nước và điện giải từ đó dẫn đến nước từ trong mao m ch bị thoát ra ngoài ống ruột g y tiêu chảy Kết quả nghiên cứu của ch ng t i cũng tương đồng với kết quả của một số nghiên cứu trước đ y (Nam 1994; Sửu 2005; Hiên 2001; Quang và nnk., 2007)

Theo Hiên (2001) ở bê tiêu chảy số lƣợng E coli tăng 279% so với bê không tiêu chảy; Sửu (2005) cho biết bê nu i t i các tỉnh miền n i phía ắc khi bị tiêu chảy có số lƣợng E coli tăng lên 17 79 x 10 6 CFU/g ph n so với 9 84 x 10 6 CFU/g ph n ở bê kh ng tiêu chảy; Quang (2004) nghiên cứu vai tr của Salmonella và E coli trong hội chứng tiêu chảy của b bê cho thấy E coli và Salmonella bội nhiễm với tỉ lệ cao, số lƣợng E coli tăng gấp 3 lần Salmonella tăng 1 98 lần so với mẫu ph n bê kh ng tiêu chảy Sửu (2005) nghiên cứu ở ba tỉnh miền n i phía ắc đã kết luận: số lƣợng vi khuẩn E coli, Salmonella và Cl perfringens thấy ở bê nghé bị tiêu chảy cao hơn bê nghé kh ng bị tiêu chảy Nghiên cứu của Quang và nnk (2006) cho thấy khi bê nghé bị tiêu chảy thì số lƣợng và tỉ lệ các chủng vi khuẩn E coli ph n lập đƣợc mang các yếu tố g y bệnh và sản sinh độc tố tăng rất cao so với bê nghé kh ng bị tiêu chảy Điều này khẳng định vi khuẩn E coli có vai tr đặc biệt quan trọng đặc biệt trong hội chứng tiêu chảy do nhiễm khuẩn Tương tự trong ph n bê tiêu chảy lượng vi khuẩn

Salmonella cũng cao hơn so với trong mẫu ph n kh ng tiêu chảy Kết quả của nghiên cứu này tương đồng với một số nghiên cứu của Quang và nnk.(2007) Kết quả nghiên cứu của Quang và nnk (2007) cho thấy khi bê nghé bị tiêu chảy thì tỉ lệ ph n lập và số lƣợng vi khuẩn Salmonella cũng cao hơn so với ph n bình thƣ ng tỉ lệ ph n lập đƣợc vi khuẩn Salmonella tương ứng là 72 66% so với 47 11% và mật độ vi khuẩn tương ứng là 2 80 x10 6 CFU/gam so với 1 50 x 10 6 CFU/g (cao hơn 1 87 lần) Từ những kết quả trên có thể khẳng định rằng việc tăng sinh về số lƣợng (CFU) vi khuẩn E coli và

Salmonella đóng vai tr quan trọng trong việc g y lên tình tr ng tiêu chảy ở bê

3.1.3 Kết quả phân lập vi khuẩn E coli và Salmonella

Trong quá trình pha loãng mẫu phân bê tiêu chảy và không tiêu chảy, các nhà nghiên cứu đã phân lập và lưu giữ thành công 73 chủng vi khuẩn E coli và 38 chủng vi khuẩn Salmonella Mỗi mẫu phân được sử dụng để phân lập và lưu giữ một khuẩn lạc thuần khiết Kết quả này phản ánh sự hiện diện đáng kể của vi khuẩn E coli và Salmonella trong các mẫu phân được thu thập.

Tiến hành ph n tích so sánh chủng lo i vi khuẩn ph n lập đƣợc trên 2 lo i ph n bê là ph n tiêu chảy và kh ng tiêu chảy kết quả đƣợc trình bày trong bảng 3.1.3

Bảng 3.1.3 Tỉ lệ vi khuẩn phân lập được trong phân không tiêu chảy và tiêu chảy

E coli Tỉ lệ(%) Salmonella Tỉ lệ

Tổng 74 73 98,65 38 51,35 a, b: các chữ cái khác nhau trong cùng một cột biểu thị sự khác nhau có ý nghĩa (p < 0.05)

Kết quả từ bảng 3.1.3 cho thấy vi khuẩn E coli tồn t i ở hầu hết các mẫu ph n bê (98,65%)

Khi ph n lập các vi khuẩn g y tiêu chảy từ 184 mẫu ph n lấy từ tr u và 152 mẫu lấy từ b Hiên & Hương (2001) kết quả cho thấy có 6 loài vi khuẩn thư ng xuyên có mặt trong ph n của tr u b khỏe m nh và tiêu chảy đó là: Salmonella, E coli, Klebsiella, Staphylococcus, Streptococcus và Bacillus subtilis Trong đó 100% số mẫu ph n xét nghiệm đều phát hiện thấy vi khuẩn E coli

Quang và nnk (2002) đã ph n lập vi khuẩn E coli từ 122 mẫu ph n bê nghé tiêu chảy ở các tỉnh Đắc Lắc L m Đồng Quảng Ngãi Khánh H a; kết quả cho thấy 100% mẫu đều dương tính với vi khuẩn E coli Hương & Mai (2008) ph n lập mẫu ph n bê sữa bị tiêu chảy và bê bình thƣ ng t i thành phố Hồ Chí Minh và Đồng Nai cho thấy tất cả 103 mẫu ph n bê đƣợc xét nghiệm đều nhiễm E coli

Nghiên cứu tình tr ng nhiễm vi khuẩn E coli trong hội chứng tiêu chảy ở tr u t i một số tỉnh phía ắc Th ch (1996) đã xác định đƣợc tỉ lệ nhiễm vi khuẩn E coli trong ph n tr u và nghé khoẻ m nh cũng nhƣ ở tr ng thái tiêu chảy đều cho kết quả dương tính 100% trong số mẫu nghiên cứu

Từ các kết quả trên cho thấy dù bê ở tr ng thái bình thƣ ng hoặc tiêu chảy thì vi khuẩn E coli lu n tồn t i trong đƣ ng tiêu hoá ch ng sẵn sàng có khả năng g y bệnh cho bê khi điều kiện bất lợi nhƣ thay đổi pH đƣ ng tiêu hóa tác động các yếu tố stress bị l nh ăn uống kém vi khuẩn E coli phát triển m nh phá vỡ c n bằng hệ vi sinh vật đƣ ng ruột và trở thành vai tr chính đồng th i tiếp nhận các yếu tố g y bệnh đƣợc di truyền bằng Plasmid Vì vậy ta có thể thấy vi khuẩn E coli đóng vai tr quan trọng g y bệnh tiêu chảy cho bê

Trong khi đó kết quả của nghiên cứu này cho thấy tỉ lệ ph n lập đƣợc vi khuẩn

Kết quả xác định độc lực và tính mẫn cảm kháng sinh của các chủng vi khuẩn E

3.2.1 Kết quả xác định độc lực của các chủng vi khuẩn phân lập được

3.2.1.1 Kết quả xác định các chủng vi khuẩn mang gene độc tố

Trong các lo i độc tố của vi khuẩn E coli và Salmonella g y bệnh ở b độc tố đƣ ng ruột và độc tố bám dính đƣợc xem là quan trọng nhất liên quan đến tính g y bệnh của họ vi khuẩn đƣ ng ruột Stx2 là gene mã hóa độc tố Shiga eae là gene mã hóa độc tố đƣ ng ruột ở vi khuẩn E coli Gene stn mã hóa yếu tố x m nhập và gene invA mã hóa độc tố ruột ở vi khuẩn Salmonella Do vậy việc phát hiện gene mã hóa của các lo i độc tố trong vi khuẩn nhƣ là một chỉ thị về khả năng g y bệnh của vi khuẩn

Kết quả xác định gen quy định độc tố của vi khuẩn E coli và Salmonella bằng phương pháp PCR đƣợc trình bày ở bảng 3.2.1.1 và bảng 3.2.1.2 hình 3.2.1.2 và hình 3.2.1.2

Bảng 3.2.1.1 Kết quả xác định gene mã hóa độc tố của vi khuẩn E coli

Gene kiểm tra stx 2 Tỉ lệ

Kết quả kiểm tra gene cho thấy trong 73 chủng E coli ph n lập đƣợc thì có 15 chủng (20 55%) mang gen mã hóa độc tố Trong đó 13/15 chủng mang gene mã hóa độc tố eae (17,80%), có 3/15 chủng mang gen mã hóa độc tố sxt 2 (4,10%) và 1/15 chủng mang cả 2 gene mã hóa độc tố stx 2 và eae (1 37%) Nghiên cứu sự ph n bố gen độc tố ở vi khuẩn E coli ph n lập từ nhóm bị tiêu chảy và nhóm bình thƣ ng cho thấy đa số vi khuẩn E coli mang gene độc tố đều nằm ở nhóm tiêu chảy 12/41 so với 3/32 nhƣ vậy có thể thấy độc tố của E coli có vai tr trong g y bệnh tiêu chảy ở bê

Hình 3.2.1.1.Kết quả xác định mang gene mã hóa độc tố của vi khuẩn E coli bằng phản ứng PCR an 1 đến 3 gene eae; lan 4 Marker (2000 bp của BIO-Rad); lan 5 đến 7 gen stx 2

Theo a và nnk (2012) khi tiến hành xác định một số độc tố Shiga trên 34 mẫu vi khuẩn E coli có 27 chủng (79,41%) mang gene stx1 và 29 chủng (85,35%) mang gene stx2 trong đó có 22 chủng (64 71%) mang cả 2 gene stx1 và stx2 Kết quả nghiên cứu của L m và nnk (2014) cho thấy trong 118 mẫu STEC có 52 chủng mang gene stx1, 58 chủng mang gene stx2, 8 chủng mang đồng th i 2 gene stx1 và stx2, 6 mẫu mang gene eae

Kết quả PCR xác định gene mã hóa độc tố của vi khuẩn Salmonella cho thấy (bảng 3.2.1.2) có 12 chủng vi khuẩn ph n lập đƣợc mang gene mã hóa độc tố trong đó có 8 chủng (21 05 %) dương tính với gene quy định độc tố đư ng ruột stn và 8 chủng (21 05%) vi khuẩn mang yếu tố x m nhập inv A Đặc biệt có 4 chủng vi khuẩn đồng th i mang yếu tố x m nhập inv A và độc tố đƣ ng ruột stn (10,53%) Kết quả bảng 3.7 cho thấy ở 2 nhóm bê bị tiêu chảy và nhóm kh ng bị tiêu chảy 10/33 so với 2/5 cho thấy đa số vi khuẩn Salmonella mang gene độc tố đều nằm ở nhóm tiêu chảy nhƣ vậy có thể thấy độc tố của Salmonella cũng có vai tr rất quan trọng trong quá trình g y tiêu chảy ở bê

Bảng 3.2.1.2 Kết quả PCR xác định gene mã hóa độc tố ở vi khuẩn Salmonella

Tổng số chủng kiểm tra

Số chủng vi khuẩn mang gene mã hóa độc tố stn Tỉ lệ

Tỉ lệ phát hiện gene độc tố của vi khuẩn Salmonella trong nghiên cứu này thấp hơn nghiên cứu của Thìn và nnk (2009); trong đó có 45 45% (25/55) vi khuẩn

Salmonella xét nghiệm mang độc tố đƣ ng ruột (stn) trong khi đó 34 55% (19/55) mang gene inv A Tỉ lệ ph n lập Salmonella khá cao tuy nhiên tần số mang gene độc l i thấp; Điều này cho thấy đối với vi khuẩn Salmonella ngoài những nhóm mang gene sản sinh độc tố có khả năng g y bệnh thì kể cả khi kh ng mang gen độc tố nhƣng khi gặp những điều kiện bất lợi cho động vật dẫn đến sức đề kháng giảm nhóm lợi khuẩn giảm Điều này đƣợc giải thích là trong điều kiện bất lợi cơ hội cho các nhóm vi khuẩn đƣ ng ruột sinh s i với số lƣợng lớn sẽ bám lên bề mặt ruột g y rối lo n trao đổi nước và điện giải dẫn đến tiêu chảy Vì vậy cần thiết lập hệ vi sinh vật có lợi trong đƣ ng ruột để lấn át khả năng tăng sinh về số lƣợng của các nhóm vi khuẩn cơ hội nhƣ E coli, Salmonella

Hình 3.2.1.2 Kết quả xác định gene mã hóa độc tố của vi khuẩn Salmonella bằng phương pháp PCR

Lan 1, 2: gen invA; lan 3: marker (2000 bp của Bio-Rad); lan 4, 5: gen stn

3.2.1.3 Kết quả xác định độc lực của các chủng vi khuẩn E coli và Salmonella mang gene độc tố

Tất cả những chủng E coli và Salmonella dương tính với gene độc đều được sử dụng để tiến hành tiêm truyền động vật thí nghiệm nhằm xác định độc lực của mầm bệnh E coli và Salmonella kết quả thể hiện qua ảng 3.2.1.3; bảng 3.2.1.4

Qua bảng 3.2.1.3 cho thấy trong 15 chủng vi khuẩn E coli mang gene độc tố đƣợc ph n lập từ ph n bê có 10 chủng vi khuẩn có độc lực cao giết chết toàn bộ chuột thí nghiệm và 5 chủng vi khuẩn có độc lực yếu kh ng g y chết trên 50% chuột thí nghiệm Trong 10 chủng vi khuẩn có độc lực cao có 8 chủng (53 33%) giết chết chuột trong khoảng th i gian dưới 24 gi sau tiêm và 2 chủng vi khuẩn giết chết chuột thí nghiệm trong th i gian trên 24 gi sau tiêm

Trong 5 chủng E coli c n l i có 3 chủng chỉ giết chết 1 trong 3 chuột thí nghiệm và có 2 chủng kh ng g y chết chuột thí nghiệm Điều đáng nói là cả 2 chủng chảy điều này tái khẳng định vi khuẩn mang gene độc tuy nhiên chỉ khi gene mã hóa thì độc tố mới biểu hiện và g y độc c n nếu kh ng nó sẽ ẩn

Bảng 3.2.1.3 Kết quả kiểm tra độc lực của chủng vi khuẩn E coli mang gene độc tố

Số chủng giết chết chuột

Số chủng không giết chết chuột Thời gian chuột chết (giờ)

Phân lập lại vi khuẩn

Giết 3/3 chuột Giết 2/3 chuột Giết 1/3 chuột

Tiến hành mổ khám kiểm tra bệnh tích chuột bị chết kết quả cho thấy hầu hết gan bị sung huyết sƣng to; thận lách tím bầm Ph c m c và phổi bình thƣ ng; tim bình thƣ ng Lấy máu tim chuột chết tái ph n lập đƣợc 100% mẫu có sự hiện diện của vi khuẩn E coli

Theo Sửu (2005) cho biết: hầu hết các chủng vi khuẩn E coli ph n lập đƣợc từ bê nghé bị tiêu chảy đều có độc lực cao g y chết 75 79% số chuột từ sau khi tiêm đến

Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng chủng vi khuẩn E coli phân lập từ bê bị tiêu chảy có độc lực rất mạnh, gây tử vong 100% cho chuột sau 8 giờ tiêm Ngược lại, chủng vi khuẩn phân lập từ phân bê có độc lực thấp hơn, chỉ gây tử vong 80% cho chuột sau 7 ngày tiêm Số liệu thống kê cho thấy 74,00% mẫu vi khuẩn E coli phân lập từ bê tiêu chảy mang độc lực.

Trong nghiên cứu vai tr g y bệnh của E coli trong hội chứng tiêu chảy ở lợn Quang (2005) cho biết: trong số 30 chủng E coli ph n lập từ lợn bị tiêu chảy có 27 chủng (90%) giết chết 100% số chuột thí nghiệm 3 chủng c n l i giết chết 50% số chuột thí nghiệm sau 24 - 72 gi Ngƣợc l i khả năng g y chết chuột thí nghiệm của các chủng ph n lập từ lợn kh ng bị tiêu chảy rất thấp chỉ có 7/27 chủng (25 92%) giết chết 50% số chuột thí nghiệm sau 84 - 120 gi 20 chủng c n l i đều kh ng g y chết chuột sau 10 ngày theo dõi

Kết quả trên cho thấy các mẫu vi khuẩn E coli ph n lập đƣợc từ bê đều có độc lực khá cao và qua đ y có thể kết luận vi khuẩn E coli là nguyên nh n quan trọng g y ra bệnh tiêu chảy ở bê trên địa bàn huyện Đức Trọng tỉnh L m Đồng

Kết quả kiểm tra độc lực của 12 chủng Salmonella ph n lập đƣợc thể hiện qua bảng 3.2.1.4.Qua bảng 3.2.1.4 cho thấy có 8 chủng vi có độc lực m nh giết chết toàn bộ chuột thí nghiệm 2 chủng vi khuẩn có độc lực yếu chỉ làm chết 1/3 chuột thí nghiệm và 2 chủng vi khuẩn kh ng làm chết chuột Trong 8 chủng vi khuẩn độc lực m nh có 4 chủng có độc lực rất m nh giết chết chuột thí nghiệm trong 24 gi và 4 mẫu giết chết chuột thí nghiệm 25 - 36 gi

Bảng 3.2.1.4 Kết quả kiểm tra độc lực vi khuẩn Salmonella mang gene độc tố bằng tiêm truyền động vật thí nghiệm

Số chủng giết chết chuột

Số chủng không giết chết chuột

Thời gian chuột chết (giờ)

Phân lập lại vi khuẩn

Giết 3/3 chuột Giết 2/3 chuột Giết 1/3 chuột

Kết quả xác định phác đồ điều trị phù hợp

Điều trị bệnh tiêu chảy do vi khuẩn E coli và Salmonella g y ra ở bê ngoài việc điều trị triệu chứng và bù nước điện giải thì việc sử dụng đ ng kháng sinh được coi là quan trọng và mang l i hiệu quả cao nhất trong điều trị Trong nghiên cứu này ch ng t i đã xác định đƣợc các kháng sinh mẫn cảm với vi khuẩn E coli và Salmonella trong ph ng thí nghiệm ( Bảng 3.2.1.1; Bảng 3.2.1.2 ) để sử dụng ch ng trong điều trị trên động vật nhằm nhằm tiêu diệt mầm bệnh

Trong nghiên cứu này để xác định lo i kháng sinh thích hợp cho việc điều trị 6 lo i kháng sinh phổ biến trong điều trị bệnh do E coli, Salmonella đƣợc sử dụng là enrofloxacin, gentamicin, ceftiofur, oxytetracycline, doxycycline, amoxicillin

Bảng 3.3 Kết quả điều trị bệnh tiêu chảy ở bê

Số bê điều trị (con)

Số bê khỏi bệnh (con)

Thời gian khỏi bệnh (ngày)

Chi phí điều trị/con (đồng)

Amoxicillin 25 16 64,00 e 3,8 b 12.800 a, b, c, d, e: các chữ cái khác nhau trong cùng một cột biểu thị sự khác nhau có ý nghĩa (P

Ngày đăng: 20/05/2024, 14:01

Xem thêm

HÌNH ẢNH LIÊN QUAN

Bảng 1.1. Đặc tính sinh hóa của vi khuẩn E. coli. (TCVN 8400-16:2011) - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Bảng 1.1. Đặc tính sinh hóa của vi khuẩn E. coli. (TCVN 8400-16:2011) (Trang 23)
Bảng 1.2. Đặc tính sinh hóa của vi khuẩn Salmonella - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Bảng 1.2. Đặc tính sinh hóa của vi khuẩn Salmonella (Trang 36)
Bảng 2.1.Tên gene, mồi dùng và kích thước sản phẩm cho phản ứng PCR - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Bảng 2.1. Tên gene, mồi dùng và kích thước sản phẩm cho phản ứng PCR (Trang 51)
Bảng 2.2. Chu trình nhiệt của phản ứng PCR xác định gen độc - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Bảng 2.2. Chu trình nhiệt của phản ứng PCR xác định gen độc (Trang 52)
Bảng 2.3. Tiêu chuẩn đánh giá tính mẫn cảm các loại kháng sinh theo quy định của nhà sản xuất - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Bảng 2.3. Tiêu chuẩn đánh giá tính mẫn cảm các loại kháng sinh theo quy định của nhà sản xuất (Trang 53)
Bảng 3.1a. Tỉ lệ bệnh tiêu chảy trên bê nuôi ở nông hộ tại huyện Đức Trọng - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Bảng 3.1a. Tỉ lệ bệnh tiêu chảy trên bê nuôi ở nông hộ tại huyện Đức Trọng (Trang 55)
Hình 3.2.1.1.Kết quả xác định mang gene mã hóa độc tố của vi khuẩn E. coli bằng phản ứng PCR - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Hình 3.2.1.1. Kết quả xác định mang gene mã hóa độc tố của vi khuẩn E. coli bằng phản ứng PCR (Trang 63)
Hình 3.2.1.2. Kết quả xác định gene mã hóa độc tố của vi khuẩn Salmonella bằng phương pháp PCR - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Hình 3.2.1.2. Kết quả xác định gene mã hóa độc tố của vi khuẩn Salmonella bằng phương pháp PCR (Trang 64)
Bảng 3.2.1.3. Kết quả kiểm tra độc lực của chủng vi khuẩn E. coli mang gene độc tố - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Bảng 3.2.1.3. Kết quả kiểm tra độc lực của chủng vi khuẩn E. coli mang gene độc tố (Trang 65)
Bảng 3.3. Kết quả điều trị bệnh tiêu chảy ở bê - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Bảng 3.3. Kết quả điều trị bệnh tiêu chảy ở bê (Trang 69)
Bảng 2. Chu trình nhiệt cho PCR xác định gene mã hóa độc tố - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Bảng 2. Chu trình nhiệt cho PCR xác định gene mã hóa độc tố (Trang 113)
Bảng 3. Tiêu chuẩn của các loại kháng sinh theo quy định của nhà sản xuất - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Bảng 3. Tiêu chuẩn của các loại kháng sinh theo quy định của nhà sản xuất (Trang 114)
Bảng 4. Kết quả giám định một số đặc tính sinh vật học của các chủng Salmonellaphân lập từ phân bê - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Bảng 4. Kết quả giám định một số đặc tính sinh vật học của các chủng Salmonellaphân lập từ phân bê (Trang 115)
Bảng 6. Kết quả kiểm tra độc lực vi khuẩn Salmonellamang gene độc tố - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Bảng 6. Kết quả kiểm tra độc lực vi khuẩn Salmonellamang gene độc tố (Trang 117)
Bảng 7. Kết quả đánh giá tính mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn Salmonella - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Bảng 7. Kết quả đánh giá tính mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn Salmonella (Trang 118)
Bảng 2. Kháng sinh sử dụng trong nghiên cứu - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Bảng 2. Kháng sinh sử dụng trong nghiên cứu (Trang 125)
Bảng 1. Thành phần nucleotide các primer dùng trong phản ứng PCR - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Bảng 1. Thành phần nucleotide các primer dùng trong phản ứng PCR (Trang 125)
Bảng 3. Kết quả giám định một số đặc tính sinh học của các chủng E. coli phân lập được - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Bảng 3. Kết quả giám định một số đặc tính sinh học của các chủng E. coli phân lập được (Trang 126)
Bảng 4. Kết quả PCR xác định gen mã hóa độc tố ở vi khuẩn E. coli (n=73) - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Bảng 4. Kết quả PCR xác định gen mã hóa độc tố ở vi khuẩn E. coli (n=73) (Trang 126)
Hình 1. Hình ảnh điện di sản phẩm PCR xác định gen mã hóa độc tố của vi khuẩn E. coli Giếng 1-3: các mẫu DNA vi khuẩn E - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Hình 1. Hình ảnh điện di sản phẩm PCR xác định gen mã hóa độc tố của vi khuẩn E. coli Giếng 1-3: các mẫu DNA vi khuẩn E (Trang 127)
Bảng 6. Kết quả đánh giá tính mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn E. coli TT Kháng sinh Số chủng - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Bảng 6. Kết quả đánh giá tính mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn E. coli TT Kháng sinh Số chủng (Trang 128)
Bảng 2.2. Tổng đàn bò theo vùng miền** - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Bảng 2.2. Tổng đàn bò theo vùng miền** (Trang 145)
Hình 2.1. Bê bị tiêu chảy - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Hình 2.1. Bê bị tiêu chảy (Trang 147)
Hình 1.2. Phân bê bị tiêu chảy - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Hình 1.2. Phân bê bị tiêu chảy (Trang 148)
Bảng 2.4. Tình hình tiêu chảy bê theo độ tuổi - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Bảng 2.4. Tình hình tiêu chảy bê theo độ tuổi (Trang 161)
Bảng 4.5. Giám định một số đặc tính sinh vật học các chủng Salmonella phân lập được - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Bảng 4.5. Giám định một số đặc tính sinh vật học các chủng Salmonella phân lập được (Trang 180)
Hình 4.1.Kết quả PCR xác định gene m hóa độc tố của vi khuẩn E. coli 1-3: Các mẫu DNA vi khuẩn E - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Hình 4.1. Kết quả PCR xác định gene m hóa độc tố của vi khuẩn E. coli 1-3: Các mẫu DNA vi khuẩn E (Trang 182)
Hình 4.2. Kết quả PCR xác định gene m hóa độc tố của vi khuẩn Salmonella - XÁC ĐỊNH ĐỘ MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở BÊ GIAI ĐOẠN BÚ SỮA VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ
Hình 4.2. Kết quả PCR xác định gene m hóa độc tố của vi khuẩn Salmonella (Trang 183)

TÀI LIỆU CÙNG NGƯỜI DÙNG

TÀI LIỆU LIÊN QUAN