Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng và điều trị nhồi máu não của lá hồng (Diospyros kaki L.f.) trên thực nghiệm.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DƯỢC LIỆU Cơng trình hồn thành tại: - Khoa Dược lý-Sinh hóa, Viện Dược liệu - Bộ mơn Dược lý, Trường Đại học Y Hà Nội Người hướng dẫn khoa học: TS Lê Thị Xoan NGUYỄN THỊ THANH LOAN PGS TS Phạm Thị Vân Anh NGUYỄN THỊ Phản biện 1: NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG DƯỢC LÝ THEO HƯỚNG DỰ PHÒNG VÀ ĐIỀU TRỊ NHỒI Phản biện 2: MÁU NÃO CỦA LÁ HỒNG (DIOSPYROS KAKI L.F.) TRÊN THỰC NGHIỆM Chuyên ngành : Dược lý - Dược lâm sàng Mã số : 9720205 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC Phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp Viện Viện Dược liệu Vào hồi ., ngày tháng năm 2023 Có thể tìm hiểu Luận án tại: - Thư viện Quốc gia Việt Nam - Thư viện Viện Dược liệu HÀ NỘI, NĂM 2023 A GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Vì vậy, đề tài “Nghiên cứu tác dụng dược lý theo hướng dự phòng điều trị nhồi máu não hồng (Diospyros kaki L.f.) thực Tính cấp thiết luận án Nhồi máu não xảy dịng máu đột ngột khơng lưu thơng đến khu vực não làm chức thần kinh tương ứng Ngày nay, nhồi máu não nguyên nhân gây tử vong đứng thứ hai nguyên nhân gây tử vong nguyên nhân gây tàn phế hàng đầu Tuy nhiên, việc điều trị nhiều hạn chế Cho đến nay, thuốc hoạt hóa plasminogen mô tái tổ hợp thuốc cấp phép điều trị nhồi máu não với khả làm tan cục máu đông phục hồi tưới máu đến vùng não bị thiếu máu Tuy nhiên, thuốc có giới hạn phạm vi tác dụng vịng 4,5 tính từ thời điểm bắt đầu bị nhồi máu não việc sử dụng thuốc có nguy gây tử vong xuất huyết não [1] Do đó, việc phát triển liệu pháp để dự phòng điều trị nghiệm” thực nhằm đánh giá tác dụng chế tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh DK số flavonoid phân lập mơ hình nhồi máu não thực nghiệm, đồng thời, đánh giá tác dụng DK lên số yếu tố nguy liên quan đến nhồi máu não gồm tăng huyết áp rối loạn lipid máu Thêm vào đó, đề tài đóng góp vào việc phát triển sản phẩm phòng điều trị nhồi máu não từ hồng trồng Việt Nam, đồng thời tạo sở cho cơng tác tiêu chuẩn hóa chất lượng sản phẩm giai đoạn sản xuất sau ứng dụng chăm sóc sức khỏe cộng đồng với minh chứng khoa học rõ ràng Mục tiêu Luận án Mục tiêu 1: Đánh giá tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh cao định chuẩn hồng flavonoid tiềm mơ hình nhồi máu não thực nhồi máu não cần thiết Cây hồng (Diospyros kaki L.f.) thuộc họ Thị (Ebenaceae) ăn lâu năm trồng phổ biến Việt Nam Một số nghiên cứu giới chứng minh hồng có nhiều tác dụng sinh học kháng khuẩn, chống ung thư, chống oxy hóa,…[2] Liên quan đến tác dụng nhồi máu não, Bei W cộng cao chiết giàu flavonoid từ hồng có tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh mơ hình gây tắc động mạch não [3] Tuy nhiên, chế bảo vệ tế bào thần kinh hồng chưa làm sáng tỏ Bên cạnh đó, tác dụng hồng lên số yếu tố nguy liên quan đến nhồi máu não tác dụng hạ huyết áp tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu nghiệm Mục tiêu 2: Đánh giá tác dụng cao định chuẩn hồng lên số yếu tố nguy liên quan đến nhồi máu não thực nghiệm Bố cục Luận án Luận án gồm 142 trang, bao gồm: Đặt vấn đề (02 trang); Chương Tổng quan (33 trang); Chương Đối tượng phương pháp nghiên cứu (27 trang); Chương Kết nghiên cứu (43 trang); Chương Bàn luận (34 trang); Kết luận (02 trang) Kiến nghị (01 trang) Luận án có 193 tài liệu tham khảo có 11 tài liệu tiếng Việt 182 tài liệu tiếng Anh Luận án có 17 bảng, 52 hình 05 phụ lục kèm theo cần làm rõ B NỘI DUNG CỦA LUẬN ÁN CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan nhồi máu não Nhồi máu não tắc nghẽn mạch huyết khối cục tắc động mạch não gây thiếu oxy giảm ATP tế bào dẫn đến tổn thương 1.2 Mô hình nhồi máu não Mơ hình gây thiếu oxy glucose (Oxygen and Glucose Deprivation, OGD) lát cắt hồi hải mã ni cấy Mơ hình nhồi máu não in vitro lát cắt vùng hải mã nuôi cấy sử dụng để đánh giá tác dụng bảo vệ thần kinh vùng dễ bị tổn thương trước tác động thiếu máu cục Ưu điểm mô huỷ hoại tế bào thần kinh Cơ chế gây tổn thương thơng qua kích hình lát cắt vùng hải mã nuôi cấy giữ cấu trúc khơng thích gây độc tế bào, tạo stress oxy hoá, gây viêm, rối loạn chức gian ba chiều mô thần kinh tương tự in vivo Trên mơ hàng rào máu não kích hoạt trình chết tế bào theo chương trình hình tình trạng thiếu máu não gây cách thay môi Hiện nay, thuốc tiêu sợi huyết chứng minh có hiệu trường cân O2/CO2 mơi trường chứa N2/CO2, khơng có oxy bệnh nhân bị thiếu máu não cấp tính alteplase Chỉ định Đồng thời, glucose bị loại bỏ mơi trường ni cấy Mơ hình OGD dùng thuốc tiêu sợi huyết bệnh nhân đến sớm trước 4,5 kể từ gây chết tế bào thần kinh tương tự đặc điểm quan sát khởi phát Tuy nhiên, tác dụng không mong muốn thường gặp thấy thiếu máu não cục in vivo [6] sử dụng thuốc biến chứng chảy máu [4] Ngoài ra, thuốc bảo vệ tế bào thần kinh dự phòng điều trị nhồi máu não xu hướng tập trung nghiên cứu nhiều năm gần Thuốc bảo vệ tế bào thần kinh đề cập đến tác nhân có khả làm giảm tổn thương não cách chống lại phản ứng bất lợi với tế bào thần kinh gây thiếu máu não cục thay cải thiện lưu lượng máu não [4] Edaravon thuốc bảo vệ tế bào thần kinh sử Mô hình gây tắc động mạch não (Middle Cerebral Artery Occlusion, MCAO) Mơ hình nhồi máu não nghiên cứu phát triển tập trung vào động mạch não đa số trường hợp nhồi máu não xảy vùng não cung cấp động mạch Phương pháp gây tắc động mạch não cách đưa sợi đơn có đầu bọc silicon từ động mạch cảnh ngoài, qua động mạch cảnh chung vào động mạch cảnh đầu sợi bắt gặp đa giác Willis bít dụng để điều trị đột quỵ thiếu máu não cục Nhật với đặc tính gốc động mạch não Do rút sợi đơn khỏi chống oxy hóa mạnh, giảm phản ứng viêm ngăn gây chết tế bào theo mạch máu cách chủ động nên gây mơ hình thiếu máu não chương trình [5] Hơn nữa, bên cạnh điều trị, dự phòng nhồi máu não tạm thời vĩnh viễn Ưu điểm mơ hình tạo tổn thương cách kiểm soát yếu tố nguy gồm tăng huyết áp, rối loạn lặp lại, tỉ lệ thành cơng cao, thích hợp cho nghiên cứu dài ngày sau lipid máu đóng vai trị quan trọng điều trị đột quỵ não gây thiếu máu não, không đòi hỏi phải phẫu thuật xâm lấn sọ não nên ảnh hưởng đến áp lực nội sọ nhiệt độ sọ [7] 1.3 Lá hồng (Diospyros kaki L.f.) Chương Lá hồng ghi nhận Y học cổ truyền Trung Quốc Lan ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Mao từ thời nhà Minh Từ nhiều năm, hồng dùng loại trà phổ biến Trung Quốc Nhật Bản với tác dụng hạ huyết áp, 2.1 Đối tượng nghiên cứu điều chỉnh rối loạn lipid máu, phòng ngừa tích tụ melamin, Thuốc thử nghiên cứu gồm cao định chuẩn hồng có hàm chống lão hóa Đến nay, nghiên cứu giới lượng flavonoid đạt 21% flavonoid phân lập từ cao định chuẩn hồng dược liệu có nhiều tác dụng sinh học khác Trong hồng (Hình 2.2) cung cấp Khoa Hóa thực vật, Viện Dược liệu đó, flavonoid hợp chất hồng [2] Tổng quan tác Cao định chuẩn hồng đạt Tiêu chuẩn sở Trong nghiên cứu cao dụng hồng cho thấy cao chiết flavonoid có tiềm dự định chuẩn hồng viết tắt DK phòng nhồi máu não với tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh thực nghiệm [3] Tuy nhiên, tác dụng hồng chưa nghiên cứu sâu chế, chưa chất phân lập hồng có tiềm điều trị nhồi máu não Hơn nữa, tác dụng cao chiết flavonoid hồng lên số yếu tố nguy liên quan đến nhồi máu não gồm tác dụng hạ huyết áp tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu chưa làm rõ Hình 2.2 Cơng thức hoá học flavonoid phân lập từ DK Động vật thí nghiệm gồm chuột nhắt trắng non (7 ngày tuổi) chuột trưởng thành (7-8 tuần tuổi, cân nặng 30 - 35 g) chủng Swiss albino chuột cống chủng Wistar trưởng thành, khỏe mạnh, cân nặng Hình 1.6 Hình ảnh hồng (Diospyros kaki L.f) 200 ± 20 g Lạng Sơn hình ảnh hồng 2.2 Nội dung nghiên cứu Hình 2.6 Quy trình phẫu thuật gây MCAO/tái tưới máu chuột nhắt Nghiên cứu đánh giá tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh DK mơ hình gây MCAO/tái tưới máu thiết kế theo hai hướng gồm liệu trình dự phòng chuột bắt đầu uống DK tiêm edaravon ngày trước gây mơ hình MCAO/tái tưới máu liệu trình điều trị chuột bắt đầu uống DK tiêm edaravon sau tái tưới máu chuột MCAO/tái tưới máu Chứng dương sử dụng nghiên cứu edaravon tiêm tĩnh mạch liều mg/kg/ngày Hình 2.4 Nội dung nghiên cứu luận án 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Đánh giá tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh DK flavonoid tiềm mơ hình nhồi máu não Mơ hình MCAO/tái tưới máu Mơ hình gây tắc động mạch não tiến hành cách đưa sợi đơn có đầu bọc silicon từ động mạch cảnh ngoài, qua động mạch cảnh chung vào động mạch cảnh đầu sợi bắt gặp đa giác Willis bít gốc động mạch não Sau 60 phút làm tắc mạch động mạch não giữa, sợi đơn rút khỏi động mạch chuột để tái tưới máu (Hình 2.6) Hình 2.5 Thiết kế nghiên cứu đánh giá tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh DK theo hướng dự phịng điều trị mơ hình MCAO/tái tưới máu Đánh giá chế tác dụng bảo vệ thần kinh DK Xác định chế bảo vệ tế bào thần kinh phương pháp nhuộm Đánh giá tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh chất (9) mơ hình MCAO/tái tưới máu chuột nhắt trắng Nissl để đánh giá số lượng tế bào thần kinh vùng vỏ não, thể vân vùng hồi hải mã (CA1, CA3) lát cắt não chuột; số lượng tế bào chết theo chương trình vỏ não thể vân phát phương pháp nhuộm Tunel; xác định cân nặng não toàn vẹn hàng rào máu não thông qua sử dụng thuốc nhuộm Evans Blue; xác định tính chống oxy hố qua định lượng hàm lượng malondialdehyd (MDA) Hình 2.10 Thiết kế nghiên cứu đánh giá tác dụng bảo vệ tế bào thần glutathion (GSH) vỏ não; mức độ biểu yếu tố tăng kinh chất (9) mơ hình MCAO/tái tưới máu trưởng nội mơ mạch máu (VEGF), Akt, p-Akt, caspase-3 vỏ 2.3.2 Đánh giá tác dụng DK lên số yếu tố nguy liên quan não chuột xác định kỹ thuật Wesstern blot đến nhồi máu não thực nghiệm Đánh giá tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh số flavonoid Đánh giá tác dụng hạ huyết áp DK phân lập từ DK mơ hình OGD lát cắt hồi hải mã ni cấy Hình 2.9 Thiết kế nghiên cứu đánh giá tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh DK flavonoid phân lập từ hồng mơ hình gây thiếu máu não cục in vitro Lát cắt hồi hải mã được gây thiếu oxy glucose 60 Hình 2.12 Thiết kế nghiên cứu tác dụng hạ huyết áp DK Cơ chế ức chế enzym chuyển angiotensin DK đánh giá in vitro Đánh giá tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu DK phút Thuốc thử chứng dương bổ sung vào mơi trường ni Tác dụng DK mơ hình chuột gây rối loạn lipid máu cấy 24 trước 24 sau trình OGD Mức độ tổn thương tế tyloxapol: Chuột uống DK fenofibrat tuần trước tiêm bào OHSCs đánh giá cách xác định mức độ hấp thụ tyloxapol Chuột cho nhịn đói 16 trước tiêm tyloxapol liều propidium iodid (PI) lát cắt sau 24 xử lý OGD 250 mg/kg Sau 20 tiêm tyloxapol, lấy máu chuột để xác định số lipid máu 10 Tác dụng DK mơ hình chuột gây rối loạn lipid máu hỗn hợp dầu cholesterol: DK atorvastatin cho chuột uống sau uống hỗn hợp dầu cholesterol gồm cholesterol, dầu lạc, acid cholic propylthiouracil Chỉ số nghiên cứu bao gồm cân nặng chuột, số lipid máu hoạt độ AST, ALT huyết chuột 2.4 Xử lý số liệu Hình 3.1 Ảnh hưởng DK lên thể tích nhồi máu não chuột Số liệu thu được xử lý theo phương pháp phân tích thống kê sinh học phù hợp phần mềm phân tích chuyên dụng Sigma Plot 14.0 Giá trị p