(Luận văn thạc sĩ) xác định hiệu suất, đặc trưng tính chất của dịch oligo carrageenan từ rong sụn kappaphycus alvarezii thủy phân bằng axit

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Nguyễn Hoàng XÁC ĐỊNH HIỆU SUẤT, ĐẶC TRƢNG TÍNH CHẤT CỦA DỊCH OLIGO CARRAGEENAN TỪ RONG SỤN KAPPAPHYCUS ALVAREZII THỦY PHÂN BẰNG AXIT LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Nha Trang - 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Nguyễn Hồng XÁC ĐỊNH HIỆU SUẤT, ĐẶC TRƢNG TÍNH CHẤT CỦA DỊCH OLIGO CARRAGEENAN TỪ RONG SỤN KAPPAPHYCUS ALVAREZII THỦY PHÂN BẰNG AXIT Chun ngành: Hóa phân tích Mã số: 8440118 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC Hƣớng dẫn Hƣớng dẫn TS Phạm Trung Sản TS Đào Việt Hà Nha Trang – 2019 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chƣa đƣợc cơng bố cơng trình khác Nha Trang, ngày 14 tháng 12 năm 2019 Tác giả luận văn Nguyễn Hoàng LỜI CẢM ƠN Trong trình nghiên cứu hồn thành luận văn này, nhận nhiều giúp đỡ quý báu thầy cô giáo, nhà khoa học thuộc nhiều lĩnh vực đồng nghiệp bạn bè Đầu tiên tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến TS Phạm Trung Sản TS Đào Việt Hà tận tình hướng dẫn tạo điều kiện cho tơi hồn thành luận văn Tơi chân thành cảm ơn đề tài mã số: TN18/C06 thuộc chương trình Nghiên cứu ứng dụng phát triển cơng nghệ cấp quốc gia hỗ trợ kinh phí cho việc thực Luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn Lãnh đạo Học viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, Ban Chủ nhiệm Khoa Hóa học Phịng Đào tạo giảng dạy, tạo điều kiện thuận lợi giúp tơi thực luận văn hồn thành thủ tục cần thiết Tôi chân thành cảm ơn giúp đỡ tạo điều kiện mặt Lãnh đạo Viện Nghiên cứu Ứng dụng Công nghệ Nha Trang anh chị em phòng Nghiên cứu ăn mịn Cơng nghệ điện hóa q trình thực luận văn Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến gia đình, người thân bạn bè quan tâm, động viên giúp đỡ tơi suốt q trình học tập hoàn thành luận văn Nha Trang, ngày 14 tháng 12 năm 2019 Tác giả luận văn Nguyễn Hoàng MỤC LỤC Trang Lời cam đoan Lời cảm ơn Mục lục .1 Danh mục ký hiệu chữ viết tắt Danh mục bảng .7 Danh mục hình vẽ, đồ thị MỞ ĐẦU 11 CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 RONG SỤN 13 1.1.1 Giới thiệu rong sụn .13 1.1.2 Thành phần hóa học rong sụn 13 1.2 TỔNG QUAN VỀ CARRAGEENAN VÀ OLIGO CARRAGEENAN 14 1.2.1 Giới thiệu chung carrageenan .14 1.2.2 Phân loại 15 1.2.3 Cấu trúc 16 1.2.4 Đặc trƣng hóa học carrageenan từ rong sụn Kappaphycus alvarezii .17 1.2.5 Oligo Carrageenan ứng dụng 18 1.2.5.1 Oligo carrageenan 18 1.2.5.2 Ứng dụng oligo carrageenan .20 1.2.6 Các phƣơng pháp thủy phân carrageenan thành oligo carrageenan 23 1.2.6.1 Phương pháp hóa học 23 1.2.6.2 Phương pháp vật lý 24 1.2.6.3 Phương pháp sinh học 25 1.2.6.4 Các phương pháp kết hợp 26 1.3 THỦY PHÂN CARRAGEENAN BẰNG PHƢƠNG PHÁP HÓA HỌC 27 1.3.1 Ƣu điểm 27 1.3.2 Nhƣợc điểm 28 1.4 CÁC PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 29 1.4.1 Phân tích thành phần hóa học rong sụn 29 1.4.1.1 Phân tích protein tổng số phương pháp Kieldahl 29 1.4.1.2 Phân tích hàm lượng lipid tổng số phương pháp Folch 29 1.4.1.3 Phương pháp phân tích hàm lượng tro 30 1.4.1.4 Phương pháp phân tích độ ẩm rong biển khô 30 1.4.2 Phƣơng pháp phân tích hàm lƣợng carbohydrat tổng sau thủy phân.30 1.4.3 Phƣơng pháp phân tích trọng lƣợng phân tử oligo carrageenan 30 1.4.3.1 Bằng nhớt kế 30 1.4.3.2 Sắc ký rây phân tử 31 1.4.3.3 Tán xạ ánh sáng tĩnh 32 1.4.4 Phƣơng pháp phân tích cấu trúc oligo carrageenan 35 1.4.4.1 Phương pháp phổ hồng ngoại (IR) 35 1.4.4.2 Phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) 36 1.4.4.3 Phương pháp phổ khối lượng (MS) 37 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 39 2.2 HÓA CHẤT: 39 2.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 39 2.3.1 Phƣơng pháp phân tích thành phần hóa học rong sụn .39 2.3.1.1 Phân tích protein thơ 39 2.3.1.2 Phân tích lipid thơ 39 2.3.1.3 Phân tích hàm lượng tro 41 2.3.1.4 Phân tích độ ẩm 42 2.3.2 Phƣơng pháp chiết carrageenan 42 2.3.3 Phƣơng pháp thủy phân tạo oligo carrageenan 43 2.3.4 Phƣơng pháp phân tích hàm lƣợng carbohydrat tổng .43 2.3.5 Phƣơng pháp phân tích trọng lƣợng phân tử phƣơng pháp sắc ký thẩm thấu gel (GPC) 43 2.3.6 Phƣơng pháp phân tích đặc trƣng cấu trúc carrageenan phổ IR 43 2.4 THỰC NGHIỆM 44 2.4.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 44 2.4.1.1 Thu xử lý nguyên liệu 45 2.4.1.2 Chiết carrageenan 45 2.4.2 Thủy phân rong sụn axít điều kiện khác 47 2.4.2.1 So sánh hiệu suất thủy phân theo nồng độ axit 47 2.4.2.2 So sánh hiệu suất thủy phân loại axit theo thời gian 48 2.4.2.3 So sánh hiệu suất thủy phân loại axit theo nhiệt độ 49 2.4.3 Thu hồi oligo carrageenan 49 2.4.4 Phân tích hàm lƣợng carbohydrat tổng .49 2.4.5 Xác định hiệu suất thủy phân trọng lƣợng phân tử dịch thủy phân 50 2.4.6 Đƣa điều kiện thủy phân tối ƣu cho dịch chiết sau thủy phân 50 2.4.7 Khảo sát khả kích thích sinh trƣởng dịch oligo carrageenan ngô 50 2.5 XỬ LÝ SỐ LIỆU 51 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 THÀNH PHẦN HÓA HỌC RONG SỤN 52 3.2 HIỆU SUẤT THỦY PHÂN THEO CARBOHYDRAT TỔNG 53 3.2.1 Ảnh hƣởng nồng độ axit .53 3.2.1.1 Đánh giá hiệu suất thủy phân hai loại axit 53 3.2.1.2 Lựa chọn nồng độ axit thích hợp 56 3.2.2 Ảnh hƣởng thời gian thủy phân 57 3.2.2.1 Đánh giá hiệu suất thủy phân hai loại axit 57 3.2.2.2 Lựa chọn thời gian thủy phân thích hợp 59 3.2.3 Ảnh hƣởng nhiệt độ 60 3.2.3.1 Đánh giá hiệu suất thủy phân 60 3.2.3.2 Lựa chọn nhiệt độ thích hợp 62 3.3 TỐI ƢU HÓA CÁC ĐIỀU KIỆN THỦY PHÂN RONG SỤN KAPPAPHYCUS ALVAREZII BẰNG AXÍT VÀ ĐỀ XUẤT QUY TRÌNH THỦY PHÂN THÍCH HỢP 63 3.3.1 Tối ƣu hóa điều kiện thủy phân 63 3.3.2 Đề xuất quy trình thủy phân carrageenan chiết từ rong sụn Kappaphycus alvarezii phƣơng pháp hóa học sử dụng xúc tác axit 70 3.4 TRỌNG LƢỢNG PHÂN TỬ TRUNG BÌNH CỦA OLIGO CARRAGEENAN 72 3.5 ĐẶC TRƢNG CẤU TRÚC CỦA OLIGO CARRAGEENAN 76 3.6 KHẢ NĂNG KÍCH THÍCH SINH TRƢỞNG CỦA DỊCH OLIGO CARRAGEENAN TRÊN CÂY NGƠ 80 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 KẾT LUẬN 85 4.2 KIẾN NGHỊ 85 TÀI LIỆU THAM KHẢO 87 PHỤ LỤC 94 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT 3,6 AG 3,6-AnhydroGalactose 3,6-AnhydroGalactose GPC Gel Permeation Chromatography Sắc ký thẩm thấu gel HMF HydroxyMethylFurfural HydroxyMethylFurfural IR InfraRed Phổ hồng ngoại NMR Nuclear Magnetic Resonance Cộng hƣởng từ hạt nhân Chất điều hòa PGR Plant growth regulator SLS Static Light Scattering Tán xạ ánh sáng tĩnh XRD X-ray diffraction Nhiễu xạ tia X trƣởng thực vật sinh