Nghiên cứu hoμn chỉnh chế phẩm Metarrhizium vμ kỹ thuật sử dụng để diệt mối nhμ Coptotermes formosanus Shiraki theo phương pháp lây nhiễm Nguyễn Dương Khuê Phòng NC Bảo quản Lâm sản I
Trang 1Nghiên cứu hoμn chỉnh chế phẩm Metarrhizium vμ kỹ thuật sử dụng
để diệt mối nhμ (Coptotermes formosanus Shiraki) theo phương pháp
lây nhiễm
Nguyễn Dương Khuê Phòng NC Bảo quản Lâm sản
I Mở đầu
ở Việt Nam mối hại gỗ có khoảng 27 loài Giống Coptotermes gây hại mạnh nhất và chiếm tới 97% trong các công trình xây dựng, chúng phá hoại nghiêm trọng các công trình xây dựng, kho tàng kỹ thuật diệt mối theo phương pháp lây nhiễm rất độc đáo và hữu hiệu nhưng vẫn phải sử dụng thuốc có nguồn gốc hoá học Các loại thuốc này hiện đang không được phép sử dụng
Thay thế thuốc chống mối nói riêng và thuốc bảo vệ thực vật nói chung, có nguồn gốc hoá học bằng chế phẩm vi sinh là điều mong ước của thực tế sản xuất Nông - Lâm - Nghiệp, đồng thời cũng là
xu hướng trên thế giới Các tác giả: Metschnikoff (1879) H.Hanel (1981, 1982), K.H.Domch (1980),
H.Hanel and J.A.L Watson (1983), Kentazo suzuki (1991), f.J.Milner (1991), Phạm Thị Thuỳ (1993, 1995), Tạ Kim Chỉnh (1994, 1996) đã cho biết:
- Vi nấm Metarrhizium có khả năng diệt côn trùng gây hại, đặc biệt là khả năng phòng trừ mối
đất Ordontotermes, Nasutitermes
- Với giống Nasutermes, khả năng gây bệnh của bào tử trần là nhanh nhất và tỷ lệ chết cao
nhất
- Metarrhizium không ảnh hưởng tới người và động vật bậc cao
Các đề tài nghiên cứu của phòng bảo quản Lâm sản (1994, 1998) đã cho kết quả:
- Đã tuyển chọn được 3 chủng Metarrhizium (ký hiệu M1, M2 và M5) có khả năng diệt được mối nhà Coptotermes theo phương pháp lây nhiễm
- Đã tạo được chế phẩm Metarrhizium nhưng lượng bào tử trần /gam chế phẩm còn thấp
- Tính ổn định của chế phẩm được bảo quản theo thời gian còn thấp (<6 tháng)
Xuất phát từ thực tiễn trên, Phòng Bảo quản Lâm sản được giao tiếp tục thực hiện đề tài:
“Nghiên cứu hoàn chỉnh chế phẩm Metarrhizium và kỹ thuật sử dụng để diệt mối (Coptotermes formosanus Shiraki) theo phương pháp lây nhiễm”
II phương pháp nghiên cứu
1 Thời gian, địa điểm nghiên cứu:
Đề tài được thực hiện từ 7/2000 – 7/2002 tại Phòng Bảo quản Lâm sản, Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam, một số đơn vị khác và hiện trường thử nghiệm trên địa bàn Hà Nội
2 Nguyên liệu nghiên cứu:
- Nguyên liệu tạo môi trường xốp: thành phần là tinh bột: bột ngô, bột cám
- 3 chủng Metarrhizium (M1, M2 và M5) đã tuyển chọn được, trong đó chủng M5 do phân lập
từ mối chết dịch tự nhiên Chủng M1, M2 do trao đổi
- Loài mối: Coptotermes formosanus Shiraki do nhóm côn trùng phòng bảo quản định tên và
tuyển chọn
3 Các phương pháp chính:
3.1 Tạo bào tử trần (BTT) thuần khiết và tạo chế phẩm Metarrhizium
Trang 2- Tạo bào tử trần dạng thuần khiết theo Kentazo suzuki
- Tạo chế phẩm Metarrhizium từ môi trường lên men xốp: thành phần nguyên liệu là tinh bột
(70%) trong đó có tỷ lệ dinh dưỡng khác nhau để tạo BTT
- Xác định lượng bào tử bằng phòng đếm hồng cầu Thomas
- Bảo quản chế phẩm Metarrhizium ở 3 điều kiện: không ánh sáng ở nhiệt độ phòng, 4-100C và cát khô vô trùng
- Thời gian bảo quản sau 1, 3, 6, 9 và 12 tháng được lấy ra để xác định hiệu lực của chế phẩm
- Xác định tỷ lệ nảy mầm bào tử theo Ducan
3.2 Phương pháp thử nghiệm khả năng gây bệnh cho mối của các chủng Metarrhizium
- Thử lây nhiễm BTT với mối theo kết quả của đề tài trước của phòng bảo quản Lâm sản
- Thử chế phẩm Metarrhizium với mối (trong phòng thí nghiệm và ngoài hiện trường) theo
phương pháp lây nhiễm để xác định hiệu lực diệt mối của chế phẩm
- Đánh giá hiệu lực diệt mối của các chủng Metarrhizium và chế phẩm của chúng qua: Tỷ lệ
(%) mối chết hiệu đính theo Abbott (1925)
- áp dụng các nguyên tắc của phương pháp thử nghiệm sinh học, dùng phương pháp thống kê sinh học thông thường để xử lý số liệu
3.3 Phân lập và thuần khiết chủng theo phương pháp Koch
-Nhận dạng giống theo Tulloch
-Môi trường phân lập và cất giữ giống, môi trường sabouraud
III kết quả nghiên cứu
3.1 Tạo chế phẩm Metarrhizium từ 3 chủng đã tuyển chọn:
Để diệt mối có hiệu quả bằng BTT, vấn đề phải tạo được lượng BTT cao nhất trong chế phẩm
3.1.1 Xác định lượng nước trộn vào môi trường
3 chủng Metarrhizium đã tuyển chọn, được nuôi cấy ở môi trường lên men xốp cho lượng BTT
cao nhất (đề tài trước) có thành phần nguyên liệu: Bột ngô(70%), Cám gạo(30%), nhưng cần phải xác
định lượng nước hoà trộn vào môi trường để vi nấm sinh trưởng, phát triển tốt, cho lượng BTT cao
Bảng 1: Khả năng sinh bào tử của 3 chủng vi nấm Metarrhizium trên các môi trường
xốp (sau 14 ngày nuôi cấy) (BTT/g)
M1 1,95 x 10 9 2,15 x 10 9 4,90 x 10 9 1,25 x 10 9
M2 1,85 x 10 9 2,05 x 10 9 4,20 x 10 9 3,15 x 10 9
M5 1,75 x 10 9 2,45 x 10 9 2,85 x 10 9 0,70 x 10 9
Với kết quả ở bảng cho thấy với lượng nước ở công thức 3 (25%), cả 3 chủng vi nấm đều cho lượng BTT cao nhất
3.1.2 Khả năng sinh BTT của M có bổ xung nguyên tố vi lượng
Trang 3Trong môi trường lên men xốp có bổ xung nguyên tố vi lượng, các chủng vi nấm cho BTT như kết quả ở bảng dưới:
Bảng 2: Lượng BTT/gr chế phẩm các chủng M sau 18 ngày nuôi cấy trên môi trường xốp
có bổ xung nguyên tố vi lượng
0 6 , 1 8 x 1 08 5 , 5 0 x 1 08 1 , 1 9 x 1 09
0 , 3 5 , 3 x 1 0 9 1 , 1 6 x 1 0 1 0 3 , 2 5 x 1 09
0 , 5 5 , 0 x 1 0 9 1 , 6 5 x 1 01 0 3 , 3 5 x 1 09
Với số liệu trên chỉ cho thấy khi bổ xung nguyên tố vi lượng 0,5% sẽ cho lượng BTT cao nhất/
gam chế phẩm
3.1.3.Khả năng sinh BTT của M có bổ xung bột Kitin vào môi trường
Cũng với môi trường lên men xốp cho bổ xung bột Kitin có số liệu như sau:
Bảng 3: Lượng BTT/gr chế phẩm các chủng M sau 18 ngày nuôi cấy trên môi trường xốp
có bổ xung bột Kitin
V 0,5 x 1010 1,65 x 1010 0,34 x 1010
KV3 0,8 x 10 10 1,3 x 10 10 1,6 x 10 10
KV5 0,5 x 10 10 3,2 x 10 10 0,4 x 10 10
Qua số liệu cho thấy khi bổ xung bột Kitin vào môi trường, các chủng M đều cho lượng BTT cao hơn Với chủng M1, M5 bổ xung bột Kitin lượng 0,3%, còn với lượng 0,5% thích hợp với chủng M2
3.1.4 Thời gian nuôi cấy các chủng M
Thời gian nuôi cấy các chủng vi nấm có liên quan với sự sinh BTT của chúng Kết quả được thể hiện ở bảng 4:
Bảng 4: Lượng BTT/gr chế phẩm của các chủng M theo thời gian nuôi cấy
(VK5)
14 ngày 0,69 x 10 10 0,58 x 10 10 0,37 x 10 10
18 ngày 1,06 x 10 10 0,89 x 10 10 0,72 x 10 10
22 ngày 1,43 x 10 10 0,79 x 10 10 1,08 x 10 10
25 ngày 0,50 x 10 10 0,59 x 10 10 0,59 x 10 10
Số liệu từ bảng trên cho thấy thời gian nuôi cấy 18 đến 22 ngày các chủng vi nấm sẽ cho lượng BTT cao nhất
Trang 4
3.2 Thời gian bảo quản chế phẩm
Để xác định tính ổn định của các chế phẩm theo thời gian, các chế phẩm M được bảo kín hoàn toàn không có ánh sáng chiếu vào, vị trí để nơi thoáng mát trong phòng, sau thời gian 1, 3, 6, 9 và 12 tháng được lấy ra kiểm tra: lượng bào tử trần, đồng thời đem thử với mối trong hộp lồng Kết quả ở bảng dưới:
Bảng 5: Tỷ lệ (%) nảy mầm của BTT/gr chế phẩm theo thời gian bảo quản
Thời gian
bảo quản (tháng)
1 3 6 9
M1 Mới
sản xuất
M2 Mới
sản xuất
M5 Mới
sản xuất
Bảng 6: Tỷ lệ % mối chết sau phun chế phẩmđ∙ bảo quản thường ở nhiệt độ
phòng (hiệu đính theo Abbott)
Thời
gian bảo
quản
Phương pháp
BQ 7ngày 13 ngày 7 ngày 13 ngày 7 ngày 13 ngày
1 tháng
BQT 86,67 92,50 51,83 67,16 67,16 75,50
3 tháng
6 tháng
BQT Bt 5,33 Bt Bt Bt
9 tháng
Trong các đối chứng sau 13 ngày không có mối chết
Nhận xét: Từ kết quả 2 bảng trên cho thấy chế phẩm Metarhizium được bảo quản
trong cùng điều kiện nhiệt độ phòng, song nếu được bảo quản kín trong tối không có tác
động của ánh sáng thì hiệu lực diệt mối của các chế phẩm kéo dài tới 9 tháng Điều này
đã giúp chúng ta chủ động trong việc sản xuất và bảo quản chế phẩm phục vụ mục đích của con người
3.3 Các đặc điểm hình thái nhận dạng các chủng Metarrhizium đã tuyển chọn
Trang 53 chủng Metarrhizium đã tuyển chọn được, nuôi cấy trên môi trường thạch, sau 7 –
10 ngày mô tả ở bảng 8
Cả 3 chủngMetarrhizium đều có sợi vách ngăn, sinh sản vô tính bằng BTT, có tế
bào sinh BTT là những thể bình BTT tạo thành ở trong hoặc ở miệng thể bình, có dạng
hình trụ (M2), hình trứng(M5), không có ngăn vách, có màu xanh, xanh xẫm,xanh lá
mạ(hơi vàng) và kích thước BTT(ở bảng 9), đó là những đặc điểm hình thái nhận dạng
của chúng
Bảng 9: Kích thước BTT 3 chủng Metarhizium đ∙ tuyển chọn
Chủng thu thập, phân lập Kích thước(àm)
Trong 3 chủng này, chủng có ký hiệu M5 là do phân lập từ mối chết dịch tự nhiên
ở tổ mối
3 chủng Metarrhizium trên được nhận dạng là:
Chủng ký hiệu M1: Metarrhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin
Chủng ký hiệu M2: Metarrhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin
Chủng ký hiệu M5: Metarrhizium flavoviridae
3.4 Kỹ thuật sử dụng chế phẩm Metarrhizium để diệt mối nhà (C formosanus
Shir.)
Dùng hộp nhử mối đặt vào nơi có mối nhà, sau 10-15 ngày tiến hành phun chế
phẩm M Qua các thí nghiệm, đồng thời với kỹ thuật phun ở hiện trường, chúng tôi đề
xuất lượng phun như sau:
Vì chế phẩm ở dạng bột khô, mịn, nên khi phun, chế phẩm ra khỏi bép phun có dạng như bụi
Vì thế khi dỡ hộp nhử mối có mối ra, phun chế phẩm lên người các cá thể mối, khi nhìn thấy trên
mình các cá thể mối thoáng có màu của chế phẩm là được
Các chế phẩm này được đưa ra thử nghiệm diệt mối nhà theo phương pháp lây nhiễm tại các
địa điểm có mối nhà đang hoạt động phá hoại nhà cửa như:
- Nhà riêng ông Nguyễn Văn Toàn 429/1 Kim Mã, Hà Nội
Phun chế phẩm 9/2001
- Nhà riêng ông Nguyễn Văn Bẩy 84,ngõ 444, Đội Cấn, HN
Phun chế phẩm 8/2001
- Nhà riêng ông Nguyễn Văn Thuỳ56, Nguyễn Văn Cừ, Gia Lâm, HN
Phun chế phẩm 9/2001
Sau khi phun chế phẩm vi nấm, định kỳ 15 - 20 ngày tiến hành kiểm tra lại,
nhưng đến nay các cơ sở trên đều không thấy còn mối sống hoạt động
Đồng thời những điểm nhà cửa, kho tàng trước đây đã tiến hành xử lý mối bằng
chế phẩm vi nấm theo phương pháp lây nhiễm như:
- Nhà ông Lê Nhân Thìn - 64 Trương Định - Hà Nội
Phun chế phẩm ngày 25/8/1998
- Công ty Pin Hà Nội (Kho + Xưởng): Phun CP ngày 10/10/1998
Trang 6- Nhà cô Yến, Nông-Lâm, Phun chế phẩm: 22/12/1998
Cho đến nay (12/2002) cũng chưa thấy mối nhà xuất hiện trở lại, điều này cho thấy
có nhiều triển vọng và khả năng trong việc ứng dụng các chế phẩm Metarrhizium để diệt mối nhà (Coptotermes formosanus Shiraki) theo phương pháp lây nhiễm
IV kết luận vμ kiến nghị
Từ kết quả thu được chúng tôi rút ra một vài kết luận:
1 Đã làm giầu lên được số bào tử trần trong chế phẩm của 3 chủng nấm
0.5x101 0-3.15x101 0 BTT/gr sau 18-22 ngày nuôi cấy
2 Xác định được tính ổn định của các chế phẩm Metarrhizium sau thời gian 9
tháng bảo quản ở nhiệt độ phòng
3 Đề xuất được kỹ thuật sử dụng chế phẩm để trừ mối nhà (Coptotermes
formosanus Shiraki) theo phương pháp lây nhiễm
Kiến nghị :
- Viện và Bộ cho đề tài được triển khai thử nghiệm vào sản xuất: chống mối bảo vệ công trình xây dựng theo hướng thay thế thuốc hoá học
- Tiếp tục cho nghiên cứu mở rộng đề tài theo hướng dùng Metarrhizium cho phòng trừ mối
phá hoại cây trồng
Tài liệu tham khảo chính
1 Bùi Xuân Đồng (1977), một số vấn đề về nấm học, NXB Khoa học và Kỹ thuật, Hà Nội
2 Bùi Xuân Đồng (1984), Nhóm nấm Hyphomycetes ở Việt Nam tập 1, NXB Khoa học và Kỹ thuật,
Hà Nội
3 Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đăng Đức, Đặng Hồng Miên, Nguyễn Vĩnh Phước, Nguyễn Đình
Quyến, Nguyễn Phùng Tiến, Phạm Văn Ty (1976), Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật
học, Tập 2, NXB Khoa học và Kỹ thuật, Hà Nội
4 Nguyễn Dương Khuê (2001), “Bước đầu thử nghiệm dùng nấm Metarrhizium cho phòng trừ mối nhà ( Coptotermes formosanus Shiraki)”, Kết quả nghiên cứu khoa học công nghệ Lâm nghiệp giai
đoạn 1996-2000, tr 187-192 NXB nông nghiệp, Hà Nội
5 Nguyễn Chí Thanh (1971), Chống mối cho công trình xây dựng và kho tàng, Hà Nội
6 Nguyễn Chí Thanh (1995), Nghiên cứu phương pháp diệt và phòng mối (Coptotermes formosanus
Shiraki) không cần tìm tổ cho công trình nhà cửa đã xây dựng, Luận văn PTS Khoa học Nông
nghiệp, Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam, Hà Nội
7 Domsch K.H., Gams W., Traute-heidi Anderson (1980), Compendium of Soil fungi, Vol 1,
pp.413-415
8 Họnel H (1982), “Selection of a fungus species, suitable for the biological control of the termite
Nasutitermes exitiosus (Hill)”, Zeitschrift fĩr agewandte Entomologie, pp 237-245, Hamburg
und Berlin
9 Kentazo Suzuki (1991) “Laboratory trial of biological control agents against subterranean
termites” - Paper prepared for the 22nd Annual Meeting Kyoto Japan
