Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm

Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DƯỢC LIỆU NGUYỄN THỊ THANH LOAN NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG DƯỢC LÝ THEO HƯỚNG DỰ PHÒNG VÀ ĐIỀU TRỊ NHỒI MÁU NÃO CỦA LÁ HỒNG (DIOSPYROS KAKI L.F.) TRÊN THỰC NGHIỆM LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI, NĂM 2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DƯỢC LIỆU NGUYỄN THỊ THANH LOAN NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG DƯỢC LÝ THEO HƯỚNG DỰ PHÒNG VÀ ĐIỀU TRỊ NHỒI MÁU NÃO CỦA LÁ HỒNG (DIOSPYROS KAKI L.F.) TRÊN THỰC NGHIỆM LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC LÝ - DƯỢC LÂM SÀNG MÃ SỐ: 9720205 Người hướng dẫn khoa học: TS Lê Thị Xoan PGS TS Phạm Thị Vân Anh LỜI CAM ĐOAN Tôi Nguyễn Thị Thanh Loan, nghiên cứu sinh chuyên ngành Dược lý - Dược lâm sàng Viện Dược liệu, xin cam đoan: Đây luận án thân trực tiếp thực hướng dẫn TS Lê Thị Xoan PGS.TS Phạm Thị Vân Anh Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước Pháp luật cam kết Tác giả luận án Nguyễn Thị Thanh Loan LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận án này, ngồi nỗ lực thân, tơi nhận nhiều giúp đỡ từ phía thầy cô, nhà khoa học thuộc nhiều lĩnh vực đồng nghiệp, bạn bè gia đình Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, tơi xin trân trọng gửi lời cảm ơn chân thành tới: TS Lê Thị Xoan, Phó Trưởng khoa Dược lý - Sinh hóa, Viện Dược liệu PGS TS Phạm Thị Vân Anh, Trưởng Bộ môn Dược lý, Giám đốc Trung tâm Dược lý lâm sàng, Trường Đại học Y Hà Nội, người thầy trực tiếp hướng dẫn, tận tình dạy bảo, giúp đỡ truyền kinh nghiệm q báu cho tơi suốt q trình thực luận án Sự nhiệt huyết, quan tâm, động viên cô động lực, hành trang giúp bước tiếp đường tương lai GS Kinzo Matsumoto, Trường Đại học Toyama, Nhật Bản; PGS.TS Phạm Thị Nguyệt Hằng, khoa Dược lý - Sinh hóa; TS Nguyễn Văn Tài, khoa Hóa thực vật, Viện Dược liệu giúp đỡ nhiều trình nghiên cứu Viện Các anh chị em Khoa Dược lý - Sinh hóa, Viện Dược liệu hết lịng giúp đỡ, đồng hành gắn bó suốt thời gian nghiên cứu học tập Viện Các thầy cô giáo, anh chị em kỹ thuật viên, y công Bộ môn Dược lý, Trường Đại học Y Hà Nội hỗ trợ, tin tưởng, ủng hộ nhiệt tình giúp đỡ không thời gian thực luận án mà cịn cơng việc sống hàng ngày Phòng Khoa học Đào tạo, Viện Dược liệu phịng ban có liên quan Viện Dược liệu tạo điều kiện thuận lợi cho q trình học tập Viện Tơi xin chân thành cảm ơn Chương trình nghiên cứu khoa học cơng nghệ trọng điểm quốc gia phát triển cơng nghiệp hố dược, Bộ Cơng thương tài trợ kinh phí cho đề tài “Nghiên cứu tạo chế phẩm từ hồng (Diospyros kaki) để phòng hỗ trợ điều trị tai biến mạch máu não” với mã số CNHD.ĐT.082/19-20 để thực luận án Tôi xin gửi lời cảm ơn Viện Dược liệu tài trợ kinh phí thơng qua đề tài cấp sở “Triển khai mơ hình thiếu máu não cục in vitro áp dụng để đánh giá tác dụng bảo vệ thần kinh dược liệu”; đề tài “Triển khai mơ hình đánh giá tác dụng chống đông máu in vitro in vivo”; đề tài “Nghiên cứu tác dụng bảo vệ thần kinh kaempferol-3-O-(2″-O-galloyl-β-D glucopyranosid) phân lập từ hồng (Diospyros kaki) mơ hình đột quị não thực nghiệm” Lời cuối cùng, từ tận đáy lịng, tơi xin cảm ơn sâu sắc bày tỏ lịng kính u tới bố mẹ, người thân gia đình, bạn bè, đồng nghiệp sát cánh bên tôi, động viên, cổ vũ, khuyến khích, tiếp thêm nghị lực để tơi hoàn thành luận án Nghiên cứu sinh Nguyễn Thị Thanh Loan MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan nhồi máu não .3 1.1.1 Khái niệm nhồi máu não 1.1.2 Các yếu tố nguy nhồi máu não 1.1.3 Nguyên nhân chế bệnh sinh nhồi máu não .4 1.1.4 Điều trị nhồi máu não 1.1.5 Dự phòng nhồi máu não .14 1.2 Tổng quan mơ hình nhồi máu não 16 1.2.1 Mơ hình nhồi máu não in vitro 16 1.2.2 Mơ hình nhồi máu não in vivo 19 1.3 Tổng quan hồng 25 1.3.1 Vị trí phân loại hồng (Diospyros kaki L.f.) 25 1.3.2 Thực vật học hồng .25 1.3.3 Tổng quan thành phần hoá học hồng .26 1.3.4 Tổng quan số tác dụng sinh học hồng .29 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .36 2.1 Đối tượng nghiên cứu .36 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu .36 2.1.2 Động vật thí nghiệm 37 2.1.3 Hố chất, dụng cụ máy móc phục vụ nghiên cứu 37 2.2 Nội dung nghiên cứu .40 2.3 Phương pháp nghiên cứu 41 2.3.1 Đánh giá tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh DK mơ hình gây tắc động mạch não (MCAO)/tái tưới máu chuột nhắt trắng 41 2.3.2 Đánh giá tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh số flavonoid phân lập từ DK mơ hình gây thiếu máu não lát cắt hồi hải mã nuôi cấy 51 2.3.3 Đánh giá tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh chất (9) mơ hình MCAO/tái tưới máu chuột nhắt trắng 54 2.3.4 Đánh giá tác dụng hạ huyết áp DK .56 2.3.5 Đánh giá tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu DK 61 2.4 Xử lý số liệu 63 2.5 Địa điểm nghiên cứu .63 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 64 3.1 Tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh DK flavonoid tiềm mơ hình nhồi máu não thực nghiệm 64 3.1.1 Tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh DK mơ hình MCAO/tái tưới máu 64 3.1.2 Tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh DK flavonoid tiềm mơ hình thiếu máu não lát cắt hồi hải mã nuôi cấy 79 3.1.3 Tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh chất (9) mơ hình MCAO/tái tưới máu… 84 3.2 Tác dụng DK lên số yếu tố nguy liên quan đến nhồi máu não thực nghiệm 91 3.2.1 Tác dụng hạ huyết áp DK .91 3.2.2 Tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu DK 98 Chương BÀN LUẬN 107 4.1 Bàn luận tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh DK flavonoid tiềm thực nghiệm 108 4.1.1 Tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh DK 108 4.1.2 Tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh số flavonoid phân lập từ DK … 116 4.2 Bàn luận tác dụng DK lên số yếu tố nguy liên quan đến nhồi máu não thực nghiệm 126 4.2.1 Tác dụng hạ huyết áp DK 126 4.2.2 Tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu DK 133 4.3 Bàn luận chung tác dụng DK lên nhồi máu não thực nghiệm 137 4.4 Đóng góp luận án .139 KẾT LUẬN .141 KIẾN NGHỊ 143 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT STT Chữ Tiếng Anh viết tắt ACE DMSO DK GSH HDL-C LDL-C MCAO MDA NMDA 10 NO 11 OGD 12 OHSCs 13 PI 14 rt-PA 15 TTC 16 VEGF Giải nghĩa Angiotensin-converting enzyme Enzym chuyển angiotensin Dimethyl sulfoxid Dimethyl sulfoxide Cao định chuẩn hồng Glutathione Glutathion High-density lipoprotein Lipoprotein tỷ trọng cao cholesterol Low-density lipoprotein Lipoprotein tỷ trọng thấp cholesterol Middle cerebral artery occlusion Tắc động mạch não Malondialdehyde Malondialdehyd N-Methyl-D-Aspartic acid N-Methyl-D-Aspartic acid Nitric oxid Nitric oxide Oxygen and glucose deprivation Thiếu oxy glucose Organotypic hippocampal slice Nuôi cấy lát cắt hồi hải mã culture Propidium iodid Propidium iodid Recombinant tissue type Thuốc hoạt hóa plasminogen plasminogen activator mơ tái tổ hợp 2,3,5-triphenyltetrazolium 2,3,5-triphenyltetrazolium hydrochlorid hydrochloride Vascular endothelial growth Yếu tố tăng trưởng nội mô factor mạch máu DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Ưu nhược điểm số mô hình nhồi máu não in vivo 20 Bảng 1.2 Một số flavonoid hồng 27 Bảng 3.1 Ảnh hưởng DK đến cân nặng chuột nghiên cứu tác dụng bảo vệ thần kinh DK mơ hình MCAO/tái tưới máu theo liệu trình dự phịng 64 Bảng 3.2 Ảnh hưởng DK đến cân nặng chuột nghiên cứu tác dụng bảo vệ thần kinh DK mơ hình MCAO/tái tưới máu theo liệu trình điều trị 65 Bảng 3.3 Ảnh hưởng DK đến điểm thần kinh chuột nghiên cứu tác dụng bảo vệ thần kinh DK mơ hình MCAO/tái tưới máu theo liệu trình dự phịng 67 Bảng 3.4 Ảnh hưởng DK đến điểm thần kinh chuột nghiên cứu tác dụng bảo vệ thần kinh DK mơ hình MCAO/tái tưới máu theo liệu trình điều trị 68 Bảng 3.5 Ảnh hưởng chất (9) đến cân nặng chuột 85 Bảng 3.6 Ảnh hưởng chất (9) đến điểm thần kinh chuột 86 Bảng 3.7 Ảnh hưởng DK lên huyết áp tâm thu chuột .91 Bảng 3.8 Ảnh hưởng DK lên cân nặng tim độ dày tâm thất trái 95 Bảng 3.9 Hoạt tính ức chế ACE DK 96 Bảng 3.10 Hoạt tính ức chế ACE captopril 97 Bảng 3.11 Tác dụng DK lên nồng độ LDL-C, HDL-C, non-HDL-C máu chuột 100 Bảng 3.12 Ảnh hưởng DK đến cân nặng chuột .101 Bảng 3.13 Ảnh hưởng DK đến nồng độ cholesterol toàn phần máu chuột .102 Bảng 3.14 Ảnh hưởng DK đến nồng độ triglycerid máu chuột 103 Bảng 4.1 Bảng tóm tắt kết nghiên cứu số flavonoid mơ hình gây nhồi máu não thực nghiệm .124 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Ảnh hưởng nhồi máu não cấp tế bào Hình 1.2 Điều trị tái tưới máu thuốc bảo vệ thần kinh nhồi máu não 11 Hình 1.3 Cơng thức hố học chế tác dụng edaravon 13 Hình 1.4 Hình ảnh lát cắt hồi hải mã nuôi cấy bị gây thiếu oxy glucose 18 Hình 1.5 Tóm tắt mơ hình gây nhồi máu não in vivo 19 Hình 1.6 Hình ảnh hồng (Diospyros kaki L.f.) Lạng Sơn hình ảnh hồng 26 Hình 1.7 Cơng thức hố học số flavonoid cao định chuẩn hồng thu hái Lạng Sơn 28 Hình 2.1 Hình ảnh cao định chuẩn hồng (DK) 36 Hình 2.2 Cơng thức hố học flavonoid phân lập từ DK 36 Hình 2.3 Hình ảnh sợi monofilament bọc sillicon 39 Hình 2.4 Nội dung nghiên cứu luận án 40 Hình 2.5 Thiết kế nghiên cứu đánh giá tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh DK theo hướng dự phịng điều trị mơ hình MCAO/tái tưới máu 42 Hình 2.6 Quy trình phẫu thuật gây MCAO/tái tưới máu chuột nhắt 44 Hình 2.7 Thử nghiệm Y-maze 46 Hình 2.8 Thí nghiệm ni cấy lắt cắt hồi hải mã chuột nhắt trắng non 52 Hình 2.9 Thiết kế nghiên cứu đánh giá tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh DK flavonoid phân lập từ hồng mơ hình gây thiếu máu não cục in vitro 53 Hình 2.10 Thiết kế nghiên cứu đánh giá tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh chất (9) mơ hình MCAO/tái tưới máu 54 Hình 2.11 Thử nghiệm quay góc 56 Hình 2.12 Thiết kế nghiên cứu tác dụng hạ huyết áp DK 57 Hình 2.13 Sơ đồ thủy phân hippuryl-histidyl-leucin enzym chuyển angiotensin 58 Hình 3.1 Ảnh hưởng DK lên thể tích nhồi máu não chuột MCAO/tái tưới máu 66 Hình 3.2 Vận tốc trung bình chuột thử nghiệm Y-maze .70