Tóm tắt: Nghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt Nam

Nghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt NamNghiên cứu đa dạng và Phát triển nguồn gen một số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt Nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ TÌNH NGHIÊN CỨU ĐA DẠNG VÀ PHÁT TRIỂN NGUỒN GEN MỘT SỐ LOÀI LAN HÀI (Paphiopedilum) ĐẶC HỮU KHU VỰC MIỀN NÚI PHÍA BẮC VIỆT NAM Ngành : Di truyền Chọn giống trồng Mã số : 962.01.11 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ NÔNG NGHIỆP Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Ngơ Xn Bình TS Trần Ngọc Hùng HÀ NỘI – 2023 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI: VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM Người hướng dẫn: Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng đánh giá luận án Tiến sĩ họp tại: Vào hồi phút, ngày tháng năm 2023 Có thể tìm hiểu Luận án thư viện: DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CĨ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Nguyễn Thị Tình, Nguyễn Tiến Dũng, Trần Trung Kiên, Lê Thanh Ninh, Đào Duy Hưng, Ngơ Xn Bình, Trần Ngọc Hùng (2022), “Nghiên cứu khả nhân giống lan hài Việt Nam (Paphiopedilum vietnamese) kỹ thuật in vitro”, Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển Nơng thơn, số 18 kỳ 2, tr.25-32 Nguyễn Thị Tình, Nguyễn Tiến Dũng, Trần Trung Kiên, Lê Thanh Ninh, Đào Duy Hưng, Ngô Xuân Bình, Trần Ngọc Hùng (2022), “Ảnh hưởng số biện pháp kỹ thuật nhân giống lan hài Điểm ngọc (Paphiopedilum emersonii) phương pháp tách mầm Thái Ngun Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển nơng thơn, số 18 kỳ 1, tr.20-28 Nguyễn Thị Tình, Nguyễn Tiến Dũng, Trần Trung Kiên, Lê Thanh Ninh, Đào Duy Hưng, Ngơ Xn Bình, Trần Ngọc Hùng (2022), “Nghiên cứu ảnh hưởng giá thể dinh dưỡng đến khả sinh trưởng phát triển lan hài Việt Nam (Paphiopedilum vietnamese) giai đoạn vườn ươm.Tạp chí Rừng Môi Trường, số 113, tr.85-89 Thi Tinh Nguyen, Tien Dung Nguyen, Xuan Thanh Dao, Truc Dat Chu, Xuan Binh Ngo (2018)“In Vitro Propagation of Vietnam Endemic Lady ‘s Llipper Orchid (Paphiopedilum vietnamense O.Gruss & Perner Joural of Horticulre and Plant Research”, Journal ò Horticulture and Plant Research, vol 1, pp1-8 MỞ ĐẦU Khu vực miền núi phía Bắc gồm khu vực Đơng Bắc Tây Bắc Việt Nam bao gồm Quảng Ninh, Lạng Sơn, Thái Nguyên, Bắc Kạn, Cao Bằng, Hà Giang, Tuyên Quang, Lào Cai, Sơn La,…Đây tỉnh có diện tích rừng, vườn quốc gia khu bảo tồn lớn Việt Nam Khu vực trung tâm đa dạng sinh học hoạt động du lịch sinh thái cao việc khai thác tiêu thụ nguồn lan rừng với khối lượng lớn dẫn đến loài thực vật quý có giá trị kinh tế địa bàn bị cạn kiệt có nguy tuyệt chủng ngồi tự nhiên Chi lan hài Việt Nam (Paphiopedium) có đa dạng số lượng chất lượng với xuất 26 loài lan hài chiếm 37% số loài lan hài giới [Averyanov, 2008 [1] Lan hài hấp dẫn người yêu lan nước giới đa dạng màu sắc, hình dạng kích thước lá, hoa cánh mơi Sự đa dạng cấp độ lồi mà cịn thể cá thể lồi Bên cạnh chúng cịn xuất nhiều biến thể có lợi cho hấp dẫn người chơi (hài Giáp biến thể hài Jacki) hài Đuôi công biến thể (hài Tam Đảo, hài Trần Tuấn) Sự khác biệt có người đam mê hài đủ tinh tế để phân biệt chúng Một số lồi lan hài cịn có hương thơm lơi người chơi (hài Hương, hài Hằng, hài Ân, hài Hồng) Lan hài hội tụ cho đủ hương, sắc tinh tế loài hoa quý phái Điều gia tăng thú vị nhà sưu tầm, chọn giống, phân loại thực vật lan giới Việt Nam Lan hài có nhiều giá trị làm cảnh, nghiên cứu mang lại tiềm lực kinh tế tạo cơng ăn việc làm cho hàng triệu người biết khai thác phát triển bền vững Tuy nhiên, lồi hài Việt Nam bị khai thác tình trạng mức, môi trường sống chúng bị hủy hoại, khả tự nhân giống phụ thuộc nhiều vào yếu tố mơi trường hạt lan hài khơng có chứa nội nhũ Các yếu tố đẩy chúng vào tình trạng từ nguy cấp đến tuyệt chủng ngồi tự nhiên Năm 2006 Sách đỏ Việt Nam đưa 13 lồi lan hài vào tình trạng nguy cấp lan hài Việt Nam (hài Bóng) tình trạng tuyệt chủng tự nhiên (EW) [Sách đỏ Việt Nam, 2006 [15] đến năm 2019 Nghị định 06/2019/NĐ-CP 2019 phủ quản lý thực vật rừng, động vật rừng nguy cấp thực thi công ước buôn bán quốc tế loài động, thực vật hoang dã nguy cấp, bổ sung thêm lồi hài vào nhóm IA nâng tổng số lồi lan hài rơi vào tình trạng nguy cấp 22 loài loài bị tuyệt chủng tự nhiên [Nghị định 06/2019/NĐ –CP, [6] Điều cho thấy tốc độ cạn kiệt, tuyệt chủng nguồn gen loài hài nhanh Việc đánh giá, nghiên cứu lồi lan hài gặp nhiều khó khăn số nguyên nhân như: số lượng cá thể bị thu hẹp, sức sống khả hoa không ổn định di thực từ rừng từ vùng sang vùng khác Trong nhân giống lai tạo lan hài, hạt phấn dễ sức nảy mầm, phơi hạt khơng có chứa nội nhũ hạt nảy mầm điều kiện gặp môi trường giàu dinh dưỡng tối ưu Nuôi trồng lan hài gặp khơng trở ngại rễ lan hài bao phủ lớp vỏ lụa, đặc trưng lớp biểu bì dễ thối, hỏng khó phát sinh rễ Vì việc lựa chọn giá thể trồng, dinh dưỡng chế độ tưới cho cần nghiên cứu kỹ lưỡng Để định hướng công tác bảo tồn, phát triển lan hài Việt Nam bền vững cần phải giải vấn đề tồn việc nghiên cứu đặc điểm hình thái, đa dạng di truyền nhân giống phục vụ công tác khôi phục nhanh nguồn gen hài tình trạng bị tuyệt chủng ngồi tự nhiên có nguy cao nghiên cứu lai tạo để tạo tổ hợp lai có giá trị thương mại cao lan hài cần thiết Từ nhận thức đề tài luận án "Nghiên cứu đa dạng Phát triển nguồn gen số loài lan hài (Paphiopedilum) đặc hữu khu vực miền núi phía Bắc Việt Nam" thực Mục tiêu luận án Đánh giá đa dạng di truyền loài hài khu vực miền núi phía Bắc thị hình thái thị phân tử để xác định mối quan hệ di truyền loài lan hài thu thập làm sở cho việc chọn tạo nguồn vật liệu di truyền tốt phục vụ cho nhân giống, bảo tồn lai tạo, tạo tiền đề phát triển số loài lan hài có giá trị phục vụ sản xuất nhu cầu chơi hoa Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn 3.1 Ý nghĩa khoa học Các kết nghiên cứu đề tài luận án cung cấp dẫn liệu khoa học có giá trị đặc điểm hình thái phân nhóm theo tính trạng đặc trưng mức độ đa dạng di truyền làm sở bảo tồn, phát triển khai thác chúng cách phù hợp Các kết nghiên cứu có hệ thống từ việc thu thập, đánh giá đặc điểm, nhân giống chọn tạo giống lai tạo lan hài, tài liệu tham khảo cho công tác nghiên cứu, đào tạo, bảo tồn phát triển nguồn gen hài Việt Nam 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Góp phần thiết thực vào việc định hướng bảo tồn phát triển lồi hài Việt Nam nói chung khu vực miền núi phía Bắc nói riêng Dữ liệu đặc điểm hình thái phân tích đa dạng di truyền sở khoa học để đề xuất hướng khai thác sử dụng hiệu nguồn gen hài Việt Nam có Tuyển chọn hai lồi lan hài có giá trị thẩm mỹ, dễ trồng, dễ chăm sóc, lai tạo tổ hợp lai tái sinh 03 dòng lai Nhân giống loài hài (hài Việt Nam, hài Điểm Ngọc) phục vụ bảo tồn phát triển sản xuất Những đóng góp đề tài luận án Là cơng trình nghiên cứu có hệ thống từ đặc điểm sinh thái học, đa dạng di truyền kiểu hình kiểu gene tương đối đầy đủ cho mẫu lan hài phân bố trồng khu vực miền núi phía Bắc Chọn lọc giới thiệu loài lan (hài Việt Nam, hài Điểm Ngọc) có giá trị thẩm mỹ (có hương, sắc) bị có nguy tuyệt chủng ngồi tự nhiênđưa vào nhân giống bảo tồn, phát triển bền vững Nhân giống in vitro thành công lan hài Việt Nam (hài Bóng) bị tuyệt chủng ngồi tự nhiên (phân hạng EW – sách đỏ Việt Nam, 2007) tái sinh thành công 03 tổ hợp lai đưa vào theo dõi Nhân giống tách chồi thành công hài Điểm Ngọc (hài Hương Lan) tình trạng nguy cấp (mức CR – sách đỏ Việt Nam, 2007) Đề xuất cặp bố mẹ có tiềm lai tạo, tạo 03 tổ hợp lai Đối tượng phạm vi nghiên cứu đề tài 5.1 Đối tượng nghiên cứu Cây lan hài thu thập khu vực miền núi phía Bắc 5.2 Phạm vi nghiên cứu Thu thập, Đánh giá đặc điểm hình thái đặc trưng đa dạng di truyền loài lan hài thu thập khu vực Từ đề xuất cặp mẹ phục vụ công tác lai tạo Đánh giá ảnh hưởng số yếu tố đến kết lai tạo lan hài Đánh giá khả nhân giống hài Việt Nam, hài Điểm Ngọc lai có giá trị phương pháp nhân giống in vitro phương pháp tách chồi Bố cục Luận án: Luận án gồm 140 trang: Mở đầu (03 trang) Tổng quan tài liệu nghiên cứu (29 trang) Vật liệu, nội dung phương pháp nghiên cứu (22 trang) Kết nghiên cứu thảo luận (77 trang) Kết luận đề nghị (2 trang) Danh mục cơng trình cơng bố (1 trang) Tài liệu tham khảo (7 trang) Luận án gồm chương, 27 bảng biểu, hình minh họa 04 phụ lục Luận án sử dụng 98 tài liệu tham khảo nước giới CHƯƠNG TỔNG QUAN CÁC VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Tổng quan chung lan hài 1.1.1 Phân loại lan hài Theo hệ thống phân loại, lan hài (Paphiopedilum) nhánh họ lan (Orchidaceae) thuộc lan (Orchidales), phân lớp hành (Liliidae), lớp mầm (Monocotyledoneae), nghành hạt kín (Angiospermatophyta) Hoàng Thị Sản (2002)[26] 1.1.2 Sự phân bố lan hài Các lồi lan hài Việt Nam chia thành hai nhóm riêng Một nhóm phân bố vùng núi đá vơi phía Bắc Việt Nam từ độ cao mặt nước biển lên đến 1600 m, nhóm cịn lại phân bố khu vực có đá mẹ silicat, đá phiến cát kết độ cao từ 700 - 2200 m 1.1.3 Sự đa dạng loài lan hài 1.1.3.1 Sự đa dạng loài lan hài giới Paphiopedilum bao gồm 50 loài lan sống cạn sống đá phân bố Himalaya, Trung Quốc, Đông Nam Á, Indonesia New Guinea Những lồi lan lồi lan cộng sinh khơng thân, giả hành với hình elip – hình mác phát triển tốt ôm lấy gốc Những hoa sinh đơn lẻ vài cụm hoa cụm hoa ngắn đến dài Cụm hoa cao 60 cm thường có màu nâu tía Các đài lưng khác biệt hai đài bên hợp để tạo thành đài thẳng đứng Các đài bên hẹp dài với mép gợn sóng Các cánh hoa vng góc với đài đơi cong phía mơi Ở chi này, tổng thể, hình dạng lá, nhị cánh hoa, chiều rộng cánh hoa số lượng hoa chùm hoa cho thấy tính bảo thủ phát sinh gen mạnh mẽ thay đổi tiến hóa rõ rệt [Zhang cs, 2016] [98] 1.1.3.2 Sự đa dạng loài lan hài Việt Nam Nằm khu vực nhiệt đới gió mùa, Việt Nam quốc gia đánh giá có đa dạng sinh học phong phú nôi nhiều loại lan đặc trưng có lan hài (Paphiopedilum) chi lan đẹp quý Việt Nam nước có đa dạng lan hài lớn giới với 26 tổng số khoảng 80 lồi, có nhiều lồi đặc hữu, trước tiên phải kể đến hài Việt Nam (P vietnamese), tiếp lồi hài đỏ (P.delenatii); hài vàng (P.villosum); lan hài tía (P.purpurathum); hài trắng (P.emersonii); hài Vân (P.callosum); hài Vân duyên (P.amabile); hài Đốm (P.concolor), hài Lông (P.hirsutissimum); hài Râu (P.parishii)…(Nguyễn Tến Bân, 1990) [2] Lan hài Việt Nam phân bố miền Nam Bắc, thời điểm nở hoa lại rải rác năm (Vũ Thị Huyền Trang cs., 2019) [34] 1.2 Nghiên cứu đa dạng di truyền lan hài giới Việt Nam Đa dạng di truyền sinh vật đặc tính sinh vật Sự đa dạng kiểu hình tính đa hình kiểu gen quy định có tương tác kiểu gen với mơi trường Biểu tính đa dạng di truyền sinh vật thể mức độ khác nhau: Đa dạng kiểu hình biểu tính trạng hình thái đa dạng tính trạng số lượng 1.2.1 Nghiên cứu đa dạng di truyền lan hài giới Trong số chi lan hài, chi Paphiopedilum nghiên cứu truy tìm nhiều Điểm đặc biệt chi nhiều lồi có màu sắc lá, thân giống nhau, gây nhầm lẫn cho người sưu tầm nghiên cứu đánh giá đa dạng di truyền xác định lồi cách xác việc sử dụng phương pháp sinh học phân tử kỹ thuật di truyền ứng dụng triệt để Khi sử dụng đặc điểm hình thái để phân loại họ lan nói chung lan hài nói riêng cấu trúc hoa tiêu chí xác định lồi xác (De cs, 2019 47]); (Tsiftsis, 2016) 89]; (Zhang cs, 2016) [98], hoa có đặc điểm riêng biệt, đặc trưng từ màu sắc đến tạo hình, loài gần gũi chi (Cribb, 1987; Cribb, 1998) [42,43] 1.2.2 Nghiên cứu đa dạng di truyền lan hài Việt Nam Kết nghiên cứu đa dạng di truyền cho loài lan hài Việt Nam chưa nhiều, phần lớn nghiên cứu mặt hình thái, đặc điểm khó để đánh giá xác lồi mức độ tương đồng hình thái cao Do đó, việc thực đề tài để đánh giá đa dạng di truyền loài lan hài thị phân tử cần thiết, giúp cho việc xác định xác lồi, làm sở cho việc nghiên cứu chọn tạo giống, biện pháp kỹ thuật phát triển lan hài cho khu vực miền núi phía bắc Phan Kế Long cs, năm 2010 [69] nhận diện số loài lan Hài đặc hữu Việt Nam nghiên cứu mối liên hệ với loài lan giới dựa vùng ITS để bảo tồn bền vững lồi lan có nguy tuyệt chủng Kết phân tích cho thấy, vùng ITS-rDNA lồi hài Việt Nam dao động 659- 700 bp Hai mẫu P.villosum lấy từ hai riêng biệt hồn tồn khơng có khác Chiều dài ITS mẫu Việt Nam giống với trình tự cơng bố Genbank Khi nghiên cứu đa dạng di truyền loài lan hài Đốm (P.concolor) địa Việt Nam (2009), tác giả Khuất Hữu Trung cộng nhậnxét: Loài lan hài Đốm (P.concolor) địa Việt Nam đa dạng phong phú Các mẫu giống thu thập vùng sinh thái khác có đặc điểm đặc trưng riêng hình thái Kết phân tích kỹ thuật RAPD-PCR hệ số tương đồng di truyền mẫu hài Đốm dao động từ 0,56 đến 0,94; 16 mẫu lan hài Đốm nghiên cứu phân thành nhóm khác Năm 2010, Nguyễn Thị Mỹ Duyên cs nghiên cứu phả hệ chi, loài lan (Orchidaceae) dựa phân tích vùng trình tự ITS, kết cho thấy loài lan hài P.delenatii, P.concolor, P.paishii, P.hirsutissimum, P.primulium có quan hệ họ hàng xa phân tích kiểu gen, mặc dù hình thái chúng xếp cùng nhóm [8] Khuất Hữu Trung cs sử dụng trình tự vùng ITS (gồm ITS1, 5.8 S, ITS2) để phân biệt 16 loài thứ loài chi Paphiopedilum Việt Nam Nghiên cứu kết luận rằng, vùng có độ biến thiên cao vùng ITS hữu ích cho việc phân tích phát sinh lồi Như có nhiều vùng trình tự sử dụng đối tượng khác hoa lan [34] Nguyễn Thị Hải Yến cs, (2020) [37] tách chiết DNA tổng số theo phương pháp dùng CTAB (Collins & Symons, 1992) có cải tiến cho phù hợp với điều kiện thí nghiệm Việt Nam để nhận dạng lan hài Hằng (P.hangianum) Việt Nam Kết phân tích dựa vào trình tự gen rbcL sai khác loài lan Hài khác 1.3 Đặc điểm lan hài 1.3.1 Đặc điểm hình thái lan hài Theo Trần Hợp (1990) [12], lồi lan hài (Paphiopedilum) Việt Nam có hình dạng bên đa dạng, chúng mang đặc điểm hình thái chung sau: - Dạng cây: Là lồi thân cỏ có kích thước trung bình với thân mang nhiều mọc thành hai hàng xếp thành hình quạt, đơi có dạng thân bị Tất lồi có thân rễ đa số ngắn Thân loại thân rễ nằm ngang, thơng thường nằm lớp đất, có nhiệm vụ đỡ cho lá, từ rễ phát triển theo nhiều ngang dọc Thân thường mang số lượng không đổi, sau đạt đến độ trưởng thành hình thành chồi hoa - Rễ: Rễ chùm, có lớp mơ xốp bọc xung quanh rễ thật, lớp màng xốp có vai trị việc giữ nước ngăn ánh sáng mạnh Sau rễ trưởng thành có dạng sợi mảnh với hệ floem phát triển mạnc Rễ xanh quanh năm bao phụ lớp vỏ làm cho rễ có khả hấp thụ độ ẩm khơng khí - Lá: Thường có dạng dài gấp đơi, hình trứng ngược hay bầu dục thn mở rộng Mỗi có đốt gốc, bẹ hình chữ V xếp lợp xít lên thân Độ dài từ 3- 50 cm Mặt có màu xanh khảm mảng đậm nhạt không với gân màu xanh rõ Mặt có đốm tím dày đặc vết tím xỉn thấy rõ gần gốc - Cụm hoa: Thường thẳng đứng hay cong, cuống hoa nằm ngang hay chúc xuống, P villosum phụ sinh thường có cuống hoa nằm ngang chúc xuống, loài P.malipoense, P.micranthum P.appletonianum) cuống hoa thẳng đứng Phần lớn loài có hoa riêng lẻ Nhưng lồi P.delenatii P.concolor, điều kiện thuận lợi lại phát triển thành cụm hoa có từ hoa trở lên Cuống hoa lơng tơ dầy, ngắn nhẵn Cụm hoa có hình dạng khác tùy lồi, từ hình múi giáo, hình trứng, chóp nhọn bầu dục trịn - Hoa: Gồm hai đài vịng ngồi, đài lưng, đài hợp ba cánh hoa vòng Lá đài lưng thường lớn, hướng thẳng lên thường bật với vạch hay chấm mặt Lá đài lưng nằm đối diện với đài hợp vị trí thấp hướng xuống phía Lá đài hợp nằm phía sau cánh mơi thường có màu tối xỉn bật so với đài lưng Cả hai có lơng tơ dày mặt Hai cánh hoa bên thường xoè xuống theo chiều ngang Chúng có hình thìa, bầu dục, trứng rộng hay trịn Cánh hoa hình mũi giáo hẹp, xoắn ốc hẹp dần từ gốc lên đến đỉnh Cánh hoa thứ ba biến dạng rõ rệt thành mơi giống bao hình hài Mơi dạng túi sâu phồng lên, hình giầy, có lơng mặt nhẵn mặt ngồi - Quả: Dạng nang, khơ, dài, có với ba van rộng ba van hẹp Qủa mở gần đỉnh rãnh nứt Qủa thường chín điều kiên tự nhiên sau thụ phấn từ đến 10 tháng - Hạt: Có hình bầu dục, hình suốt ngắn, dạng thn dài hay hẹp thường có chiều dìa từ 0,4 - 1,1 mm Phôi nhỏ, dài từ 0,3 - 0,4 mm Hạt nội nhũ khó nảy mầm điều kiện tự nhiên Hạt lan chín nhẹ dễ dàng phát tán nhờ gió hạt khơng có nội nhũ, nên phải sống cộng sinh với loài nấm rễ Qua kết cho thấy thông tin đặc điểm hình thái lan hài nghiên cứu đánh giá, thực tế loài lan hài khác sinh trưởng phát triển khu vực địa lý khác có đặc trưng riêng cho lồi, việc nghiên cứu đánh giá đặc điểm hình thái cho loài cần thiết, làm sở cho việc đánh giá định danh, đưa biện pháp kỹ thuật phù hợp cho loài lan hài nhằm nâng cao hiệu nghiên cứu phát triển giống lan hài quý cho khu vực miền núi phía bắc Việt Nam 1.3.2 Đặc điểm sinh thái lan hài Tại Việt Nam, lan hài thường phân bố vùng có lươṇg mưa lớn, ẩm độ cao Tuy nhiên đặc trưng vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa nên chúng thường phải trải qua giai đoạn khô hạn Sự xuất hiêṇ dày, dai moṇg nước hướng thích nghi tốt để sống sót qua đợt khơ hạn định kỳ chúng nhanh chóng phục hồi mùa mưa trở lại Độ ẩm xung quanh rễ, kiểu đất ̣pH, có măṭ nấm rễ, tác nhân thụ phấn cường độ ánh sáng nhân tố quan troṇg hình thành phát triển quần thể lan hài (Averyanov cs, 2008) [1] 1.4 Tình hình sản xuất tiêu thụ lan hài giới Việt Nam 1.4.1 Tình hình sản xuất tiêu thụ lan hài giới Hiện tình hình sản xuất hoa giới phát triển cách mạnh mẽ trở thành ngành thương mại có lợi cho kinh tế nước trồng xuất hoa Diện tích trồng hoa giới ngày mở rộng khơng ngừng tăng lên, nhiều tạp chí hoa lan xuất bản, nhiều hội thảo lan tổ chức Trước việc nuôi trồng xuất chủ yếu lan rừng nên nguy khoảng 13 loài tuyệt chủng, ngày việc trồng lan dần theo quy mô công nghiệp, việc xuất lan đạt tới số lượng hàng trăm ngàn giò, hàng vạn cành lan năm nhằm đáp ứng nhu cầu ngày cao thị trường 1.4.2 Tình hình sản xuất tiêu thụ lan hài Việt Nam Việt Nam nằm vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa, nóng ẩm quanh năm thuận lợi cho việc trồng hoa, cảnh Tuy nhiên chưa đầu tư thích đáng nên ngành trồng hoa nói chung ngành trồng lan nói riêng chưa thực phát triển, sản xuất lan Việt Nam phát triển mạnh mẽ tỉnh phía Nam, đặc biệt Đà Lạt thành phố Hồ Chí Minh Từ nghiên cứu cho thấy, sản xuất, kinh doanh, lan hài Việt Nam từ trước đến dạng tiềm năng, có khả cạnh tranh thị trường quốc tế Những hoạt động kinh doanh xuất lan hài thời gian qua có ý nghĩa khởi động, hứa hẹn phát triển tương lai tạo thêm việc làm cho người dân khu vực Nâng kim ngạch xuất hoa lan ngang tầm với quốc gia khu vực 1.5 Nghiên cứu trạng giải pháp nhằm mục đích bảo tồn lan hài giới Việt Nam Trên giới nhiều loài lan có nguy tuyệt chủng, liệt kê phụ lục II CITES, nhiều nguyên nhân biến đổi khí hậu, khai thác mức, buôn bán bất hợp pháp lấn chiếm đất đai Hoa lan biết đến cảnh quan trọng Việt Nam, đặc biệt lan hài Các loài lan hài Việt Nam tiếng với vẻ đẹp đa dạng có nhu cầu sử dụng làm cảnh cao toàn giới Do cần có biện pháp kỹ thuật để nhân giống, bảo tồn phát triển lan hài có giá trị Việt Nam 1.5.1 Hiện trạng giải pháp bảo tồn lan hài giới Chi lan hài (Paphiopedilum) có khoảng 75 lồi Tuy nhiên lồi mà cơng tác điều tra, thu thập, bảo tồn nguồn gen lan hài giới quan tâm nghiên cứu nhiều tổ chức, cá nhân phủ nước Đầu tiên phải kể đến tổ chức CITES đưa Công ước buôn bán quốc tế loài động, thực vật hoang dã nguy cấp (CITES) Hiệp định phủ, thiết lập nhằm mục tiêu kiểm sốt hoạt động bn bán quốc tế mẫu vật loài động, thực vật hoang dã cách bền vững, đảm bảo hoạt động không làm ảnh hưởng đến tồn vong lồi tự nhiên Cơng ước đời góp phần giảm thiểu bn bán lồi lan hài bất hợp pháp 1.5.2 Hiện trạng giải pháp bảo tồn lan hài Việt Nam Việt Nam nằm khu vực châu Á nhiệt đới - nơi phát sinh nhiều loài phong lan quý giới Việt Nam nằm số 25 quốc gia hàng đầu giới đa dạng sinh học, có đa dạng lồi lan Theo đánh giá Averyanov Việt Nam có 158 chi khoảng 900 loài Theo tác giả Trần Duy Quý cs Việt Nam thống kê phát Việt Nam có 160 chi 1004 lồi lan Đây quốc gia có nguồn tài nguyên thực vật đặc biệt họ lan phong phú bậc khu vực Châu Á Mặc dù phủ Việt Nam nhiều chiến lược biện pháp thành lập mạng lưới bảo tồn loài lan hài, nghiêm cấm khai thác buôn bán lan hài hầu hết loài lan hài Việt Nam tình trạng nguy cấp tuyệt chủng ngồi tự nhiên như: hài Việt (P.vietnamense), hài mốc vàng (P.armeniacum), hài Mốc hồng (P.micranthum), hài Điểm Ngọc (P emersonii) (The IUCN, 2019 Phụ lục công ước CITES Danh mục Thực vật rừng, Động vật rừng nguy cấp, quý (nhóm1) Nghị định số 06/2019/NĐ-CP, Nghị định Chính phủ, ngày 22/01/2019) Do việc bảo tồn lồi lan hài Việt Nam cần phải đồng thực nhanh biện pháp nhân giống khẩn cấp lồi lan hài có giá trị, lồi đặc hữu Việt Nam hài Việt Nam (hài Bóng), hài Điểm Ngọc (hài Hương Lan) 1.5.3 Nghiên cứu khả nhân giống lan hai giới Việt Nam 1.5.3.1 Nghiên cứu nhân giống lan hài giới Việc nhân giống lan hài nhà khoa học quan tâm nghiên cứu từ sớm Cây lan hài trồng từ nguồn giống nhân theo phương pháp nhân giống tách chồi, gieo hạt phương pháp in vitro 1.5.3.2 Nghiên cứu khả nhân giống lan hài Việt Nam * Nghiên cứu nhân giống in vitro lan hài Ngoài phương pháp gieo hạt tự nhiên, chi lan Paphiopedilum thường nhân giống qua phân chia chồi nách từ mẹ nhân giống phương pháp in vitro 1.6 Các kết luận qua phân tích tổng quan Như vậy, để có sở cho cơng tác bảo tồn chọn lọc nguồn nguyên liệu làm giống để phát triển nguồn gen làm hoa cảnh việc đánh giá mức độ đa dạng nguồn gen lan hài thực cần thiết 10 2.3.3 Phương pháp sử dụng đánh giá đa dạng di truyền dựa vào kiểu hìnhPhương đánh giá đa dạng di truyền mức hình thái * Phương pháp UPOV 2.3.4 Các phương pháp sử dụng đánh giá đa dạng di truyền dựa vào thị phân tử * Tách chiết ADN tổng số Trong nghiên cứu này, chọn phương pháp sử dụng CTAB P Doyle and Doyle (1990) [51] với số cải tiến nhỏ để tiến hành tách chiết ADN từ mẫu nghiên cứu * Giải trình tự Sản phẩm PCR ITS sau tinh sạch, giải trình tự công ty Apical Scientific (Malaysia) Kết giải trình tự được so sánh với trình tự tương đồng NCBI Sau đó, trình tự tập hợp lại phân tích chương trình MEGA v6.06 để tạo phát sinh loài 2.3.5 Phương pháp lai tạo lan hài 2.3.5.1 Phương pháp lai tạo chọn lọc Phương pháp lai tạo lan hài dựa theo phương pháp Dongarwar Thakur [50] 2.3.6 Phương pháp nghiên cứu nhân giống in vitro lan hài Việt Nam sản phẩm lai * Lựa chọn vật liệu khởi đầu Cây hài Việt Nam có màu sắc hoa đẹp, sinh trưởng phát triển tốt, cho hoa thường xuyên Chúng tiến hành thụ phấn Sau đậu sau tháng tiến hành đưa vào nhân giống * Phương pháp nhân giống in vitro lan hài Nhân giống in vitro thực theo phương pháp vi nhân giống hoa lan Arditti có cải tiến kết hợp tham khảo nghiên cứu Hemanta [55] - Các thí nghiệm ni cấy mơ tiến hành điều kiện nhân tạo, nhiệt độ 25 ± 2oC, ẩm độ 70%, ánh sáng đèn huỳnh quang với cường đô từ 2.400 – 3.000 lux, thời gian chiếu sáng 16 sáng/24 Môi trường nuôi cấy đưa pH 5,8 hấp khử trùng 121oC, áp suất 1,1 atm 30 phút Các dụng cụ dao, kéo, đĩa cấy 2.4 Điều kiện thí nghiệm tiêu theo dõi 2.4.1 Các tiêu theo dõi + Các tiêu rễ, thân, lá, hoa + Các tiêu theo dõi nuôi cấy in vitro + Các tiêu sinh trưởng phát triển 2.4.2 Điều kiện thí nghiệm * Điều kiện ni cấy - Nhiệt độ phòng 25 ± 20C, ẩm độ 60-70%, thời gian chiếu sáng 16giờ/ngày, cường độ ánh sáng 1.500 - 2.300 lux * Điều kiện trồng chăm sóc - Duy trì nhiệt độ vườn ươm 13 – 18OC vào mùa đông; 26 – 34oC vào mùa hè - Phòng trừ bệnh hại: phun định kỳ 10 ngày/lần Antracol 70WP nồng độ 0,1% 11 - Các loại phân bón lá, chất kích thích, phun vào buổi chiều mát, sau tưới nước để tăng khả hấp thu dinh dưỡng 2.5 Phương pháp xử lý số liệu * Đánh giá đa dạng di truyền - Số liệu nghiên cứu phân tích, xử lý dựa phần mềm Excel version 5.0, chương trình thống kê cho ngành sinh học * Nhân giống in vitro, nhân giống tách chồi nuôi trồng Sử dụng phương pháp thống kê sinh học để phân tích số liệu thí nghiệm phần mềm (Excel, Irristat 5.0) CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 Thu thập, đánh giá thực trạng giá trị loài lan hài khu vực miền núi phía Bắc Lan Hài nhóm khác biệt Chúng dễ dàng nhận cấu trúc hoa khác thường với cánh hoa hình túi sâu trông giống hài nằm vị trí thấp hoa, tạo nên vẻ bề đặc sắc Các loài Lan Hài thường gặp tự nhiên thuộc vào nhóm quí 3.1.1 Thu thập đánh giá đặc điểm sinh thái nguồn gan loài lan hài khu vực miền núi phía Bắc Sự đa dạng sinh học loài lan hài thể phong phú hình dạng, kiểu dáng, kích thước màu sắc hoa Các mẫu giống lan hài chia thành nhóm (nhóm có vân đốm nhóm xanh khơng có vân đốm) Nhóm xanh khơng có vân đốm thích hợp điều kiện lạnh, khó trồng (hài Râu, Đi cơng, Vệ nữ, hài Chân tím, hài Điểm Ngọc, hài Hằng, hài Râu, hài Henrry, hài Hellen, hài Lông, hài Đuôi Công … thường trồng vùng núi cao Tam Đảo, Sapa, Ba Bể, Mẫu Sơn… Nhóm có Vân đốm phân thành loại loại: Loại dễ trồng, sinh trưởng phát triển nhiều vùng, nhiều điều kiện sinh thái khác (hài Hồng, hài Vân Nam, hài Táo, hài Gấm, hài Giáp) trồng vùng đồng vùng Loại khó trồng (hài Việt Nam, hài Mạng đỏ tía, hài Mốc vàng) 3.1.2 Tình hình khai thác, sử dụng ni trồng Hiện lồi lan hài bị săn tìm, thu hái cung cấp cho "thị trường đen" quốc tế, khiến số lượng hài bị suy giảm nhanh chóng, dẫn đến số loài dần tự nhiên Việc thu hái tự nhiên khơng có kiểm sốt khiến nửa số lồi hài gần tuyệt chủng Một điều nghịch lý lồi hài Việt Nam khó tìm thấy tự nhiên khai thác cạn kiệt nạn phá rừng lại xuất với số lượng lớn thị trường nước Tại vùng đệm vườn quốc gia, lan hài bị người dân địa khai thác cách triệt để, nhằm phục vụ nhu cầu thưởng ngoạn, chơi hoa cảnh Hình thức khai thác chủ yếu đào đánh ngun khóm trồng * Kiến thức ni trồng địa phương thức nhân giống Lan hài sau khai thác từ rừng người dân trồng theo kinh nghiệm cá nhân, chưa nắm rõ yêu cầu ngoại cảnh, yêu cầu sinh lý để có biện pháp kỹ thuật phù hợp, nên tỷ lệ sống, tỷ lệ nở hoa thấp dẫn đến hiệu kinh tế chưa 12 cao Để tránh khơng phải trì, chăm sóc thu lợi nhuận ngay, người dân sau khai thác về, hài thường bán nguyên nguyên khóm thị trường 3.1.3 Khả bảo tồn phát triển Toàn chi lan hài Paphiopedilum Pfitzer Việt Nam đưa vào sách đỏ Công ước quốc tế (CITES), lồi thuộc chi có ý nghĩa lớn lĩnh vực thương mại, trước hết giá trị làm cảnh, có hương thơm, màu sắc đẹp đặc biệt lâu tàn, nên thị trường nước giới ưa chuộng Để bảo tồn phát triển cần có biện pháp thu thập lưu giữ, xây dựng kỹ thuật nhân giống, trồng chăm sóc phù hợp, đặc biệt sử dụng phương pháp chon tạo giống truyền thống kết hợp với công nghệ sinh học để tạo giống thương mại có giá trị kinh tế cao, thích nghi với điều kiện sản xuất, có khả chống chịu cao, đẻ nhánh khỏe, nhiễm bệnh, cành cứng, hoa to, bền, màu sắc tươi đậm 3.2 Đánh giá đặc điểm hình thái đa dạng di truyền lồi lan hài phân bố trồng khu vực miền núi phía Bắc 3.2.1 Đánh giá đặc điểm hình thái lồi lan hài phân bố trồng khu vực miền núi phía Bắc 3.2.1.1 Đánh giá đặc điểm hình thái đặc trưng Đánh giá đặc trưng hình thái giống lan hài địa, cho thấy giống nghiên cứu có thân ngắn, khơng nhìn thấy thân (hài Kim) thân gần chìm đất (hài Vệ nữ), thân mập khỏe Bộ rễ giống lan hài khỏe, có nhiều lơng tơ nên lan hài sống vùng núi cao, bám vào vách đá 3.2.1.2 Đánh giá đặc điểm đặc trưng hình thái thân, rễ khả thích nghi lồi lan hài phân bố nuôi trồng khu vực miền núi phía Bắc + Kích cỡ cây: Đây tính trạng thể sức sống, sức sinh trưởng khả thích nghi Các lồi lan hài Việt Nam biểu nhóm kích cỡ cây: Cây to (hài Hằng, hài Râu, hài Giáp, hài Điểm Ngọc), nhỡ (hài Việt Nam, hài Hồng, hài Jacki, hài Gấm, hài Đuôi Công, hài Vân Bắc, hài Vân Nam ) nhỏ (hài mốc vàng, hài hellen, hài mạng đỏ tía) + Lan hài khơng chơi hoa, lan hài nhiều người kiếm tìm đẹp, có vân, Lá lan hài biểu nhiều màu sắc khác nhau: Lá có đốm, giáp, trơn khơng đốm Nhóm thích nghi với khí hậu mát mẻ phân bố độ cao 1000m thường lồi khơng có vân lá: hài Kim, hài Vệ nữ, hài Râu, hài Hằng, hài Điểm Ngọc, hài hellen, hài thuộc lồi khơng có vân 3.2.1.3 Đánh giá đặc điểm đặc trưng hình thái hoa - Về thời gian xuất ngồng hoa thời gian nở hoa lồi lan hài có khác Hài Kim, hài mạng đỏ tía, hài hồng, hài Trần liên thường xuất ngồng hoa nở hoa vào dịp cuối năm thời tiết lạnh (từ tháng 10-tháng 1) nhóm lan hài thường nở hoa vào dịp Tết Hài Điểm Ngọc, hài Hằng, hài Việt Nam, hài Gấm thường xuất ngồng hoa nở hoa vào tháng 3,4,5; hài Râu, hài Jacki, hài Giáp, hài Xanh vào cuối hè đầu thu (tháng 5,6,7,8) Trong hài Táo, hài Vân Nam, Vân Bắc, hài Henry, hài Đi Cơng có thời gian dài từ -10) - Chiều dài ngồng hoa phân làm loại: Dài (Mạng đỏ tía, hài Râu, hài Táo, hài Mốc vàng, hài Xanh, Hài Jacki), trung bình (Hài Việt Nam, hài Việt Nam nuôi cấy mô, hài Hồng, hài Điểm Ngọc, hài Hằng, Hài Đuôi Công, hài Kim (Lai Châu), hài Vân Nam 13 (Hà Giang), hài Vân Nam (Tuyên Quang), hài Lông, hài Kim (Lai Châu)) ngắn (Hài Điểm Ngọc, hài Hellen, hài Gấm, hài Hecmani, hài Henry) - Kích thước hoa phân làm dạng: Hoa to (Hài Việt Nam, hài Việt Nam nuôi cấy mô, hài Điểm Ngọc, hài Hằng, hài Jacki, hài Xanh, hài Mạng đỏ tía), trung bình (Hài Chân Tím, hài Đi Công, hài Kim (Lai Châu), hài Gấm, hài Lông, hài Hecmani, hài Henrry, hài Hellen, hài Hồng, hài Henrry, hài mốc vàng, hài Vân Bắc, hài Vân Nam Hà Giang + Tuyên Quang.) hoa nhỏ có hài Hellen - Màu sắc hoa lan hài đa dạng từ màu trắng, vàng, hồng, nâu, xanh, - Hương thơm : Lan hài phân thành nhóm: nhóm lan hài có hương thơm (ít) gồm có lan hài Hồng, hài Điểm Ngọc, hài Hằng Cịn lại lồi lan hài khơng có hương thơm 3.2.2 Đánh giá đa dạng di truyền nguồn gen loài lan hài phân bố ni trồng khu vực miền núi phía Bắc Việt Nam Trong công tác bảo tồn, chọn tạo giống trồng việc đánh giá đa dạng di truyền cần thiết Nó xác định xác tên lồi, xác định khả sinh sản trì lịi giống lồi, xác định việc lựa chọn xác cặp bố mẹ phụ thuộc công tác lai tạo 3.2.2.1 Đánh giá đa dạng di truyền loài lan hài phân bố trồng khu vực miền núi phía Bắc dựa vào kiểu hình Tiến hành phân tích quan hệ di truyền dựa đặc điểm tính trạng hình thái tập đoàn 23 loài hài phần mềm NTSYS pc 2.10 Dựa vào kết phân loại cho thấy 23 lồi phân thành nhóm với hệ số tương đồng tương cao dao động khoảng 0,00 đến 9,94 * Nhóm I: Gồm lồi hài chia thành phân nhóm bậc sau: + Phân nhóm Ia: Gồm lồi: hài Hecman H1 hài Henry H13 Khoảng cách tương đồng loài mức cao, đạt 0,37 Tức là, gần khơng có khác đặc điểm tính trạng hình thái lồi Ia Hài Hecman H1 Hài Henry H13 I Hài Kim Lai Châu H2 Hài Đi cơng H9 Ib Nhóm I Hài Chân tím H17 Hài Lông H10 Hài Việt Nam (rừng) H3 Hài Việt Nam (Cao Bằng) Hài Hồng H5 IIa1 Hài Gấm H19 Hài Mốc vàng H4 Hài Mạng đỏ tía H23 IIa Hài Vân Nam TQ H6 Hài Vân Nam Kon Tum H14 IIa2 Hài Vân bắc H15 II Nhóm II Hài Táo H8 Hài Hằng H7 Hài Điểm Ngọc H18 IIb1 Hài Xoắn H21 IIb Hài Jacki H12 Hài Giáp H16 Hài Hellen H11 IIb2 0.34 0.26 0.17 0.09 0.00 Coefficient Hình 3.2 Sơ đồ phân nhóm lồi lan hài dựa đặc điểm hình thái phần mềm NTSYS pc 2.10 14 + Phân nhóm Ib: Gồm lồi: hài Kim Lai Châu H2, hài Đi cơng H9, hài Lơng H10 hài Chân tím H17 Khoảng cách tương đồng lồi nhóm dao động khoảng từ 1,03 – 8,72 Trong đó, mức độ tương đồng cao lồi: hài Đi cơng H9 hài Lơng H10 (1,03) Bên cạnh đó, hai loài hài Kim Lai Châu H2 hài Chân tím H17 có khoảng cách tương đồng tương đối xa, đạt 8,72 * Nhóm II: Bao gồm 16 lồi lan hài cịn lại Khoảng cách tương đồng lồi nhóm dao động từ 0,00 đến 9,94 chia thành phân nhóm bậc 1: + Phân nhóm IIa: Gồm 10 loài hài chia thành phân nhóm bậc 2: Phân nhóm IIa1: Gồm lồi lan hài: hài Việt Nam (rừng) H3, hài Mốc vàng H4, hài Hồng H5, hài Gấm H19 hài Mạng đỏ tía H23 Hệ số tương đồng dao động từ 0,00 đến 9,94 loài hài Việt Nam (rừng) H3 hài Việt Nam (Cao Bằng) có hệ số tương đồng 0,00 Hai loài hài Mốc vàng H4 hài Hồng H5 có hệ số tương đồng xa (9,94), gần khơng có tương đồng mặt hình thái hai lồi lan Hài Phân nhóm IIa2: Gồm loài: hài Vân Nam Trung Quốc H6, hài Táo H8, hài Vân Nam Kon Tum H14 hài Vân Bắc H15 Hệ số tương đồng loài hài nhóm mức trung bình dao động khoảng từ 1.67 đến 5,61 Mức độ tương đồng cao loài: hài Nam Kon Tum H14 hài Vân Bắc H15 (đạt 1,67); Mức độ tương đồng thấp loài hài Táo H8 hài Vân Bắc H15 (đạt 5,61) + Phân nhóm IIb: Gồm lồi lan Hài chia thành phân nhóm bậc 2: Phân nhóm IIb1: Gồm loài: hài Hằng H7, hài Jacki H12, Hài Giáp H16, hài Điểm Ngọc H18 hài Xoắn H21 Hệ số tương đồng lồi nhóm dao động từ 1,05 đến 9,97 Phân nhóm IIb2: Phân nhóm bao gồm loài hài Hellen H11, hệ số tương đồng loài với loài lan hài phân nhóm IIb thấp, dao động từ 1,49 đến 2,99 Hệ số tương đồng loài so với 21 lồi hài cịn lại nghiên cứu thấp, dao động từ 1,49 đến 3,66 3.2.2.2 Đánh giá đa dạng di truyền loài lan hài phân bố trồng khu vực miền núi phía Bắc dựa vào thị phân tử Thực phản ứng PCR với cặp mồi ITS1/ITS4, kết thu 23 mẫu giống lan hài cho băng đơn hình với kích thước 700 bp (hình 3.3) Hình 3.3 Kết PCR 23 mẫu giống lan hài nghiên cứu với cặp mồi ITS1/ITS4 M: Marker 100bp ladder 15 Kết phân tích 23 mẫu lan hài cho thấy: Sản phẩm PCR băng có kích thước nằm khoảng 677 – 740 bp Tại locut, kích thước alen thu biến thiên phạm vi bp Kết thống kê hệ số tương đồng di truyền trình tự nucleotide 23 mẫu giống lan hài với mẫu tham chiếu cho thấy 23 mẫu giống lan hài 20 mẫu giống tham chiếu chia thành nhóm chính: * Nhóm thứ gồm 11 mẫu giống lan hài 10 mẫu giống tham chiếu chia thành phân nhóm phụ - Phân nhóm phụ 1.1 gồm mẫu giống lan hài H16, H12, H4, H23, H18 H7 với mẫu giống tham chiếu Sáu mẫu giống có mức tương đồng trình tự nucleotide dao động từ 79,4% (giữa mẫu giống H12 H18) đến 94,9% (giữa mẫu giống H7 H23) Trong mẫu giống H16 - hài Xanh có mức tương đồng trình tự nucleotide cao với mẫu giống tham chiếu JQ929336.1 P.malipoense (98.9%) Mẫu giống H12 - hài Jacki có mức tương đồng trình tự nucleotide cao với mẫu giống tham chiếu MH550872.1_P.jackii (97.6%) Tương tự mẫu giống H4 – hài Mốc vàng có mức tương đồng trình tự nucleotide cao với mẫu giống tham chiếu AY643431.1_P.armeniacum (99.2%) Mẫu giống H23 - lan hài Mốc hồng có mức tương đồng trình tự nucleotide cao với mẫu giống tham chiếu KX931039.1 P.micranthum (99.7%) Mẫu giống H18 - hài Điểm Ngọc có mức tương đồng trình tự nucleotide cao với mẫu giống tham chiếu MH550877.1 P.emersonii (99.5%) Mẫu giống H7 - hài Hằng có mức tương đồng trình tự nucleotide cao với mẫu giống tham chiếu MH550873.1_P.hangianum (99.5%) - Phân nhóm phụ 1.2 gồm mẫu giống H5 - hài Hồng tương đồng 99.3% trình tự nucleotide với mẫu giống tham chiếu JQ929314.1 P.delenatii - Phân nhóm phụ 1.3 gồm mẫu giống H3, H20 H22 có mức tương đồng trình tự nucleotide với cao 98.5% (giữa mẫu giống H3 H22) 99% (giữa mẫu giống H3 H20) Ba mẫu giống có mức tương đồng trình tự nucleotide với mẫu giống tham chiếu P.vietnamense 99,1% (giữa mẫu H3 - lan hài Việt Nam nuôi cấy mô mẫu tham chiếu MH550870.1 P.vietnamense); 99,2% (giữa mẫu H20 - hài Việt Nam x hài Hồng mẫu tham chiếu MH550871.1 P.vietnamense) 99.8% (giữa mẫu H22 - lan hài Bóng thu thập từ rừng mẫu tham chiếu MH550870.1 P.vietnamense) - Phân nhóm phụ 1.4 gồm mẫu giống H21 - hài Râu tương đồng 99.5% trình tự nucleotide với mẫu giống tham chiếu MK161269.1_Paphiopedilum_dianthum * Nhóm thứ hai gồm mẫu giống H10, H2, H9, H11, H17, H1, H13 mẫu giống tham chiếu Các mẫu giống nhóm có hệ số tương đồng với dao động từ 96,6% (giữa mẫu giống H10 H13) đến 99% (giữa mẫu giống H2 H9) * Nhóm thứ gồm mẫu giống H19 - hài Gấm tương đồng 99.2% trình tự nucleotide với mẫu giống tham chiếu JQ929313.1 Paphiopedilum concolor 16 Hình 3.4 Sơ đồ hình 23 mẫu giống lan hài mẫu giống tham chiếu * Nhóm thứ gồm mẫu giống H8, H15, H14, H6 mẫu giống tham chiếu Bốn mẫu lan hài nhóm có mức tương đồng trình tự nucleotide với dao động từ 82.1% (giữa mẫu H8 H15) đến 98.5% (giữa mẫu H6 H14) 3.3 Đánh giá, xác định số lồi lan hài có triển vọng, tiềm phát triển đề xuất hướng bảo tồn phát triển Từ kết đánh giá đặc điểm hình thái đa dạng di truyền loài lan hài nội dung nội dung đồng thời dựa tài liệu (sách, báo, ấn phẩm) lan hài Luận án dề xuất số giải pháp sau: Cần có biện pháp bảo tổn loài lan hài phân bố ni trồng khu vực miền núi phía Bắc theo nhiều hình thức (nhân giống, bảo tồn chỗ, bảo tồn chuyển chỗ) Đặc biệt cần có biện pháp khẩn cấp loài lan hài bị tuyệt chủng tự nhiên (hài Việt Nam), loài lan hài tình trạng nguy cấp (hài Điểm Ngọc, hài Hằng, hài Chân tím, hài Đi Cơng) Trong khuân khổ luận án có hạn lựa chọn lan hài Việt Nam lan hài Điểm Ngọc đưa vào nhân giống Cần phải thực phép lai loài khác loài nhằm tạo lai đáp ứng nhu cầu người chơi 3.3.1 Xác định nguồn gen ưu tú để thiết lập cặp bố mẹ phục vụ công tác lai tạo Trong lai tạo giống trồng nhà chọn giống ln hướng tới tìm cặp bố mẹ để tận dụng ưu lai, đánh giá đặc điểm di truyền phương pháp nhanh giúp nhà chọn tạo giống lựa chọn cặp bố mẹ có khả cho ưu lai cao Ưu lai thể cặp bố mẹ có hệ số di truyền xa Dựa vào đặc điểm hoa, màu sắc hoa, thời gian hoa, chiều dài cuống hoa, khả thích nghi, dễ hoa đánh giá đa dạng di truyền mức kiểu hình phân tử đề xuất số cặp lai sau: 17 - Các cặp bố mẹ có hệ số di truyền xa STT Tên cặp lai (♀ x ♂) Ký hiệu ♀Hài Điểm Ngọc x ♂hài Việt Nam ♀H18 x ♂H20 ♀Hài Gấm x ♂hài Điểm Ngọc ♀H19 x ♂H18 ♀Hài Gấm x ♂hài Việt Nam ♀H19 x ♂H20 ♀Hài Gấm x ♂hài Hằng ♀H19 x ♂H7 ♀Hài Điểm Ngọc x ♂hài Hồng ♀H19 x ♂H5 ♀Hài Hằng x ♂hài Việt Nam ♀H7 x ♂H20 - Các cặp bố mẹ có hệ số di truyền gần STT Tên cặp lai (♀ x ♂) Ký hiệu ♀Hài Mạng đỏ tía x ♂hài Gấm ♀H23 x ♂H19 ♀Hài Điểm Ngọc x ♂hài Hằng ♀H18 x ♂H7 ♀Hài Hồng x ♂ hài Việt Nam ♀H5 x ♂H20 Đặt tên HG01 HN01 HV01 3.3.2 Đánh giá khả lai tạo cặp bố mẹ lan hài 3.3.2.1 Nghiên cứu ảnh hưởng sức sống hạt phấn đến tỷ lệ đậu Hạt phấn loài lan hài (Hài Việt Nam, Hài Hồng, Hài Mạng đỏ tía, Hài Điểm Ngọc, Hài Hằng Hài Gấm) có sức sống nảy mầm cao ngày đầu sau nở Tỷ lệ nảy mầm hạt phấn ngày đầu dao động từ 50,4 đến 89,3% Đến ngày thứ hạt phấn lan hài bắt đầu giảm dần đến ngày thứ 10 hạt phấn nảy mầm kém, ống phấn vươn ngắn, nên sử dụng hạt phấn lan hài để làm vật liệu thụ phấn cho nhụy thời gian từ hoa nở 1-3 ngày 3.3.2.2 Ảnh hưởng thời điểm lai ngày đến tỷ lệ đậu cặp lan hài lai Nhiều nghiên cứu cho thấy, tỷ lệ đậu lai giống thường phụ thuộc vào phương thức thụ phấn, sức sống hạt phấn, thời điểm thụ phấn, mẹ, điều kiện môi trường thao tác kỹ thuật thụ phấn Trong tổ hợp lai có tổ hợp sử dụng mẹ hài Việt Nam cho kết thụ phấn thấp, tỷ lệ thụ phấn đạt sử dụng làm mẹ cho kết lai tạo thấp Tỷ lệ đạt 0% đến 20% Cao tổ hợp lai HG x HMD tỷ lệ thụ phấn đạt 20 – 70% Trong thời gian thụ phấn thích hợp giai đoạn từ 8-10h Các tổ hợp lai Hằng x Hương tỏ thích hợp thời điểm thụ phấn từ 8-10h 3.3.2.3 Nghiên cứu ảnh hưởng số loại dinh dưỡng đến khả tăng trưởng lai Trong cặp lai có cặp lai H19 x H23; H23 x H18; H5 x H20 phát triển Cịn cặp lai khác có q trình héo hoa sau thụ phấn, sau 20 ngày thụ phấn hình thành khơng phát triển sau 1-2 tháng rụng Kết đánh giá ảnh hưởng thành phần dinh dưỡng phối trộn đến khả sinh trưởng lan hài cho thấy phân bón số (Phân trùn quế) thích hợp với tăng trưởng tăng trưởng 3.4 Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống số loài lan hài có giá trị số sản phẩm lai Từ kết điều tra, nghiên cứu cho thấy cần phải bảo tồn phát triển loài lan hài có giá trị mức độ nguy cấp cần phải thực biện pháp nhân