Thông tin tài liệu
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI - PHẠM NGỌC LÂM PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA XẠ KHUẨN NỘI SINH TRÊN CÂY MÀNG TANG (Litsea cubeba (Lour.) Pers.) LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ SINH HỌC Hà Nội - Năm 2017 1708330003671079e0020-c260-4ec9-90e2-28a5f2ae2ea2 1708330003671e0f3d991-f06c-4437-80fc-038d0ae15180 17083300036710a2eb4c3-beb5-4256-82c3-864393903547 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI - PHẠM NGỌC LÂM PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA XẠ KHUẨN NỘI SINH TRÊN CÂY MÀNG TANG (Litsea cubeba (Lour.) Pers.) LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS PHÍ QUYẾT TIẾN PGS.TS VŨ THU TRANG Hà Nội - Năm 2017 Hc viên: Phạm Ngọc Lâm i hc Bách Khoa Hà Ni Chuyên ngành: Cơng ngh Sinh hc ng dn : TS Phí Quyết Tiến PGS.TS Vũ Thu Trang Tên lu―Phân lnh mt s m sinh hc ca x khun ni sinh Màng tang (Litsea cubeba Nt trình nghiên cu lun i s ng dn ch bo tn tình cng dn hành nghiên cu lut cách trung thc, toàn b ni dung báo cáo lun c trc tip thc hin Tt c nghiên cu không chép t báo cáo khoa hc, lua bt c tác gi Học viên Phạm Ngọc Lâm I Đối với học viên cao học, luận văn tốt nghiệp cơng trình khoa học nhỏ mang ý nghĩa lớn, đánh dấu bước trưởng thành người đường ứng dụng kiến thức học vào thực tiễn Trước hết, xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Phí Quyết Tiến, Phó Viện trưởng Viện Cơng nghệ Sinh học – Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam PSG.TS Vũ Thu Trang, Phó trưởng Khoa Cơng nghệ thực phẩm, Viện Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm – Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội tận tình hướng dẫn truyền đạt kiến thức q báu để giúp tơi hồn thành luận văn Trong thời gian thực tập làm việc phịng Cơng nghệ Lên men - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, nhận quan tâm giúp đỡ, bảo tận tình chun mơn, kĩ thuật động viên chân thành tập thể cán phịng Tơi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quý báu Tôi xin gửi lời cảm ơn đến Ban lãnh đạo Viện Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm – Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội, tạo điều kiện thuận lợi giúp tơi hồn thành luận văn Cuối tơi xin cảm ơn gia đình bạn bè động viên khuyến khích tơi suốt trình học tập để đạt kết ngày hôm Hà Nội, tháng 10 năm 2017 Học viên Phạm Ngọc Lâm II STT Các kí hiệu/ chữ viết tắt Ý nghĩa DNA Deoxyribonucleic acid FISH Fluorescent insitu hybridization IAA Indole acetic acid IC 50 Inhibitory concentration 50% - Nng c ch ng th KTCC Khut KTKS Khun ty khí sinh MIC Minimum inhibitory concentrationN c ch ti thiu NRP Nonribosomal peptide NRPS Nonribosomal peptide synthetase 10 PKS Polyketide synthase 11 PKS-I Polyketide synthase type I 12 PKS-II Polyketide synthase type II 13 RNA Ribonucleic acid III Bng 1.1 Mt s hot chc tìm thy x khun nc liu .10 Bng 1.2 Mt s loài x khun ni sinh hic phân lp t c liu .16 Bng 2.1 Trình t cp mc s dng phn ng PCR khui gen 16S rRNA 32 Bng 3.1 m hình thái ca chng x khun nn hình phân lp t mu Màng tang ti Thanh Hóa, Hà Ni Phú Th .35 Bng 3.2 Kh t kinh ca mt s chng x khun 45 Bng 3.3 Kh t kinh ca chng MPT28 .51 Bng 3.4 Màu sc khun lc ca chng MPT28 ni cng 52 Bng 3.5 Kh ng hóa ngua chng x khun MPT28 sau 7-14 ngày nuôi cy 30°C 53 Bng 3.6 Nng NaCl, nhi , pH thích h ng ca chng MPT28 .54 Bng 3.7 ng ca trình t gen 16S rRNA ca x khun MPT28 vi trình t ng ca chng x khuc .56 IV D Hình 1.1 B v trí 34 vùng có s ng thc vt cao vic ly m phân lp x khun ni sinh .15 Hình 3.1 Hình nh khun lc chng x khun ni sinh lng ISP5 (a), SPA (b), HV (c), TA (d), STA (e), CA (f) sau tun ni cy 34 Hình 3.2 S phân b x khun ni sinh b phn ca Màng tang: s liu tng s ca 03 vùng (a); s liu thng kê theo tng vùng (b) 38 Hình 3.3 S phân b ca x khun ni sinh long phân lp khác 39 Hình 3.4 T l chng x khun ni sinh phân b theo nhóm màu sc khun ty Thanh Hóa, Hà Ni Phú Th 41 Hình 3.5 Bi thng kê kh t kinh ca 143 chng x khun ni sinh 42 Hình 3.6 Kh t kinh ca 47 chng x khun ni sinh (XKNS) 43 Hình 3.7 Hot tính kháng Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 (A) Bacillus cereus ATCC 11778 (B) ca mt s chng x khun ni sinh 44 Hình 3.8 T l chng x khun kháng nht mt chng vi sinh vt kinh phân b Thanh Hoá, Hà Ni Phú Th 47 Hình 3.9 T l chng kháng nht mt vi sinh vt kinh phân b theo v trí r, thân, 49 Hình 3.10 Hình thái khun lc (a) trêng ISP1 b mt chui bào t (b) i kính hin vi quang h i 7.500 ln ca chng MPT28 .52 DNA tng s (a) sn phm PCR (b) gel agarose 1,0% .55 Hình 3.12 Cây phát sinh chng loi ca chng MPT28 .57 V L .2 LI C ii DANH MC CÁC KÍ HIU, CÁC CH VIT TT iii DANH MC CÁC BNG iv DANH MC HÌNH V TH .v MC LC vi M U .1 Chƣơng I TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 Xạ khuẩn nội sinh thực vật dƣợc liệu 1.1.1 Khái nim x khun ni sinh 1.1.2 ni sinh ca x khun thc vt 1.1.3 ng dng ca x khun ni sinh thc vt .4 1.2 Phân lập xạ khuẩn nội sinh 11 1.2.1 p x khun ni sinh 11 1.2.2 ng phân lp .13 1.2.3 Các nghiên cu ci tin hiu qu phân lp 13 1.3 Sự đa dạng xạ khuẩn nội sinh thực vật 14 1.3.1 ng thc vt - ngun ti s ng x khun ni sinh 14 1.3.2 S ng ca x khun np chng loi 18 1.4 Khả sinh tổng hợp kháng sinh xạ khuẩn nội sinh dƣợc liệu 21 1.4.1 Kháng sinh t x khun ni sinh 22 1.4.2 Các gen tham gia vào trình tng hp kháng sinh hp cht i th cp 23 1.5 Tình hình nghiên cứu xạ khuẩn nội sinh thực vật Việt Nam .24 1.6 Cây Màng tang tiềm khai thác xạ khuẩn nội sinh 25 2.1 Vật liệu nghiên cứu 28 Chƣơng II VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 28 2.1.1 Mu Màng tang, chng ging vi sinh vt .28 2.1.2 Hóa cht, enzyme, thit b nghiên cu 28 VI 2.1.3 2.2 ng nuôi cy .29 Phƣơng pháp nghiên cứu 29 2.2.1 Thu thp chun b mu .29 2.2.2 Phân lp x khun ni sinh mu Màng tang 29 2.2.3 Sàng lc chng x khun có hot tính kháng vi sinh vt kinh 30 2.2.4 Nghiên cm sinh hc ca chng x khun MPT28 .30 2.2.5 Phân loi chng x khun MPT28 da phân tích trình t gen 16S rRNA 32 2.1.1 lý s liu 33 Chƣơng III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 3.1 Phân lập đa dạng xạ khuẩn nội sinh Màng tang vùng sinh thái khác 34 3.1.1 Phân lp x khun ni sinh Màng tang ti Thanh Hóa, Hà Ni Phú Th 34 3.1.2 3.2 S phân b x khun ni sinh Màng tang .37 Khả kháng vi sinh vật kiểm định chủng xạ khuẩn nội sinh 42 3.2.1 Kh t kinh ca chng x khun phân b theo vùng sinh thái khác 47 3.2.2 Kh t kinh ca chng x khun phân b theo v trí .49 3.3 Đặc điểm sinh học phân loại chủng xạ khuẩn MTP28 .50 3.3.1 m sinh hc chng x khun MPT28 51 3.3.2 Phân loi da xánh trình t gen 16S rRNA ca chng x khun MPT28 55 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 58 G B 59 TÀI LIU THAM KHO 60 PH LC 71 VII S xut hin ca nhng vi khun gây bnh kháng nhiu loi kháng sinh vi s lây lan rng ln ca nghiêm trng thu hút mi u ca cng S a nhng tác nhân gây b cho thy nhiu loi thuc kháng sinh hi li thi khơng cịn hiu qu Trong nhng thành công ca gii pháp thay th tng hp hóa hc vn cịn rt hn ch o mt khong tr ng tìm loi thuc mi Vì vy, cn nay, nhà khoa hc doanh nghip c phm th gii vn khơng ngng tìm kim ngun hp cht t phát trin loi kháng sinh mi nhm khc phc tình trng kháng thun X khung quan tâm nghiên cu ca rt nhiu nhà khoa hc th gii v ng hot cht sinh hc c c bit cht kháng sinh Các loài x khun ni sinh sng mô thc vt to mt s hp chy s phát trin ca ch giúp chúng tn tc ch Trong s hp cht này, cht có hot tính sinh h hot tính kháng khung oxy hóa, chng st rét ha hn nhiu ting dng y hc Vic phân lp x khun ni sinh sàng lc chng x khun có kh ng hp cht có hot tính kháng khun mng nghiên cu ti Cây Màng tang (Litsea cubeba (Lour.) Pers.) mt loi c liu phân b c ct Nam Chúng cha nhiu tinh du mà thành phn citral, có tác dng kháng khung oxy hóa Mc dù tinh dc s dng nhiu cuc sn s ng nghiên cu v x khun ni sinh Màng tang kh n ca chúng ti Vit Nam vn rt hn ch Xut phát t nhng trên, thc hin nghiên cu: “Phân lập xác định số đặc điểm sinh học xạ khuẩn nội sinh Màng tang (Litsea cubeba (Lour.) Pers.)”
Ngày đăng: 19/02/2024, 23:03
Xem thêm: