Biomaker và ng d ng trong chứụẩn đoán.... Các phƣơng pháp chẩn đoán dựa vào biomaker .... VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .... Phƣơng pháp nghiên cứu .... Đánh giá khả năng gắn kháng
LỜI CAM ĐOAN u ca bc thc hii s ng dn ca Tic Phong Ni dung lu có tham kho s dng tài li i tác phm, tp chí website theo danh mc tài liu tham kho ca lu Kt qu trình bày luc thu thc trình nghiên cu trung thc công b Hà Ni, tháng 12 Tác giả luận văn Trần Thanh Hoài 1708177964375b905ba80-0847-4067-a22c-ad7a1f6ea757 1708177964375bb929a5f-1492-45c4-9a97-834c624dcd35 170817796437499ed1a00-ebc8-4317-90ac-974d315256c9 Trn Thanh Hoài Lu MỤC LỤC Trang ph bìa L Mc lc DANH MC CÁC KÝ HIU, CÁC CH VIT T DANH MC CÁC BNG DANH MC CÁC HÌNH V TH MỞ ĐẦU CHƢƠNG I TỔNG QUAN 1.1 Biomaker ứng dụng chẩn đoán 1.1.1 Biomaker 1.1.2 ng dng ca biomarker chnh 1.2 Các phƣơng pháp chẩn đoán dựa vào biomaker 14 1.2.1 K thut PCR, real-time PCR 14 1.2.2 K thut ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) 15 1.2.3 K thut protein array 16 1.2.4 K thung ng b mt 17 1.3 Ứng dụng phƣơng pháp tƣơng tác cộng hƣởng bề mặt nghiên cứu nhận diện protein huyết 29 1.3.1 Tm quan trng ca protein huyt 29 1.3.2 Nhng hn ch nghiên cu protein huyt 33 1.3.3 ng b mt gii pháp cho phân tích nhn din protein huyt 33 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 37 2.1 Vật liệu nghiên cứu 37 Trn Thanh Hoài Lu ng nghiên cu 37 2.1.2 Hóa cht thit b s dng 37 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 37 n ligand IL2-antibody lên chip GLC 37 u 40 liu 42 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 45 3.1 Đánh giá khả gắn kháng thể kháng IL-2 lên sensor chíp GLC 45 3.2 Đánh giá ảnh hƣởng c mẫu huyết đến tín hiệu đo 47 3.3 Phân tích protein IL-2 mẫu huyết 52 3.3.1 Phân tích n khác ca protein IL-2 huyt 52 3.3.2 Phân tích tính nh ca tín hi -2 huyt 58 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO 62 Trn Thanh Hoài Lu DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DNA: Deoxyribo Nucleic Acid IL-2 : Interleukin IL-2 Ab : Interleukin antibody Kháng th kháng interleukin KD : Equilibrium kinetic hng s cân bng kd : Dissociation kinetic hng s ng hc liên kt ka : Association kinetic hng s kt hp PCR: Polymerase Chain Reaction RNA: Ribonucleic acid RU: Response units SPR: Surface plasma resonance Cng b mt DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Trang Bng 1.1: Các loi protein microarray [21] 17 Bng 1.2 S i n protein huyt b [32] 32 Bu kin chy chip GLC 38 Bng 2.2 V t ligand dung dng mu 39 Bng 2.3 V t IL-2 dung dng mu 41 Bng 2.3 V t mu phân tích dung dng mu 41 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình Trang Hình 1.1.C m t bào lai (clone) dòng AFP- i 10×20 10×10 [7] 10 Trn Thanh Hoài Lu ng dn ch cp suy tim [5] 11 .4 21 Hình 1.5 Hình nh mơ phprotein-ligand 6x6 25 Hình 1.6 Hình nh thơng s ng hc c antibody 26 Hình 1.7 Bi biu din thành phn 22 protein (chi m 99%) huyt [32] 31 Hình 3.1 Quá trình gn IL-2 antibody lên b mt chip 47 Hình 3.2 Quá trình phân tích protein IL-2 49 Hình 3.2 Phân tích hng s ng ha IL-2 vi ligand 52 -2 vi n mu huyt 54 Hình 3.4 Phân tích hng s ng ha IL-2 vi ligand vi mu huy pha lỗng khác 57 Hình 3.5 Phân tích tính nh ca tín hia l 59 Trn Thanh Hoài Lu MỞ ĐẦU Hi n nay, s ng bnh nhân b c tính có tng cu bnh nhân b M m mt vic rt quan tr hn ch nhng ca t vong ung c cha khi hoàn toàn nu phát hin sm nh mi b u ch ly mt, gen, máu hoc c tiu Mc xem mu phân tích ti phát hin ch th sinh hc nói chung ch th c luân chuyn m cha nhiu thành ph ng, enzym, kháng th m máu s cung cp nhiu thơng tin quan trng v tình trng sc khe Có rt nhiu k thut có th c phân tích m c ng d thut PCR, real-time PCR, ELISA, k thu thut ch da vào biomaker Mm riêng Trong thut protein array k thut m nhy cao cho phép phân tích nhiu mu lúc, nhiên cn phu mu bng phóng x, ch làm bi i cu trúc ca mu c khc ph m này, k thut phân tích mu b ng ng b mt (SPR) không cc nghiên cu phát trin ng b ma nhiu loi phân t, t nhng phân t có khng nh n nhng phân t có kh ng ln (vài triu Daltons), nhng phân t ng thp ng b mt (SPR) không ch t qu nh ng ca phân t cn phân tích mà cịn cung cp thơng s ng hc Trn Thanh Hồi Lu các Mt s nghiên cu cho thy tia k thut ng b mt (SPR) chm K thut quan tam c a nhiu nhà khoa hc th gii Tuy nhiên, Vit Nam, k thut rt mi m Vic nghiên cu phát trin k thut nghiên cu proteomic nói chung ch s mang li nhiu li ích Chính va chn u ng dng công ngh SPR ch Trong gii hn ca luc, tơi xin trình bày nhng kho sát u ca nghiên cu ng dng công ngh SPR ch sm Ni dung c a lu - n kháng th kháng IL-2 lên sensor chip GLC - ng ca mu huyt n tín hi - Phân tích IL-2 mu huyt + Phân tích n khác ca protein IL-2 huyt + Phân tích tính nh ca tín hi -2 huyt Trn Thanh Hoài Lu CHƢƠNG I TỔNG QUAN 1.1 Biomaker ứng dụng chẩn đoán 1.1.1 Biomaker proteonomics, ngày biomarker liên [6] nguyên nhân [6] 1.1.2 Ứng dụng biomarker chẩn đoán bệnh Các nhà nhi Trn Thanh Hoài Lu [6] Có hai lý , Tron [6] 1.1.2.1 Ứng dụng biomarker chẩn đoán ung thƣ sinh p - 10 Trn Thanh Hoài Lu ung [7] , alpha- Khi hàm [7] Hình 1.1.- 10×20 10×10 [7] 1.1.2.2 Ứng dụng biomarker chẩn đoán tim mạch c