Phân tích thành phần STIPULEANOSID r2 trong các bộ phận của cây sâm vũ diệp

VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI an dP ======  ====== rm ac y, KHOA Y DƯỢC ed ic ine TRẦN THỊ NGỌC HÀ lo fM PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN STIPULEANOSID R2 TRONG CÁC BỘ PHẬN CỦA CÂY SÂM VŨ DIỆP ho o (Panax bipinnatifidus Seem.) NGÀNH DƯỢC HỌC Co py rig h t@ Sc KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hà Nội - 2019 KHOA Y DƯỢC rm ac y, =======  ====== VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI an dP Người thực hiện: TRẦN THỊ NGỌC HÀ PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN STIPULEANOSID R2 ine TRONG CÁC BỘ PHẬN CỦA CÂY SÂM VŨ DIỆP lo fM ed ic (Panax bipinnatifidus Seem.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC t@ Sc ho o (NGÀNH DƯỢC HỌC) Khóa: QH2014.Y Co py rig h Người hướng dẫn: GV.TS NGUYỄN HỮU TÙNG Hà Nội - 2019 MỤC LỤC VN U LỜI CẢM ƠN Danh mục ký hiệu tên viết tắt Danh mục bảng rm ac y, Danh mục hình vẽ đồ thị ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG – TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Sâm Vũ Diệp an dP 1.1.1 Tên khoa học 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Đặc điểm phân bố sinh thái ine 1.1.4 Thành phần hóa học ed ic 1.1.5 Tính vị, cơng .8 1.1.6 Tác dụng dược lý lo fM 1.1.7 Công dụng 1.2 Tổng quan Saponin 1.3 Tổng quan Stipuleanosid R2 10 ho o 1.4 Tổng quan số nghiên cứu phân tích định tính định lượng thành phần hóa học Sâm Vũ Diệp 11 Sc CHƯƠNG - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 t@ 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 14 2.1.1 Nguyên liệu 14 rig h 2.1.2 Dung mơi, hóa chất 14 2.1.3 Thiết bị 14 Co py 2.2 PHƯƠNG PHÁP 15 2.2.1 Phương pháp chiết xuất Sâm Vũ Diệp 15 `2.2.2 Phương pháp phân tích TLC 16 Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep 2.2.3 Phương pháp định lượng Stipuleanosid R2 HPLC 17 VN U CHƯƠNG - KẾT QUẢ 25 3.1 Chiết xuất saponin từ phận lá, thân, rễ Sâm Vũ Diệp 25 3.2 Định tính TLC thành phần Stipuleanosid R2 phận Sâm rm ac y, Vũ Diệp 25 3.3 Định tính thành phần Stipuleanosid R2 cao chiết từ phận Sâm Vũ Diệp HPLC 26 3.4 Định lượng Stipuleanosid R2 phận Sâm Vũ Diệp HPLC 27 an dP CHƯƠNG - BÀN LUẬN 29 4.1 Về chiết xuất xác định thành phần saponin có phận Sâm Vũ Diệp 29 ed ic ine 4.2 Về định lượng sơ thành phần Stipuleanosid R2 phận Sâm Vũ Diệp HPLC 29 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 31 lo fM TÀI LIỆU THAM KHẢO 33 Co py rig h t@ Sc ho o PHỤ LỤC 35 Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep LỜI CẢM ƠN VN U Trong thời gian tiến hành nghiên cứu hồn thiện đề tài khóa luận, nhận hướng dẫn, hỗ trợ giúp đỡ tận tình tâm huyết thầy cô, anh chị trước Khoa Y Dược-ĐHQGHN với ủng hộ bạn bè người thân gia đình Qua đây, tơi xin trân trọng gửi lời cảm ơn chân rm ac y, thành tới người ln bên cạnh, dìu dắt, dạy ủng hộ tơi q trình thực khóa luận Trước hết, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Dương Thị Ly Hương, T.S Nguyễn Hữu Tùng - Khoa Y Dược ĐHQGHN, thầy cô dành thời gian để trực tiếp hướng dẫn, bảo tận tình, truyền đạt cho tơi kinh nghiệm an dP quý báu động viên suốt q trình hồn thiện khóa luận Tơi xin cảm ơn sâu sắc tới anh Nguyễn Hoàng Việt ; chị Đặng Thị Ngần - Khoa Y Dược ĐHQGHN, người tiền bối bên cạnh suốt q trình thực nghiệm labo, giúp tơi khắc phục sai sót hay vượt qua khó ine khăn thất bại qúa trình thí nghiệm ed ic Tơi xin gửi lời cảm ơn đến Ban chủ nhiệm Khoa, thầy cô Khoa Y Dược, đặc biệt mơn Hóa dược Kiểm nghiệm thuốc tạo lo fM điều kiện cho thực khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn tập thể Dược học khóa QH.2014.Y, đặc biệt bạn Nông Mỹ Hoa, Nguyễn Thị Hồng Nhung, Cao Thị Phương Thảo, Bùi Thị Thanh Vân đồng hành suốt thời gian nghiên cứu Sc Hà Nội, ngày 09 tháng 05 năm 2019 Sinh viên Trần Thị Ngọc Hà Co py rig h t@ hôm ho o Và cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến gia đình thân yêu bạn bè bên ủng hộ tơi q trình học tập, phấn đấu để đạt thành tích ngày Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep Danh mục ký hiệu tên viết tắt Tên đầy đủ EtOH Ethanol HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao HPLC-DAD Sắc ký lỏng hiệu cao đầu dò mảng diod MeOH Methanol rm ac y, VN U Ký hiệu Giới hạn phát LOQ Giới hạn định lượng RDS Độ lệch chuẩn tương đối an dP LOD SVD Sâm vũ diệp TLC Sắc ký lớp mỏng Tài liệu tham khảo ine TLTK ed ic TPHH UV Thuốc thử Tử ngoại UV-detector aray diode Co py rig h t@ Sc ho o UV-DAD lo fM TT Thành phân hóa học Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep Danh mục bảng VN U Bảng 1.1 Các thành phần hóa học nghiên cứu Sâm Vũ Diệp Bảng 1.2 Điều kiện sắc ký kết phân tích định tính, định lượng acid oleanolic dược liệu Sâm Vũ Diệp 12 rm ac y, Bảng 1.3 Chương trình pha động chạy HPLC-DAD .13 Bảng 2.1 Chương trình dung môi chạy HPLC-DAD 18 Bảng 3.1 Hàm lượng cắn phân đoạn chiết xuất từ thân rễ Sâm Vũ Diệp 25 Bảng 3.2 Hàm lượng cắn phân đoạn chiết xuất từ thân Sâm Vũ Diệp 25 an dP Bảng 3.3 Tính thích hợp hệ thống sắc ký 19 Bảng 3.4 Kết khảo sát khoảng tuyến tính stipuleanosid R2 .20 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp 21 ine Bảng 3.6 Khảo sát độ thu hồi 22 ed ic Bảng 3.7 Kết định lượng stipuleanosid R2 thân rễ SVD 27 Co py rig h t@ Sc ho o lo fM Bảng 3.8 Kết định lượng stipuleanosid R2 thân SVD 28 Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep Danh mục hình vẽ đồ thị VN U Hình 1.1 Đặc điểm hình thái Sâm Vũ Diệp Hình 1.2 Đặc điểm thực vật vùng phân bố Sâm Vũ Diệp Hình 1.3 Cấu trúc hóa học 10 saponin tách từ rễ SVD .5 rm ac y, Hình 1.4 Cấu trúc hóa học β-sitosterol, oleanolic acid daucosterol Hình 1.5 Cấu trúc hóa học Stipuleanosid R2(a) Aralosid A methyl(b) ester Hình 1.6 Thành phần saponin thuộc nhóm triterpenoid có Sâm Vũ Diệp.10 an dP Hình 1.7 Công thức cấu tạo Stipuleanosid R2 11 Hình 2.1 Mẫu dược liệu Sâm Vũ Diệp 14 Hình 2.2 Sơ đồ quy trình chiết 16 ine Hình 2.3 Dịch lọc rễ, thân, SVD 16 ed ic Hình 3.1 Sắc ký đồ dung dịch mẫu trắng, mẫu chuẩn mẫu thử 19 Hình 3.2 Đồ thị biểu diễn đường chuẩn stipuleanosid R2 21 Hình 3.3 Kết TLC Stipuleanosid R2 phận dược liệu Sâm Vũ lo fM Diệp 26 Hình 3.4 Sắc ký đồ HPLC stipuleanosid R2 (A) mẫu cao thân rễ (B), thân (C) Sâm Vũ Diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) 26 Co py rig h t@ Sc ho o Hình 3.5 Sắc ký đồ cao tổng thân SVD 28 Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep ĐẶT VẤN ĐỀ VN U Sâm Vũ Diệp (Panax bipinnatifidus Seem., họ Nhân sâm - Araliaceae) thuốc quý phân bố Trung Quốc dãy núi Hoàng Liên Sơn Tây Bắc nước ta [9] Gần Sâm Vũ Diệp (SVD) hóa bước đầu trồng thử nghiệm số địa phương Hà Giang, Lào Cai Về mặt y học, rm ac y, SVD sử dụng làm thuốc bổ thành phần số thuốc truyền thống dân tộc vùng núi Tây Bắc Theo tài liệu nghiên cứu trước [2,12] cho thấy dược liệu SVD sử dụng phần thân rễ, chứa hàm lượng lớn saponin-Stipuleanosid R2-thành phần hoạt chất mang lại tác dụng an dP dược lý giá trị sử dụng dược liệu q y học Tuy nhiên, chưa có cơng bố thức thành phần saponin phận mặt đất SVD Do đó, việc tập trung nghiên cứu thành phần saponin phận SVD định lượng thành phần có ý nghĩa quan trọng việc ứng dụng dược liệu SVD thực tiễn Vậy liệu phận khác mặt đất ine SVD (lá, thân, hoa) có chứa thành phần saponin phần (dưới mặt đất) thân rễ hay khơng? Nếu có hàm lượng bao nhiêu? Có thể sử dụng phận ed ic thay dược liệu SVD không? Để trả lời câu hỏi trên, đồng thời đóng góp vào việc nghiên cứu lo fM cách có hệ thống saponin xây dựng tiêu chí định tính, định lượng, sở liệu hóa thực vật tiêu chuẩn hóa dược liệu SVD; chúng tơi thực đề tài “Phân tích thành phần Stipuleanosid R2 có phận Sâm Vũ Diệp” tiếp nối nghiên cứu bước đầu thành phần hóa học thân rễ SVD ho o “Nghiên cứu thành phần saponin có thân rễ SVD trồng Sa Pa”-luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Thu Thủy [12], với mục tiêu định tính bước đầu định Sc lượng thành phần stipuleanosid R2 phận Sâm Vũ Diệp gồm: Co py rig h t@ thân (trên mặt đất), thân rễ Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep CHƯƠNG – TỔNG QUAN VN U 1.1 Tổng quan Sâm Vũ Diệp 1.1.1 Tên khoa học chi Sâm (Panax L), họ Ngũ gia bì (Araliaceae) [2] 1.1.2 Đặc điểm thực vật rm ac y, Sâm Vũ Diệp có tên khoa học Panax bipinnatifidus Seem [1], SVD thuộc Sâm Vũ Diệp thân thảo sống nhiều năm, ưa bóng đặc biệt ưa ẩm Thân rễ dài có nhiều đốt vết sẹo thân rụng hàng năm để lại Thân khí sinh mảnh, cao 20 - 30 cm, thường đơn độc, mọc thẳng, rỗng giữa, có vạch dọc, an dP thường lụi vào mùa đông, mọc chồi thân từ tháng đến đầu tháng dương lịch Lá kép chân vịt, gồm - mọc vịng Lá chét - (ít 3) thn, dài 2,5 - 14 cm, rộng 1,5 - cm, gốc trịn, đầu thn thành mũi nhọn, xẻ thùy lo fM ed ic ine khơng đều, mép có cưa, có lơng [1] ho o Hình 1.1 Đặc điểm hình thái Sâm Vũ Diệp 1.1.3 Đặc điểm phân bố sinh thái Sc Trong tự nhiên, SVD phân bố Trung Quốc, Ấn Độ Nepan (vùng cận t@ Hymalaya) dãy núi Hoàng Liên Sơn, Tây Bắc nước ta [1] Sa Pa-Việt Nam điểm phân bố cuối SVD phía nam Năm 1973, phát núi Hàm Rồng, sát thị trấn Sa Pa, độ cao 1600 m Hiện vùng phân bố rig h SVD bị thu hẹp dần, từ độ cao khoảng 1800 m trở lên, coi cực [1] Gần SVD hóa bước đầu trồng thử nghiệm số Co py địa phương Hà Giang Lào Cai [18] Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep Tiêm riêng biệt dung dịch mẫu thử, mẫu thử lặp lại lần, ghi nhận VN U sắc ký đồ ghi lại đáp ứng chất cần phân tích Nồng độ stipuleanosid R2 dung dịch thử xác định dựa S-b C (µg/ml) = a H x 100 rm ac y, công thức: Với S diện tích pic stipuleanosid R2; a,b hệ số phương trình đường chuẩn y = ax+b, H độ tinh khiết chất đối chiếu (%) thức: Trong đó: x ine m x 1000000 100 x H 100-a ed ic X (%) = C x 10 x 100 an dP Hàm lượng stipuleanosid R2 dược liệu xác định dựa công M: khối lượng dược liệu (g) lo fM X: hàm lượng stipuleanosid R2 dược liệu (%) C: Nồng độ stipuleanosid R2 dung dịch thử, xác định đường chuẩn (µg/ml) ho o a: độ ẩm dược liệu (%) H: hiệu suất chiết (%) Xử lý số liệu Sc  t@ + Tập hợp kết loại bỏ giá trị thô theo test Dixon + Tính độ lệch chuẩn: Co py rig h + Tính giá trị trung bình: Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep 23 Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep VN U + Tính độ lệch chuẩn tương đối: Trong đó: rm ac y, X : giá trị trung bình hàm lượng hợp chất xi : giá trị hàm lượng hợp chất mẫu thứ i n : số thử nghiệm sử dụng để tính giá trị trung bình hàm lượng hợp chất an dP SD: độ lệch chuẩn Co py rig h t@ Sc ho o lo fM ed ic ine RSD: độ lệch chuẩn tương đối Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep 24 Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep 3.1 Chiết xuất saponin từ phận lá, thân, rễ Sâm Vũ Diệp VN U CHƯƠNG - KẾT QUẢ Hiệu suất cắn phân đoạn so với cắn toàn phần so với nguyên liệu khơ trình bày bảng 3.1 Lần đo Hàm ẩm thân (%) 7,52 7,81 7,92 Trung bình 7,75 RSD 2,6 rm ac y, Bảng 3.1 Hàm ẩm nguyên liệu thu từ phận Hàm ẩm thân rễ (%) 7,72 7,78 7,81 1,3 ine an dP 7,93 ed ic Bảng 3.2 Hiệu suất chiết phận Khối lượng Khối lượng cao Hiệu suất nguyên liệu (g) tổng EtOH (g) chiết(%) 450 57 12,67 500 95,9 19,18 lo fM Bộ phận Thân ho o Thân rễ 3.2 Định tính TLC thành phần Stipuleanosid R2 phận Sâm Sc Vũ Diệp Tiến hành chạy sắc ký TLC để định tính chất Stipuleanosid R2 cao t@ chiết từ phân SVD hệ dung môi triển khai Sau phun thuốc thử rig h dung dịch H2SO4 10% (TT) EtOH, sấy 120°C đến vết Quan sát vết xuất ánh sáng thường, so sánh giá trị hệ số di chuyển Rf so với chất Co py đối chiếu Stipuleanosid R2 [20], thu kết sau: Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep 25 rm ac y, VN U Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep Hình 3.3 Kết TLC Stipuleanosid R2 phận dược liệu Sâm Vũ Diệp 1: mẫu cao tổng thân an dP 2: mẫu cao tổng thân rễ 3: chất chuẩn Stipuleanosid R2 Nhận xét: kết TLC cho thấy vết sắc ký Stipuleanosid R2 xuất ine cao chiết phần thân thân rễ SVD Co py rig h t@ Sc ho o lo fM Sâm Vũ Diệp HPLC ed ic 3.3 Định tính thành phần Stipuleanosid R2 cao chiết từ phận Hình 3.4 Sắc ký đồ HPLC stipuleanosid R2 (A) mẫu cao thân rễ (B), thân (C) Sâm Vũ Diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep 26 Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep Nhận xét: VN U Sử dụng chương trình phân tích HPLC phần 2.2.3.a cho thấy chất tinh khiết stipuleanosid R2 mẫu cao toàn phần thân rễ, thân SVD Kết phân tích HPLC minh họa Hình 3.2 cho thấy sắc ký đồ phận thân rễ, thân xuất pic có thơng số thời gian lưu nằm rm ac y, khoảng thời gian lưu tương ứng chất chuẩn stipuleanosid R2 (tR = 15,565-15,85 phút) với thông số độ tinh khiết pic chồng phổ UV sở chế độ qt phổ đầu dị DAD Bên cạnh tín hiệu khác tương đồng bao gồm tín hiệu tR = 16,616 thân rễ tR=16,166 phút cho thấy an dP tương đồng thành phần saponin chưa xác định phận rễ, thân 3.4 Định lượng Stipuleanosid R2 phận Sâm Vũ Diệp HPLC ine Qua kết định tính TLC HPLC kết từ nghiên cứu trước [6,8,12] cho thấy thành phần SVD saponin khung oleanan, có hợp chất quan trọng stipuleanosid R2 Do chúng tơi tiến hành ed ic xác định hàm lượng stipuleanosid R2 để góp phần đánh giá SVD theo kế hoạch nghiên cứu đề Kết thu trình bày sau Khối lượng Nồng độ Diện tích Hàm lượng Stipuleanosid nguyên liệu cao pic R2 nguyên liệu khô (g) (mg/ml) (mAU*s) (%) 500 10 721,829 0,559 500 10 748,681 0,581 500 10 735,082 0,570 ho o STT Trung bình 0,57 ± 0,01% RSD (%) 2,0 Co py rig h t@ Sc lo fM Bảng 3.7 Kết định lượng stipuleanosid R2 thân rễ SVD Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep 27 Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep VN U b) Định lượng stipuleanosid R2 thân SVD Bảng 3.8 Kết định lượng stipuleanosid R2 thân SVD Nồng độ cao Diện tích pic (g) (mg/ml) (mAU*s) 450 50 1451,157 450 50 1502,325 450 50 1441,055 Hàm lượng Stipuleanosid R2 rm ac y, Khối lượng nguyên liệu nguyên liệu khô (%) an dP STT Trung bình 0,265 0,257 0,26 ± 0,006% 2,3 Hình 3.5 Sắc ký đồ cao tổng thân SVD Co py rig h t@ Sc ho o lo fM ed ic ine RSD 0,259 Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep 28 Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep CHƯƠNG - BÀN LUẬN VN U 4.1 Về chiết xuất xác định thành phần saponin có phận Sâm Vũ Diệp Với qui trình chiết xuất SVD phương pháp chiết hồi lưu đơn giản, rm ac y, nhiệt độ 70o dung môi ethanol thu cắn toàn phần, phương pháp chiết hồi lưu có ưu điểm làm tăng tốc độ chiết, chiết kiệt hoạt chất nguyên liệu Kết thu 95,9 g cao tổng EtOH thân rễ (H=19,18%) 57,6 g cao tổng EtOH thân (H=12,67%) Tiến hành phương pháp TLC cho thấy cắn thu sau trình chiết an dP xuất vết màu hồng sau chuyển sang màu tím cao chiết EtOH lá, thân (trên mặt đất) thân rễ rõ rệt, đặc trưng dẫn xuất triterpen Trong đó, vết sắc ký hợp chất Stipuleanosid R2 lên rõ rệt cao tổng ine phần thân, thân rễ SVD Kết phân tích TLC sơ cho thấy phận thân SVD có chứa thành phần saponin tương tự với phần thân rễ này; đặc biệt thành phần Stipuleanosid R2 Thành phần hóa học ed ic thuốc-saponin/ginsenosid loài Panax thường phức tạp gồm nhiều thành phần việc xác định xác thành phần địi hỏi phân lập sắc ký xác cấu trúc hóa học phương pháp phổ Từ chúng tơi tiến hành sử dụng HPLC lo fM để nhằm xác định xác có mặt thành phần saponin khác Stipuleanosid R2 cao chiết phận SVD Kết HPLC cho thấy sắc ký đồ phận thân rễ, thân xuất ho o pic có thơng số thời gian lưu tương ứng stipuleanosid R2 (tR = 15,56515,85 phút) với thông số độ tinh khiết pic chồng phổ UV sở chế độ Sc quét phổ đầu dò DAD Đây kết sơ ban đầu cho thấy có mặt Stipuleanosid R2 xuất phận rễ, thân [6] t@ 4.2 Về định lượng sơ thành phần Stipuleanosid R2 phận Sâm Vũ Diệp HPLC rig h Sau tiến hành phân tích xác định hàm lượng Stipuleanosid R2 HPLC, kết sơ cho thấy hàm lượng Stipuleanosid R2 thân rễ 0,57 %; py thân 0,26 % với hàm ẩm nguyên liệu 7,8 %; hàm lượng Co stipuleanosid R2 cao chiết từ thân rễ SVD cao hàm lượng cao chiết từ thân Dựa kết này, sơ nhận định phận khác Sâm Vũ Diệp bao gồm thân giàu hoạt chất saponin đượctiến Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep 29 Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep hành nghiên cứu thêm thành phần hóa học để ứng dụng dược liệu thay VN U phần thân rễ SVD y học cổ truyền Việc tận dụng thêm phần mặt đất Sâm Vũ Diệp sử dụng triệt để giá trị phận thuốc giống loài Panax tiếng khác: Nhân Sâm (P.ginseng), Tam Thất (P.notoginseng) làm tăng thêm nguồn khai thác dược liệu; giúp tiết kiệm chi phí rm ac y, nghiên cứu bảo tồn nguồn dược liệu quý thuộc chi Panax Trên kết định tính định lượng sơ thành phần Stipuleanosid R2 phận SVD Kết mang tính chất tham khảo chưa có tính xác cao nghiên cứu cịn nhiều sai sót hạn chế an dP Cần tiến hành xây dựng thẩm định lại phương pháp nghiên cứu HPLC mẫu thân, rễ điều kiện phù hợp với phịng thí nghiệm để có kết ổn định Co py rig h t@ Sc ho o lo fM ed ic ine xác Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep 30 Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ VN U KẾT LUẬN Với kết thực nghiệm thu được, đề tài đạt mục tiêu đề là: định tính định lượng sơ thành phần stipuleanosid R2 phận rm ac y, thân, thân rễ Sâm Vũ Diệp Kết có ý nghĩa thực tiễn cơng tác kiểm nghiệm thuốc nói chung kiểm nghiệm dược liệu nói riêng, góp phần vào cơng tác thiết lập sở liệu hóa thực vật làm sở định hướng cho nghiên cứu hoạt tính sinh học đối tượng tiềm thuộc chi Panax Bên cạnh đó, đề tài cịn an dP góp phần định hướng sử dụng, khai thác dược liệu, cụ thể SVD cách sử dụng phận khác phần thân rễ (dưới mặt đất) để phân lập, tinh chế thành phần saponin Nhằm mục tiêu tiết kiệm thời gian nghiên cứu chi phí cho người dân nhu cầu sử dụng Sâm để chăm sóc sức khỏe ine Tuy nhiên với hạn chế nghiên cứu, kết kết sơ ban đầu, mang tính chất tham khảo cần tiến hành nghiên thẩm định nghiên ed ic cứu kỹ để đưa nhận định khách quan xác định tính định lượng thành phần Stipuleanosid R2 lo fM KIẾN NGHỊ Đề tài phần nghiên cứu bước đầu đề tài cấp Nhà nước thuộc chương trình Tây Bắc “Ứng dụng giải pháp khoa học công nghệ để phát triển nguồn nguyên liệu tạo sản phẩm từ hai loài thuốc Sâm Vũ ho o Diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) Tam Thất hoang (Panax stipuleanatus H.Tsai et K.M.)” Khoa Y Dược-ĐHQGHN [6], đặt mục tiêu xác lập Sc sở khoa học giải pháp công nghệ sinh học, hóa học dược học để phát triển sản phẩm từ hai loài Sâm Vũ Diệp Tam Thất hoang Luận văn t@ kết nghiên cứu sơ thành phần hóa học Sâm Vũ Diệp Với kết thu sai sót hạn chế gặp phải tiến hành rig h thực đề tài, nhóm nghiên cứu xin kiến nghị thực thêm phép thực nghiệm sau: py  Tiến hành thẩm định lại phương pháp HPLC cao chiết EtOH phận Co thân Sâm Vũ Diệp Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep 31 Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep  Triển khai phân lập tinh chế thêm hợp chất Stipuleanosid R2 VN U thân Sâm Vũ Diệp  Tiến hành nghiên cứu thêm thành phần hóa học thân SVD  Thiết lập thêm điều kiện cho chất đối chiếu Stipuleanosid R2 rm ac y, kết xác định lượng hàm lượng chất phận SVD xác ổn định  Xây dựng chất chuẩn stipuleanosid R2 từ Sâm Vũ Diệp  Tiến hành khảo sát động thái tích lũy, thay đổi thành phần hóa học theo độ tuổi Co py rig h t@ Sc ho o lo fM ed ic ine an dP  Dựa kết nghiên cứu thành phần hóa học, cần tiếp tục nghiên cứu tác dụng sinh học loài Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep 32 Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep TÀI LIỆU THAM KHẢO VN U Tiếng Việt Đỗ Huy Bích cộng (2003), Cây thuốc Động vật làm thuốc Việt Nam Vol 2, Nhà xuất khoa học kỹ thuật rm ac y, Lê Đình Bích, Trần Văn Ơn (2007), Thực vật học tập 1, NXBYHHN Đỗ Văn Hào (2017), Nghiên cứu thành phần hóa học sâm vũ diệp thu hái Tây Bắc, Khoa Y Dược-ĐHQGHN Nguyễn Thị Huệ (2017), Phân tích acid oleanolic thành phần saponin rễ sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) thu hái Sa Pa, Khoa an dP Y Dược-ĐHQGHN Nguyễn Thị Thu Hương, Lương Kim Bích, Đồn Thị Ngọc Hạnh (2005), "Nghiên cứu tác dụng sâm Việt Nam đinh lăng trí nhớ", Tạp chí ine Dược liệu,, 10(6), pp 196-200 PGS.TS Dương Thị Ly Hương (2018), Ứng dụng giải pháp khoa học ed ic công nghệ phát triển nguồn nguyên liệu tạo sản phẩm từ loại thuốc Sâm Vũ Diệp (Panax bipinnatifidus) Tam Thất Hoang (Panax lo fM stipuleantanus) vùng Tây Bắc, Khoa Y Dược-ĐHQGHN Trần Công Luận, Lưu Thảo Nguyên, Nguyễn Tập (2009), "Nghiên cứu thành phần hóa học số tác dụng dược lý hai loài sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) tam thất hoang (Panax stipuleanatus Tsai et Feng)", ho o Tạp chí dược liệu, 14(1), pp 17-23 Dương Thị Phượng (2018), Định lượng Stripuleanosid R2 thân rễ Sâm Sc vũ diệp, Khoa Y Dược-ĐHQGHN Nguyễn Văn Tập, Phạm Thanh Huyền, Lê Thanh Sơn ( 2006), "Kết t@ nghiên cứu phân bố, sinh thái sâm vũ diệp Tam thất hoang Việt Nam", rig h Tạp chí dược liệu 11(5), pp 177-180 10 Ngơ Vân Thu (1990), Hóa học Saponin, Khoa Dược – Trường Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh Co py 11 Ngơ Vân Thu, Trần Hùng (2011), Dược liệu học tập 1, NXB Y học – Bộ Y tế Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep 12 Nguyễn Thị Thu Thủy, Nguyễn Hữu Tùng, Nguyễn Thế Tùng (2018), bipinnatifidus Seem) trồng Sa Pa, Đại học Dược Hà Nội VN U Nghiên cứu thành phần Saponin thân rễ Sâm Vũ Diệp (Panax 19 Nguyễn Văn Tập (2005), "Các loài thuộc chi Panax L Việt Nam", Tạp rm ac y, chí dược liệu, 10(3), pp 71-76 Tiếng Anh 13 Hu M, Ogawa K et Al (1995), "Triterpenoid glucuronide saponins from root bark of Aralia armata", Phytochemistry, 39, pp 179-184 14 H T Nguyen, et al (2011), "Oleanolic triterpene saponins from the roots of an dP Panax bipinnatifidus", Chem Pharm Bull (Tokyo), 59(11), pp 1417-1420 15 Wang Dq, et al (1989), "Studies on saponins from the leaves of Panax japonicasvar bipinnatifidus (Seem.) Wu etFeng", Yao XueXueBao, 24(8), pp 16 Who (1997), A WHO ine 593-599 guide to good manufacturing practice ed ic (GMP)requirements - Part 2: Validation, Word Health Organization Geneva 17 Zhang Y, Shi C et Al (2016), "Saponins from Panax bipinnatifidus Seem.: lo fM New strategy of extraction, isolation, and evaluation of tyrosinase inhibitory activity based on mathematical calculations", J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci,, 1039, pp 79-87 18 Zhitao Liang, et al (2009), "Determination of acid oleanolic and ursolic ho o acid in Oldenlandia diffusa and its substitute using high performance liquid chromatography", Journal of food and drug analysis, 17(2), pp 69-77 Co py rig h t@ Sc 20 Stipuleanosid R2, http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep Co py rig h t@ Sc ho o lo fM ed ic ine an dP rm ac y, Phụ lục - Phiếu kết giám định mẫu VN U PHỤ LỤC Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep Co py rig h t@ Sc ho o lo fM ed ic ine an dP rm ac y, VN U Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep Phan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diepPhan.tich.thanh.phan.STIPULEANOSID.r2.trong.cac.bo.phan.cua.cay.sam.vu.diep