Nghiên cứu tạo mẫu ngoại kiểm miễn dịch tuyến giáp chứa thông số free triiodothyronine, free thyroxine, thyrotropin dùng trong đánh giá chất lượng xét nghiệm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH ∞0∞ NGUYỄN THỊ HỒNG PHƯƠNG NGHIÊN CỨU TẠO MẪU NGOẠI KIỂM MIỄN DỊCH TUYẾN GIÁP CHỨA THÔNG SỐ FREE TRIIODOTHYRONINE, FREE THYROXINE, THYROTROPIN DÙNG TRONG ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG XÉT NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC TP HỒ CHÍ MINH, NĂM 2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH ∞0∞ NGUYỄN THỊ HỒNG PHƯƠNG NGHIÊN CỨU TẠO MẪU NGOẠI KIỂM MIỄN DỊCH TUYẾN GIÁP CHỨA THÔNG SỐ FREE TRIIODOTHYRONINE, FREE THYROXINE, THYROTROPIN DÙNG TRONG ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG XÉT NGHIỆM Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số chuyên ngành: 42 02 01 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn: TS LÊ THỊ TRÚC LINH PGS TS TRẦN HỮU TÂM TP HỒ CHÍ MINH, NĂM 2023 TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Độc lập – Tự – Hạnh phúc KHOA ĐÀO TẠO SAU ĐẠI HỌC GIẤY XÁC NHẬN Tôi tên là: Nguyễn Thị Hồng Phương Ngày sinh: 31/01/1987 Nơi sinh: TP.HCM Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã học viên: 218202011002 Tôi đồng ý cung cấp tồn văn thơng tin luận văn tốt nghiệp hợp lệ quyền cho Thư viện trường đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh Thư viện trường đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh kết nối tồn văn thơng tin luận văn tốt nghiệp vào hệ thống thông tin khoa học Sở Khoa học Cơng nghệ Thành phố Hồ Chí Minh Ký tên CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Dộc lập - Tự - Hạnh phúc Ý KIẾN CHO PHÉP BẢO VỆ LUẬN VẤN THẠC sĩ CŨA GIẢNG VIÊN HƯỚNG DẢN Giàng viên hướng dần : TS Lê Thị Trúc Linh Học viên thực : Nguyễn Thị Hồng Phương Lớp : MB1O021 Ngày sinh : 31/01/1987 Nơi sinh: TP.HCM Tên đề tài: “NGHIỀN cứu TẠO MÂU NGOẠI KIÊM MIÊN DỊCH TUYẾN GIÁP CHỨA THÔNG SỐ FREE TRIIODOTHYRONINE, FREE THYROXINE, THYROTROPIN DÙNG TRONG ĐÁNH GIÁ CHÁT LƯỢNG XÉT NGHIỆM” Ý kiến cùa giáo viên hướng dẫn việc cho phép học viên bảo vệ luận văn trước Hội đồng: ùf (.ku.Hk Vxxc iS .V) Thành phố Hồ Chi Minh, ngày tháng năm 202-3 Người nhận xét TS Lê Thị Trúc Linh CỘNNGgưHờÒi /AihXậÃi/ xHéỘt I CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Đôc lập - Tự - Hạnh phúc Ý KIẾN CHO PHÉP BẢO VỆ LUẬN VĂN THẠC sĩ CỦA GIẢNG VIÊN HƯỚNG DẢN Giàng viên hưcÝng dần : PGS TS Trần Hữu Tâm Học viên thực : Nguyễn Thị Hồng Phương Lớp : MBIO021 Ngày sinh : 31/01/1987 Nơi sinh: TP.HCM Tên đề tài: “NGHIÊN cứu TẠO MÃU NGOẠI K.IÉM MIÉN DỊCH TUYẾN GIÁP CHỨA THÔNG so FREE TRIIODOTHYRONINE, FREE THYROXINE, THYROTROPIN DỪNG TRONG ĐÁNH GIÁ CHẦT LƯỢNG XÉT NGHIỆM” Ý kiến giáo viên hướng dẫn việc cho phép học viên bảo vệ luận văn trước Hội đồng: Thành phố Hồ Chi Minh, ngày Sữ.Ặ.tháẠg ỉk năm 202d' PGS TS Trần Hữu Tâm LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan luận văn “Nghiên cứu tạo mẫu ngoại kiểm miễn dịch tuyến giáp chứa thông số Free Triiodothyronine, Free Thyroxine, Thyrotropin dùng đánh giá chất lượng xét nghiệm” nghiên cứu tơi Ngoại trừ tài liệu tham khảo trích dẫn luận văn này, tơi cam đoan tồn phần hay phần nhỏ luận văn chưa công bố sử dụng để cấp nơi khác Khơng có sản phẩm/ nghiên cứu người khác sử dụng luận văn mà khơng trích dẫn theo quy định Luận văn chưa nộp để nhận cấp trường đại học sở đào tạo khác Thành phố Hồ Chí Minh, năm 2023 Chữ ký tác giả: …………… Họ tên tác giả: Nguyễn Thị Hồng Phương LỜI CẢM ƠN Để hồn thành luận văn này, tơi xin cảm ơn sâu sắc đến Ban Giám đốc Trung tâm Kiểm chuẩn Xét nghiệm TP.HCM tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành luận văn cơng việc giao Đồng thời cảm ơn tập thể Khoa Sinh phẩm đóng góp cơng sức hỗ trợ tơi q trình thực thí nghiệm Tôi xin chân thành cảm ơn quý thầy cô Bộ Môn Công Nghệ Sinh học trường Đại học Mở TP.HCM TS Lê Thị Trúc Linh quan tâm truyền đạt cho kiến thức, kỹ kinh nghiệm nghiên cứu khoa học Tôi xin gửi lời cảm ơn PGS TS Trần Hữu Tâm truyền đạt kiến thức hướng dẫn tận tình trình thực luận văn Những góp ý quý báu chỉnh sửa chi tiết luận văn thầy cô giúp luận văn tơi hồn thiện mặt nội dung hình thức Thầy ln quan tâm, động viên, nhắc nhở kịp thời để em hồn thành luận văn tiến độ Con cảm ơn ba mẹ người hi sinh đời để nuôi dạy khôn lớn động viên tinh thần để có niềm tin nghị lực vượt qua khó khăn sống cơng việc để có thành ngày hơm Trân trọng NGUYỄN THỊ HỒNG PHƯƠNG TÓM TẮT Xét nghiệm miễn dịch tuyến giáp định cận lâm sàng thường quy sở y tế, xét nghiệm quan trọng chúng giúp bác sĩ đưa định quan trọng điều trị, chẩn đoán sớm phát sớm phịng bệnh, Ba thơng số thường định Free Triiodothyronine (FT3), Free Thyroxine (FT4), Thyrotropin (TSH) Việc phải có kết xét nghiệm miễn dịch tin cậy, đảm bảo chất lượng quan trọng Một công tác đảm bảo độ tin cậy chất lượng xét nghiệm miễn dịch tuyến giáp kiểm soát chất lượng xét nghiệm Việc kiểm soát chất lượng thực thông qua mẫu ngoại kiểm Do đó, nghiên cứu tạo mẫu ngoại kiểm miễn dịch tuyến giáp chứa thông số Free Triiodothyronine, Free Thyroxine, Thyrotropin cấp bách cần thiết, giúp đáp ứng nhu cầu phòng xét nghiệm Bước nghiên cứu sàng lọc yếu tố ảnh hưởng tác động đến nồng độ thơng số TSH, FT3, FT4 mẫu Thí nghiệm sàng lọc đa yếu tố thực ma trận Plackett- Burman Kết cho thấy có yếu tố gồm ethylene glycol, meso-erythritol, thời gian sấy có tác động mạnh Sau đó, yếu tố tối ưu hóa phương pháp đáp ứng bề mặt RSM-CCD tìm giá trị tối ưu hóa ethylene glycol, thời gian sấy, meso-erythritol 16,02 %; 12,79 giờ; 0,12 g/ml Mơ hình dự đốn nồng độ thơng số TSH 7,56 (µU/ml), FT3 4,75 (pmol/l), FT4 12,78 (pmol/l) Hai tiêu chí quan trọng trước thực ngoại kiểm đánh giá độ đồng độ ổn định theo tiêu chuẩn ISO Guide 80 13528, mẫu đánh giá độ đồng thực lão hóa cấp tốc để đánh giá độ ổn định theo thời gian, đánh giá ảnh hưởng chất lượng mẫu điều kiện vận chuyển Tuổi thọ mẫu xác định phương pháp lão hóa cấp tốc nhiệt độ 5oC 316 ngày (10 tháng 16 ngày) Với thời gian này, mẫu đạt tiêu chuẩn mẫu kiểm chuẩn, với thời hạn sử dụng mẫu lâu hãng nước Randox, Biorad Kết độ ổn định điều kiện vận chuyển gửi mẫu gần mẫu xa cho thấy phòng xét nghiệm khơng có khác biệt với Fthực nghiệm < Flý thuyết Điều chứng tỏ mẫu ngoại kiểm miễn dịch tuyến giáp ổn định điều kiện vận chuyển Sử dụng phân tích thống kê theo kiểm định Cochran’s với cỡ mẫu lô n = 10 cho thấy mẫu môi trường bảo quản tối ưu đồng Xác nhận giá trị đích ban đầu mẫu sở đánh giá độ kết xét nghiệm phương pháp phân tích khác chia theo nhóm thiết bị: Roche Cobas e411 (điện hóa phát quang), Mindray CL-1000i (hóa phát quang), Human Reader HS (miễn dịch enzyme) để gửi mẫu phân tích Giá trị đích nhóm xác định cách tính giá trị trung bình lần độ lệch chuẩn (2SD) Trên dòng máy Roche Cobas e411 giá trị đích thơng số TSH 6,27 ± 0,24 µU/ml, FT3 4,20 ± 0,20 pmol/l, FT4 13,25 ± 0,80 pmol/l; dòng máy Mindray CL-1000i giá trị đích thơng số TSH 5,33 ± 0,32 µU/ml, FT3 3,19 ± 0,12 pmol/l, FT4 12,44 ± 0,32 pmol/l; dòng máy Human Reader HS giá trị đích thơng số TSH 5,33 ± 0,32 µU/ml, FT3 3,19 ± 0,12 pmol/l, FT4 12,44 ± 0,32 pmol/l Kết đánh giá trị đích dòng thiết bị cho thấy độ biến thiên CV% nhỏ độ biến thiên cho phép (I%) theo nguồn biến thiên sinh học Mẫu ngoại kiểm miễn dịch tuyến giáp đáp ứng tiêu chí mẫu ngoại kiểm, đạt độ ổn định điều kiện bảo quản vận chuyển để triển khai chương trình ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm Việt Nam Đây sở ban đầu cho việc nghiên cứu thêm thông số xét nghiệm miễn dịch liên quan đến bệnh lý tuyến giáp kháng thể Thyroid peroxidase (TPOAb), Thyroglobulin (Tg), kháng thể Thyroglobulin (TgAb),…Nghiên cứu cần tối ưu hóa mẫu thêm ngưỡng cường giáp để áp dụng vào chương trình ngoại kiểm xác định tuổi thọ xác mẫu theo thời gian thực The thyroid immunoassay is one of the earliest available medical facilities These tests are very crucial in helping doctors make important decisions about treatment, early diagnosis, and prevention of diseases, Three parameters, Free Triiodothyronine (FT3), Free Thyroxine (FT4), and Thyrotropin (TSH) are common uesd in thyroid immunoassays It is crucial to have a reliable and quality-assured service for obtaining accurate test results Quality control is an essential tool in ensuring the reliability and qulity of thyroid immunoassays This quality check is performed through an exception sample Therefore, it is crucial to conduct research on creating foreign samples to test thyroid immunity, which includes the three parameters of Free Triiodothyronine, Free Thyroxine, and Thyrotropin This research is urgent and necessary in order to meet the needs of laboratories is extremely urgent and necessary, helping to meet the needs of laboratories The first step of the research is to identify the factors that influece the concentrations of TSH, FT3, FT4 This is done through a multifactor screening experiment using the Plackett- Burman matrix The results of the experiment showed that three factors including an ethylene glycol, meso-erythritol, and drying time had the strongest impact Next, the three factors were optimized using the RSM-CCD surface response method, resulting in optimized values of 16.02 %, ethylene glycol, 12.79 hours drying time, and 0.12 g/ml for meso-erythritol The model also predicts the concentration of TSH, FT3, FT4 to be 7.56 (µU/ml), 4.75 (pmol/l), and 12.78 (pmol/l) Two important criteria to consider are uniformity rate and stability evaluation, as outlined in ISO Guide 80 and 13528 It is important to evalute the samples for uniformity rate and aging in order to combat price instability over time and to assess the quality of samples that may affect operating conditions The sample lifespan determined by the accelerated aging method at oC is 316 days (10 months 16 days) During this time, the sample meets the standards of a test sample, with a longer sample shelf life than that of foreign companies such as Randox and Biorad Stable results under exercise conditions when sending near and far samples show that between laboratory tests there is no difference with experiment <